小鼠心脏切片模具使用说明

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在无创性通气条件下快速建立小鼠心肌梗死模型的简易方法

在无创性通气条件下快速建立小鼠心肌梗死模型的简易方法

在无创性通气条件下快速建立小鼠心肌梗死模型的简易方法建立小鼠心肌梗死模型是研究心脏疾病机制和寻找新的治疗方法的重要手段之一、传统的建立小鼠心肌梗死模型的方法通常需要进行开胸及结扎冠状动脉手术,手术创伤大且操作复杂。

为了减少对小鼠的伤害,同时提高模型建立的效率,研究者提出了无创性通气条件下快速建立小鼠心肌梗死模型的简易方法。

1.实验材料准备:- 公共实验室小鼠(如Balb/C、C57BL/6等)- 地慢心脏梗死模型配套器械(如PureHeart Mini心脏梗死模型器材)2.实验步骤:步骤1:术前准备-按照实验要求准备相应的实验材料和设备-将小鼠逐个放入麻醉箱内进行麻醉,待小鼠完全昏迷(通常需要2-3分钟)步骤2:无创性通气条件下建立心肌梗死模型-麻醉后,将小鼠固定在手术台上,用消毒剂彻底擦拭小鼠胸部和腹部皮肤-将小鼠放置在体温控制垫上,保持恒温(37°C)- 将PureHeart Mini心脏梗死模型器材的针头插入小鼠第四肋间(左胸骨中线处),注意避免伤及心脏和其他重要组织-设定模型器材中压力泵的速率、时间和压力参数,以便形成合适的胸腔内压,有效模拟心脏梗死条件-开始通气,继续观察针头指针的转动方向,确保小鼠心脏受到一定程度的阻塞-经过一定时间后,停止通气并移除器材步骤3:术后处理-将小鼠放回饲养箱内恢复,可以提供温暖的环境和足够的饮食-关注小鼠的身体状态和行为,观察是否出现异常情况-根据实验设计,选择合适的时间点进行进一步的实验操作,如心电图监测、组织采集等3.实验注意事项:-建议在合适的无菌实验环境中进行实验操作,确保操作的无菌性-手术和实验过程中需要注意小鼠的麻醉深度和麻醉时间,避免对小鼠造成不必要的伤害-实验结束后,请做好相关废弃物和污染物的处理工作,以保护实验环境和生物安全无创性通气条件下快速建立小鼠心肌梗死模型是一种简易、有效的研究方法,可以显著减少对小鼠的手术损伤。

通过该方法建立的心肌梗死模型可用于研究心肌损伤和修复机制,以及筛选心脏保护药物和治疗方法。

小鼠心肌纤维化造模

小鼠心肌纤维化造模

小鼠心肌纤维化造模
操作流程及步骤:
1、取筛选后的纯合健康成年小鼠,准备手术器械。

2、小鼠麻醉:20g-阿氟汀0.3ml,腹腔注射[1]。

3、剃毛暴露术区。

4、小鼠固定,头-尾-四肢。

5、气管插管,连通呼吸机[2-4]。

6、开胸:第二与第三肋间附近开皮-钝性分离浅部肌肉层、深部肌肉层、穿
透胸膜暴露心脏。

7、用拉钩将上下肋骨拉开,暴露术野。

8、手术针在左心尔正下方2mm处穿入结扎[5]。

9、关胸,封皮。

10、撤掉呼吸机,放在温暖处待小鼠复苏。

11、2周后超声,4周左右造模成功。

心得体会及注意事项:
1、注意小鼠腹腔注射操作规范。

2、最难步骤需要多加练习。

3、插入标志胸部起伏有明显憋气感,拔出支撑导丝憋气症状明显改善.。

4、连通呼吸机后失去自主呼吸,呼吸频率与呼吸机一致。

5、成功标志:所结扎动脉供血下端心肌因缺血而出现缺血性白色。

小鼠心脏成纤维细胞说明书

小鼠心脏成纤维细胞说明书

小鼠心脏成纤维细胞说明书
1、组织来源:小鼠乳鼠
2、产品规格:25cm2培养瓶
3、细胞简介:
小鼠心脏成纤维细胞分离自正常大鼠心脏组织,细胞呈梭型、多边形等不规则形状。

体外培养的小鼠心脏成纤维细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

本公司生产的小鼠心脏成纤维细胞采用酶解法制备而来,细胞总量约为1×106个/瓶,细胞纯度可达85%以上,且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

二、使用方法
客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。

1、取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态;
2、待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养;
3、细胞传代
(1)吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
(2)添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,37℃温浴1-2min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入完全培养液终止消化;
(3)用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的完全培养基至5ml,放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养;
(4)待细胞完全贴壁后,培养观察。

之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。

(备注:由于实验所用试剂与操作环境的不同,以上方法供各实验室参考。


三、注意事项
1、培养基于4℃条件下可保存3-6个月;
2、在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作;
3、传代培养过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态;
4、该细胞只可用于科研。

