第21章基因诊断与基因治疗第二十一章
疾病分类icd-10第20、21章
八、实验
核对卷一确定编码： （1）中毒引起的临床表现：胃炎， 编码：K29.7 编码：K29.7 （2）中毒的后遗症编码：T97 中毒的后遗症编码：T97 （3）自杀的后遗症编码：Y87.0 自杀的后遗症编码：Y87.0
第二十一章 影响健康状态和 与保健机构接触的因素 Z00-Z99） （Z00-Z99）
第二十章 疾病和死亡的外因 V01-Y98） （V01-Y98）
首都医科大学宣武医院 张丽
这一章即是原来ICD这一章即是原来ICD-9的E编码部分。其虽作为ICD编码部分。其虽作为ICD10核心分类的一部分，但在使用方面仍不能作为主要 10核心分类的一部分，但在使用方面仍不能作为主要 编码。它与第十九章一起使用。按照ICD-10第二卷的 编码。它与第十九章一起使用。按照ICD-10第二卷的 指导，只是选择性附加编码，但在我国，为了与ICD指导，只是选择性附加编码，但在我国，为了与ICD9一致，还是应当对所有S00-T98的情况编一个第二十 一致，还是应当对所有S00-T98的情况编一个第二十 章的附加编码，并用于疾病分类外部原因的统计分类 。 本章的编码对于第十九章以外的各章的外因情况，可 作为选择性附加编码。
七、编码的查找方法
2、中毒与有害效应外因编码的查找 主导词的选择 以药物和化学制剂名称为主导词。
七、编码的查找方法
2、中毒与有害效应外因编码的查找 编码的查找 在索引第三部分中查找药物和化学制剂的 名称，并根据外因的性质查找编码。 例如：有毒植物的中毒，由于自杀 查：植物 （P1366） P1366） - 有毒的，作为食物 T62.2 X69.9
七、编码的查找Байду номын сангаас法
1、损伤外因编码的查找 主导词的选择 主导词多为非医学术语，常用的有：打击、击中 、碰撞、坠落、燃烧、咬伤、加害、自杀、意外 事故等。 选择主导词时，有时要从多方面的同义词中去选 择。 如：“打击”可用“击中”；又如：损伤的性质 为他杀，主导词可为“加害”。
第二十一章基因诊断与基因治疗
第二十一章基因诊断与基因治疗基因诊断与基因治疗能够在比较短的时间从理论设想变为现实，主要是由于分子生物学的理论及技术方法，特别是重组DNA技术的迅速发展，使人们可以在实验室构建各种载体、克隆及分析目标基因。
所以对疾病能够深入至分子水平的研究，并已取得了重大的进展。
因此在20世纪70年代末诞生了基因诊断(gene diagnosis):随后于1990年美国实施了第一个基因治疗(gene therapy)的临床试验方案。
可见，基因诊断和基因治疗是现代分子生物学的理论和技术与医学相结合的范例。
第一节基因诊断一.基因诊断的含义传统对疾病的诊断主要是以疾病的表型改变为依据，如患者的症状、血尿各项指标的变化，或物理检查的异常结果，然而表型的改变在许多情况下不是特异的，而且是在疾病发生的一定时间后才出现，因此常不能及时作出明确的诊断。
现知各种表型的改变是由基因异常造成的，也就是说基因的改变是引起疾病的根本原因。
基因诊断是指采用分子生物学的技术方法来分析受检者的某一特定基因的结构(DNA 水平)或功能(RNA水平)是否异常，以此来对相应的疾病进行诊断。
基因诊断有时也称为分子诊断或DNA 诊断(DNA diagnosis)。
基因诊断是病因的诊断，既特异又灵敏，可以揭示尚未岀现症状时与疾病相关的基因状态，从而可以对表型正常的携带者及某种疾病的易感者作出诊断和预测，特别对确定有遗传疾病家族史的个体或产前的胎儿是否携带致病基因的检测具有指导意义。
二.基因诊断的原理及方法(一)基因诊断的原理疾病的发生不仅与基因结构的变异有关，而且与其表达功能异常有关。
基因诊断的基本原理就是检测相关基因的结构及其表达功能特别是RNA产物是否正常。
由于DNA的突变、缺失、插入、倒位和基因融合等均可造成相关基因结构变异，因此，可以直接检测上述的变化或利用连锁方法进行分析，这就是DNA诊断。
对表达产物niRNA质和量变化的分析为RNA诊断(RNA diag no sis)。
基因诊断与基因治疗
（1）DNA模板的变性 DNA模板的变性 模板的
将待扩增DNA加热到95 左右，使双链DNA DNA解开成 将待扩增DNA加热到950C左右，使双链DNA解开成 DNA加热到
使模板DNA或延伸后的双链DNA DNA或延伸后的双链DNA发生热变性 为单链（即：使模板DNA或延伸后的双链DNA发生热变性 ），
PCR技术在模板、dNTP、Mg2+等条件下，用耐热 技术在模板、dNTP、 等条件下， 技术在模板 Taq酶代替DNA聚合酶 用合成的DNA引物代替RNA 酶代替DNA聚合酶， DNA引物代替RNA引 的Taq酶代替DNA聚合酶，用合成的DNA引物代替RNA引 经过DNA变性、引物与模板结合 复性）和延伸3 DNA变性 模板结合（ 物，经过DNA变性、引物与模板结合（复性）和延伸3 个步骤的循环过程（25∼30个循环），目的DNA可 个循环），目的DNA 个步骤的循环过程（25∼30个循环），目的DNA可扩增 100万倍以上 万倍以上。 100万倍以上。
并游离于反应体系中作为模板； 并游离于反应体系中作为模板；
（2）模板与引物的结合（退火或复性） 模板与引物的结合（退火或复性）
将体系温度降至合适温度（ 左右） 将体系温度降至合适温度 （ 550C 左右 ） ， 使加入 的引物与模板DNA两端 碱基序列互补结合。 的引物与模板DNA两端（3ˊ端）碱基序列互补结合。 DNA两端（
固 相 支 持 物
B
本法优点： 本法优点：
16 特异性强，对样本纯度要求不高，定量较准确。 特异性强，对样本纯度要求不高，定量较准确。
situ） （6）原位杂交（nucleic acid hybridization in situ） 将标记探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交， 将标记探针与细胞或组织切片中的核酸进行杂交， 进而检测特异的DNA RNA序列 DNA或 序列。 进而检测特异的DNA或RNA序列。 有 细胞原位杂交 组织切片原位杂交 三类杂交
补充题-辅导
