实验一还原糖和总糖的测定——3,5二硝基水杨酸比色法
总糖和还原糖的测定
三、实验器材
1、材料：山芋粉 2、仪器：电子分析天平、水浴锅、V-1100 可见分光光度计、移液器 3、其他：试管、容量瓶、三角烧瓶、量筒、 吸管（移液管）、洗耳球、玻棒、洗瓶、 漏斗、离心管、六凹反应盘、pH试纸（1 ～14）
四、实验试剂
1、标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml） 2、DNS试剂 3、6mol/L HCl 4、6mol/L NaOH 5、I2-KI溶液
六、计算
C1V1 ω(还原糖)=——×100% m1
C2V2
ω(总糖)=——×0.9×100% m2
附：相关仪器使用 1、移液管的使用
2、移液器的使用
3、离心机的使用 注意配平，对称放 4、V-1100可见分光光度计的使用 比色皿
V-1100可见分光光度计
开机预热30min 测吸光度 选择波长（540nm） MODE键切换到T，将黑体放入光路中
2、样品中总糖的水解、提取
准确称取0.2g山芋粉置于100ml三角烧瓶中
加3ml蒸馏水，调成糊状
取1～2滴于六凹 反应盘中，加1滴 I2-KI溶液，如果 完全不显蓝色， 即可进行下面的 操作。
再加12ml蒸馏水，5ml 6mol/L HCl
沸水浴，30min (不时搅拌) 冷却至室温 用6mol/L NaOH调pH7.0（ pH试纸） 蒸馏水定容至100ml,混匀
合上盖，0键校零MODE键切换到A，参比 Nhomakorabea放入到光路中
合上盖，100键调零
将待测液依次放入到光路中，即可得出 待测液的吸光度。
比色皿的使用
管号
试剂
标准葡萄糖溶液 /ml
0
1
2
3
4
5
6
7
DNS比色法测定还原糖和总糖
DNS⽐⾊法测定还原糖和总糖还原糖和总糖的测定(3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法)⼀、实验⽬的1、掌握还原糖和总糖测定的基本原理2、学习⽐⾊法测定还原糖的操作⽅法和分光光度计的使⽤⼆、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本⽅法。
还原糖是指含有⾃由醛基或酮基的糖类。
单糖都是还原糖，双糖和多糖不⼀定是还原糖，例如乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是⾮还原糖。
利⽤各种糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来。
对⾮还原性的双糖和多糖，可⽤酸⽔解法使其降解成还原性单糖进⾏测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(常以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热可被氧化成糖酸及其它产物，⽽氧化剂3,5-⼆硝基⽔杨酸则被还原为棕红⾊的3-氨基-5-硝基⽔杨酸。
在⼀定范围内，还原糖的量与棕红⾊物质颜⾊的深浅成正⽐关系，利⽤分光光度计在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖⽔解为单糖时，每断裂⼀个糖苷键需加⼊⼀分⼦⽔，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。
三、实验材料和试剂1、实验材料⾯粉2、实验试剂①1mg/ml葡萄糖标准液准确称取80℃烘⾄恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于⼩烧杯中，加少量蒸馏⽔溶解后，转移到100ml容量瓶中，⽤蒸馏⽔定容⾄100ml，混匀，4℃冰箱中保存备⽤。
②3,5-⼆硝基⽔杨酸(DNS)试剂将6.3g DNS和262ml 2M NaOH溶液，加到500ml含有185g酒⽯酸钾钠的热⽔溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏⽔定容⾄1000ml，贮于棕⾊瓶中备⽤。
③碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏⽔中。
④酚酞指⽰剂：称取0.1g酚酞，溶于250ml 70%⼄醇中。
⑤6M HCl和6M NaOH各100ml。
四、实验器材具塞璃玻刻度试管：20ml×11 ⼤离⼼管：50ml×2烧杯：100ml×1 三⾓瓶：100ml×1容量瓶：100ml×3 刻度吸管：1ml×1；2ml×2；10ml×1恒温⽔浴锅沸⽔浴离⼼机扭⼒天平分光光度计五、操作步骤1、制作葡萄糖标准曲线取7⽀具塞刻度试管编号，按表1分别加⼊浓度为1mg/ml的葡萄糖标准液、蒸馏⽔和DNS试剂，配成不同浓度的葡萄糖反应液。
总糖和还原糖的测定
朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律
朗伯－比尔定律是比色分析旳基本原理， 这个定律是有色溶液对单色光旳吸收程度与 溶液及液层厚度间旳定量关系。此定律是由 朗伯定律和比尔定律归纳而得。
A或D=㏒I0/I
A或D＝光吸收或光密度
I0 ＝入射光强度 I ＝透射光强度
三、试剂和器材
试剂：
DNS试剂 葡萄糖原则溶液 ； 6M HCl；碘－碘化钾溶液； 6M NaOH；0.1% 酚酞指示剂。
材料
藕粉，玉米淀粉
器材
容量瓶,试管，移液管，量 筒，胶头滴管，漏斗
50℃水浴，沸水浴，分光 光度计等。
四、操作环节
1.葡萄糖原则曲线制作 2.还原糖旳提取
