分光光度计基本操作方法
紫外可见分光光度计的基本操作
紫外-可见分 光光度法模 块之
能认知仪器组成、配套部件 和控制面板
阅读说明书，编写仪器操作 规程
能熟练操作紫外-可见分光 光度计
能对仪器进行校验，和对仪 器进行日常维护与保养
能力目标
课程引入
2005年中央12台曾报道，上海市的蔡女士一家刚住进新房没多久，丈 夫就得了白血病去世。通过检测机构对室内的空气质量进行一次检测，发 现储藏室和卧室中的甲醛含量竟然远远超出标准值的三倍。
紫外可见分光光度法是基于物质分子对 200-780nm区域光的选择性吸收而建立 起来的分析方法。
紫外可见分光光度法分类
目 视 比 色 法
紫 外 分 光 光 度 法
光 电 比 色 法 分 光 光 度 法
紫 外 可 见 分 光 光 度 法
可 见 分 光 光 度 法
比色分析法：利用比较待测溶液本身的颜色或加入试剂后呈现的颜色深浅来 测定溶液中待测物质的浓度的方法
以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作 图，画出曲线，此曲线即称为该物质的光 吸收曲线（或吸收光谱曲线）。Biblioteka 123-c c c
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KMnO4溶液的光吸收曲线
➢溶液对不同波长的光的吸收程度是不同的， 存在最大吸收峰的位置称为最大吸收波长。 ➢不同浓度的溶液，其吸收曲线的形状相似， 最大吸收波长也一样。 ➢不同物质的吸收曲线，其形状和最大吸收 波长都各不相同，可利用吸收曲线来作为 物质定性分析的依据。
硫酸铜溶液吸收黄光，呈现兰色。 高锰酸钾溶液吸收绿色光，呈现紫红色
分光光度计使用方法
最佳答案1.接通电源;打开仪器开关;掀开样品室暗箱盖;预热10分钟..2.将灵敏度开关调至“1”档若零点调节器调不到“0”时;需选用较高档..3.根据所需波长转动波长选择钮..4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处;用擦镜纸擦清外壁;放入样品室内;使空白管对准光路..5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器;使读数盘指针指向t=0处..6.盖上暗箱盖;调节“100”调节器;使空白管的t=100;指针稳定后逐步拉出样品滑竿;分别读出测定管的光密度值;并记录..7.比色完毕;关上电源;取出比色皿洗净;样品室用软布或软纸擦净分光光度计使用的外部环境要求分光光度计属于精密仪器;应当妥善保管和精心维护;这样才能保证分光光度计长期使用、长期的稳定可靠、测量精度高..元析公司在多年的生产和应用的过程中;得到了一套在一定环境下维护分光光度计的经验;具体如下：1、环境温度在条件容许的情况下;尽量保持在15-30摄氏度之间;这样能保持电器件稳定工作;不易老化;使分光光度计不易损坏;灯源的使用寿命得到延长..若条件不容许;在高温的情况下;缩短开机时间;高效使用分光光度计;使电器件不要长期保持在高温下..在低温下;使预热时间比常温下的预热时间要长;这样能保证在仪器稳定的情况下进行测试..2、环境湿度在条件容许的情况下;尽量保持在60%以下;这样能保证光度计内部的光学件和电器件不易受潮、腐蚀、和上霉..若条件不容许;在高湿度和低湿度的情况尽量保持通风..3、环境在条件容许的情况下尽量保持洁净;打扫环境时动作不宜太大;不要扬起灰尘;打扫之前用防尘罩盖上分光光度计;不要让灰尘进入分光光度计内部..以上仅就仪器使用的外部环境作了描述;以供使用用户参考..分光光度计的使用分光光度计的应用常识分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器..常用于核酸;蛋白定量以及细菌生长浓度的定量..分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源;通过系列分光装置;从而产生特定波长的光源;光源透过测试的样品后;部分光源被吸收;计算样品的吸光值;从而转化成样品的浓度..样品的吸光值与样品的浓度成正比..核酸的定量核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能..可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸;单链、双链DNA;以及RNA..核酸的最高吸收峰的吸收波长260nm..每种核酸的分子构成不一;因此其换算系数不同..定量不同类型的核酸;事先要选择对应的系数..如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA;37μg/ml的ssDNA;40μg/ml的RNA;30μg/ml的Olig..测试后的吸光值经过上述系数的换算;从而得出相应的样品浓度..测试前;选择正确的程序;输入原液和稀释液的体积;尔后测试空白液和样品液..然而;实验并非一帆风顺..读数不稳定可能是实验者最头痛的问题..灵敏度越高的仪器;表现出的吸光值漂移越大..事实上;分光光度计的设计原理和工作原理;允许吸光值在一定范围内变化;即仪器有一定的准确度和精确度..如EppendorfBiophotometer的准确度≤1.0%1A..这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动;都是正常的..另外;还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值;离子浓度等：在测试时;离子浓度太高;也会导致读数漂移;因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液;如TE;可大大稳定读数..样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒;尤其是核酸样品..这些小颗粒的存在干扰测试效果..为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响;要求核酸吸光值至少大于0.1A;吸光值最好在0.1-1.5A..在此范围内;颗粒的干扰相对较小;结果稳定..从而意味着样品的浓度不能过低;或者过高超过光度计的测试范围..最后是操作因素;如混合要充分;否则吸光值太低;甚至出现负值；混合液不能存在气泡;空白液无悬浮物;否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品;否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项..除了核酸浓度;分光光度计同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度;如A260/A280的比值;用于评估样品的纯度;因为蛋白的吸收峰是280nm..纯净的样品;比值大于1.8DNA或者2.0RNA..如果比值低于1.8或者2.0;表示存在蛋白质或者酚类物质的影响..A230表示样品中存在一些污染物;如碳水化合物;多肽;苯酚等;较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0..A320检测溶液的混浊度和其他干扰因子..纯样品;A320一般是0..蛋白质的直接定量UV法这种方法是在280nm波长;直接测试蛋白..选择Warburg公式;光度计可以直接显示出样品的浓度;或者是选择相应的换算方法;将吸光值转换为样品浓度..蛋白质测定过程非常简单;先测试空白液;然后直接测试蛋白质..由于缓冲液中存在一些杂质;一般要消除320nm的“背景”信息;设定此功能“开”..与测试核酸类似;要求A280的吸光值至少大于0.1A;最佳的线性范围在1.0-1.5之间..实验中选择Warburg公式显示样品浓度时;发现读数“漂移”..这是一个正常的现象..事实上;只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%;表明结果非常稳定..漂移的原因是因为Warburg公式吸光值换算成浓度;乘以一定的系数;只要吸光值有少许改变;浓度就会被放大;从而显得结果很不稳定..蛋白质直接定量方法;适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质..