第21章基因诊断与基因治疗A型题：1．内源基因变异不包括A．点突变B．缺失或插入突变C．外源基因入侵D．表达异常E．基因结构变异2．所谓基因诊断即A．临床学诊断B．血清学诊断C．免疫学诊断D．生化学诊断E．直接检测基因结构3．以下哪一个不是基因诊断技术方法A．PCR B．PCR/SSCP C．PCR/RFLP D．RNAi E．DNA芯片4．相同长度的单链DNA因其碱基序列不同，甚至单个碱基不同，都可能形成不同的空间构象，从而在电泳时泳动速率不同，这种分析方法称A．RFLP B．ASO C．SSCP D．PCR E．限制性内切酶酶谱分析法5．基因诊断的特点，错误的是A．针对性强B．特异性高C．灵敏度高D．费用较低E．适用性强，诊断范围广6．基因诊断常用的方法不包括A．核酸分子杂交B．PCR C．Western blotting D．基因测序E．基因芯片7．关于ASO杂交法的叙述，正确的是A．该方法仅用于诊断已知突变B．该方法可发现新的突变基因类型C．仅能检测纯合子D．原理是依据DNA片段长度多态性E．原理是利用限制性内切酶位点的改变8．关于基因诊断的叙述，错误的是A．细胞癌变机制的研究B．对肿瘤进行诊断分类C．肿瘤预后检测D．在不同环节上指导抗癌E．肿瘤的预防9．有关自杀基因的叙述，错误的是A．细菌产生的酶催化无毒性药物转变为细胞毒性物B．常用的有HSV-tk、EC-CD等C．可用于肿瘤的治疗D．携带该基因的受体细胞被杀死E．可用于遗传病的基因治疗10．非病毒介导的基因转移的化学方法有A．显微注射B．脂质体介导C．DNA直接注射法D．基因枪技术E．电穿孔11．做基因治疗时禁止使用A．淋巴细胞B．生殖细胞C．肝细胞D．肌细胞E．肿瘤细胞12．利用正常机体细胞中不存在的外源基因所表达的酶催化药物前体转变为细胞毒性产物而导致细胞死亡的基因治疗方法是A．基因灭活B．基因矫正C．基因置换D．基因增补E．自杀基因的应用13．基因治疗所采用的方法不包括A．基因矫正B．基因置换C．基因增补D．基因敲除E．自杀基因14．目前基因治疗中选用最多的基因载体是A．肽核酸（PNA）B．三链DNA C．HSV-tk D．逆转录病毒E．干扰RNAB型题A．基因灭活B．基因矫正C．基因置换D．基因增补E．自杀基因的应用15．将变异基因进行修正的基因治疗方法是B16．将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是C17．利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是AX型题18．常用于基因诊断的核酸杂交方法包括A．限制性内切酶酶谱分析法B．ASO杂交法C．RFLP分析法D．基因序列测定E．PCR19．基因诊断可用于A．肿瘤B．感染性疾病C．遗传性疾病D．传染性疾病E．法医鉴定20．基因治疗可用于A．肿瘤B．心血管疾病C．神经系统疾病D．遗传性疾病E．感染性疾病21．基因诊断的检测对象是A．DNA B．mRNA C．tRNA D．rRNA E．蛋白质22．目前基因治疗中常选用的基因载体是A．质粒B．腺病毒C．反转录病毒D．腺病毒相关病毒E．黏粒第22章常用分子生物学技术的原理及其应用1．用于分析蛋白质分子相互作用的技术是A．Southern 印迹B．Northern 印迹C．Western 印迹D．斑点印迹E．原位杂交2．以标记探针检测NC膜上RNA的方法称A．原位杂交B．免疫印迹C．Western blotting D．Northern blotting E．Southern blotting3．Western 印迹是指A．DNA与探针结合B．DNA与抗体结合C．RNA与抗体结合D．蛋白质与抗体结合E．免疫分子与DNA结合4．Southern blotting指的是A．DNA印迹技术B．RNA印迹技术C．蛋白质印迹技术D．斑点杂交E．原位杂交5．免疫印迹技术指的是结合在膜上的A．蛋白质分子与抗体分子结合B．DNA分子与抗体分子结合C．RNA分子与抗体分子结合D．DNA分子与RNA分子结合E．免疫分子与DNA分子结合6．用于核酸杂交的探针应是A．双链DNA B．蛋白质C．单链DNA或RNAD．双股多肽链E．双链RNA7．关于原位杂交的叙述，正确的是A．在DNA芯片上进行杂交B．直接在组织切片或细胞涂片上杂交C．将核酸点在NC膜上直接进行杂交D．即DNA点阵法E．在凝胶中进行杂交8．Northern blotting是指A．将DNA转移到膜上，用DNA探针杂交B．将RNA转移到膜上，用DNA探针杂交C．将DNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交D．将RNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交E．将DNA转移到膜上，用RNA探针杂交9．下列哪一种分子不能用做探针A．人工合成的寡核苷酸片段B．克隆的基因组DNA C．cDNAD．蛋白质E．RNA片段10．印迹技术的操作程序是A．电泳→转移→杂交→显色B．杂交→电泳→转移→显色C．电泳→显色→转移→杂交D．转移→电泳→杂交→显色E．显色→电泳→转移→杂交11．直接针对目的DNA设计的筛选方法是A．抗药标志筛选B．-互补筛选C．分子杂交D．免疫化学E．酶联免疫12．PCR技术不能用于A．目的基因的克隆B．基因的体外突变C．DNA的微量分析D．DNA序列测定E．蛋白质含量测定13．组成PCR反应体系的基本成分不包括A．模板DNA B．连接酶C．特异性引物D．DNA聚合酶E．dNTP14．RT-PCR可以用于A．DNA序列测定B．RNA结构分析C．蛋白质表达分析D．基因表达分析E．蛋白质氨基酸序列分析15．PCR的模板是A．双链DNA或单链mRNA B．单链DNA或单链cDNAC．双链DNA或单链cDNA D．双链DNA或双链RNAE．双链DNA或双链cDNA16．关于PCR的叙述，错误的是A．是一种体外扩增DNA的方法B．一般采用的变性温度是72℃C．循环次数为25~30次D．基本原理依据DNA半保留复制E．需要耐热的DNA聚合酶17．有关DNA链末端终止法的叙述，不正确的是A．需要ddNMP B．需要ddNTP C．dNTP:ddNTP的比例要合适D．需要放射性核素或荧光染料E．需要NTP18．目前应用最广泛的DNA测序方法是A．化学裂解法B．Crick法C．Sanger法D．Allan Maxam法E．