藕粉改为称1.0克，50℃水浴20min浸出， 水浴锅中进行 3.总糖旳水解及提取 玉米淀粉测总糖，沸水浴20min酸水解，电 磁炉中进行 4.样品含糖量旳测定
试验三 总糖和还原糖旳测定
——3,5二硝基水杨酸(DNS)法
一、目 旳
掌握还原糖和总糖旳测定原理 掌握分光光度计旳使用
二、原 理
还原糖：指具有自由醛基或酮基旳糖类
单糖: 不能被水解成更小分子旳糖,单糖都是还原糖 葡萄糖, 果糖
寡糖: 最主要旳是双糖：Maltose（麦芽糖 ）,Sucrose（蔗糖） Lactose（乳糖 ） 但Sucrose不是还原糖 多糖: 能水解成多种单糖分子,如淀粉,糖原和纤 维素
样品旳透射比或吸光度值。样品读数三遍，取平均值。 7).使用分光光度计时带测定样品、洗瓶、废液杯、笔和本。
移液器旳使用手法，两档位
吸液
放液
八、思索题
1.比色时为何要设计空白管？
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定
3,5-二硝基水杨酸比色法-还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法是一种常用的测定还原糖和总糖含量的方法。
本文将介绍该方法的操作步骤、原理及注意事项。
一、操作步骤1. 样品制备：精确称取适量糖样品，加入足量去离子水稀释至1 mL，摇匀。
2. 试剂制备：(1) Na2CO3试液：称取0.5 g Na2CO3加入50 mL去离子水中，溶解并稀释至1 L。
(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS)重量浓度为1 g/L的甲醛溶液：按比例称取适量DNS和甲醛，在去离子水中稀释制成重量浓度为1 g/L的甲醛溶液。
3. 测定步骤：(1) 取3个试管，编号为A、B、C，并进行空白对照。
将A、B、C试管分别加入0.1 mL 样品，每个试管中加入相同量的0.9 mL去离子水。
在空白试管中加入相同量的去离子水代替样品。
(2) 在A试管中加入0.5 mL Na2CO3试液，摇匀。
(3) 将B试管浸于沸水中加热3-5分钟，使其中的还原糖完全还原。
(4) 在A、B两样品试管中加入0.5 mL甲醛溶液，摇匀并置于60℃水浴上加热10分钟。
(6) 加入1.5 mL水后，在空白对照试管和样品试管中均加入0.5 mL DNS溶液，摇匀。
(7) 在95℃水浴加热10分钟，并立即冷却至室温。
(8) 测量吸光度值，通过标准曲线计算样品中还原糖或总糖含量。
二、原理还原糖或总糖与Na2CO3在典型的碱性条件下发生醛基反应，把碳水化合物中的亲电基转化为醛基，再将其还原为对应的醇，生成糖醇和尿素等。
然后，在碱性条件下，醛基与3,5-二硝基水杨酸(DNS)反应，发生环化，生成糖醛酸化合物，这些化合物在pH9.0以下表现为桥形分子，具有紫色的吸收峰。
在高温条件下，DNS与糖醛酸化合物相结合，形成柿子色化合物，进一步增加吸收光的强度。
还原糖或总糖的含量可以通过比较样品的吸光度值和标准曲线来测定。
三、注意事项1. 避免试管附着并确保试管内部表面干净。
还原糖和总糖含量的测定(3,5 一二硝基水杨酸比色法)
还原糖和总糖含量的测定（3，5 一二硝基水杨酸比色法）还原糖和总糖含量的测定（3 ，5 一二硝基水杨酸比色法）作者：佚名文章来源：生物化学实验技术点击数：2132 更新时间：2021-5-13 11:29:24一、目的植物体内的还原糖，主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。
它们在植物体内的分布，不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况，而且也是呼吸作用的基质。
还原糖还能形成其他物质如有机酸等。
此外，水果蔬菜中糖量的多少，也是坚定其品质的重要指标。
还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用，其他碳水化合物，如淀粉蔗糖等，经水解也生成还原糖。
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，练习比色定糖法的基本操作，热悉分光光度计的使用方法。
二、原理各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解度不同，可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与 3 ， 5 一二硝基水杨酸共热， 3 ， 5 一二硝基水杨酸被还原为 3-氨基 -5- 硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。
一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系， 540nm 波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
三、仪器、试剂和材料1 .仪器（ 1 ）刻度试管： 25 ml X 11（ 2 ）离心管或玻璃漏斗 X2（ 3 ）烧杯： 1OOml X 1（ 4 ）三角瓶： 100m1 X 1（ 5 ）容量瓶： 100ml X 3（ 6 ）刻度吸管： 1 ml X 1 ， 2m1 X 4, 10ml X 1（ 7 ）恒温水浴（ 8 ）沸水浴（ 9 ）离心机（过滤法不用此设备）（ 10 ）电子顶载天平（ 11 ）分光光度计2 .试剂（ 1 ） 1 mg/ ml 葡萄糖标准液：准确称取 100mg 分析纯葡萄糖（预先在8 0 ℃ 烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到 100ml 的容量瓶中，以馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