小鼠MCAO手术造模步骤

小鼠MCAO手术造模步骤

10%水合氯醛溶液,中南大学湘雅三医院;XTL-400连续变倍体视显微镜,重庆澳浦东光电技术有限公司;单极微手术电凝器,武汉春光医疗美容仪器有限公司;眼科器械(眼科弯镊、眼科直镊、眼科剪、眼科钳等),视卓医疗器械有限公司;医用缝合针,巢湖市宾雄医疗器械有限公司;医用真丝编织线(5M灭菌线团),规格2-0、4-0、5-0,上海浦东金环医疗用品股份有限公司;碘伏;浓度75%医用酒精;医用棉签;手术刀片;剃须刀片;小鼠解剖台;组织剪;组织镊;止血钳;持针钳;微型动脉夹;1mL一次性注射器;特制的栓线;电子秤;红外灯等。

实验方法:采用改良的Zea Longa法,本法改良之处在于不暴露翼腭动脉(PPA ,pterygopalatine artery),而颈内动脉(ICA ,internal carotid artery)通过悬挂编织线以及夹动脉夹的方式阻碍其血流,最后从颈外动脉(ECA ,external carotid artery)插入栓线。

实验步骤:1、对禁食一晚的C57BL/6小鼠称重,以10%水合氯醛溶液按照0.004 mL/g小鼠体重的量对小鼠进行腹腔注射麻醉。

提前准备好用于结扎或阻断动脉的编织线,于生理盐水中浸润。

2、数分钟后,若小鼠不能自由翻身则认为已达到麻醉深度要求,将小鼠绑缚于解剖台上,在小鼠颈下塞以棉签垫高,碘伏消毒小鼠颈部并备皮。

3、沿小鼠颈部正中剪开皮肤,用眼科弯镊和眼科直镊在体视显微镜放大视野下钝性分离皮下组织和脂肪,划开浅肌膜和颈阔肌,暴露出颈深肌膜和气管前肌。

4、分离到气管前肌后,在右侧胸锁乳突肌前缘撕开颈深肌膜,显露胸锁乳突肌并将其拉向后侧,沿胸锁乳突肌向下继续分离,直到暴露较深位置的颈动脉鞘。

5、在避免压迫小鼠气管的同时,划开颈动脉鞘,分离出颈总动脉(CCA ,common carotidartery)并穿线以活结阻断血流,注意不要伤害到鞘内伴行的颈内静脉与迷走神经,对神经的刺激或损伤可能引起小鼠呼吸骤停。

心肌肥厚慢性心衰小鼠模型造模方法

心肌肥厚慢性心衰小鼠模型造模方法

心肌肥厚慢性心衰小鼠模型造模方法
TAC是一个慢性心室肥大的最为常用疾病模型,可用于模拟高血压或室内压增高而引起的肥厚性心肌病,在临床前药物研究或基础医学、生物学研究中广泛应用。

TAC手术后即刻诱发/启动心室肥厚的进程,根据不同的小鼠品系和手术缩窄程度(如27G、28G缩窄),一般来说1周(28G缩窄)或2周(27G缩窄)即可发展为显著性的心室肥厚,并可于2~3周(28G缩窄)或4~6周(27G缩窄)发展为心力衰竭。

手术方法:
一般采用雄性小鼠,根据实验目的不同,鼠龄可以在9~10周之间,缩窄程度可选用中度缩窄(27G)或重度缩窄(28G)。

在主动脉弓部用线结扎法形成一精确的定量缩窄,达到限制血流增加室内压的目的。

TAC诱发心室肥大或心衰的方法最早由Rockman等于1991年正式建立,之后成为广泛应用的心室肥大、心衰模型。

图1. 主动脉弓部缩窄及心重体重比、血流动力学变化,参见 PNAS. 1991; 88(18):8277-81。

模型发展判断:
心脏超声检测心功能,以下数据为动物清醒状态下的超声结果。

图1. 正常小鼠心脏超声(C57BL/6J 小鼠)
图2. TAC术后4周超声(左心室心肌代偿性增厚)
图3. TAC术后12-14周超声(心衰指标为EF-射血分数、FS-短轴缩窄分数)
超声检测要求:
动物麻醉状态下的心功能是下降的,故本公司要求超声时心率为500-550次/分,甚至需要测量清醒状态下的超声,尽可能反应动物真实的心功能。