Walter Gilbert法19．基因文库A．包括细胞内所有的蛋白质的信息B．包括基因组DNA文库和cDNA文库C．是指某一基因外显子数目D．可以通过DNA末端合成终止法获得E．不需要进行DNA片段重组载体就可获得20．杜氏肌营养不良致病基因的克隆是A．功能互补试验B．侯选基因克隆C．定位克隆D．功能克隆E．利用特异性抗体筛选cDNA文库21．关于定位克隆，错误的是A．包括遗传学分析和分子生物学分析B．遗传学分析确定致病基因的染色体定位C．分子生物学分析筛选和克隆致病基因D．遗传学分析包括染色体异常分析和交换分析E．需要多种技术结合22．克隆致病相关基因的策略不包括A．定位克隆B．功能克隆C．定位侯选基因克隆D．非定位侯选基因克隆E．利用特异性抗体筛选cDNA文库23．要获得疾病相关基因的克隆，可以通过A．用特异性抗体筛选表达型cDNA文库B．对该基因编码的蛋白质进行分析来推测C．对该基因表达的mRNA进行分析来推测D．将病人的相应基因与正常人进行比较E．转基因技术24．将一个动物的体细胞胞核导入另一个体的去除胞核的卵细胞内，这种技术称A．转基因技术B．核转移技术C．基因剔除技术D．基因重组技术E．基因靶向灭活技术25．动物整体克隆技术是指A．转基因动物B．转基因C．基因剔除D．核转移技术E．基因靶向灭活26．基因剔除技术的基本原理是A．建立在核转移技术上B．定位侯选基因策略C．建立在同源重组技术上D．建立在酵母系统的功能互补实验上E．定位克隆27．基因转移和剔除技术在医学中的最重要用途是A．建立疾病的动物模型B．疾病相关基因的克隆C．疾病相关基因的鉴定D．发现信号转导药物E．建立器官发育的动物模型28．克隆羊多莉的诞生是应用了A．转基因技术B．核转移技术C．基因剔除技术D．基因同源重组技术E．基因克隆技术29．基因芯片的用途不包括A．基因表达检测B．基因突变检测C．研究蛋白质功能D．杂交测序E．基因组作图30．关于DNA芯片的叙述，错误的是A．多用于大规模检测B．手工点样C．需强大的扫描分析硬、软件支持D．由DNA点阵技术发展而来E．可在很小的硅片上固定探针31．可用于基因表达谱分析的是A．Western印迹B．原位杂交C．PCR D．DNA芯片E．Southern印迹32．关于酵母双杂交系统的应用，错误的是A．分析已知蛋白质之间的相互作用B．研究蛋白质功能域C．分析蛋白质与DNA的相互作用D．绘制蛋白质相互作用系统图谱E．药物设计B型题A．检测特异DNA B．检测特异mRNA C．检测特异蛋白质D．检测特异DNA和蛋白质E．检测特异抗体和核酸33．Southern印迹A34．Northern印迹B35．Western印迹CA．细胞水平的基因转移B．将目的基因导入胚胎干细胞C．动物体细胞核导入去核的受精卵D．将重组质粒导入细胞E．去除动物体内某种基因36．转化D37．动物整体克隆技术C38．基因靶向灭活技术EX型题39．下列哪两种物质间形成的杂化链，属于核酸分子杂交A．DNA和DNA B．DNA和RNA C．RNA和RNA D．蛋白质和蛋白质E．DNA和蛋白质40．生物大分子印迹技术包括A．DNA blotting B．RNA blotting C．蛋白质印迹D．免疫印迹E．Western blotting41．PCR的主要步骤有A．退火B．变性C．转位D．延伸E．进位42．PCR的主要用途有A．核转移B．DNA微量分析C．基因的体外突变D．目的基因的克隆E．DNA序列测定43．关于DNA序列自动化测定的叙述，正确的是A．需要DNA模板B．不再需要引物C．用4种荧光标记D．激光扫描分析读序E．基本原理与手工测序相同44．关于DNA测序的化学裂解法，正确的是A．DNA发生随机断裂B．采用某种化学试剂裂解DNA C．需对DNA进行标记D．聚丙烯酰胺凝胶电泳分离裂解片段E．以ddNTP作原料45．有关转基因技术的正确说法是A．基因转移只能在同种异体之间进行B．基因转移只能在同种个体之间进行C．将目的基因整合入受精卵细胞D．将目的基因整合入胚胎干细胞E．导入目的基因的个体不能传代46．在动物体内去除某种基因的技术称为基因A．靶向灭活B．剔除C．转移D．克隆E．修饰第23章基因组学与医学A型题1．下列哪项属于结构基因组学研究内容A．基因组DNA序列测定B．鉴定DNA序列中的基因C．分析基因功能D．描述基因表达模式E．比较不同物种的整个基因组2．基因组学的全部研究领域是指A．测定某一种生物基因组的DNA序列B．鉴定某一种生物的部分基因功能C．结构基因组学、功能基因组学和比较基因组学的总和D．不同生物之间进行的比较基因组学E．检测一种细胞或组织的全套mRNA3．结构基因组学的研究内容是A．绘制出某种生物的物理图谱B．确定和发现蛋白质的编码序列C．利用计算机“同源搜索”发现蛋白质功能域D．测定某种细胞或组织的蛋白质表达谱E．用DNA芯片技术绘制整体基因表达谱4．功能基因组学的研究内容是A．绘制出某种生物的物理图谱B．采用DNA芯片进行细胞或组织的转录组分析C．绘制出某种生物的遗传图谱D．测定出某种生物基因组的全部序列E．分析两种不同生物基因组的差异5．基因表达模式研究所属的领域是A．结构基因组学B．比较基因组学C．环境基因组学D．药理基因组学E．功能基因组学6．研究蛋白质组学的主要方法是A．琼脂糖凝胶电泳B．双向电泳法C．等电聚焦电泳D．变性聚丙烯酰胺凝胶电泳E．氨基酸序列分析7．人类基因组计划研究内容不包括A．遗传制图B．物理制图C．基因组DNA序列测定D．鉴定DNA序列中的基因E．创建计算机分析管理系统8．以下哪一项不是猎取疾病基因的策略A．定位基因克隆B．侯选基因克隆C．功能基因克隆D．定位侯选基因克隆E．染色体定位9．检测人类基因变异或突变采用最多的方法是A．DNA直接测序B．限制性片段长度多态性C．变性梯度胶电泳D．单核苷酸多态性E．Northern blotting10．某种遗传性疾病是由一个点突变（无限制性内切酶位点变化）引起，可以A．用DNA单链构象多态性分析突变B．用限制性片段长度多态性分析突变C．用Western blotting分析突变D．用电泳分析基因组DNAE．用电泳分析细胞中的所有蛋白质11．比较正常与疾病基因组差异表达分析的技术是A．Southern blotting B．Western blottingC．超离心技术D．SNPs E．DNA芯片12．白血病和淋巴瘤的常见病因是A．