生 化 实 验
(3) 0.10mo1/L醋酸溶液100mL
(4) 0.01mo1/L醋酸溶液50mL
（5）0.5%酪蛋白溶液（以0.01M NaOH作溶剂）100ml
（6）0.01%溴甲酚绿指示剂
（7）0.02mo1/L氢氧化钠溶液100ml
（8）0.02mo1/L盐酸溶液100ml
1.00N醋酸溶液（ml）2.4————
0.1N醋酸溶液（ml）—4.01.0——
0.01N醋酸溶液（ml）———2.50.62
酪蛋白醋酸钠溶液（ml）1.01.01.01.01.0
溶液的最终pH3.24.14.75.35.9
沉淀出现的情况
（2）静置约20分钟，观察每支试管内溶液的混浊度，以“—、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋”符号表示沉淀的多少。根据观察结果，指出哪一个是酪蛋白的等电点。
茚三酮反应分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2。
NH2和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所
形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成
有色物质。此反应的适宜pH为5—7，同一浓度的蛋白质或氨基酸
在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
(13) 2％氯化钡溶液150mL
四、实验操作
1、蛋白质的盐析
中性无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。
4、有机溶剂沉淀蛋白质
取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL 95％乙醇，混匀，观察沉淀的生成。
(完整word版)实验一植物中总糖的测定
实验一植物中总糖的测定——3，5-二硝基水杨酸比色法实验目的（1）掌握总糖定量测定的基本原理（2)熟悉3,5—二硝基水杨酸定糖法的基本操作实验原理各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖.利用溶解性质不同,可将植物样品中的单糖、双糖、多糖分别提取出来。
再用水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3，5-二硝基水杨酸被还原为3—氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质），还原糖则被氧化成糖醛酸及其他产物。
在一定范围内,还原糖的量与棕红色物质的颜色深浅成比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光度，通过标准曲线，便可求出样品中总糖的含量。
多糖水解时,在单糖残基上加了一个分子水，因而在计算中需扣除已经加入的水量，测定所得的总糖量乘以0。
9即为实际的总糖含量。
实验材料、仪器与试剂1．实验材料面粉2．实验仪器刻度试管或比色管，刻度吸管,恒温水浴锅，烧杯，容量瓶,电子天平，分光光度计，三角瓶。
3．试剂（1)1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取500mg分析纯葡萄糖,置于烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到500ml的容量瓶中.以蒸馏水定容至刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
(2）a：3，5—二硝基水杨酸试剂：取6.5g3，5—二硝基水杨酸溶于少量热蒸馏水中，溶后移入1000ml 容量瓶中,加入325ml 2mol/L氢氧化钠溶液，再加入45g丙三醇，摇匀，冷却，定容至1000ml。
b:3，5—二硝基水杨酸试剂：将6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L氢氧化钠溶液加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中,再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠,搅拌溶解。
冷却后加蒸馏水定容至1000ml，储于棕色瓶中备用。
（3）碘—碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100ml蒸馏水中。
(4）酚酞指示剂：称取0。
1g酚酞，溶于250ml70%乙醇中。
还原糖和总糖的测定(3,5
参比管
还原糖测定管号
总糖测定管号
①
②
Ⅰ
Ⅱ
还原糖待测液（mL）
0
2
2
0
0
总糖待测液（mL）
0
0
0
1
1
蒸馏水（mL）
2
0
0
1
1
3，5—二硝基水杨酸比色法（mL）
1.5
1.5
1.5
1.5
1.5
实验结论：
还原糖组：X =0.786mg总糖组：X =1.532mg
还原糖％=(1.532×50/2×100)/(1.0189×10^3)=3.758％
实验步骤：
取7支具有25刻度的试管，编号。按下表，精确加入浓度为1mg/mL的葡萄糖标准液和3，5—二硝基水杨酸试剂。
管号
1
2