紫外直接定量法相对于比色法来说;速度快;操作简单；但是容易受到平行物质的干扰;如DNA的干扰；另外敏感度低;要求蛋白的浓度较高..比色法蛋白质定量蛋白质通常是多种蛋白质的化合物;比色法测定的基础是蛋白质构成成分：氨基酸如酪氨酸;丝氨酸与外加的显色基团或者染料反应;产生有色物质..有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关;从而反应蛋白质浓度..比色方法一般有BCA;Bradford;Lowry等几种方法..Lowry法：以最早期的Biuret反应为基础;并有所改进..蛋白质与Cu2+反应;产生蓝色的反应物..但是与Biuret相比;Lowry法敏感性更高..缺点是需要顺序加入几种不同的反应试剂；反应需要的时间较长；容易受到非蛋白物质的影响；含EDTA;Tritonx-100;ammoniasulfate等物质的蛋白不适合此种方法..BCABicinchoninine acid assay法：这是一种较新的、更敏感的蛋白测试法..要分析的蛋白在碱性溶液里与Cu2+反应产生Cu+;后者与BCA形成螯合物;形成紫色化合物;吸收峰在562nm波长..此化合物与蛋白浓度的线性关系极强;反应后形成的化合物非常稳定..相对于Lowry法;操作简单;敏感度高..但是与Lowry法相似的是容易受到蛋白质之间以及去污剂的干扰..Bradford法：这种方法的原理是蛋白质与考马斯亮兰结合反应;产生的有色化合物吸收峰595nm..其最大的特点是;敏感度好;是Lowry和BCA两种测试方法的2倍；操作更简单;速度更快；只需要一种反应试剂；化合物可以稳定１小时;方便结果；而且与一系列干扰Lowry;BCA反应的还原剂如DTT;巯基乙醇相容..但是对于去污剂依然是敏感的..最主要的缺点是不同的标准品会导致同一样品的结果差异较大;无可比性..某些初次接触比色法测定的研究者可能为各种比色法测出的结果并不一致;感到迷惑;究竟该相信哪种方法由于各种方法反应的基团以及显色基团不一;所以同时使用几种方法对同一样品得出的样品浓度无可比性..例如：Keller等测试人奶中的蛋白;结果Lowry;BCA测出的浓度明显高于Bradford;差异显着..即使是测定同一样品;同一种比色法选择的标准样品不一致;测试后的浓度也不一致..如用Lowry测试细胞匀浆中的蛋白质;以BSA作标准品;浓度1.34mg/ml;以a球蛋白作标准品;浓度2.64mg/ml..因此;在选择比色法之前;最好是参照要测试的样本的化学构成;寻找化学构成类似的标准蛋白作标准品..另外;比色法定量蛋白质;经常出现的问题是样品的吸光值太低;导致测出的样品浓度与实际的浓度差距较大..关键问题是;反应后1011分光光度计的重要配件——比色杯的颜色是有一定的半衰期;所以每种比色法都列出了反应测试时间;所有的样品包括标准样品;都必须在此时间内测试..时间过长;得到的吸光值变小;换算的浓度值降低..除此;反应温度、溶液PH值等都是影响实验的重要原因..此外;非常重要的是;最好是用塑料的比色法..避免使用石英或者玻璃材质的比色杯;因为反应后的颜色会让石英或者玻璃着色;导致样品吸光值不准确..细菌细胞密度OD600实验室确定细菌生长密度和生长期;多根据经验和目测推断细菌的生长密度..在遇到要求较高的实验;需要采用分光光度计准确测定细菌细胞密度..OD600是追踪液体培养物中微生物生长的标准方法..以未加菌液的培养液作为空白液;之后定量培养后的含菌培养液..为了保证正确操作;必须针对每种微生物和每台仪器用显微镜进行细胞计数;做出校正曲线..实验中偶尔会出现菌液的OD值出现负值;原因是采用了显色的培养基;即细菌培养一段时间后;与培养基反应;发生变色反应..另外;需要注意的是;测试的样品不能离心;保持细菌悬浮状态..分光光度计的重要配件——比色杯比色杯按照材质大致分为石英杯、玻璃杯以及塑料杯..根据不同的测量体积;有比色杯和毛细比色杯等..一般测试核酸和紫外定量蛋白;均采用石英杯或者玻璃杯;但是不适合比色法测定..因为反应中的染料如考马斯亮兰能让石英和玻璃着色;所以必须采用一次性的塑料杯..而塑料杯一般不适合用于在紫外范围内测试样品..由于另外测试的样品量不同;所以一般分光光度计厂家提供不同容积的比色杯以满足用户不同的需求..目前市场已经存在一种既可用于核酸、紫外蛋白质定量;亦可用于蛋白比色法测定的塑料杯;样品用量仅需50μl;比色杯单个无菌包装;可以回收样品..如EppendorfUVette塑料比色杯;是目前比色杯市场上一个革新..随着生命科学以及相关学科发展;对此类科学的实验研究提出更高的要求;分光光度计将是分子生物学实验室不可缺少的仪器;也成为微生物、食品、制药等相关实验室的必备设备之一..分光光度技术6.1基本原理利用紫外光、可见光、红外光和激光等测定物质的吸收光谱;利用此吸收光谱对物质进行定性定量分析和物质结构分析的方法;称为分光光度法或分光光度技术;使用的仪器称为分光光度计;这种分光光度计灵敏度高;测定速度快;应用范围广;其中的紫外/可见分光光度技术更是生物化学研究工作中必不可少的基本手段之一..因此本章重点讨论紫外/可见分光光度法的基本原理、仪器构造及其在生化领域中的应用等..1.光谱：光是电磁波;可用波长“λ”表示;电磁波谱是由不同性质的连续波长的光谱所组成;对于生物化学来说;最重要的波长区域是可见光和紫外光..光的波长是二个相邻的波峰之间的距离..光的传播是由相互垂直的电场分量“E”和磁场分量“H”所构成..λ＝C/νλ——波长C——光速ν——频率;单位时间通过一个定点的波数..光又可以看作是由具有能量的粒子所组成..这些粒子所具有的原能量“E”由下式算出：E＝hνH——普朗克常数6.624×10-27尔格秒ν——频率紫外区可分为紫外近紫外和真空紫外远紫外..由于吸收池又称样品池、比色杯等和光学元件以及氧气能吸收小于190nm波长的光;因此常规紫外测定集中在近紫外区;即200nm～400nm..可见光区为400nm～800nm..组成物质的分子均处于一定能态并不停地运动着;分子的运动可分为平动、转动、振动和分子内电子的运动;每种运动状态都处于一定的能级;因此分子的能量可以写成：E＝E0+E平+E转+E振+E电E0是分子内在的不随分子运动而改变的能量;平动能E平只是温度的函数;因此与光谱有关的能量变化是分子的转动能量、振动能量和分子的电子能量..分子的每一种能量都有一系列的能级;能级不是任意的;而是具有量子化特征的;通常分子处于基态;当它吸收一定能量跃迁到激发态;则产生吸收光谱..分子转动、振动和电子能级的跃迁;相应地产生转动、振动及电子光谱..按照量子力学原理;分子能态按一定的规律跳跃式地变化;物质在入射光的照射下;分子吸收光时;其能量的增加是不连续的;物质只能吸收一定能量的光;吸收光的频率和两个能级间的能量差要符合下列关系：E＝E2-E1＝hE1、E2分别表示初能态和终能态的能量;初能态与终能态之间的能量差愈大;则所吸收的光的频率愈高即波长愈短;反之则所吸收的光的频率愈低即波长愈长..由于吸收是不连续的;因此在光的一定部位出现一系列吸收暗带..因为分子转动、振动及电子能级跃迁的能量差别较大;因此;它们的吸收光谱出现在不同的光谱区域..分子转动能级级差小;△E＜0.05电子伏特ev;分子转动光谱的吸收出现在远红外或微波区..振动能级纵间的差别较大;E＝0.05～1.0ev;振动光谱出现在中红外区..电子能级的级差更大;E＝1～20ev;所以由电子跃迁得到的光谱出现在可见、紫外或波长更短的光谱区..可见光、紫外光吸收光谱;是由于分子中联系较松散的价电子被激发产生跃迁从而吸收光辐射能量形成的;即分子由基态变为激发态;电子由一个低能级的轨道即成键轨道;吸收了光能量跃迁到高能级轨道称为反键轨道..与吸收光谱有关的三种电子是：⑴二个原子的电子沿其对称方向相互形成的共价键即单键;称σ键;构成键的电子称σ电子;如C－C、C－H键..⑵平行于二个原子轨道形成的价键即双键;称π键;形成π键的电子称为π电子;如C=C键..⑶未共享成键的电子;称n电子..各种电子跃迁所需能量大小的顺序是：n→π*＜π→π*≤n→σ*＜π→σ*＜σ→π*＜σ→σ*紫外吸收光谱主要是由于双键电子;尤其是共轭双键中的π电子和未共享的电子对的激发所产生的..所以各种物质分子对紫外光的吸光性质取决于该分子的双键数目和未共享电子对的共轭情况等..