因基因重排导致的染色体易位B．因p21基因失活C．因p53基因失活D．H-ras基因突变E．raf基因缺失13．环境基因组学的研究目的是A．确定心血管疾病的相关基因B．了解环境对人类疾病的影响和意义C．克隆与肿瘤发生相关的基因D．寻找疾病时基因组差异表达的基因E．寻找单基因导致遗传疾病的致病基因14．应用基因组学资料进行药物分析的技术是A．SSCP B．RFLP C．正、反向cDNA文库消减技术D．染色体原位杂交E．基因敲除技术15．获得性基因病是指A．在某一基因位点上的缺失导致的疾病B．由多个基因并与环境因素相互作用导致的疾病C．在某一基因位点上的突变导致的疾病D．由病原微生物基因组感染人类基因组引发的疾病E．由重金属中毒引发的疾病16．检测人类基因变异或突变的技术有A．染色体原位杂交B．染色体连锁分析C．双向电泳分析D．飞行质谱分析E．SNPs技术X型题17．蛋白质组学A．是后基因组研究的一部分B．研究组织细胞中全部蛋白质表达的情况C．以双向电泳为一重要手段D．是以蛋白质的分类为研究目标E．研究不同条件下蛋白质表达差异18．后基因组研究内容包括A．测定全部基因组序列B．研究基因产物的功能C．测定一条染色体上DNA的序列D．研究不同组织细胞中基因表达的差异E．蛋白质空间结构的分析与预测19．功能基因组主要研究内容包括A．鉴定DNA序列中的基因B．比较不同物种的整个基因组C．实验性设计基因功能D．描述基因表达模式E．基因组序列测定20．常见的药物设计靶点分子有A．G蛋白偶联受体B．各种蛋白酶类C．各种蛋白激酶D．各种氧化还原酶类E．各种合成酶。
补充题-辅导
第21章基因诊断与基因治疗A型题：1．内源基因变异不包括A．点突变B．缺失或插入突变C．外源基因入侵D．表达异常E．基因结构变异2．所谓基因诊断即A．临床学诊断B．血清学诊断C．免疫学诊断D．生化学诊断E．直接检测基因结构3．以下哪一个不是基因诊断技术方法A．PCR B．PCR/SSCP C．PCR/RFLP D．RNAi E．DNA芯片4．相同长度的单链DNA因其碱基序列不同，甚至单个碱基不同，都可能形成不同的空间构象，从而在电泳时泳动速率不同，这种分析方法称A．RFLP B．ASO C．SSCP D．PCR E．限制性内切酶酶谱分析法5．基因诊断的特点，错误的是A．针对性强B．特异性高C．灵敏度高D．费用较低E．适用性强，诊断范围广6．基因诊断常用的方法不包括A．核酸分子杂交B．PCR C．Western blotting D．基因测序E．基因芯片7．关于ASO杂交法的叙述，正确的是A．该方法仅用于诊断已知突变B．该方法可发现新的突变基因类型C．仅能检测纯合子D．原理是依据DNA片段长度多态性E．原理是利用限制性内切酶位点的改变8．关于基因诊断的叙述，错误的是A．细胞癌变机制的研究B．对肿瘤进行诊断分类C．肿瘤预后检测D．在不同环节上指导抗癌E．肿瘤的预防9．有关自杀基因的叙述，错误的是A．细菌产生的酶催化无毒性药物转变为细胞毒性物B．常用的有HSV-tk、EC-CD等C．可用于肿瘤的治疗D．携带该基因的受体细胞被杀死E．可用于遗传病的基因治疗10．非病毒介导的基因转移的化学方法有A．显微注射B．脂质体介导C．DNA直接注射法D．基因枪技术E．电穿孔11．做基因治疗时禁止使用A．淋巴细胞B．生殖细胞C．肝细胞D．肌细胞E．肿瘤细胞12．利用正常机体细胞中不存在的外源基因所表达的酶催化药物前体转变为细胞毒性产物而导致细胞死亡的基因治疗方法是A．基因灭活B．基因矫正C．基因置换D．基因增补E．自杀基因的应用13．基因治疗所采用的方法不包括A．基因矫正B．基因置换C．基因增补D．基因敲除E．自杀基因14．目前基因治疗中选用最多的基因载体是A．肽核酸（PNA）B．三链DNA C．HSV-tk D．逆转录病毒E．干扰RNAB型题A．基因灭活B．基因矫正C．基因置换D．基因增补E．自杀基因的应用15．将变异基因进行修正的基因治疗方法是B16．将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是C17．利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是AX型题18．常用于基因诊断的核酸杂交方法包括A．限制性内切酶酶谱分析法B．ASO杂交法C．RFLP分析法D．基因序列测定E．PCR19．基因诊断可用于A．肿瘤B．感染性疾病C．遗传性疾病D．传染性疾病E．法医鉴定20．基因治疗可用于A．肿瘤B．心血管疾病C．神经系统疾病D．遗传性疾病E．感染性疾病21．基因诊断的检测对象是A．DNA B．mRNA C．tRNA D．rRNA E．蛋白质22．目前基因治疗中常选用的基因载体是A．质粒B．腺病毒C．反转录病毒D．腺病毒相关病毒E．黏粒第22章常用分子生物学技术的原理及其应用1．用于分析蛋白质分子相互作用的技术是A．Southern 印迹B．Northern 印迹C．Western 印迹D．斑点印迹E．原位杂交2．以标记探针检测NC膜上RNA的方法称A．原位杂交B．免疫印迹C．Western blotting D．Northern blotting E．Southern blotting3．Western 印迹是指A．DNA与探针结合B．DNA与抗体结合C．RNA与抗体结合D．蛋白质与抗体结合E．免疫分子与DNA结合4．Southern blotting指的是A．DNA印迹技术B．RNA印迹技术C．蛋白质印迹技术D．斑点杂交E．原位杂交5．免疫印迹技术指的是结合在膜上的A．蛋白质分子与抗体分子结合B．DNA分子与抗体分子结合C．RNA分子与抗体分子结合D．DNA分子与RNA分子结合E．免疫分子与DNA分子结合6．用于核酸杂交的探针应是A．双链DNA B．蛋白质C．单链DNA或RNAD．双股多肽链E．双链RNA7．关于原位杂交的叙述，正确的是A．在DNA芯片上进行杂交B．直接在组织切片或细胞涂片上杂交C．将核酸点在NC膜上直接进行杂交D．即DNA点阵法E．在凝胶中进行杂交8．Northern blotting是指A．将DNA转移到膜上，用DNA探针杂交B．将RNA转移到膜上，用DNA探针杂交C．将DNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交D．将RNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交E．将DNA转移到膜上，用RNA探针杂交9．下列哪一种分子不能用做探针A．人工合成的寡核苷酸片段B．克隆的基因组DNA C．cDNAD．蛋白质E．RNA片段10．印迹技术的操作程序是A．电泳→转移→杂交→显色B．杂交→电泳→转移→显色C．电泳→显色→转移→杂交D．转移→电泳→杂交→显色E．显色→电泳→转移→杂交11．直接针对目的DNA设计的筛选方法是A．抗药标志筛选B．-互补筛选C．分子杂交D．免疫化学E．酶联免疫12．PCR技术不能用于A．目的基因的克隆B．基因的体外突变C．DNA的微量分析D．DNA序列测定E．蛋白质含量测定13．组成PCR反应体系的基本成分不包括A．模板DNA B．连接酶C．特异性引物D．DNA聚合酶E．dNTP14．RT-PCR可以用于A．DNA序列测定B．RNA结构分析C．蛋白质表达分析D．基因表达分析E．蛋白质氨基酸序列分析15．PCR的模板是A．双链DNA或单链mRNA B．单链DNA或单链cDNAC．双链DNA或单链cDNA D．双链DNA或双链RNAE．双链DNA或双链cDNA16．关于PCR的叙述，错误的是A．是一种体外扩增DNA的方法B．一般采用的变性温度是72℃C．循环次数为25~30次D．基本原理依据DNA半保留复制E．需要耐热的DNA聚合酶17．有关DNA链末端终止法的叙述，不正确的是A．需要ddNMP B．需要ddNTP C．dNTP:ddNTP的比例要合适D．需要放射性核素或荧光染料E．需要NTP18．目前应用最广泛的DNA测序方法是A．化学裂解法B．Crick法C．Sanger法D．Allan Maxam法E．Walter Gilbert法19．基因文库A．包括细胞内所有的蛋白质的信息B．包括基因组DNA文库和cDNA文库C．是指某一基因外显子数目D．可以通过DNA末端合成终止法获得E．不需要进行DNA片段重组载体就可获得20．杜氏肌营养不良致病基因的克隆是A．功能互补试验B．侯选基因克隆C．定位克隆D．功能克隆E．利用特异性抗体筛选cDNA文库21．关于定位克隆，错误的是A．包括遗传学分析和分子生物学分析B．遗传学分析确定致病基因的染色体定位C．分子生物学分析筛选和克隆致病基因D．遗传学分析包括染色体异常分析和交换分析E．需要多种技术结合22．克隆致病相关基因的策略不包括A．定位克隆B．功能克隆C．定位侯选基因克隆D．非定位侯选基因克隆E．利用特异性抗体筛选cDNA文库23．要获得疾病相关基因的克隆，可以通过A．用特异性抗体筛选表达型cDNA文库B．对该基因编码的蛋白质进行分析来推测C．对该基因表达的mRNA进行分析来推测D．将病人的相应基因与正常人进行比较E．转基因技术24．将一个动物的体细胞胞核导入另一个体的去除胞核的卵细胞内，这种技术称A．转基因技术B．核转移技术C．基因剔除技术D．基因重组技术E．基因靶向灭活技术25．动物整体克隆技术是指A．转基因动物B．转基因C．基因剔除D．核转移技术E．基因靶向灭活26．基因剔除技术的基本原理是A．建立在核转移技术上B．定位侯选基因策略C．建立在同源重组技术上D．建立在酵母系统的功能互补实验上E．定位克隆27．基因转移和剔除技术在医学中的最重要用途是A．建立疾病的动物模型B．疾病相关基因的克隆C．疾病相关基因的鉴定D．发现信号转导药物E．建立器官发育的动物模型28．克隆羊多莉的诞生是应用了A．转基因技术B．核转移技术C．基因剔除技术D．基因同源重组技术E．基因克隆技术29．基因芯片的用途不包括A．基因表达检测B．基因突变检测C．研究蛋白质功能D．杂交测序E．基因组作图30．关于DNA芯片的叙述，错误的是A．多用于大规模检测B．手工点样C．需强大的扫描分析硬、软件支持D．由DNA点阵技术发展而来E．可在很小的硅片上固定探针31．可用于基因表达谱分析的是A．Western印迹B．原位杂交C．PCR D．DNA芯片E．Southern印迹32．关于酵母双杂交系统的应用，错误的是A．分析已知蛋白质之间的相互作用B．研究蛋白质功能域C．分析蛋白质与DNA的相互作用D．绘制蛋白质相互作用系统图谱E．药物设计B型题A．检测特异DNA B．检测特异mRNA C．检测特异蛋白质D．检测特异DNA和蛋白质E．检测特异抗体和核酸33．Southern印迹A34．Northern印迹B35．Western印迹CA．细胞水平的基因转移B．将目的基因导入胚胎干细胞C．动物体细胞核导入去核的受精卵D．将重组质粒导入细胞E．去除动物体内某种基因36．转化D37．动物整体克隆技术C38．基因靶向灭活技术EX型题39．下列哪两种物质间形成的杂化链，属于核酸分子杂交A．DNA和DNA B．DNA和RNA C．RNA和RNA D．蛋白质和蛋白质E．DNA和蛋白质40．生物大分子印迹技术包括A．DNA blotting B．RNA blotting C．蛋白质印迹D．免疫印迹E．Western blotting41．PCR的主要步骤有A．退火B．变性C．转位D．延伸E．进位42．PCR的主要用途有A．核转移B．DNA微量分析C．基因的体外突变D．目的基因的克隆E．DNA序列测定43．关于DNA序列自动化测定的叙述，正确的是A．需要DNA模板B．不再需要引物C．用4种荧光标记D．激光扫描分析读序E．基本原理与手工测序相同44．关于DNA测序的化学裂解法，正确的是A．DNA发生随机断裂B．采用某种化学试剂裂解DNA C．需对DNA进行标记D．聚丙烯酰胺凝胶电泳分离裂解片段E．以ddNTP作原料45．有关转基因技术的正确说法是A．基因转移只能在同种异体之间进行B．基因转移只能在同种个体之间进行C．将目的基因整合入受精卵细胞D．将目的基因整合入胚胎干细胞E．导入目的基因的个体不能传代46．在动物体内去除某种基因的技术称为基因A．靶向灭活B．剔除C．转移D．克隆E．修饰第23章基因组学与医学A型题1．下列哪项属于结构基因组学研究内容A．基因组DNA序列测定B．鉴定DNA序列中的基因C．分析基因功能D．描述基因表达模式E．比较不同物种的整个基因组2．基因组学的全部研究领域是指A．测定某一种生物基因组的DNA序列B．鉴定某一种生物的部分基因功能C．结构基因组学、功能基因组学和比较基因组学的总和D．不同生物之间进行的比较基因组学E．