3
4
5
6
7
葡萄糖标准溶液（mL）
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
蒸馏水（mL）
2.0
Байду номын сангаас1.8
1.6
1.4
1.2
1.0
0.8
3，5—二硝基水杨酸比色法（mL）
1.5
1.5
1.5
总糖％=(0.786×100/1×0.9×100)/(1.0683×10^3)=6.622％
思考与讨论：
（1）还原糖的提取步骤知，淀粉水解可在无催化下进行，但速率慢，水解量少。
（2）由总糖提取可知，在100摄氏度由酸存在的条件下，可加速水解进行。
（3）影响实验结果的因素有哪些？
a:淀粉溶解时没有充分溶解，水解的淀粉很少。
还原糖和总糖的测定
生物化学综合实验报告题目：3，5—二硝基水杨酸比色法测定还原糖和总糖姓名：学号：同组成员：分院(系）：专业班级：指导教师:完成日期：年月日1。
实验目的用比色法测定山芋中还原糖和总糖含量2。
实验原理先用已知浓度的葡萄糖标准溶液与DNS反应测其分光度，制得标准曲线，在测山芋中糖与DNS反应后的分光度A从而得其总糖和还原糖含量。
3。
实验仪器和试剂试剂：1g/L葡萄糖标准液、3,5-二硝基水杨酸、6mol/L HCl，6mol/L NaOH仪器:25，100ml容量瓶、1，5ml吸量管、50ml移液管、100ml 量筒、试管、滴管、离心管、玻璃棒、洗耳球、100ml容量瓶、比色皿离心机、分光光度计、恒温水箱4。
实验步骤一、取六只比色管向其中加入葡萄糖标液0、0。
2、0。
4、0.6、0。
8、1.0毫升在加入蒸馏水2。
0、1.8、1。
6、1。
4、1.2、1.0毫升，最后向其中各加入DNS试剂1。
5毫升混合均匀后100摄恒温水浴5min，冷却后加入蒸馏水至25ml刻度线，用1号样调零，测其分光度，制得标准曲线。
二、还原糖提取：取3g山芋粉，加入30ml水，搅匀后在50摄水中保温20min，离心，取滤液,用100ml容量瓶定容得还原糖待测液.总糖提取：取0.2克山芋粉，加入试管中吸取5ml HCL溶液，8ml蒸馏水搅匀,100摄下恒温水浴30min，冷却,NaOH调节PH至中性,离心,滤液用100ml容量瓶定容，得总糖待测液.测定时取5支比色管分别加入还原糖0、1。
0、1。
0、0、0毫升，总糖0、0、0、0.5、0。
5毫升,蒸馏水2。
0、1。
0、1。
0、1。
5、1。
5毫升,DNS试剂1.5毫升100摄恒温水浴5min后冷却，稀释至25毫升用一号管调节分光度为0，测总糖和还原糖的分光度.5数据处理葡萄糖标准曲线表管号0 1 2 3 4 5 含糖总量（mg）0 0.2 0。
4 0。
6 0。
8 1 葡萄糖标液(ml）0 0.2 0.4 0。
实验一35二硝基水杨酸比色法还原糖和总糖的测定
百度文库- 让每个人平等地提升自我实验一还原糖和总糖的测定——3,5-二硝基水杨酸比色法一、实验目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。
三、实验材料、主要仪器和试剂1．实验材料小麦面粉；广范pH试纸。
2．主要仪器（1）大试管：2×20cm×14（2）烧杯：100mL×3（3）三角瓶：100mL×1（4）容量瓶：100mL×3（5）移液管：1mL×3；2mL×2；10mL×4（6）吸耳球、玻璃棒（7）恒温水浴锅（8）漏斗、滤纸（9）白瓷缸、电炉（10）精度天平（11）分光光度计3．试剂（已制备）（1）1mg/mL葡萄糖标准液准确称取90℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将3,5-二硝基水杨酸（DNS）和2mol\L NaOH溶液262mL，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中，7-10天后才能使用。
还原糖和总糖的测定
1.样品中还原糖的提取：称取 5g 左右的平菇，用碾碎装置碾碎，再用研钵研磨，将渣和 汁全部转移到 100ml 的三角瓶中，用水冲洗碾碎装置和研钵，所得液体并入三角瓶中，置于 500C 的恒温水浴中保温 30min， 使还原糖浸出。 10000rpm 离心 2min。 将液体全部转入 100ml 的容量瓶中，用蒸馏水洗涤三角瓶，并转入容量瓶中定容。得到还原糖的待测液。 2. 显色：取三支具有 25ml 刻度的试管，编号，按下表所示的量，精确加入待测液和试 剂。 将各管摇匀， 在沸水浴中加热 5min， 取出冷却到室温， 以蒸馏水定容至 25ml， 混匀后， 在 540nm 波长下，测定各管的消光值。
1
还原糖的测定---3,5-二硝基水杨酸比色法
标准曲线测定结果：
管号 1 0 0 2 10 0.087 3 20 0.263 4 30 0430 5 40 0.598 6 60 0.752 7 80 0.883
葡萄糖含量 （ug） OD 值
葡萄糖标准曲线表
1 0.8 0.6 OD值 0.4 0.2 0 0 -0.2 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 葡萄糖mg y = 0.770x - 0.031 R² = 0.995
管号 还原糖测定液（ml） 蒸馏水（ml） 3,5-二硝基水杨酸试剂（ml） 参比管 0 0 2 1.5 还原糖测定管号 1 2 0 1.5 2 2 0 1.5
还原糖% =
查曲线所得含糖 mg 数 × （提取液总体积/测定时取用体积） 样品 mg 数
× 100
2
总糖的测定----3,5-二硝基水杨酸比色法
1.样品中总糖的提取：称取 5g 左右的平菇，先用碾碎装置碾碎，再用研钵研磨，将渣和