石蜡切片-小鼠心脏组织-心衰模型-实验步骤

石蜡切片-小鼠心脏组织-心衰模型-实验步骤

石蜡切片操作流程及步骤:1、样品4℃过夜[1,2]。

2、清洗水槽及过滤网[3]。

3、打开机器开关,调节水池温度21℃、展片水池温度45℃、烘片温度55℃[4]。

4、固定包埋组织块[5]。

5、调节出水水流大小[6]。

6、调节切片厚度5um、10 um[7]。

7、将包埋组织块下调至与刀片位置同一平面,前后距离使其与刀片距离恰好接触[8]。

8、开始切片带出现完整的组织切横切面将其随水流传送至水池中[9-13]。

9、选择较好的切片,用载玻片将其从21℃水池中捞出。

每个石蜡取5-6张片子[14-15]。

10、放到展片水池中展开、载玻片编号[16]。

11、55℃烘干,无水滴后可收片。

心得体会及注意事项:1、包埋组织块冻存温度过低会冻坏,不冻存石蜡粘性大不容易切片。

2、操作期间应放入冰中储存,自备冰块。

3、水槽中石蜡会堵塞上水滤网影响出水速度。

4、展片水池水要在展片前达到预设温度。

5、要固定牢固,固定不牢切片时容易破坏样品。

6、以中间水柱恰好达到刀片位置最佳,水流过小切片不易冲下,水流过大会导致切片破坏。

7、5 um染色效果更佳,根据不同组织染色要求调节切片厚度。

8、若前后位置调节不精确可使距离稍大,随后手动摇轮慢慢靠近,每次前进距离为提前设定距离5um或10 um。

9、切片期间不出现严重的黏附,粘连,裂片,不要轻易停止,切片要匀速.10、切片过薄会迅速升温从0℃升至21℃或更高,若随意停止,石蜡黏附性增加会导致粘刀片等问题影响继续操作。

11、若一个样本操作时间过长应取下放入冰块一段时间再继续操作。

12、原则没有大问题匀速不要随意停。

13、换新刀片(刀片上有黏附石蜡会导致切片裂开,最好换至新刀片)。

14、尽量清理水池多余无用切片及碎石蜡,但是要小心不要碰坏样品切片。

15、每个载玻片取2-3个组织最佳。

16、展片不足会有褶皱影响染色结果,展片时间过长会导致组织裂开。

小鼠切除伤口夹板模型及干细胞移植的应用

小鼠切除伤口夹板模型及干细胞移植的应用

小鼠切除伤口夹板模型及干细胞移植的应用小鼠切除伤口恢复模型已经大量用于伤口愈合以及皮肤再生。

但是由于小鼠的皮肤是移动的,伤口闭合过程中存在很多收缩。

在小鼠切除伤口夹板模型中,夹板环紧紧黏在伤口周边,防止局部皮肤皱缩,因此伤口通过肉芽形成和上皮组织自行修复功能再次愈合,人类身上也会发生此过程。

模型用时2-4周,可用于研究干细胞在皮肤修复和再生方面的影响。

在这一实验过程中,我们在基底膜上将干细胞植入到创面上,或者将其注射到周边组织中。

不同时间点可以获取的系列伤口组织样本来观察植入期以及干细胞在血管生成和伤口愈合过程中的影响。

介绍在出生后的人类和哺乳动物,皮肤全厚性伤害的愈合并非由组织的再生从而达到伤前的情形,而是由结痂组织形成。

在某些情况下,伤口的愈合大大受损,导致慢性伤口的出现。

削弱皮肤再生和延缓伤口愈合的机制尚不完全清楚。

越来越多的证据表明,干细胞可以促进伤口愈合和皮肤再生。

人们已经提出了各种试图反映人类伤口愈合问题的模型。

切除伤口愈合模型这一模型中,已被广泛用来研究伤口愈合和皮肤再生,但它同时也有相当大的局限性,特别是在啮齿动物身上。

切除伤口愈合的啮齿动物模型的局限性啮齿动物切除伤口愈合模型已被广泛用来研究伤口愈合,皮肤再生,干细胞和组织移植以及免疫排斥反应。

尽管此模型便于建立且频繁使用,但是因为啮齿类动物不同人类的伤口愈合特性,所以有着明显的局限性。

啮齿动物因为皮肤可以移动,皮肤收缩占了伤口闭合的很大一部分;而人类的皮肤与皮下组织相连,新组织的产生形成伤口愈合。

此外,在伤口周围皮肤的收缩也受动物的姿势和运动,以及伤口敷料的影响,因而会导致了伤口闭合过程相当大的差异。

因此需要一个在最小技术变量下稳定的伤口愈合模型,且实现数据的高重复性。

切除伤口夹板模型概述切除伤口夹板模型不同于切除伤口模型,因为使用的夹板环紧紧地粘附于伤口周围的皮肤上,防止由皮肤收缩引起的伤口闭合,从而通过肉芽形成和再上皮化使得伤口愈合,类似的过程也可以在人类身上实现。