检测一种细胞或组织的全套mRNA3．结构基因组学的研究内容是A．绘制出某种生物的物理图谱B．确定和发现蛋白质的编码序列C．利用计算机“同源搜索”发现蛋白质功能域D．测定某种细胞或组织的蛋白质表达谱E．用DNA芯片技术绘制整体基因表达谱4．功能基因组学的研究内容是A．绘制出某种生物的物理图谱B．采用DNA芯片进行细胞或组织的转录组分析C．绘制出某种生物的遗传图谱D．测定出某种生物基因组的全部序列E．分析两种不同生物基因组的差异5．基因表达模式研究所属的领域是A．结构基因组学B．比较基因组学C．环境基因组学D．药理基因组学E．功能基因组学6．研究蛋白质组学的主要方法是A．琼脂糖凝胶电泳B．双向电泳法C．等电聚焦电泳D．变性聚丙烯酰胺凝胶电泳E．氨基酸序列分析7．人类基因组计划研究内容不包括A．遗传制图B．物理制图C．基因组DNA序列测定D．鉴定DNA序列中的基因E．创建计算机分析管理系统8．以下哪一项不是猎取疾病基因的策略A．定位基因克隆B．侯选基因克隆C．功能基因克隆D．定位侯选基因克隆E．染色体定位9．检测人类基因变异或突变采用最多的方法是A．DNA直接测序B．限制性片段长度多态性C．变性梯度胶电泳D．单核苷酸多态性E．Northern blotting10．某种遗传性疾病是由一个点突变（无限制性内切酶位点变化）引起，可以A．用DNA单链构象多态性分析突变B．用限制性片段长度多态性分析突变C．用Western blotting分析突变D．用电泳分析基因组DNAE．用电泳分析细胞中的所有蛋白质11．比较正常与疾病基因组差异表达分析的技术是A．Southern blotting B．Western blottingC．超离心技术D．SNPs E．DNA芯片12．白血病和淋巴瘤的常见病因是A．因基因重排导致的染色体易位B．因p21基因失活C．因p53基因失活D．H-ras基因突变E．raf基因缺失13．环境基因组学的研究目的是A．确定心血管疾病的相关基因B．了解环境对人类疾病的影响和意义C．克隆与肿瘤发生相关的基因D．寻找疾病时基因组差异表达的基因E．寻找单基因导致遗传疾病的致病基因14．应用基因组学资料进行药物分析的技术是A．SSCP B．RFLP C．正、反向cDNA文库消减技术D．染色体原位杂交E．基因敲除技术15．获得性基因病是指A．在某一基因位点上的缺失导致的疾病B．由多个基因并与环境因素相互作用导致的疾病C．在某一基因位点上的突变导致的疾病D．由病原微生物基因组感染人类基因组引发的疾病E．由重金属中毒引发的疾病16．检测人类基因变异或突变的技术有A．染色体原位杂交B．染色体连锁分析C．双向电泳分析D．飞行质谱分析E．SNPs技术X型题17．蛋白质组学A．是后基因组研究的一部分B．研究组织细胞中全部蛋白质表达的情况C．以双向电泳为一重要手段D．是以蛋白质的分类为研究目标E．研究不同条件下蛋白质表达差异18．后基因组研究内容包括A．测定全部基因组序列B．研究基因产物的功能C．测定一条染色体上DNA的序列D．研究不同组织细胞中基因表达的差异E．蛋白质空间结构的分析与预测19．功能基因组主要研究内容包括A．鉴定DNA序列中的基因B．比较不同物种的整个基因组C．实验性设计基因功能D．描述基因表达模式E．基因组序列测定20．常见的药物设计靶点分子有A．G蛋白偶联受体B．各种蛋白酶类C．各种蛋白激酶D．各种氧化还原酶类E．各种合成酶。
高三生物 基因诊断和基因治疗
2.基本原理
利用碱基的互补配对原则
3.常用方法
核酸分子杂交技术 聚合酶链反应(PCR)
基因测序
二:基因诊断在临床上的应用
传统诊断方法的缺陷
基因诊断特点 应用实例
传统诊断方法的缺陷
传统的疾病诊断方法大多为“表型诊 断”，以疾病或病原体的表型为依据.而 表型的改变在多数情况下是非特异的， 出现的时间也较晚，易错过治疗的最佳 时期.某些疾病本身不呈现显著的表型改 变，用传统的检测方法易出现“假阴 性”.另外，传统诊断方法费时，精确度 低
※高效专一的基因转移方法
※基因转移后对组织、细胞无害
※在动物模型实验中具有安全、有效的治疗效果
※临床试验或应用前需向国家有关审批部门报批
4.基本步骤
选择治疗基因 选择运输治疗基因 的载体,将治疗基因 转入患者体内
治疗基因的表达
基因治疗实例1
实例2.
现实中的 问题 2000年9月,一位18岁的美国女孩 在接受腺病毒介导的基因治疗中 死于严重的过敏反应.这个悲剧 性的事件,使人们对以病毒为载体 的基因治疗的安全性提出了质疑
基因诊断特点
①以基因作为检查材料和探查目标， 属于“病因诊断”，针对性强 ②分子杂交技术选用特定基因序列作 为探针，具有很高的特异性 ③分子杂交和聚合酶链反应都具有放 大效应，诊断灵敏度很高 ④适用性强，诊断范围广，检测目标 可为内源基因也可为外源基因
应用实例
(一)遗传病的产前诊断
通过基因诊断,可检测胎儿性别,这对 与性染色体有关的遗传病的诊断是 十分必要的.对于高发性的遗传病,如 地中海贫血、镰刀状贫血、凝血因 子缺乏等基因诊断已在临床应用多 年,为优生优育作出了贡献
2.基本原理
基因治疗的基本原理来源于人类对自身遗 传机制的了解.基因作为机体内的遗传单位， 不仅可以决定我们的相貌、高矮，而且它 的异常变化将会不可避免的导致各种疾病. 基因治疗就是利用分子生物学技术，将正 常的基因直接或间接转入细胞中以修补错 误基因
基因诊断与基因治疗+癌基因抑癌基因与生长因子章节习题答案解析.doc