汁全部转移到 100ml 的三角瓶中，用水冲洗碾碎装置和研钵，所得液体并入三角瓶中，加入 20ml 6mol/L 的 HCl 及 30ml 的蒸馏水， 置于沸水浴中保温 1h。 待三角瓶中的水解液冷却后， 用 PH 试纸检测， 以 6mol/L NaOH 中和至中性。 10000rpm 离心 2min。 将液体全部转入 250ml 的容量瓶中，用蒸馏水洗涤三角瓶，并转入容量瓶中定容。得到总糖的待测液。 2.显色： 取三支具有 25ml 刻度的试管， 编号， 按下表所示的量， 精确加入待测液和试剂。 将各管摇匀，在沸水浴中加热 5min，取出冷却到室温，以蒸馏水定容至 25ml，混匀后，在 540nm 波长下，测定各管的消光值。
实验一还原糖和总糖的测定——3,5二硝基水杨酸比色法
实验⼀还原糖和总糖的测定——3,5⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法《⽣物化学》实验指导书适⽤专业：⽣物科学、⾷品科学、⽣物⼯程、农学、园艺、环境科学孝感学院⽣命科学与技术学院⽣物化学实验细则为了保证⽣物化学实验的顺利进⾏，培养同学们掌握良好、规范的⽣物化学基本实验技能，特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。
1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2. 严格按照⽣物化学实验分组，分批进⼊实验室，不得迟到。
⾮本实验组的同学不准进⼊实验室。
3. 进⼊实验室必须穿实验服。
各位同学进⼊各⾃实验⼩组实验台后，保持安静，不得⼤声喧哗和嬉戏，不得⽆故离开本实验台随便⾛动。
绝对禁⽌⽤实验仪器或药物嬉耍。
4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒⼊废液桶中，⽤过的滤纸放⼊垃圾桶中，禁⽌直接倒⼊⽔槽中或随地乱丢。
5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使⽤前应了解使⽤⽅法，使⽤时要严格遵守操作规程，不得擅⾃移动实验仪器。
否则，因⾮实验性损坏，由损坏者赔还。
6. 使⽤⽔、⽕、电时，要做到⼈在使⽤，⼈⾛关⽔、断电、熄⽕。
7. 做完实验要清洗仪器、器⽫，并放回原位，擦净桌⾯。
8. 实验后，要及时完成实验报告。
⽬录实验⼀还原糖和总糖的测定——3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１实验⼆油脂酸价的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５实验三蛋⽩质的提取及浓度测定?(紫外吸收法)．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．７实验四淀粉酶活⼒的测定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．９实验五酶的激活和抑制作⽤．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１３实验六氨基酸的分离鉴定――纸层析法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１４实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１６实验⼋琼脂糖凝胶电泳技术――DNA样品检测．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．１８实验⼀还原糖和总糖的测定——3,5-⼆硝基⽔杨酸⽐⾊法⼀、⽬的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习⽐⾊法测定还原糖的操作⽅法和分光光度计的使⽤。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。
同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。
我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。
本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。
本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。
首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。
2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
面粉中还原糖和总糖测定
目的要求
⑴了解3,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的原 理. ⑵掌握还原糖及总糖测定的操作方法.
实验原理
COOH OH
+ 还原糖
O2N NO2
加热 碱 性 O2N
COOH OH
+ 糖酸
NH2
3,5-二硝基水杨酸(黄色)
3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色)
结果与计算
�
非还原性的双糖(如蔗糖)以及多糖(如淀粉)可用酸 水解法彻底水解成单糖进行测定. 由于多糖水解时,在每个单糖残基上加了一分子水,因 而在计算时应乘以折算系数(1-18/180)=0.9.