微创建立小鼠心肌梗死模型及其评价

微创建立小鼠心肌梗死模型及其评价

微创建立小鼠心肌梗死模型及其评价张红霞;刘艳;李玲萍;贺忠梅【摘要】目的探索一种微创建立小鼠心肌梗死模型的方法,并利用超声心动图进行评价.方法 40只C57BL/6雄性小鼠随机分为心梗组(MI,n=30)与假手术组(Sham,n=10).术前及术中用异氟烷对动物行吸入麻醉,于左胸3、4肋间做一1.0 cm左右切口,将心脏从胸壁窗口挤出.MI组结扎冠脉左前降支建立心梗模型;Sham 组冠脉只穿线不结扎,其余操作同MI组.术后4周采用超声心动图检测心脏结构与功能,经心肌组织病理学分析以判断模型成功与否.结果 MI组小鼠存活率为78.6%,Sham组为100%.超声结果显示,与Sham组相比,MI组小鼠的LVAWd、LVAWs、EF及FS均明显降低(P<0.05),LVIDd与LVIDs明显增加(P<0.05).Masson染色可见MI组小鼠的左心室腔明显增大,心室壁变薄,纤维化面积增加[(13.54±1.39)%比(0.08±0.03)%,P<0.01].结论采用本法制备小鼠心梗模型具有微创、快捷、高效、无需使用呼吸机的优势,而且模型稳定可靠.【期刊名称】《中国心血管病研究》【年(卷),期】2014(012)004【总页数】4页(P334-336,383)【关键词】心肌梗死;动物模型;微创;超声心动图【作者】张红霞;刘艳;李玲萍;贺忠梅【作者单位】030001 太原市,山西医科大学生理学系,细胞生理学山西省重点实验室;030001 太原市,山西医科大学生理学系,细胞生理学山西省重点实验室;030001太原市,山西医科大学生理学系,细胞生理学山西省重点实验室;030001 太原市,山西医科大学生理学系,细胞生理学山西省重点实验室【正文语种】中文【中图分类】Q95-33;R542.2+2心肌梗死(myocardial infarction,MI)是一种发生率和病死率极高的严重病症,对其发病机制与防治策略的研究需要高效稳定的动物模型。

小鼠颈部异位心脏移植模型制作

小鼠颈部异位心脏移植模型制作

小鼠颈部异位心脏移植模型制作目前多采用大鼠心脏移植模型,其缺点在于:1.大鼠的遗传背景资料没有小鼠完善;2.目前的转基因及基因敲除动物多为小鼠;3.针对小鼠的诊断试剂种类要比大鼠丰富得多。

鉴于此,建立了小鼠的心脏移植模型是目前研究移植免疫最主要的模型。

一、实验动物:供、受者均选用雄性近交系小鼠如Balb/c(H-2d), 10~12周龄,体重25-30g。

二、实验器材: 36倍手术显微镜(Wild M691),10/0血管缝线(Ethicon公司或上海医用缝合针厂),一次性电凝器(John Weiss & Son Ltd.公司),三、麻醉剂:Hypnorm与Hypnovel(Janssen 公司)。

麻醉剂Hypnorm与Hypnovel 均用蒸馏水按1:4稀释,等体积混合后,小鼠腹腔注射0.15~0.2ml/只。

四、供心切取术小鼠四肢固定,剃毛,75﹪酒精消毒,正中开腹,暴露下腔静脉,注射20u/ml肝素生理盐水1ml,横断下腔静脉及主动脉放血,横断膈肌,从双侧锁骨中线由下至上直至锁骨剪开,离断前胸壁,0~4℃生理盐水停搏心脏,去除周围脂肪组织及胸腺,10倍手术显微镜视野下用6-0丝线近心房处分离结扎右上腔静脉并右心房及下腔静脉,远端剪断;游离升主动脉及主动脉弓,在无名动脉分支处远心端结扎主动脉,远端横断。

在无名动脉分支处远心端横断。

游离肺动脉主干并在分支处剪断,左上腔静脉、左心房与肺静脉用6-0丝线结扎,远端游离。

全心修剪后保存于0~4℃生理盐水中。

五、受者手术(一)移植部位的准备小鼠四肢用纸胶布固定于手术板上,臵一橡皮筋于上下切齿之间以固定头部,头朝术者,剃毛,消毒。

自下颌中点至右锁骨中点处剪一长约1cm斜切口,游离皮下组织,灼断颌下腺体及部分脂肪组织,仔细游离右侧颈外静脉,在远心端分支处用丝线结扎,其间小分支用电凝器灼断,微血管夹近心端阻断静脉,并在远心端横断之;灼断右侧胸锁乳突肌,暴露颈动脉鞘,充分游离颈动脉,远心端结扎,微血管夹阻断近心端,横断颈动脉。