第二十一章基因诊断与基因治疗一、选择题A型题1、将致病基因的异常碱基进行纠正，而正常部分予以保留的方法为：A、基因矫正B、基因增补C基因置换D基因失活E基因诊断2、内源性基因结构突变发生在生殖细胞，可引起哪种疾病：A、肿瘤B、传染病C、遗传性疾病D、心血管疾病E、神经系统疾病3、常用的基因诊断的技术方法不包插：A、核酸分子杂交B、基因转移C、基因测序D、PCRE、PCR/RFLP4、基因结构突变不包括：A、点突变B、染色体易位C、基因重排D、基因表达异常E、基因扩增5、基因治疗的基本程序不包括：A、治疗基因的选择B、基因载体的选择C、靶细胞的选择D、基因转移E、基因测序6、非病毒介导的基因转移方法，下列哪一个是化学方法：A、DNA直接注射B、基因枪技术C、脂质体介导D、显微注射E、电穿孔7、在基因治疗中，目前一般多选用下列哪项作为基因载体：A、脂质体B、运载蛋白C、质粒D、病毒E、DEAE-«j聚糖8、基因治疗的临床实施屮，基因转移以下列哪项为主：A、病毒介导B、脂质体介导C、基因枪技术D、DNA直接注射E、显微注射9、某些病毒或细菌产生的酶可催化无毒性的药物前体转变成细胞毒性物质，从而导致细胞死亡，利用该酶基因进行的基因治疗属于：A、反义核酸技术B、自杀基因的应用C、基因敲除D、基因失活E、基因缺失10、基因诊断屮，最为确切的基因诊断方法为：A、RFLP 分析B、PCRC、PCR/SSCPD、PCR/ASOE、基因测序X型题1、内源基因变异主要有：A、外源基因入侵B、表达异常C、染色体易位D、基因扩增E、基因重排2、基因诊断屮，属于核酸分子杂交技术的是：A、限制性内切酶酶谱分析法B、RFLP分析C、ASO杂交法D、PCRE、基因测序3、基因诊断的应用有：A、遗传病的诊断B、肿瘤诊断C、检测传染性流行病D、器官移植配型E、法医4、符合下列哪些条件才能应用目前的基因治疗：A、已经在DNA水平上明确了该病为单基因缺陷疾病B、仅限于体细胞治疗C、治疗效果必须胜过对病人的危害D、表达水平无需严格调控即可使疾病得以改善, 且无副作用。
生物化学及分子生物学(人卫第九版)-26基因诊断与基因治疗
基因诊断与基因治疗
作者 : 李存保 单位 : 内蒙古医科大学
目录
第一节 基因诊断
第二节 基因治疗
重点难点
掌握
基因诊断与基因治疗的概念
熟悉
基因诊断技术、基因治疗的基本策略和基本程序
了解
基因诊断和基因治疗在医学中的应用
第1节
基因诊断
一、基因诊断的概念与特点
（1） 基因诊断的概念：
是指利用分子生物学技术和方法直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而 对疾病作出诊断的方法。
（2）直接体内疗法
临床上可用于基因诊断的样品有血液、组织块、羊水和绒毛、精液、毛发、唾液 和尿液等。
三、基因诊断的基本技术
（一）核酸分子杂交技术
1. Southern 印迹法 其可以区分正常和突变样品的基因型，并可获得基因缺失或插入片段大小等信息。 DNA印迹一般可以显示50 bp～20 kbp的DNA片段，片段大小的信息是该技术诊断基因缺 陷的重要依据。 2. Northern 印迹法 Northern印迹法（Northern blot）能够对组织或细胞的总RNA或mRNA进行定性 或定量分析，及基因表达分析。Northern印迹杂交对样品RNA纯度要求非常高，限制了 该技术在临床诊断中的应用。
是以改变人遗传物质为基础的生物医学治疗，即通过一定方式将人 正常基因或有治疗作用的DNA片段导入人体靶细胞以矫正或置换致病基因 的治疗方法。它针对的是疾病的根源，即异常的基因本身。
一、基因治疗的基本策略
（一）缺陷基因精确的原位修复
1.基因矫正 gene correction 致病基因的突变碱基进行纠正 2.基因置换 gene replacement 用正常基因通过重组原位替换致病基因 这两种方法属于对缺陷基因精确的原位修复，既不破坏整个基因组的结构，又可达到治 疗疾病的目的，是最为理想的治疗方法。
遗传性疾病的基因诊断与治疗
遗传性疾病的基因诊断与治疗遗传性疾病是由遗传变异和突变引起的疾病。
遗传性疾病具有遗传性和家族性等明显特征，其严重程度和预后往往与基因变异的性质和各种环境因素密切相关。
目前，随着技术的进步，遗传性疾病的基因诊断和治疗取得了重要的进展。
一、基因诊断基因诊断是通过分析患者的基因组DNA序列，确定引起疾病的基因序列变异，诊断遗传性疾病的方法。
现代基因诊断技术包括单基因遗传病的Sanger测序、高通量测序和SNP芯片检测等，这些技术都具有高速、高精度和高通量的特点。
在基因诊断中，还需要对不同种类的基因变异进行分析和分类。
这包括突变、多态性、缺失、插入、删除等多种变异类型。
与传统的基因诊断方法相比，现代基因诊断技术已经实现了高度的自动化和高通量的检测，具有更高的准确性和可靠性。
这种技术的应用使得遗传性疾病的诊断变得更加准确，同时也为疾病的治疗提供了更加精确的基础。
二、基因治疗随着基因疗法的发展，对于某些遗传性疾病，基因治疗已成为一种治疗方案。
基因疗法是一种介入人类基因表达和功能的治疗方法，通过改变基因表达和功能，调节细胞、组织和器官的生理和代谢状态，从而达到治疗疾病的目的。
基因治疗的实现需要通过基因转移技术将基因表达载体（如质粒、病毒）送往目标细胞，并在有效的浓度下表达基因。
基因治疗可分为替代性基因治疗、抑制性基因治疗、基因修饰治疗等多种类型。
目前，已有一些基因疗法被应用于一些遗传性疾病的治疗中，如乙酰胆碱酯酶缺乏症、家族性高胆固醇血症等。
基因治疗的方法还远不止于此，有很多新的治疗策略和方法在开发，如CRISPR-Cas9基因编辑技术，这种技术能够针对人类基因进行精确的编辑，有望为治疗遗传性疾病带来突破性变革。
三、基因诊断与基因治疗在生殖健康中的应用在生殖健康领域中，基因诊断和基因治疗在多个方面都有应用。
例如，包括人类遗传性疾病的筛查、胚胎筛查、计划生育、辅助生殖技术、基因诊断咨询等多个方面。
通过进行遗传咨询和基因检测，可以尽早诊断和预测诱发遗传疾病的危险因素，及时了解遗传疾病的状态，制定和实施有效的疾病预防措施以及生殖规划。
第二十一章 基因诊断与基因治疗
第二十一章基因诊断与基因治疗Gene Diagnosis and Gene Therapy一、授课章节及主要内容：第二十一章基因诊断与基因治疗二、授课对象：临床医学、预防、法医（五年制）、临床医学（七年制）三、授课学时本章教学共1学时。
讲授安排如下：基因诊断0.5学时，基因治疗0.5学时。
四、教学目的与要求通过本章学习，从整体上了解基因诊断和基因治疗的基本概念、基本理论。
了解内源基因变异和外源基因入侵是导致人类致病的两大类因素。
了解基因诊断和基因治疗常用技术方法的类型和基本知识，了解基因治疗的基本程序。
五、重点与难点重点：掌握基因诊断、基因治疗的概念和理论。
难点：①限制性内切酶酶谱分析法原理。
②DNA限制性片段长度多态性及其用于基因诊断的原理。
③PCR/单链构象多态性分析。
④基因灭活的几种方法。
⑤基因治疗的载体。
六、教学方法及授课大致安排教学方法：主要是自学形式，讲授基因诊断与基因治疗的概念。
授课大致安排：前言3分钟，基因诊断概念2分钟，诊断方法15分钟；基因治疗概念2分钟，方法15分钟，基因治疗的基本程序8分钟。