操作步骤
一,样品中还原糖和总糖的提取 1,样品中还原糖的提取 , 2,样品中总糖的提取 ,
二,标准葡萄糖浓度梯度和样品待测液的测定
还原糖和总糖的测定
自主实验论文论文题目：面粉中还原糖和总糖的测定姓名：***学号：***********日期：2013年12月19日目录一、摘要二、关键词三、3 ，5- 二硝基水杨酸比色法测定雪碧中还原糖的含量1.实验目的2.实验原理3.所用试剂及仪器4.操作步骤5.实验结果及数据处理6.从结果中所得到的的心得7.参考文献【摘要】本论文是针对面粉中还原糖含量的测定，更为重要的是还原糖在人体组成中也起到了重要的作用，每日摄入还原糖的多少对于人们的身体健康也有着重要的影响。
因此此次测定面粉中的还原糖中，采用碘量法测定还原糖的含量。
本实验通过碘量法测定还原糖的含量从而得到测定数据，分析日常生活中对于面食品摄入量的合适范围。
【关键词】还原糖碘量法食品营养还原糖是指具有还原性的糖类，它在植物界分布十分广泛，是食品工业的主要原辅材料，也是大多数食品的重要组成成分，也是谷类食品和水果、蔬菜的重要成分。
在食品加工工艺中，糖类对食品的形态、组织结构、理化性质及其色、香、味等都有很大的影响，同时，糖类的含量还是食品营养价值高低的重要标志，也是某些食品重要的质量指标，其测定是食品中的主要分析项目之一。
1. 实验目的通过运用3 ，5- 二硝基水杨酸比色法测定面粉中还原糖及其总糖含量，从而通过实验结果分析，怎样合理食用面试。
2. 实验原理总糖主要指具有还原性的葡萄糖，果糖，戊糖，乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖（水解后为1分子葡萄糖和1分子果糖），麦芽糖（水解后为2分子葡萄糖）以及可能部分水解的淀粉（水解后为2分子葡萄糖）。
利用溶解度不同，可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖，通过测定确定酸性水解后还原糖的含量，从而求出样品中总糖的含量。
在碱性条件下，还原糖与3 ，5 一二硝基水杨酸共热，3 ，5 一二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5- 硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。
实验一还原糖和总糖含量的测定
实验一还原糖和总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一．目的1.掌握还原糖定量测定的基本原理；2.学习比色定糖法的基本操作；3.熟悉分光光度计的使用方法。
二．原理在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。
三．仪器.试剂和材料1.仪器：（1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂；（1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH3.材料：食用面粉四．操作步骤将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。
在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。
以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2.样品中还原糖和总糖含量的测定（1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。
过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。
（2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。
放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。
待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。
以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法
还原糖和总糖的测定3,5-二硝基水杨酸比色法一、目的掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
三、实验材料、主要仪器和试剂1. 实验材料小麦面粉；精密pH 试纸。
2. 主要仪器（1）具塞玻璃刻度试管：20mL×11（2）大离心管：50mL×2（3）烧杯：100mL×1（4）三角瓶：100mL×1（5）容量瓶：100mL×3（6）刻度吸管：1mL×1；2mL×2；10mL×1（7）恒温水浴锅（8）沸水浴（9）离心机（10）扭力天平（11）分光光度计3. 试剂（1）1mg/mL 葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3gDNS 和262mL 2M NaOH 溶液，加到500mL含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
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《生物化学》实验指导书适用专业：生物科学、食品科学、生物工程、农学、园艺、环境科学孝感学院生命科学与技术学院生物化学实验细则为了保证生物化学实验的顺利进行，培养同学们掌握良好、规范的生物化学基本实验技能, 特制定以下实验细则，请同学们严格遵守。