先天性心脏病大动脉转位小鼠模型的建立

先天性心脏病大动脉转位小鼠模型的建立

摘要目的:尝试建立一种先天性心脏病大动脉转位小鼠模型,为探讨该类疾病发生、发展的相关机制提供条件。

方法:20只8~10周大的SPF 级ICR 孕鼠随机分为对照组(n =5)和实验组(n =15)。

实验组孕鼠在E8.5天给予单次剂量全反式视黄酸(70 mg/kg)腹腔注射,对照组孕鼠在E8.5天给予单次剂量二甲基亚砜(70 mg/kg)腹腔注射。

注射完毕后继续饲养至E18天后取出胚胎,在体式显微镜下观察心脏表型。

结果:与对照组相比,实验组胚胎的早产、流产、胚胎吸收的发生率显著增加;大动脉转位表型明显,发生率为61.2%,同时合并突眼、神经管畸形等多种心外表型发生。

结论:全反式视黄酸可以诱导小鼠胚胎发生大动脉转位,是一种可行的疾病动物模型。

关键词 心脏缺损,先天性;大血管错位;全反式视黄酸;模型,动物Establishment of Congenital Heart Disease Transposition of Great Arteries in Experimental Mice ModelGAO Shi-jun, NIE Yu, LIAN Hong, HU Sheng-shou.State Key Laboratory of Cardiovascular Disease, Cardiovascular Institute and Fu Wai Hospital, CAMS and PUMC, Beijing (100037), ChinaCorresponding Author: HU Sheng-shou, Email: shengshouhu@先天性心脏病大动脉转位小鼠模型的建立高仕君,聂宇,廉虹,胡盛寿AbstractObjective: To establish a mice model of congenital heart disease transposition of great arteries in order to provide a research reference for the occurrence and development of transposition of great arteries.Methods: A total of 20 pregnant ICR mice at 8-10 weeks of age were divided into 2 groups: Control group, the mice received a single dose of DMSO 70 mg/kg at 8.5 days of gestation, n =5 and Experiment group, the mice received a single dose of all-trans retinoic acid 70 mg/kg at 8.5 days of gestation, n =15. All animals were treated for 18 days and then the embryos were taken to observe cardiac morphology under stereomicroscope.Results: Compared with Control group, Experiment group had obviously increased occurrence rates of premature delivery, abortion and embryo absorption, and 61.2% phenotype for transposition of great arteries; meanwhile, combining with non-heart defect phenotypeas exophthalmos and spinal malformation.Conclusion: All-trans retinoic acid may induce transposition of great arteries in mice embryos, which is a feasible animal model in experimental research.Key words Heart delects, congenital; Transposition of great arteries; All-trans retinoic acid; Model, animals(Chinese Circulation Journal, 2016,31:499.)完全性大动脉转位(Transposition of greatarteries,TGA)是一种严重的先天心脏发育缺陷,发病率为0.2‰~0.3‰,男女比例为1.5~3.2:1[1],占先天性心脏病的7%~8%。

小鼠心肌切片描述

小鼠心肌切片描述

小鼠心肌切片描述小鼠心肌切片描述引言:小鼠心肌切片是一种常用的实验方法,用于研究心脏疾病、药物筛选和心肌细胞功能等方面。

本文将详细描述小鼠心肌切片的制备过程和切片的形态学特征。

一、材料与方法1. 实验动物:使用12-16周龄的雄性C57BL/6小鼠。

2. 心脏采集:通过颈部剪开皮肤和颈动脉,注射适量的异氟醚进行全身麻醉,然后迅速取出心脏。

3. 心脏固定:将心脏迅速置于冰冷的PBS缓冲液中,并用注射器注入PBS缓冲液进行灌洗,以去除血液。

4. 心脏包埋:将固定好的心脏放入OCT复合剂中,并迅速冷冻至-80°C保存。

二、切片制备1. 切片设备准备:将冷藏好的OCT包埋组织块取出,放在-20°C环境下静置5分钟,使其变硬。

2. 切片装置准备:将冷冻组织块放入切片装置中,调整切片角度和厚度。

3. 切片过程:使用冷冻切片机,将心肌组织块切成30-50μm的薄片,收集在含有PBS缓冲液的离心管中。

4. 心肌切片保存:将收集好的心肌切片置于PBS缓冲液中,并尽快进行下一步处理。

三、形态学特征1. 组织结构:小鼠心肌切片呈现典型的心肌细胞排列方式,具有明显的纤维结构。

心肌细胞之间紧密相连,形成纵横交错的网状结构。

2. 细胞形态:小鼠心肌细胞呈长条状,具有分支和突起。

细胞内可见明显的横纹和线粒体等器官结构。

3. 组织染色:常用荧光染料如荧光素酶或达科西亚染色可以标记特定蛋白质或核酸分子,用于研究不同类型的心肌细胞或标记特定信号通路。

四、应用领域1. 心脏疾病研究:通过小鼠心肌切片可以观察心脏组织的形态和结构变化,研究心脏病理生理过程,如心肌纤维化、心肌细胞凋亡等。

2. 药物筛选:使用小鼠心肌切片可以评估药物对心肌细胞功能的影响,如钙离子调节、离子通道活性等,为新药开发提供参考。

3. 心肌细胞功能研究:通过小鼠心肌切片可以进行电生理实验,如整体细胞膜电位记录和钙离子成像等,研究心肌细胞的电活动和收缩功能。

小鼠心脏离体灌注缺血-再灌注模型

小鼠心脏离体灌注缺血-再灌注模型

小鼠心脏离体灌注缺血-再灌注模型(2013/6/20 廖翔)一.材料1. 所需液体:K-H液(NaCl 118, NaHCO3 24, CaCl22.5, KCl 4.7, KH2PO4 1.2, MgSO4 1.2, Glucose 11, EDTA 0.5 (in mM))、低分子肝素溶液(500IU/ml)、戊巴比妥钠液、碳酸氢钠液、盐酸液。

2. 取鼠:标准C57小鼠(20-25g)。

3. 物品:∙手术剪、血管钳 1套,用于开腹、开胸∙眼科剪、眼科镊 1套,用于开胸后取心、剔除心缘纤维组织∙小圆培养皿 2个,培养皿内加4°K-H液,先后装取出的心∙1000ml烧杯 2个 +小转子,一个用于配制H-K液,一个装双蒸水,清洗灌注仪器∙500ml烧杯 1个,用作废液缸。