如下表所示：电子跃迁类型与紫外吸收波长nm关系表电子跃迁类型例子紫外吸收波长范围σ→σ*C－H100～150nmπ→π*非共轭C＝O＜200nmπ→π*共轭＝C－C＝200～300nmn→π*C＝O～300nmπ→π*跃迁：此类跃迁所需能量较小;吸收波长在紫外区的200～300nm;不饱和烃、共轭烯烃及芳香烃均可发生这类跃迁;氨基酸、蛋白质与核酸均含有大量共轭双键;因而200～300nm的紫外吸收测定;在生化实验技术中有极广泛的用途..若逐渐改变照射某物质的入射光的波长;并测定物质对各种波长光的吸收程度吸光度“A”或光密度“O.D”或透射程度透光度“T”;以波长λ作横坐标;“A”或“T”为纵座标;画出连续的“A~λ”或“T~λ”曲线;即为该物质的吸收光谱曲线..吸光度ADCBλmaxλmin波长nm由上图可以看出吸收光谱的特征：⑴曲线上“A”处称最大吸收峰;它所对应的波长称最大吸收波长;以λmax表示..⑵曲线上“B”处有一谷;称最小吸收;它所对应的波长;所对应的波长;称最小吸收波长;以λmin表示..⑶曲线上在最大吸收峰旁边有一小峰“C”;称肩峰..⑷在吸收曲线的波长最短的一端;曲线上“D”处;吸收相当强;但不成峰形;此处称为末端吸收..λmax是化合物中电子能级跃迁时吸收的特征波长;不同物质有不同的最大吸收峰;所以它对鉴定化合物极为重要..吸收光谱中;λmax、λmin、肩峰以及整个吸收光谱的形状决定于物质的性质;其特征随物质的结构而异;所以是物质定性的依据..测定某物质的紫外吸收光谱的曲线;可与已知标准的紫外光谱图相对照;对照时须注意测定的条件;如溶剂、浓度等..常用标准的紫处吸收光谱是萨德勒研究实验公司编制的“Sadtler”紫外标准图谱集;到七十年代末为止已收集28585个化合物紫外光谱图;此外还有药物和非极性溶剂紫外光谱图2000多幅..由于化合物紫外吸收峰较少;而且峰形都很宽;不象红外光谱是许多指纹峰;所以在用紫外吸收光谱进行化合物定性鉴定时;应注意：化合物相同;其紫外光谱应完全相同；但是紫外光谱相同不一定化合物就相同;可能仅是存在某些相同的发色团或基团;因此在鉴定时应与红外光谱相结合..由于电子跃迁的同时也引起分子的转动和振动光谱;要把电子跃迁和分子振动、转动的跃迁完全分开是不可能的;因此我们常见的紫外吸收光谱是由一个或几个宽的吸收谱带所组成..紫外光谱中常用的术语有发色团、助色团、增色效应和减色效应..发色团：凡是与饱和碳氢化合物连接能引起n→π*、π→π*、n→σ*等电子跃迁的基团称为发色团..例如：C＝C、C＝O等发色团..助色团：助色团是一些具有非共价键的基团如OH、NH2、SH等..这些基团在波长＞200nm处没有吸收;当它与发色团相连接时;使发色团的吸收带向长波移动;称为红移或浅色效应;红移的同时吸收带的强度增加..若助色团与发色团相连接;产生n→π*跃迁;使吸收波长向短波移动;称为兰移或深色效应..增色效应hyperchromiceffect:核酸变性或降解;使得DNA或RNA溶液对紫外光的吸收明显增加;即ε值吸光系数或称消光系数显着升高;此现象称为增色效应..此效应是由于碱基之间电子相互作用的改变所致;通常在260nm处测量..减色效应hypochromiceffect:在一定的条件下;变性的核酸又可以复性;此时ε值又明显减少;回复到原来的核酸分子ε值较低的水平;即此时DNA或RNA溶液的紫外光吸收显着降低;此现象称为减色效应;此效应也是由于碱基之间电子相互作用的变化所引起的;通常在260nm条件下测量..2.光吸收定律：朗伯——比尔Lambert－beer光吸收定律：A＝－lgT＝εbcA——吸光度;又称光密度“O.D”..T——透光度;T＝I/I..;I..——为照射到吸收池上的光强;I——为透过吸收池的光强..ε——摩尔吸光系数或克分子吸光系数Lmol－1cm－1..b——样品光程cm;通常使用1.0cm的吸收地;b=1cm..C——样品浓度mol/L..由上式可以看出：吸光度A与物质的吸光系数“ε”和物质的浓度“C”成正比..摩尔吸光系数：;是物质对某波长的光的吸收能力的量度..ε越大;吸收光的能力越强;相应的分光度法测定的灵敏度就越高..ε值越大;说明电子跃迁的几率大;通常ε＝10～105：一般认为ε＞104为强吸收；ε＝103～104为较强吸收；ε＜102为弱吸收;此时分光光度法不灵敏..因为通常使用分光光度计可检测出的最小吸光度A＝0.001;所以;当b＝1cm;ε＝105时;可检测的溶液最小浓度是C＝10-8mol/L..常用的吸光系数还有一种百分吸光系数;即在某一波长下;溶液浓度为1%W/V;液层厚度b＝1cm时的吸光度;以E1%λmax表示..C——百分浓度W/V..L——液层厚度;吸收杯光径长度..A——吸光度..最大吸收波长λmax时的ε和E1%λmax值可用下式换算：ε＝E1%λmax×分子量/10吸光度“A”有一个重要性质是其具有加和性：A＝ε1C1b1＋ε2C2b2＋ε3C3b3＋……＝即混合物的总吸光度等于溶液中的各组份各自在该波长下吸光度的算术和..这是多元混合物分光光度法定量分析的基础..若溶液中各溶质的吸光系数ε相同;则各溶质吸光度的大小与溶质浓度成比例..例如;离子交换柱层析分离核苷酸实验中可利用吸光度计算回收率：m＝CV;∵;∴m——溶质的量C——溶质浓度V——溶液体积A——吸光度ε——吸光系数b——吸收池光径∴回收率100%上式中假设ε总和各核苷酸的ε近似相等例一：尿嘧啶核苷酸溶液用1cm石英吸收池测定260nm处的吸光度为0.650;用同一吸收池测定纯溶剂的吸光度为0.070;计算尿嘧啶溶液的摩尔浓度;已知其摩尔吸光系数=8.2×103 M－1cm－1M＝mol/L..∵A＝εbC∵A＝溶剂加样品的吸光度－溶剂的吸光度∴A＝0.650－0.070＝0.580∵b＝1cm∴C==7.1×10－5mol/L例二：1%W/V;10mg/ml酪氨酸酶溶液的吸光度为24.91cm吸收池;280nm;计算A280=0.250的酪氨酸酶溶液的浓度..由于这两种酶溶液的百分吸光系数“E1%1cm;280nm”是相同的;因此可用正比例法计算浓度..∵∴∴C未知＝0.01％＝0.1mg/ml6.2分光光度计的组成和构造：1.组成：各种型号的紫外/可见分光度计;不论是何种型式;基本上都由五部分组成：1光源；2单色器包括产生平行光和把光引向检测器的光学系统；3样品室；4接收检测放大系统；5显示或记录器..光源单色器样品室检测放大系统显示器国产分光光度计近年来已有很大的发展;各种档次的分光光度计都已更新升级换代;可见光系列有：721、722、723等型号;紫外/可见光系列有：751、752、753、754、756等型号;主要生产厂为上海分析仪器总厂等..我系1985年购买的瑞士KONTRON康强公司生产的UNICON860型紫/可见光分光光度计;是双光束、快速自动扫描、荧屏显示的高档分光光度计..这种双光束分光光度计的特点是来自光源的连续光谱经凹面全息光栅分光后;由出射狭缝得到单色光;经过由电机带动的25周/秒左右的旋转镜分解为“样品”、“参比”光束;顺序分时通过参比池和样品吸收池;照射到光电倍增管上;由于两条光路是几乎同时测量;参比信号又不断与标准电压比较;使参比信号恒定;所以由光源、单色器、外界杂光、光电倍增管以及电源电压等带来的影响;仪器均能自动消除..最快波长扫描速度为1200nm/min;有五种测量功能和五种数据处理功能..我系2000年购买的德国耶拿蔡司公司生产的SPECORD200型高档紫外/可见光分光光度计的光路原理图如下：SPECORD200分光光度计的样品和参比光路;分别有各自的带温控的光电二极管检测器;因而取消了电机带动的旋转镜;大大提高了仪器的稳定性及各项检测指标;其波长范围是190nm～1100nm;吸光度测定范围是0～3A;可变狭缝宽度为1nm、2nm和5nm;仪器使用微机控制时;扫描速度最高可达6000nm/min;宽大的样品室可以安装各种附件;仪器性能优良;适合教学、科研使用..该仪器的使用说明详见附录..2.构造：⑴光源：理想光源的条件是：①能提供连续的辐射；②光强度足够大；③在整个光谱区内光谱强度不随波长有明显变化；④光谱范围宽；⑤使用寿命长;价格低..用于可见光和近红外光区的光源是钨灯;现在最常用的是卤钨灯Halogenlamp;即石英钨灯泡中充以卤素;以提高钨灯的寿命..适用波长范围是320～1100nm..由于能量输出的波动为电压波动的四次方倍;因此电源电压必须稳定..