1. 实验前应提前预习实验指导书并复习相关知识。
2. 严格按照生物化学实验分组，分批进入实验室，不得迟到。
非本实验组的同学不准进入实验室。
3. 进入实验室必须穿实验服。
各位同学进入各自实验小组实验台后，保持安静，不得大声喧哗和嬉戏，不得无故离开本实验台随便走动。
绝对禁止用实验仪器或药物嬉耍。
4. 实验中应保持实验台的整洁，废液倒入废液桶中，用过的滤纸放入垃圾桶中，禁止直接倒入水槽中或随地乱丢。
5. 实验中要注意节约药品与试剂，爱护仪器，使用前应了解使用方法，使用时要严格遵守操作规程，不得擅自移动实验仪器。
否则，因非实验性损坏，由损坏者赔还。
6. 使用水、火、电时，要做到人在使用，人走关水、断电、熄火。
7. 做完实验要清洗仪器、器皿，并放回原位，擦净桌面。
8. 实验后，要及时完成实验报告。
实验一还原糖和总糖的测定一一3,5-二硝基水杨酸比色法. (1)实验二油脂酸价的测定 (5)实验三蛋白质的提取及浓度测定？（紫外吸收法） (7)实验四淀粉酶活力的测定 (9)实验五酶的激活和抑制作用 (13)实验六氨基酸的分离鉴定一一纸层析法 (14)实验七基因组DNA的快速提取---碘化钾法 (16)实验八琼脂糖凝胶电泳技术一一DNA样品检测 (18)实验一 还原糖和总糖的测定一一3,5-二硝基水杨酸比色法、目的与要求掌握还原糖和总糖测定的基本原理，学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光度计的使用。
二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是 还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利 用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和 多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含 量(还原糖以葡萄糖含量计)。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分 光光度计，在540nm 波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖 的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应 乘以0.9。
小麦面粉(1000 g)2•主要仪器3. 试剂(1) 1mg/mL 葡萄糖标准液100 mg ,置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100 mL 容量瓶中，用蒸馏水定容至 100 mL ,混匀，4C 冰箱中保存备用。
(2) 3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂：称取6.5 g DNS 溶于少量热蒸馏水中， 溶解后移入1000 mL 容量瓶中，加入2 mol/L 氢氧化钠溶液325 mL ,再加入45 g 丙三醇，摇匀，冷却后定容至1000 mL三、实验材料、主要仪器和试剂1.实验材料 (1)具塞玻璃刻度试管: 20 mL X 11 (2)滤纸 (3)烧杯：100 mL X 2(4)三角瓶：100 mL X 1(5 )容量瓶:100 mL X 3 (6)刻度吸管：1mL X 1 ； 2 mL X 2; 10 mL X 1 (7)恒温水浴锅(8)煤气炉 (9)漏斗(10)天平 (11)分光光度计准确称取80 C 烘至恒重的分析纯葡萄糖(3) 碘-碘化钾溶液：称取 5 g 碘和10 g 碘化钾，溶于100 mL 蒸馏水中。
(4) 酚酞指示剂：称取 0.1 g 酚酞，溶于250 mL 70%乙醇中。
(5) 6 M HCI 和 6 M NaOH 各 100 mL 。
(分别取 59.19 mL 37% 浓盐酸和 24 克 NaOH 定容 至 100mL )四、操作步骤1. 制作葡萄糖标准曲线取7支20 mL 具塞刻度试管编号， 按表1分别加入浓度为1 mg/mL 的葡萄糖标准液、 蒸馏水 和3,5-二硝基水杨酸(DNS )试剂，配成不同葡萄糖含量的反应液。
表1葡萄糖标准曲线制作管号1mg/mL 葡萄糖标准液(mL )蒸馏水 (mL ) DNS (mL )葡萄糖含量 (mg )光密度值 (OD 540nm )0 0 2 1.5 01 0.2 1.8 1.5 0.22 0.4 1.6 1.5 0.43 0.6 1.4 1.5 0.64 0.8 1.2 1.5 0.85 1.0 1.0 1.5 1.061.20.81.5 1.2将各管摇匀，在沸水浴中准确加热 5 min ，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至 20 mL ，加塞 后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。
调波长540 nm ,用0号管调零点，测出1〜6号管的光密度值。
以光密度值为纵坐标，葡萄糖含量( mg )为横坐标，在坐标纸上绘出标准曲线。