∙50ml烧杯 1个(用于少量的药物灌注)∙吸管 2个,分别滴加碳酸氢钠液、盐酸液∙持针器1把,夹持带针7号线∙尖镊2把,夹持主动脉∙大镊子1把,持物∙1mL注射器 2个,分别用于注射麻药、肝素∙5mL注射器 1个,用于加CaCl2液∙50mL注射器1个,用于加K-H液∙5mL注射器针头自制灌注针 1个(用于挂小鼠心脏,尖端磨平,距针尖2mm出磨出刻痕以便打结固定)∙6号线(用于固定心脏)、带针7号线(用于结扎LCD)∙氧气罐(95% O2 +5% CO2)∙20X20cm泡沫板1个+大头针4枚,用于固定麻醉后的小鼠∙泡沫盒1个,装冰块∙橡皮泥,用于固定挂心脏的自制注射器4. 仪器:手术显微镜、langendorff离体灌注装置(灌注系统、恒温装置、灌注泵)5. 另外准备手套、口罩、棉签等注:现在差的物品有:尖镊2把(夹持主动脉)二.操作方法:1、打开离体灌注装置,设备自检。

注意灌注压调零;配制K-H液,调pH为7.4左右(7.35-7.43),加入灌注装置恒温至37°,运行灌注泵,排空灌注系统的气泡。

加适量K-H液于小圆培养皿中放于冰块上(4°),打开显微镜,将需要使用的工具摆放到位。

小鼠皮肤心脏联合移植模型的建立及移植物功能监测

小鼠皮肤心脏联合移植模型的建立及移植物功能监测

小鼠皮肤心脏联合移植模型的建立及移植物功能监测胡钰;吴大威;翟秀宇;陈默;王远涛【摘要】目的探讨小鼠皮肤心脏联合移植模型的建立及移植物功能的监测.方法以BALB/C小鼠、C57BL/6小鼠做为供、受者,单纯皮肤移植组采用尾-背法行皮肤移植,单纯心脏移植组采用腹腔异位心脏移植法行心脏移植,皮肤心脏联合移植组序贯采用尾-背皮肤移植及腹腔异位心脏移植模型.术后采用腹部触诊的方法,监测心脏移植物功能,通过观察残存移植皮片大小,监测皮肤移植物功能.结果皮肤心脏联合移植组皮肤移植物存活时间较单纯皮肤移植组略有延长(皮肤心脏联合移植物v.s.单纯皮肤移植组,8天v.s.7天),但两组皮肤移植物存活时间比较没有显著差别(P=0.1290).单纯心脏移植组心脏移植物和皮肤心脏联合移植组心脏移植物平均存活时间均为9天(MST=9天),两组心脏移植物存活时间无显著差别(P=0.6077).结论小鼠皮肤心脏联合移植模型稳定,移植物功能监测简单方便,适用于移植免疫学方面的研究.%Objective To explore the technique of mouse skin plus heart transplantation and the function of graft monitoring.Methods Methods:BALB/C and C57BL/6 mice were used as donors and recipients,respectively.Skin only group:C57BL/6 recipients received tail skin from BALB/C donors.Heart only group:C57BL/6 recipients received heart grafts from BALB/C donors.Skin plus heart group:C57BL/6 recipients received heart and tail skin grafts from BALB/C donors at the same time.Heterotopic palpation was performed to monitor the function of heart graft after transplantation,the function of skin grafts were monitored by observing the size of surviving grafts.WTHZResults Median survival time (MST) of skin grafts in skin only group was 7 days,the skin grafts survivaltime have slightly longer compared to skin only group,but there were no significant difference(MST=8 days,P=0.1290).There were no significant difference of heart grafts survival time in both heats only group and skin plus heart group(MST=9 days,P=0.6077).Conclusion Skin plus heart transplantation procedure is stable to perform.Heterotopic palpation of hearts grafts and observing the size of skin grafts are simple to monitor the function of grafts.The skin plus heart transplantation model by using this procedure and monitoring protocol is useful for immunological research related to transplantation.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2017(021)007【总页数】4页(P1256-1259)【关键词】移植;模型;小鼠【作者】胡钰;吴大威;翟秀宇;陈默;王远涛【作者单位】吉林大学中日联谊医院病理科,吉林长春130033;吉林大学第一医院泌尿外二科;吉林大学第一医院泌尿外二科;吉林大学第一医院泌尿外二科;吉林大学第一医院泌尿外二科【正文语种】中文【中图分类】R654.2随着分子生物学技术的发展,出现了各种转基因和基因敲除小鼠,为研究移植免疫反应提供了更多的工具。