用于紫外光区的是氘灯Deuteriumlamp;适用波长范围是195～400nm;由于氘灯寿命有限;国产氘灯寿命仅五百小时左右;要注意节约灯时..⑵单色器：单色器是分光光度计的心脏部分;它的作用是把来自光源的混合光分解为单色光并能随意改变波长..它的主要组成部件和作用是：①入射狭缝——限制杂散光进入..②色散元件——即棱镜或光栅;是核心部件;可将混合光分解为单色光..③准直镜——把来自入射狭缝的光束转化为平等光;并把来自色散元件的平等光聚焦于出射狭缝上..④出射狭缝——只让额定波长的光射出单色器..转动棱镜或光栅的波长盘;可以改变单色器出射光束的波长；调节出入射狭缝隙的宽度;可以改变出射光束的带宽和单色光的纯度..光栅：光栅有透射光栅和反射光栅;实际应用的都是反射光栅;它又可分为平面反射光栅即通称的反射光栅或闪烁光栅和凹面反射光栅两类;凹面反射光栅可以起色散元件和准直镜两个作用;使色散后的光束聚焦于出射狭缝;得到锐线光谱..光栅的刻制方法有两种：机刻光栅：用金刚刀挤压镀于硬质玻璃上0.5~1的铝反射层而得..刻制工作量极大;一般每分钟只能刻10条线;刻100mm宽的600线/mm的光栅要100小时..最多刻到3600线/mm..由于其制造周期长;成本高;一般只能制得少量的母光栅;而实际应用的多是复制光栅;即在母光栅上涂上硅油;再镀上一层铝;用环氧树脂粘下来;就得到复制光栅..机刻光栅的缺点是线槽稍有缺陷时就会出现“鬼线”;即位于光谱强线两侧的模糊不清的假线..全息光栅：用全息照相法刻制的高精度光栅..即用高强度的相干性极好的单色光;如激光;用高分辨的感光材料——光致抗蚀剂记录干涉条纹;曝光1小时;化学处理掉受光部分;再进行真空镀膜镀铝;得到全息反射光栅..这种光栅几乎没有线槽间的周期误差;几乎没有“鬼线”;杂散光很少..最大线槽密度可达6500线/mm;最大直径可达400mm;刻线越多;分辨率就越高;最常用的是1200~1500线/mm的全息光栅..狭缝、光谱频带宽度和分辨率：出射狭缝的宽度通常有两种表示方法：一为狭缝的实际宽度;以毫米mm表示;另一种为光谱频带宽度;即指由出射狭缝射出光束的光谱宽度;以毫微米nm表示..例如;出射狭缝的宽度是6nm;并不是说出射狭缝的宽度是6nm;而是指由此狭缝射出的光具有6nm的光谱带宽..纯粹的单色光只是一种理想情况;分光光度计所能得到的“单色光”;实际上只是具有一定波长范围的谱带;狭缝越宽;所包括的波长范围也愈宽..对单色光纯度来说;狭缝是愈窄愈好;但光的强度也就越弱;因此狭缝不能无限制地小;狭缝的最小宽度取决于检测器能准确地进行测量的最小光能量..目前达到的最小宽度为0.1nm..。
F-7000荧光分光光度计操作规程
F-7000荧光分光光度计基本操作规程1、开机顺序（1）开启计算机。
（2）开启仪器主机电源。
按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。
同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色。
2、打开运行软件。
（1）双击桌面图标（FL Solution 2.1 for F-7000）。
主机自行初始化，扫描界面自动进入。
（2）初始化结束后，须预热15-20分钟，按界面提示选择操作方式。
3、关机顺序（逆开机顺序实施操作）：（1）关闭运行软件FL Solution 2.1 for F-7000。
（2）关闭仪器主机电源。
（3）关闭计算机。
注意事项（1）注意开机顺序。
步骤1-（2）若是未先开主机，则程序会抓取不到主机讯号。
（2）注意关机顺序。
（3）为延长仪器使用寿命，扫描速度、负高压、狭缝的设置一般不宜选在高档。
（4）关机后必须半小时（等氙灯温度降下）方可重新开机。
F-7000荧光分光光度计使用操作步骤1、开机：（1）开启计算机。
（2）开启仪器主机电源。
按下仪器主机左侧面板下方的黑色按钮（POWER）。
同时，观察主机正面面板右侧的Xe LAMP 和RUN指示灯依次亮起来，都显示绿色。
2、计算机进入Windows XP视窗后，打开运行软件（如图1）。
（1）双击桌面图标（FL Solution 2.1 for F-7000）。
主机自行初始化，扫描界面自动进入。
（2）初始化结束后，须预热15-20分钟，按界面提示选择操作方式。
图1 FL Solution 2.1扫描界面3、测试模式的选择：波长扫描（wavelength scan）（1）点击扫描界面右侧“Method”。
（2）在“General”选项中的“Measurement”选择“wavelength scan”测量模式，如图2。
图2 Method--“General”选项的界面（3）在“Instrument”选项中设置仪器参数和扫描参数，如图3。
紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介
紫外可见分光光度计操作步骤及注意事项简介操作步骤操作之前1.1开启电源进行初始化开启主机电源，分光光度计将按屏幕所显示的项目进行自检和初始化，如下图所示。
所有项目检测完毕，初始化结束，整个过程大约需要4min（若使用多池检测需5min）。
每个项目进行初始化操作时将被加亮显示，当初始化完成后，该项右边的星标也将加亮显示。
但是，如果检测到任何异常，初始化过程将立即中止，星标也不会加亮显示。
1.2屏幕显示和触摸键盘UV-1700的触摸键盘图可用数字键0~9和功能键F1~F4选择不同屏幕中的模式和设置。
选择时，按下相应的数字键或功能键即可，无需按ENTER键确认。
此外，输入数值时，如波长设置或显示模式等，必须按ENTER键确认输入值。
下面介绍每个键的基本功能，在不同屏幕下有一些键可能被赋予特殊的功能。
①START/STOP键一旦参数设置完成，可用该键开始和停止测量过程。
②AUTO ZERO键按该键，当前波长的吸光度自动调整为0（100%T）。
测量前，必须确保在样品侧和参比侧中都放有盛有空白的比色池。
③GOTOWL键该键可用来改变当前的波长。
④ENTER键输入数值后，按该键确认。
⑤Cursor光标键（＜（-），＞）这组键可控制液晶显示屏幕中光标的左右移动。
输入数值时，左光标键还可以用来输入负值（-）。
⑥Function功能键（F1~F4）这组键的功能与液晶显示屏幕下方所显示的功能相对应。
⑦RETURN键按下该键可返回当前屏幕的前一屏。
⑧MODE键用该键可从每种测量模式的参数设置屏返回到主模式屏。
⑨Print打印键用该键可输出当前屏幕显示的硬拷贝。
⑩Numeric数字键用该键可输入数值？CE键用该键可清除数值输入错误。
按该键，已输入的数值将被清除，可重新输入正确的数值。
模式选择和共享操作初始化完成后即显示模式选择屏幕各种模式概述：在模式选择屏幕下选择各种测量模式，即显示各自的参数配置屏幕。
①光度模式在固定波长下测量样品的吸光度或%透光率。
可见分光光度计使用的基本步骤
可见分光光度计使用的基本步骤一、仪器准备1. 确保可见分光光度计处于稳定的工作状态，检查电源是否正常连接，并确保仪器内部的光源和检测器没有损坏。
2. 清洁仪器的光路系统，包括光源、单色器、样品室和检测器，以确保准确的测量结果。
3. 使用标准溶液校准仪器，确保测量的准确性和可靠性。
二、样品处理1. 准备待测样品，并确保样品溶解彻底，避免出现悬浮物或沉淀物影响测量结果。
2. 如果样品浓度过高，可以适当稀释以在可见光范围内进行测量。
3. 样品应尽量避免与外界光源接触，以防止光散射和吸收的影响。
三、测量操作1. 打开仪器电源，并等待一段时间，使仪器达到稳定状态。
2. 将样品放入样品室中，确保样品室的盖子牢固关闭，避免外界光线的干扰。
3. 选择合适的波长范围进行测量，通常可见光范围为380-780nm。
4. 设置所需的光谱扫描参数，如扫描速度、积分时间等，根据实际情况进行调整。
5. 点击开始测量按钮，仪器将自动进行光谱扫描，并显示测量结果。
四、数据分析1. 分析测量结果，观察样品的吸光度和透过率，根据需要可以绘制吸光度-波长曲线或透过率-波长曲线。
2. 根据吸光度的变化确定样品的浓度或反应程度。
3. 如果需要测量多个样品或进行对比分析，可以依次更换样品并重复上述测量步骤。
五、注意事项1. 避免将样品直接接触到仪器的光路系统，以防止污染和损坏。
2. 在测量前，应先校准仪器，使用标准溶液进行校准，确保测量结果的准确性。
3. 注意选择合适的光源和滤光片，以获得所需的波长范围和光强度。