葡萄糖标准曲线葡萄糖含量(mg光密度值计算出7、8号管光密度值的平均值和 9、10管光密度值的平均值，在标准曲线上分别查出相应的葡萄糖毫克数，按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量还原糖(% =查曲线所得葡萄糖毫克数x 测定液总体积积x样品毫克数 1003总糖(% =查曲线所得水解后葡萄糖毫克数X 稀释倍数2.样品中还原糖和总糖的测定 (1)还原糖的提取准确称取3.00 g 食用面粉，放入100 mL 烧杯中，先用少量蒸馏水调成糊状,然后加入50 mL蒸馏水，搅匀，置于 50C 恒温水浴中保温 20 min ，不时搅拌，使还原糖浸出。
过滤，将滤液全部 收集在100 mL 的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，即为还原糖提取液。
(2)总糖的水解和提取准确称取1.00 g 食用面粉，放入100 mL 三角瓶中, 力口 15 mL 蒸馏水及10 mL 6 M HCI ，置沸 水浴中加热水解 30 min,取出1〜2滴置于白瓷板上，加 1滴I-KI 溶液检查水解是否完全。
如已 水解完全，则不呈现蓝色。
水解毕。
冷却至室温后加入 1滴酚酞指示剂，以 6 moI/L NaOH 溶液 中和至溶液呈微红色，并定容到100 mL ,过滤取滤液混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总糖测定。
(3)显色和比色10 mL 于100 mL 容量瓶中，定容至刻度,取4支20 mL 具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，将各管摇匀，在沸水浴中准确加热 5 min ，取出，冷却至室温，用蒸馏水定容至20 mL ,加塞后颠倒混匀，在分光光度计上进行比色。
调波长 540 nm ，用0号管调零点，测出 7〜10号管的光密度值。
管号还原糖待测 液(mL )总糖待测 液(mL )蒸馏水 (mL ) DNS (mL )光密度值 (OD 540nm )查曲线葡萄 糖量(mg )平均值7 0.51.51.580.51.5 1.5911 1.510111.5(以葡萄糖计)。
x 0.9 x 100表2样品还原糖测定五、结果与计算样品毫克数、, 、卜 \ 、、八六、注意1. 标准曲线制作与样品测定应同时进行显色，并使用同一空白调零点和比色。
2. 面粉中还原糖含量较少，计算总糖时可将其合并入多糖一起考虑。
七、思考题1•在样品的总糖提取时，为什么要用浓HCI处理？而在其测定前，叉为何要用NaOH中和?2标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什么要同步进行？比色时设0号管有什么意义？3. 绘制标准曲线的目的是什么？实验二油脂酸价的测定一、目的与要求初步掌握测定油脂酸价的原理和方法；了解测定油脂酸价的意义。
二、实验原理油脂在空气中暴露过久，部分油脂会被水解产生游离脂肪酸和醛等物质，并且这些物质具有刺激性气味，使油脂产生酸价。
酸败的程度使以水解产生的游离脂肪酸的多少为指标的，常以酸价或者是酸值来表示。
同一油脂若酸价高，则说明水解产生的游离脂肪酸就多。
酸价是指中和1g油脂中游离脂肪酸所需的氢氧化钾的毫克数。
酸价越高，油脂的质量也越差。
三、主要仪器、实验材料和试剂1. 锥形瓶（250 mL）3个。
2. 量筒（50 mL）1 支。
3. 碱式滴定管1支。
4. 花生油、菜油、芝麻油等。
5. 乙醇-乙醚混合液（1:1,V/V）。
6. 0.1 % KOH （1 克KOH 溶于1000 mL 纯水中）。
四、操作步骤1. 准确称取1~2 g油脂于250 mL锥形瓶中。
2. 在瓶内加入乙醇—乙醚混合液50 mL,充分振荡，使油脂样品完全溶解成透明溶液。
待油样完全溶解后，加入 1 %酚酞指示剂3〜5滴，立即用0.1% KOH标准溶液滴定至溶液成微红色（放置30 S内不褪色）为终点，并记录用去的KOH的体积，并按下式进行计算。
酸价=2（V2-V1）/WV2 :滴定油样时耗用氢氧化钾溶液的毫升数V1 :滴定空白对照耗用氢氧化钾溶液的毫升数W:油样重（g）注：滴定过程中如出现混浊或分层，表明由碱液带进水过多，乙醇量不足以使乙醚与碱溶液互溶。
一旦出现此现象，可补加乙醇，促使均一相体系的形成。
五、实验结果六、思考题测定油脂酸价时，装油的锥形瓶和油样中均不得混有无机酸，这是为什么?实验三蛋白质的提取及浓度测定（紫外吸收法）一、目的与要求掌握蛋白质的提取方法；学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理；熟练掌握紫外分光光度计的使用方法。
二、实验原理大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。
由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白质具有吸收紫外光的性质，最大吸收峰在280nm波长处。
在此波长范围内，蛋白质溶液的光密度OD280nm与其浓度呈正比关系，可作定量测定。
三、实验材料、主要仪器和试剂1•试验材料：萌发3天的小麦种子2. 主要仪器（1）紫外分光光度计，（2）离心机（3）试管与试管架，（4）刻度吸量管（5）研钵（6）100 mL容量瓶3•试剂：标准牛血清蛋白溶液：准确称取经凯氏定氮法校正的结晶牛血清蛋白，配制成浓度为1mg/ mL （0.5克标准牛血清蛋白纯水定容至500 mL ）的溶液。
四、操作步骤1 •蛋白质（淀粉酶）的提取称取1g萌发3天的小麦种子（芽长约1cm），置于研钵中，加入少量石英砂和 2 mL蒸馏水，研磨匀浆。
将匀浆倒入离心管中，用6mL蒸馏水分次将残渣洗入离心管。
提取液在室温下\ /放置提取15〜20 min，每隔数分钟搅动1次，使其充分提取。