石蜡切片-小鼠心脏组织-心衰模型-实验步骤

石蜡切片-小鼠心脏组织-心衰模型-实验步骤

石蜡切片-小鼠心脏组织-心衰模型-实验步骤石蜡切片操作流程及步骤:1、样品4℃过夜[1,2]。

2、清洗水槽及过滤网[3]。

3、打开机器开关,调节水池温度21℃、展片水池温度45℃、烘片温度55℃[4]。

4、固定包埋组织块[5]。

5、调节出水水流大小[6]。

6、调节切片厚度5um、10 um[7]。

7、将包埋组织块下调至与刀片位置同一平面,前后距离使其与刀片距离恰好接触[8]。

8、开始切片带出现完整的组织切横切面将其随水流传送至水池中[9-13]。

9、选择较好的切片,用载玻片将其从21℃水池中捞出。

每个石蜡取5-6张片子[14-15]。

10、放到展片水池中展开、载玻片编号[16]。

11、55℃烘干,无水滴后可收片。

心得体会及注意事项:1、包埋组织块冻存温度过低会冻坏,不冻存石蜡粘性大不容易切片。

2、操作期间应放入冰中储存,自备冰块。

3、水槽中石蜡会堵塞上水滤网影响出水速度。

4、展片水池水要在展片前达到预设温度。

5、要固定牢固,固定不牢切片时容易破坏样品。

6、以中间水柱恰好达到刀片位置最佳,水流过小切片不易冲下,水流过大会导致切片破坏。

7、5 um染色效果更佳,根据不同组织染色要求调节切片厚度。

8、若前后位置调节不精确可使距离稍大,随后手动摇轮慢慢靠近,每次前进距离为提前设定距离5um或10 um。

9、切片期间不出现严重的黏附,粘连,裂片,不要轻易停止,切片要匀速.10、切片过薄会迅速升温从0℃升至21℃或更高,若随意停止,石蜡黏附性增加会导致粘刀片等问题影响继续操作。

11、若一个样本操作时间过长应取下放入冰块一段时间再继续操作。

12、原则没有大问题匀速不要随意停。

13、换新刀片(刀片上有黏附石蜡会导致切片裂开,最好换至新刀片)。

14、尽量清理水池多余无用切片及碎石蜡,但是要小心不要碰坏样品切片。

15、每个载玻片取2-3个组织最佳。

16、展片不足会有褶皱影响染色结果,展片时间过长会导致组织裂开。

小鼠脑切片矩阵模具安全操作及保养规程

小鼠脑切片矩阵模具安全操作及保养规程

小鼠脑切片矩阵模具安全操作及保养规程1. 引言小鼠脑切片矩阵模具是在神经科学研究领域中常用的一种仪器,用于固定和切割小鼠脑组织样本。

为了确保实验的安全性和实验结果的准确性,必须对小鼠脑切片矩阵模具进行正确的操作和保养。

本文将介绍小鼠脑切片矩阵模具的安全操作规程和保养规程,以提高实验效果和延长仪器的使用寿命。

2. 安全操作规程安全操作对于任何实验都至关重要,下面是小鼠脑切片矩阵模具的安全操作规程:2.1 穿戴安全防护装备在操作小鼠脑切片矩阵模具之前,应穿戴适当的安全防护装备,如实验手套、实验围裙和护目镜等。

这些防护装备可以有效地保护实验人员免受潜在危险物质或切割工具可能带来的伤害。

2.2 工作环境清洁整洁在进行实验之前,要确保实验室工作环境整洁并保持清洁。

工作台面上不应有多余的杂物,以确保实验平台的稳定性,并可以避免不必要的事故发生。

2.3 熟悉仪器操作手册在操作小鼠脑切片矩阵模具之前,务必详细阅读和理解仪器的操作手册。

操作手册中包含了仪器的使用方法、注意事项和安全规范等重要信息,对于正确操作仪器和避免操作中的危险非常重要。

2.4 调整切割厚度和速度在使用小鼠脑切片矩阵模具进行切割之前,需要根据实验的需求调整切割厚度和速度。

确保切割厚度和速度适当,以避免切割过深或切割过快可能引起的样本损坏和数据不准确。

2.5 仪器实验后的清洁在使用小鼠脑切片矩阵模具进行实验后,需要及时清洁仪器。

使用干净的纱布或棉签轻轻擦拭仪器表面和切割部件,确保清洁彻底,并避免留下任何污渍或残留物。

3. 保养规程正确的仪器保养可以延长小鼠脑切片矩阵模具的使用寿命,下面是保养规程的具体步骤:3.1 定期检查和清洁仪器定期检查小鼠脑切片矩阵模具的各个部件,包括固定夹持装置和切割平台等。

清除可能存在的尘土、碎片和其他污渍,并确保所有部件无损坏和松动。

3.2 使用合适的清洁剂在对小鼠脑切片矩阵模具进行清洗时,应选择合适的清洁剂。

根据仪器表面的材质和污渍的种类,选择适当的清洁剂进行清洁。

小鼠造模实验步骤

小鼠造模实验步骤

小鼠造模实验步骤关于动物造模的方式在很久以前就开始使用了,因为有了这些动物造模的方式所以在很长的一段时间里面动物模型一直都是医学界经常用来研究和使用的一种方式,而且在很多的**中都是进行使用的,现在关于小鼠的实验也在不断地进行中,那么在进行造模手术的过程中都是经历了哪些重要的步骤呢,一起来看看吧。

实验步骤:1.在进行动物造模的实验之前,要将进行试验的小鼠禁食,好是禁食12个小时左右,然后使用注射溶液进行麻醉,其中溶液的配合比是百分之十的水合氯醛溶液按照0.004毫升每克的数量输入到小鼠的体内,并且进行腹腔的麻醉,在进行麻醉之前就将编织线还有结扎以及阻断动脉的线准备好,并且在生理盐水中进行浸润。