4. 仪器操作过程中应轻拿轻放，避免碰撞和摔落。
5. 定期清洁仪器的光路系统，以保持仪器的灵敏度和准确性。
六、常见问题解答1. 为什么在测量前需要校准仪器？校准仪器可以消除仪器本身的误差，并确保测量结果的准确性。
2. 为什么在测量样品前需要稀释？样品浓度过高会使光通过样品时发生较大的吸收，导致测量结果不准确。
3. 为什么样品需要避免与外界光源接触？外界光源会干扰测量结果，影响测量的准确性。
分光光度计的使用方法
分光光度计的使用方法主体内容：1．使用仪器前，使用者应该首先了解本仪器的结构和工作原理。
以及各个操作旋钮之功能。
在未接通电源前，应该对仪器的安全性进行检查，电源线接线应牢固。
通地要良好，各个调节旋钮的起始位置应该正确，然后再接通电源开关。
仪器在使用前先检查一下，放大器暗盒的硅胶干燥筒(在仪器的左侧)，如受潮变色，应更换干燥的蓝色硅胶或者倒出原硅胶，烘干后再用。
2．将灵敏度旋钮调置“ 1档”(放大倍率最小)。
3．开启电源，指示灯亮，选择开关置于“ T，”波长调至测试用波长。
仪器预热20 分钟。
4．打开试样室盖(光门自动关闭)，调节“ 0旋”钮，使数字显示为“ 00.0，盖上试样室盖，将比色皿架置与蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率“ 100%旋”钮，使数字显示为“ 100.0。
”5．如果显示不到“ 100.0，”则可适当增加微电流放大器的倍率档数，但尽可能置低倍率档使用，这样仪器将有更高的稳定性。
但改变倍率后必须按(4)重新校正“0和”“ 100%。
”6．预热后，按(4)连续几次调整“ 0和”“100%，”仪器即可进行测定工作。
7．吸光度 A 的测量按(4)调整仪器的“ 00.0和”“100%，”将选择开关置于“A，”调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000，”然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度值。
8．浓度 C 的测量：选择开关由“A旋”置“C，”将已标定浓度的样品放入光路，调节浓度旋钮，使得数字显示为标定值，将被测样品放入光路，即可读出被测样品的浓度值。
9．如果大幅度改变测试波长时，在调整“ 0和”“ 100%后”稍等片刻，（因光能量变化急剧，光电管受光后响应缓慢，需一段光响应平衡时间），当稳定后，重新调整“0和”“100%”即可工作。
10．每台仪器所配套的比色皿，不能与其它仪器上的比色皿单个调换。
11．本仪器数字表后盖，有信号输出0～1000MV，插座1脚为正，2脚为负接地线。
紫外可见分光光度计的操作和维护
紫外可见分光光度计的操作和维护紫外可见分光光度计是一种常用的分析仪器，用于测定物质的吸光度、透过率、浓度等参数为了确保设备的准确性和稳定性，正确操作和维护紫外可见分光光度计至关重要本手册提供了紫外可见分光光度计的基本操作步骤和维护方法一、操作步骤1. 开机准备1.确保设备放置在稳定的环境中，避免振动和强光干扰2.接通电源，开启设备等待设备自检完成后，进入操作界面2. 调整波长1.在操作界面中选择“波长调整”功能2.使用鼠标或触摸屏点击波长切换按钮，直至选择到所需的波长3.确认波长后，点击“确定”按钮3. 调零1.在操作界面中选择“调零”功能2.点击“调零”按钮，设备将自动进行调零操作3.调零完成后，点击“确定”按钮4. 测量1.在操作界面中选择“测量”功能2.将样品放入样品池中，确保样品不接触池底3.点击“测量”按钮，设备将自动进行测量4.测量完成后，点击“确定”按钮，获取测量结果5. 数据处理1.在操作界面中选择“数据处理”功能2.根据需要选择适当的数学运算方法，如吸光度、透过率等3.点击“计算”按钮，设备将自动进行数据处理4.数据处理完成后，点击“确定”按钮，获取最终结果二、维护与保养为了确保紫外可见分光光度计的正常运行和延长使用寿命，定期进行维护与保养至关重要以下是一些基本的维护与保养方法：1. 清洁1.定期清洁设备表面，避免灰尘和污垢积累2.使用湿布擦拭设备，不要使用腐蚀性清洁剂3.清洁样品池和比色皿，确保无污垢和残留物2. 更换光源1.定期检查光源是否正常工作，如发现异常，及时更换2.更换光源时，请确保使用与设备兼容的光源3. 校准1.定期进行设备校准，确保测量结果的准确性2.根据设备说明书，按照校准步骤进行操作4. 检查光学系统1.定期检查光学系统，确保无划痕、污垢或损坏2.使用清洁布轻轻擦拭光学元件，避免使用腐蚀性清洁剂5. 检查电源1.确保设备接入稳定的电源，避免电压波动对设备造成损害2.若设备出现电源问题，及时与专业人员进行联系三、安全注意事项1.在操作紫外可见分光光度计时，请佩戴适当的防护用品，如防护眼镜、手套等2.避免直接照射眼睛和皮肤，以防紫外线伤害3.不要将样品与设备接触，以防污染或损坏设备4.操作设备时，请勿触摸热源或光源部分，以免造成烫伤正确操作和维护紫外可见分光光度计是确保设备准确性和稳定性的关键请遵循本手册提供的操作步骤和维护方法，并在使用过程中注意安全如有疑问或设备故障，及时与专业人员进行联系紫外可见分光光度计是一种常用的分析仪器，用于测定物质的吸光度、透过率、浓度等参数为了确保设备的准确性和稳定性，正确操作和维护紫外可见分光光度计至关重要本手册提供了紫外可见分光光度计的基本操作步骤和维护方法一、操作步骤1. 开机准备1.确保设备放置在稳定的环境中，避免振动和强光干扰2.接通电源，开启设备等待设备自检完成后，进入操作界面2. 调整波长1.在操作界面中选择“波长调整”功能2.使用鼠标或触摸屏点击波长切换按钮，直至选择到所需的波长3.确认波长后，点击“确定”按钮3. 调零1.在操作界面中选择“调零”功能2.点击“调零”按钮，设备将自动进行调零操作3.调零完成后，点击“确定”按钮4. 测量1.在操作界面中选择“测量”功能2.将样品放入样品池中，确保样品不接触池底3.点击“测量”按钮，设备将自动进行测量4.测量完成后，点击“确定”按钮，获取测量结果5. 数据处理1.在操作界面中选择“数据处理”功能2.根据需要选择适当的数学运算方法，如吸光度、透过率等3.点击“计算”按钮，设备将自动进行数据处理4.数据处理完成后，点击“确定”按钮，获取最终结果二、维护与保养为了确保紫外可见分光光度计的正常运行和延长使用寿命，定期进行维护与保养至关重要以下是一些基本的维护与保养方法：1. 清洁1.定期清洁设备表面，避免灰尘和污垢积累2.使用湿布擦拭设备，不要使用腐蚀性清洁剂3.清洁样品池和比色皿，确保无污垢和残留物2. 更换光源1.定期检查光源是否正常工作，如发现异常，及时更换2.更换光源时，请确保使用与设备兼容的光源3. 校准1.定期进行设备校准，确保测量结果的准确性2.根据设备说明书，按照校准步骤进行操作4. 检查光学系统1.定期检查光学系统，确保无划痕、污垢或损坏2.使用清洁布轻轻擦拭光学元件，避免使用腐蚀性清洁剂5. 检查电源1.确保设备接入稳定的电源，避免电压波动对设备造成损害2.若设备出现电源问题，及时与专业人员进行联系三、安全注意事项1.在操作紫外可见分光光度计时，请佩戴适当的防护用品，如防护眼镜、手套等2.避免直接照射眼睛和皮肤，以防紫外线伤害3.不要将样品与设备接触，以防污染或损坏设备4.操作设备时，请勿触摸热源或光源部分，以免造成烫伤正确操作和维护紫外可见分光光度计是确保设备准确性和稳定性的关键请遵循本手册提供的操作步骤和维护方法，并在使用过程中注意安全如有疑问或设备故障，及时与专业人员进行联系应用场合科学研究紫外可见分光光度计广泛应用于化学、生物学、环境科学、材料科学等领域的科学研究它可以帮助科学家们测定物质的浓度、分析物质的组成、研究物质的结构等在实验室中，紫外可见分光光度计是一种常用的分析工具，可以为研究提供准确、可靠的数据工业生产紫外可见分光光度计也可用于工业生产中的质量控制和工艺优化例如，在制药行业中，它可以用于测定药品中活性成分的含量，确保产品质量符合标准在食品工业中，它可以用于检测食品中的添加剂和污染物此外，在材料制造业中，它可以用于监测材料的光学性能变化，以优化生产工艺教育与培训紫外可见分光光度计也是教育和培训的重要工具在高校和职业学校的化学、物理、生物等课程中，它可以用于实践教学，让学生们亲手操作，学习光谱分析的基本原理和方法同时，它也可以用于教师和研究人员的科研工作，提高科研教学水平注意事项操作规范1.在操作紫外可见分光光度计之前，应仔细阅读设备说明书，了解设备的操作方法和注意事项2.操作设备时，应遵循安全规程，佩戴适当的防护用品，如防护眼镜、手套等3.避免直接照射眼睛和皮肤，以防紫外线伤害4.不要将样品与设备接触，以防污染或损坏设备维护与保养1.定期进行设备校准，确保测量结果的准确性2.定期清洁设备表面，避免灰尘和污垢积累3.使用湿布擦拭设备，不要使用腐蚀性清洁剂4.清洁样品池和比色皿，确保无污垢和残留物5.定期检查光源是否正常工作，如发现异常，及时更换6.检查光学系统，确保无划痕、污垢或损坏7.确保设备接入稳定的电源，避免电压波动对设备造成损害数据处理与分析1.在数据处理与分析过程中，应确保操作的正确性，避免误操作导致数据错误2.根据实验需求，选择适当的数学运算方法，如吸光度、透过率等3.注意检查数据的合理性，如有异常，应重新进行测量或检查设备4.在数据分析过程中，应充分理解数据背后的含义，结合实验背景进行合理解读安全与环保1.操作设备时，请注意安全，遵守实验室安全规程2.设备运行过程中，如发现异常情况，应立即停止运行，并及时与专业人员进行联系3.使用过程中，应遵守环保法规，妥善处理废弃物，减少对环境的影响正确操作和维护紫外可见分光光度计，能为科学研究、工业生产和教育与培训提供准确、可靠的数据支持同时，遵循注意事项，确保设备的安全、稳定运行，延长使用寿命。
光栅分光光度计操作规程模版
光栅分光光度计操作规程模版
1. 仪器准备
1.1 准备光栅分光光度计及其附件。
1.2 确保仪器处于稳定的工作环境中，远离干扰源，如强磁场、强光等。
2. 仪器启动
2.1 检查并确保光栅分光光度计的电源线连接正常，然后接通电源。
2.2 检查和确定仪器的光源开关处于关闭状态。
2.3 检查并确定仪器连接至电脑的通信线正确连接。
3. 样品处理
3.1 准备好待测样品，并按照实验要求进行处理。
3.2 确保待测样品干净、无污染，并且合适装入仪器。
4. 仪器校准
4.1 打开光栅分光光度计软件，并进入校准模式。
4.2 根据实验要求选择正确的波长，并进行波长校准。
4.3 根据实验要求选择正确的光程、光强和零点，并进行校准。
5. 测量操作
5.1 将待测样品放入光栅分光光度计样品台。
5.2 选择实验要求的测量模式，如吸光度、透射率等。
5.3 输入实验要求的光程、波长和样品信息等参数。
5.4 按下开始测量按钮，进行测量。
6. 数据处理
6.1 测量完成后，保存数据至电脑存储设备。
6.2 使用光栅分光光度计软件对测量数据进行处理和分析。
7. 仪器关机
7.1 关闭光栅分光光度计软件。
7.2 关闭光栅分光光度计，先断开电源，再断开通信线。
8. 资料整理
8.1 清理光栅分光光度计及其附件，确保没有残留样品或污物。
8.2 整理保存实验相关的资料和数据。
这就是光栅分光光度计的操作规程模版，按照以上步骤进行操作可以有效保证实验的准确性和可重复性。
原子吸收分光光度计操作步骤
原子吸收分光光度计操作步骤概述原子吸收分光光度计是一种用来测定溶液中金属元素浓度的仪器，通过测定样品吸收光的强度来推断样品中金属元素的浓度。
本文将介绍原子吸收分光光度计的基本原理及操作步骤。
基本原理原子吸收分光光度计利用原子吸收光谱实现测定金属元素浓度的目的。
它的基本原理是：原子的特定波长的光被样品吸收后，光强度降低与样品中金属元素的浓度成正比。
根据比尔-朗伯定律，吸光度与样品浓度呈线性关系。
操作步骤1. 仪器准备•打开原子吸收分光光度计电源，并等待仪器预热至稳定状态。
•检查气体供应是否充足，确保氢和氧化乙炔供应正常。
2. 样品制备•准备样品溶液，确保溶液浓度在仪器的检测范围内。
•对于固体样品，可使用酸溶解、矿化或氧化等方法将其转化为可测试的溶液。
3. 仪器校准•使用标准物质调整仪器的测量和校准参数。
•根据测定的金属元素选择合适的标准物质，并按照标准曲线进行校准。
4. 设置仪器参数•对于需要测定的金属元素，根据其吸收光谱的特点设置仪器的工作参数，包括波长、单元时间、延迟时间等。
5. 样品测量1.取一定量的样品溶液，注入到光吸收池中。
2.将样品吸入到气溶胶化系统，生成微小的样品颗粒。
3.接通氢和氧化乙炔气体供应，使样品颗粒在火焰中加热，发生原子化。
4.选择合适的波长，使原子吸收光谱处于最大吸收峰位置。
5.通过光束传感器测量样品吸收光的强度。
6.记录吸收光强度数据，可以连续测量多个样品。
6. 数据处理原子吸收分光光度计测量后的数据分为样品吸光度和空白吸光度两部分。
通过计算样品吸光度与标准曲线的关系，可以得到样品中金属元素的浓度。
7. 清洗和维护•在测量结束后，关闭气体供应，清洗各个部件，以防止交叉污染。
•定期进行仪器维护和校准，保证仪器的准确性和稳定性。
注意事项•操作前必须做好实验室安全防护措施，佩戴适当的个人防护装备。
•严格按照仪器使用说明书进行操作。
•样品应当清洁、干燥，以确保测量的准确性。
•注意避免样品之间的污染和交叉污染。
紫外可见分光光度计操作步骤
紫外可见分光光度计操作步骤分光光度计是一种用于测量样品溶液中吸光度的仪器。
在化学、生物、药学等领域中应用广泛。
紫外可见分光光度计是其中一种常见的类型，用于测量紫外和可见光区域的吸光度。
以下是紫外可见分光光度计的操作步骤：1. 准备工作：在进行实验前，确保工作区域整洁，并确保仪器处于正确的工作状态。
检查光源、光栅、样品室和检测器等部件，确保它们正常工作并干净。
2. 样品的制备：根据实验要求，准备待测样品的溶液。
确保溶液浓度适宜，并考虑到样品的化学性质。
3. 仪器的开机：打开紫外可见分光光度计的电源开关，并等待一段时间，让仪器预热。
根据仪器型号的不同，可能需要预热几分钟或更长时间。
4. 波长的选择：根据实验需求，选择适当的波长范围。
通过调节光栅或使用仪器上的转盘，选择所需的波长。
5. 参比校准：进行参比校准以确保仪器的准确性和稳定性。
使用空白试剂或者校准溶液进行基准校准，将吸光度调整为零。
6. 目标样品测量：用吸光度盅或石英池装载样品，并将其放入样品室。
关闭样品室的盖子，确保良好的密封性。
获得准确的吸光度读数，注意记录所测得的吸光度值。
7. 重复测量和平均值：为了确保结果的准确性，可以进行多次重复测量，并计算平均值。
8. 数据处理：根据实验要求，对测得的吸光度数据进行相应的数据处理。
可以绘制曲线图、计算浓度或者比较不同样品之间的吸光度差异。
9. 关机：测量完成后，关闭仪器的电源开关，并进行必要的清理工作。
清除样品室和其他部件上可能残留的溶液或污染物。
紫外可见分光光度计的操作步骤可以根据实验需求的不同而有所变化。
以上步骤只是一个基本的操作指南，大致展示了使用分光光度计的一般流程。
在具体操作中，根据实验要求和仪器的使用说明进行操作，以确保实验的准确性和可靠性。
分光光度计操作规程_722分光光度计使用
分光光度计操作规程_722分光光度计使用
1.准备工作
a.将仪器放置在稳定的、光线充足的工作台上，并接通电源。
b.打开仪器软件，并确保仪器与计算机正常连接。
c.检查分光光度计的波长范围和准确度是否符合实验要求。
2.校准分光光度计
a.使用标准溶液进行波长和零点校准。
先选择一个已知浓度的标准品，将其溶解在适量的溶剂中。
b.将校准溶液注入样品池中，选择合适的波长进行校准。
根据校准曲线，调节零点和波长以获得正确的吸收峰值。
c.重复上述步骤，直到仪器校准到仪器规定的标准范围内。
3.测量样品
a.准备样品溶液，并将其注入样品池中。
b.选择合适的波长，并设置光程长度。
c.记录样品的吸收峰值，并计算吸光度。
d.如果需要测量多个样品，使用清洁纸巾或纱布仔细清洁样品池，然
后将下一个样品放入样品池中进行测量。
4.记录数据和分析
a.将测量结果记录下来，包括样品的吸光度值、波长和光程长度。
b.如果需要，根据实验需要对数据进行进一步处理和分析。
5.关闭分光光度计
a.测量结束后，关闭仪器软件。
b.清洁和擦拭仪器，确保其干净整洁。
c.关闭仪器电源。
以上是分光光度计的基本操作规程，具体操作规程可能因不同的仪器型号而有所不同。
在操作过程中，要注意避免污染样品，保持仪器的清洁和干燥，避免操作不当或者过度操作导致仪器的损坏。
同时，对于高精度的测量，还需要注意温度、湿度等环境因素的控制。
F-180型荧光分光光度计操作规程
F-180型荧光分光光度计基本操作规程1、开机（1）开启装有荧光分析软件的计算机。
（2）将荧光分光光度计用随机配带的USB数据线连接到电脑的USB 接口。