2.等到的时间以后,在检查看看小鼠的状态,如果小鼠不能够自由翻身的话,那么就说明已经达到了麻醉的要求,这个时候将小鼠绑在解剖台上面,并且在脖子以下的地方使用棉签进行垫高,并且实用碘来进行**,随后准备备皮。

3.使用工具在小鼠的脖子的正中间的位置将皮肤剪开,然后使用眼科专用的弯镊子和眼科的直镊子进行分别和皮下组织以及脂肪的分离,然后将浅机模和颈阔肌分割以后,颈深肌就会暴露出来,同时暴露出来的还有气管前肌。

4.在持续分离的过程中,将气管前肌分离以后,从小数的额右侧锁乳突肌前面的位置将颈深肌膜死开以后,然后将颈动脉鞘暴露出来,这个时候要将小鼠的气管部分进行压迫,并且将颈动脉鞘花开,进行穿线并且打上活结这样能够阻断小鼠的血液的流通,但是要注意的是不能够伤害动脉神经鞘的颈内静脉和迷走神经,如果不小心伤害到的话,很有可能会引起来小鼠的呼吸骤停。

5.这个时候沿着颈总动脉向上分离,并且在甲状软骨的上面的部分将颈外动脉分离出来,并且还要在靠近器官的地方进行操作。

6.在颈外动脉起始前的地方进行**分舌动脉的手术,还要使用枕动脉和颌外动脉的位置进行双重结扎,在结扎以后从中间的地方剪断小鼠的颈外动脉,并且在近心端的位置进行结扎而且留长。

大小鼠脑切片模具

大小鼠脑切片模具

北京华越洋生物提供QQ:1733351176脑切片模具,大鼠脑切片模具,小鼠脑切片模具描述大小鼠脑切片模具包括大鼠脑模具和小鼠脑模具。

脑模具经过精密机械加工和高度抛光,可确保切片过程的可重复性。

使用材料为有铝合金,结实耐用,可被加热、冷却、高压灭菌、擦洗,经得起苛刻的使用条件。

冠状脑模具具有矢状中线,可方便的分离左右脑半球。

切片精度精确至1 mm,小鼠脑模具也适用于新生大鼠。

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脑模具经过精密机械加工和高度抛光,可确保切片过程的可重复性。

使用材料为进口不锈钢,结实耐用,可被加热、冷却、高压灭菌、擦洗,经得起苛刻的使用条件。

冠状脑模具具有矢状中线,可方便的分离左右脑半球。

切片精度精确至1 mm,小鼠脑模具也适用于新生大鼠。

脑切片模具,大鼠脑切片模具,小鼠脑切片模具具体规格有:小提示:脑切片模具好坏的区分关健在于两点:1)材料的好坏,市面上有铝合金,有机玻璃及普通不锈钢三种材料,前两种材料易粘组织,铝合金和普通不锈钢的材料不耐腐蚀,用户只将其半裸放在盐水中静置12小时左右,就可以看见上面锈迹斑斑,且严重的有很多锈穿的小孔出现,这种材料是经不起我们苛刻的实验条件的。

我们的材料是采用进口不锈钢,可随意放在任意盐水浓度中测试,均不会有锈迹出现。

2)看槽的外观,普通产品加工粗糙,槽多有变形,且切口不平滑,这样的产品在放置刀片时就会遇到麻烦,有的刀片放不进,有的放进去了,取出来麻烦,而且我们切出来的组织也不均匀,严重影响实验效果。

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不锈钢小鼠心脏切片模具
Stainless Steel Mouse Heart Slicer
小鼠冠状心脏切片模具的型号:间距为1.0mm。

说明:
The Stainless Steel Mouse Heart Slicer Matrix with 1.0 mm coronal section slice intervals allows an investigator or research scientist to slice repeatable coronal sections (slice channels are perpendicular to the long axis of the heart) of a mouse heart. Thus, the mouse heart slicer matrix enables precise blocking prior to microtome sectioning, and facilitates the excision or isolation of small, reproducible tissue regions for biochemical or histological analysis, such as the evaluation and quantification of infarction.
特点:
- Slice intervals spaced 1.0mm apart (slice channels are coronally oriented, i.e. perpendicular to the long axis of the heart)
- Use this matrix to section the mouse heart into coronal slices with thicknesses in increments of 1.0mm - Designed to accommodate for unique anatomical features of the mouse heart
- Use with fresh or preserved heart tissue (or similarly sized rodent tissue / organ)
- Each mouse heart matrix is identical to insure reproducible sections
- Comes ready to use, with 5 single edge razor blades provided at no additional cost
- Each slicer matrix is made from high-grade, stainless steel
- Stainless steel mouse heart slicer matrices are autoclavable, precisely machined, great for cryogenic work, and built to last.
USES INCLUDE:
- Dissection / Blocking of the mouse heart into coronal sections
- Sectioning the mouse heart prior to or post staining with agents included TTC or X-Gal-stain
- Repeated isolation of mouse heart regions for further analysis or slide preparation
- Tissue preparation
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