（3）将荧光分光光度计开关（仪器主机左侧面板下方的黑色按钮）按向“ON”，打开荧光分光光度计电源。
同时，观察主机正面面板右侧的氙灯指示灯和运行指示灯依次亮起来，都显示绿色。
（4）30秒钟后打开荧光分析软件。
有两种方法，分别为：●“开始”——“程序”——“F180”●双击桌面图标打开软件。
主机自行初始化，扫描界面自动进入。
（5）初始化结束后，须预热15-20分钟，按界面提示选择操作方式。
2、样品测定（1）在测量之前要设定分析条件。
有两种方法进行分析条件设置。
●从“工具”菜单中，选择“配置”命令。
●点击“测量方法”按钮，将显示一个对话框。
共三种类型的分析条件：波长扫描、时间扫描和定量分析。
一般选择定量分析。
（2）当选择基本设置标签时，将显示一个窗口，按照实验需要进行设置。
（3）建立标准曲线1.输入标准样品浓度值打开样品表窗口，如样品浓度值不合适，双击鼠标左键更改。
2.测量标准样品荧光值在样品表窗口样品1波长处单击鼠标右键，首先测量空白样品，然后再测量标准样品。
依次测完所有标准样品。
3.显示拟合曲线点击右侧工具栏最下方图标，显示拟合曲线、公式及参数。
（4）测量样品光标移到样品显示区，单击鼠标右键点击测量，样品的荧光值与浓度显示在样品显示区。
重复以上操作完成所有样品测量。
（5）设置光闸“开”、“关”或“自动”可通过右侧工具栏中间图标进行切换。
（6）测量完成，点击“完成”结束本次测量。
3、关机（1）如果在联机状态下，先回到主界面（即扫描界面），点击菜单“工具——关闭氙灯”关闭氙灯，将提示“确认关闭氙灯吗？”，点击“确定”，将关闭氙灯，点击“取消”，则退出窗口。
（2）然后，点击软件的关闭按钮，将提示“确定关闭扫描窗口吗？”，点击“是（Y）”，关闭软件，“否（N）”，返回。
分光光度计使用原理及操作方法
分光光度计使用原理及操作方法分光光度计使用原理及操作方法一、分光光度计的原理分光光度计是一种测量样品溶液中吸收或透射光强的仪器。
它的基本原理是通过将可见光或紫外光通过样品溶液后，测量出光强的变化，从而得知样品溶液中物质的浓度或其他性质。
分光光度计的原理可以分为下面几个步骤：1. 光源发射：分光光度计通常使用可见光或紫外光作为光源。
这些光经过滤波器减少杂散光，通过准直系统形成平行光束。
2. 样品测量：经过准直系统形成的平行光束通过样品溶液，样品中吸收或透射一部分光。
被吸收的光与未经样品的光进行比较，通过这种比较可以得到吸光度或透光度。
3. 光电传感器检测：被吸收或透射后的光通过光电传感器检测并转化为电信号。
光电传感器常用的有光电二极管或光电倍增管。
4. 信号处理和显示：光电传感器转化的电信号经过放大和滤波处理后，通过计算机或显示器显示出吸光度或透光度的数值。
二、分光光度计的操作方法1. 准备工作：在使用分光光度计之前，需要进行准备工作。
这包括检查仪器是否处于正常工作状态，校准仪器的零点，确认样品槽或比色皿是否清洁干净。
2. 设定波长：根据需要测量的物质，设定合适的波长。
分光光度计通常具有可以选择波长的旋钮或按钮，通过旋转或按键来设定所需的波长。
3. 参比校正：为了确保测量结果的准确性，需要进行参比校正。
这可以通过将参比溶液放入样品槽，并记录下参比物质的吸光度或透光度值。
然后将样品溶液放入样品槽中进行测量。
4. 测量样品：将待测样品溶液放入样品槽中，确保溶液填满槽，并将样品槽放入分光光度计中。
根据需要选择透射模式或吸收模式，开始测量。
5. 记录和分析：根据测量结果记录样品的吸光度或透光度值。
可以根据所测得的数值进行进一步的数据分析和计算。
6. 清洁操作：在使用完毕后，及时清洁分光光度计的样品槽和其他部件，以确保下次使用时的准确性和可靠性。
三、注意事项1. 避免阳光直射：分光光度计的使用需要避免阳光直射，以免影响测量的准确性。
分光光度计使用方法
分光光度计使用方法分光光度计是一种用于测量溶液中物质浓度或溶液中特定物质含量的仪器，它利用光的吸收特性来进行测量。
在实验室中，分光光度计被广泛应用于化学、生物、环境等领域。
下面将介绍分光光度计的使用方法，希望能对您有所帮助。
1. 准备工作。
在使用分光光度计之前，首先要进行仪器的准备工作。
确保仪器处于正常工作状态，检查光源、光栅、检测器等部件是否完好。
同时，还需要校准仪器，以确保测量结果的准确性。
2. 样品处理。
在进行光度测量之前，需要对待测样品进行处理。
通常情况下，样品需要进行稀释或者过滤，以确保测量结果的准确性。
另外，还需要注意避免气泡的产生，因为气泡会影响光的透过性，从而影响测量结果。
3. 设置参数。
在进行光度测量之前，需要根据样品的特性来设置分光光度计的参数。
包括选择合适的波长、设定光程、调整灵敏度等。
这些参数的设置将直接影响到测量结果的准确性，因此需要认真对待。
4. 测量操作。
当准备工作完成并且参数设置好之后，就可以进行光度测量操作了。
将样品装入光度计的样品室中，关闭样品室，并启动仪器进行测量。
在测量过程中，需要确保仪器的稳定性，避免外界因素对测量结果的影响。
5. 数据处理。
测量完成后，得到的数据需要进行处理和分析。
根据实际情况选择合适的数据处理方法，比如绘制标准曲线、计算浓度等。
同时，还需要对测量结果进行验证，确保数据的准确性和可靠性。
6. 仪器维护。
在使用分光光度计之后，需要对仪器进行及时的清洁和维护工作。
清洁仪器表面和样品室，保持仪器的整洁和干净。
另外，还需要定期对仪器进行维护和保养，延长仪器的使用寿命。
总结。
分光光度计是一种非常重要的实验仪器，它在科研和实验室工作中扮演着重要的角色。
正确的使用方法和维护保养对于保证测量结果的准确性至关重要。
希望通过本文的介绍，能够帮助您更好地掌握分光光度计的使用方法，提高实验工作的效率和准确性。
紫外可见分光光度计的操作和使用
紫外可见分光光度计是一种广泛应用于化学、生物、药物等领域的实验仪器，它可以用来测量样品对紫外和可见光的吸收情况，从而得到样品的吸光度和浓度等重要参数。
在科研实验室和生产现场中，紫外可见分光光度计的操作和使用技巧非常重要，正确的操作可以确保实验结果的准确性和可靠性。
下面将介绍紫外可见分光光度计的操作和使用方法：一、准备工作1.1 样品的制备：首先要准备好需要测量的样品，确保样品的制备符合实验要求，并且样品溶液的浓度和透明度在光度计测量范围内。
1.2 仪器的准备：打开紫外可见分光光度计的电源，将仪器预热至稳定的工作温度，同时检查仪器的灯泡和光栅等部件是否正常。
二、测量操作2.1 校准仪器：在进行测量之前，必须对仪器进行校准，保证测量结果的准确性。
2.2 装样品：将样品溶液分别加入光度计的比色皿或石英比色皿中，注意不要留下气泡或杂质。
2.3 设定参数：根据样品的特性和测量要求，设定光度计的波长、光程和测量范围等参数。
2.4 测量数据：开始测量之后，观察样品的吸光度变化曲线，并记录下稳定的吸光度数值。
三、数据处理3.1 计算浓度：根据测得的吸光度数值，使用比色法或标样法计算出样品的浓度。
3.2 分析结果：根据测得的数据，分析样品的吸收特性和浓度变化规律，得出实验结论。
四、仪器维护4.1 清洁保养：每次使用完毕后，要及时清洁光度计的仪器和光学部件，确保仪器的稳定性和精度。
4.2 故障排除：如果在使用过程中发现仪器出现故障或异常，及时进行故障排除和维修处理。
五、注意事项5.1 防止污染：在操作过程中要注意避免样品污染或交叉污染，确保测量结果的准确性。
5.2 安全操作：使用化学药品和致癌物质时，要做好个人防护，避免对身体造成伤害。
通过以上对紫外可见分光光度计的操作和使用方法的介绍，相信大家对这一实验仪器有了更加深入的了解。
正确的操作和使用方法可以帮助科研人员和实验人员获得准确可靠的实验数据，为科学研究和生产实践提供有力支持。
分光光度计的操作规程
分光光度计的操作规程
《分光光度计操作规程》
一、目的：
为了正确、安全地操作分光光度计，保证实验数据的准确性和可靠性。
二、操作步骤：
1. 打开分光光度计电源，并预热30分钟。
2. 打开分光光度计软件，进行系统自检，并调整仪器为待测物质的最佳波长。
3. 调整仪器的光谱扫描参数，包括扫描范围、扫描速度等。
4. 使用洁净的玻璃仪器盖，将待测溶液倒入比色皿中，放入分光光度计样品舱。
5. 调节光路长度，使得样品舱内的溶液透光度最大。
6. 在软件中启动光谱扫描，记录扫描结果。
7. 将待测溶液倒出，用纯水清洗比色皿和样品舱，然后用吸水纸吸干。
8. 关闭分光光度计软件，关闭仪器电源，清洁并整理工作台面。
三、注意事项：
1. 操作人员必须穿戴实验服和实验手套，避免对待测溶液的污染。
2. 切勿将溶液倒入分光光度计内部，防止对仪器造成损坏。
3. 操作过程中要注意光谱扫描的速度和范围，避免错过待测物质的吸收峰。
4. 定期对分光光度计进行维护保养，保证仪器的稳定性和准
确性。
四、总结：
分光光度计是一种精密的仪器，操作规程的严格执行可以确
保实验数据的准确性和可靠性。
操作人员应严格按照规程进行操作，同时定期对仪器进行维护保养，以保证其长期稳定运行。
UV-1800紫外可见分光光度计操作流程
UV-1800紫外可见分光光度计操作流程
一、测量前的准备工作
1、开机
检查仪器、电脑和打印机的电源线是否良好，确认样品室中无遮挡物；打开打印机电源，打开主机电源，然后打开计算机电源，打开工作站，进入光度计自检过程，自检无误后进入主工作程序；预热15-30分钟，然后开始测量；
2、设置通讯端口
选择菜单[配置]-[通讯端口]，在此窗口中可选择软件所使用的通讯端口“COM1”或者“COM2”等，单击[确定]。
3、基线校正
保证仪器在整个波段范围内基线的平直度及光度准确度，每次测量前需进行基线校正或自动校零。
二、基本操作
根据不同需要，选择其中的不同工作模式（光谱测量、光度测量、定量测量和时间扫描），设定工作参数，然后插入样品进行测量，并根据需要打印出结果。
三、关机
测量工作结束后，用户应选择【文件】菜单的【退出】项退出系统，以便保存必要的操作数据。
关电源时，应先关闭仪器主机的电源，然后正确退出Windows并关闭计算机电源，最后关闭其它设备的电源。
注意事项
1、仪器要预热15-30分钟，保证测定的准确性。
2、每次测量前需进行基线校正或自动校零。
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分光光度计的使用操作
分光光度计的使用操作
使用分光光度计进行测量的基本操作包括以下几个步骤：
1. 准备工作：确保分光光度计处于正常工作状态，检查光源、接收器、滤光片等部件是否正常，若有需要则进行调整或更换。
2. 校零操作：将分光光度计调零，使得光度计读数为零。
一般情况下，先关闭光源，然后将空白试样放入仪器并调整至零点读数。
3. 设置波长：根据需要进行波长调整，选择合适的波长。
通常，可根据样品的特性确定适当的波长。
4. 放入样品：将待测样品放入分光光度计的样品室中，确保样品与测量器件充分接触，防止遮光等干扰。
5. 读取光度：打开光源，并开始测量。
根据设备的使用说明，可在显示屏上读取相应的光强度或透过率数值。
6. 记录和分析结果：根据测量结果，记录光强度或透过率数值，并根据需要进行数据分析和处理。
7. 清洁和保养：使用完毕后，注意清洁分光光度计的各个部件，尤其是样品室，以免污染下一次测量。
需要注意的是，不同型号的分光光度计可能有一些差异，因此
在使用前最好先参考设备的相关操作说明书或咨询专业人士了解具体的操作步骤。
分光光度计使用说明书
分光光度计使用说明书使用说明书一、产品概述分光光度计是一种用于测量溶液的吸光度的仪器。
利用该仪器可以快速准确地确定溶液的浓度或者反应速率。
本使用说明书将介绍如何正确操作和维护分光光度计，以确保获得准确可靠的测量结果。
二、操作步骤1. 准备工作：a. 将分光光度计放置在水平台面上，并接通电源。
b. 打开仪器盖，确保样品池干净无杂质。
c. 检查光源和检测器是否正常工作，如有异常请联系售后服务。
2. 设置测量参数：a. 根据待测样品的特性选择适当的波长。
可参考相关文献或专业建议。
b. 在仪器控制面板上输入所选波长，并设置所需测量模式（如吸光度、浓度等）。
c. 确定所需测量次数，若需要测量同一样品的多个数据点，请设置合适的扫描速度和时间间隔。
3. 校准仪器：a. 使用标准品进行仪器校准。
可选择合适的标准品（如纯净水或已知浓度的溶液）进行校准，确保测量精确度。
b. 将标准品放入样品池中，按下校准按钮，仪器将自动校准至零位。
4. 放置样品：a. 将待测样品倒入样品池中，确保样品池完全填满，且无气泡或杂质。
b. 关闭仪器盖，避免外界光干扰。
5. 进行测量：a. 按下测量按钮，仪器将自动开始测量。
b. 等待测量结果稳定后，记录测量数值。
c. 如果需要连续测量多个样品，请按照上述步骤将新样品放置在样品池中。
6. 数据处理：a. 根据测量结果计算所需的浓度或者反应速率。
b. 如有需要，可将数据导出至外部设备或者打印机。
c. 清除样品池中的残留物，确保仪器和样品池保持干净。
三、维护和注意事项1. 定期清洁：a. 关闭仪器电源，并拔除电源插头。
b. 用温和的清洁剂和柔软布将仪器外部表面擦拭干净。
c. 定期检查光源和检测器的工作状态，如有异常应及时联系售后服务。
2. 防尘措施：a. 保持仪器处于干燥无尘的环境中，避免粉尘进入仪器内部。
b. 不使用时，及时盖好仪器盖，防止灰尘积累。
3. 注意事项：a. 在操作分光光度计时，请确保手部无水分、油脂或溶液残留，以免影响测量结果。
紫外可见分光光度计使用指南
紫外可见分光光度计使用指南紫外可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是一种广泛应用于化学、生物、医药等领域的分析仪器。
本文将为您详细介绍紫外可见分光光度计的使用指南，旨在帮助您正确操作和掌握这一仪器。
一、仪器简介紫外可见分光光度计主要由光源系统、样品室、光栅系统、检测器以及数据处理等部分组成。
其中光源系统提供所需的可见光和紫外光源，而样品室则是放置待测样品的空间。
此外，光栅系统用于分光，检测器用于检测光的强度变化，而数据处理则是对光谱进行处理和分析。
二、准备工作1. 确保仪器处于水平放置，并连接好电源和通电。
2. 打开仪器软件，并确保与电脑连接正常。
3. 清洁样品室，确保无尘和杂质，并待样品室干燥后再使用。
4. 校准仪器，以确保准确的测量结果。
三、测量操作步骤1. 软件选择：在电脑上的仪器软件上选择适当的测量模式，比如吸光度或者特定波长测量模式。
2. 光程设定：根据测量样品的类型和浓度，设置合适的光程。
3. 参考峰设定：使用纯溶剂或空白试样设定参考峰，以进行准确的吸光度测量。
4. 样品处理：将待测样品制备好，确保样品质量、浓度和体积的准确性。
5. 样品吸收测量：将样品放置于样品室中，点击软件“开始测量”按钮，记录吸光度的数值。
6. 数据处理：对测得的吸光度数据进行处理和分析，如绘制吸光度-波长曲线等。
四、注意事项1. 避免污染：使用洁净的试剂和仪器操作，避免样品和试剂污染，以免影响测量结果。
2. 防护措施：避免将有害物质接触到皮肤、眼睛或吸入，注意个人防护。
3. 清洁仪器：测量结束后，及时清洁仪器，保持仪器的良好状态。
4. 保养维护：定期进行仪器的保养和维护，如更换灯泡、校准光程等。
5. 数据备份：重要的测量数据需及时备份和存档，以防数据丢失。
五、故障排除1. 仪器无法通电或启动：检查电源和插线是否正常连接，确保电源供应稳定。
2. 光谱异常或不稳定：检查光源是否需要更换，清洁样品室和光栅，确保光谱信号正常。
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分光光度计基本操作方法
1、连接仪器电源线，确保仪器供电电源有良好的接地性能。
2、接通电源，开机使仪器预热20分钟。
至仪器自动校正后，显示器显示
“546.0nm 0.000A”仪器自检完毕，即可进行测试。
3、用<方式>键设置测试方式，根据您的需要选择，透光率（T），吸光度（A）
浓度（C）
4、选择您要分析的波长，按键6（设定键）屏幕上显示“WL=XXX.Xnm”字
样，按键1或2输入您要分析的波长，之后按键7（确认键）、显示器第一列右键显示“XXX。
Xnm BLANKING”仪器正在变换您所设置的波长及自动调出0ABS/100%请稍等。
待仪器显示出您需要的波长，并且已经把参数调成
0.000A时，即可测试。
5、将您的参比样品溶液和被测溶液分别倒入比色皿中，打开样品盖室，将
盛有溶液的比色皿插入比色皿中，盖上样品盖室。
6、将参比溶液推（拉）入光路中，按<0ABS/100%T>键调0ABS/100%T。
此时
显示器显示的BLANKING，直至显示“100%T”或“0.000A”为止。
7、当仪器显示器显示“100%T”或“0.000A”为止。
将待测样品拉入光路，
这时即可得到被测样品的透光比（T）或吸光度（A）参数。