七、主要外文专业词汇gene diagnosis,gene therapy,RFLP,SSCP,gene chip,RNAi,triplex approach八、思考题1.什么是基因诊断？介绍基因诊断的常用技术方法。
2.简单介绍基因诊断的应用。
3.什么是基因治疗？简述基因治疗的方法。
4.基因灭活的主要方法有哪些？简述灭活的原理。
5.简述基因治疗的基本程序。
九、教材与教具:人民卫生出版社《生物化学》第六版十、授课提纲(或基本内容)概述Introduction基因诊断与基因治疗是分子生物学理论和技术应用到临床医学所产生的新的诊断和治疗疾病的方法。
这些新方法是现有诊断和治疗疾病手段的补充和扩展。
随着分子生物学理论和技术的新进展不断应用于临床医学研究，人们对疾病发生、发展的分子机理的认识也不断深入；从基因水平诊断疾病和治疗疾病已成为现代基础医学和临床医学研究的重要内容。
基因诊断与基因治疗习题及答案
第十八章基因诊断与基因治疗一、填空题1. 基因突变可导致____的改变，从而引起____。
2. 基因变异包括____和____。
3. 内源性基因变异包括____、____、____和____等。
4. 外源性基因变异是指____疾病。
5. 基因诊断常用技术方法有____、____、____和____。
6. 核酸分子杂交技术是依据____、____和____原理设计的技术方法。
7. 常用固相核酸杂交方法有____、____、____、____、____和____等。
8. PCR是____的缩写，译为____。
9. PCR过程由____、____和____步骤组成。
10. 生物芯片技术包括____、____、____、____、____和____。
11. 基因测序是将有关基因进行____，测出____，从中找出____所在。
12. 基因治疗在概念上分为____和____。
目前普遍接受的是____。
13. 基因治疗的总体策略主要有____、____、____、____、____、____和____等。
14. 基因治疗的基本程序包括____、____、____、和____。
15. 获得治疗性基因的方法包括____、____、____、和____。
16. 常被用于基因治疗的基因转移载体有____、____和____。
17. 基因治疗中的靶细胞也称为____细胞，靶细胞有____和____两大类。
18. 基因转移方法概括地讲有____、____和____等。
二、名词解释19. 基因诊断20. 基因治疗21. 核酸分子杂交22. Southern blotting23. 生物芯片24. 免疫基因治疗25. 基因矫正26. 基因置换27. 基因增补28. 基因失活29. 自杀基因30. 夹心杂交31. 引物32. Northern blotting33. PCR三、问答题34. 简述基因诊断的特点。
35. 简述分子杂交程序。
基因诊断与基因治疗PPT课件
• PCR可结合ASO，即PCR－ASO技术，即先将含有突变点 的基因有关片段进行体外扩增，然后再与ASO探针作点杂交， 这样大大简化了方法，节约了时间，而且只要极少量的基因 组DNA就可进行。
• 根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探 针、RNA探针、cDNA探针、cRNA探针及 寡核检测
• 核酸探针的常用酶促标记技术
–缺口平移 –DNA快速末端标记 –用T4多核苷酸酶标记DNA 5‘末端，随引物延伸 –聚合酶链反应
• 核酸探针的非放射性标记技术
1995年美国FDA批准Ad－P53肿瘤基因治疗等临床试验 的实施，标志着基因治疗已逐步进入一个正常的、目标明 确的理性化发展阶段。
• 18岁的格尔辛基（Jesse Gelsinger）因临床试验的某些 失误而于1999年9月17日死亡。格尔辛基是世界上首位由 基因治疗导致丧生的患者。他患先天性鸟氨酸甲酰氨基转 移酶（OTC）缺乏症（X连锁性遗传病）病症，在男性身 上较严重，往往引起新生男婴患者的死亡。
–光促生物素标记核酸 –酶促生物素标记核酸 –寡核苷酸的生物素末端标记 –酶标DNA –酶标寡核苷酸 –DNA半抗原标记
核酸分子杂交方法
• 核酸分子杂交可按作用环境大致分为固相杂 交和液相杂交两种类型
• 固相杂交是将参加反应的一条核酸链先固定 在固体支持物上，一条反应核酸链游离在溶 液中，固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙 膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。
胞培养。从1982年起采取妊娠8-12周的绒毛DNA 作产前诊断使产前基因诊断的时间提前。由于 PCR技术的应用，甚至在胚胎植入前(受精6d)也可 作产前诊断。
基因诊断与基因治疗
三、基因治疗
基因治疗中最核心的问题则是对细胞中的缺陷基因进行修正
或补充 注意: 由于外源遗传物质可能影响生物的群体遗传特征。因此， 目前的基因治疗主要限于生物的体细胞，而生殖细胞和受精 卵则禁止使用。
基因治疗类型
体外基因治疗
体内基因治疗
健康的（已经 过基因修饰） 和病变的基因 在细胞内并存
父
甲
乙
母
二、基因芯片技术
基因芯片概念:基因芯片，也叫
DNA芯片,是将大量特定序列的 DNA核酸分子（分子探针）固定在 经过处理后的尼龙膜,玻璃片,硅片 上 从而大量快速、平行高效地对碱 基序列进行测定和定量分析的一种 类似电脑的芯片。 原理:利用碱基的互补配对原则,分 子杂交原理 材料:分子探针,尼龙膜,玻璃片,硅片
基因治疗遗传病
1990年9月14日，安德森将经过改造的 含有健康基因的白血球输入因腺苷脱氨酶缺 乏造成先天性免疫功能不全，只能生活在无 菌的隔离帐里的4岁女孩的左臂静脉血管， 以后的10个月内她又接受了7次同样的治疗。 1991年1月，另一名患同样病的女孩也接受 了同样的治疗。两患儿经治疗后，免疫功能 日趋健全，走出了隔离帐，过上了正常人生 活，并进入普通小学上学。
基因治疗的发展
基因治疗3个阶段： 1980—1989年为准备期。在临床前研究和舆论 准备。 1990—1995年为狂热期。1990年9月第一例成 功，带来一片狂热。一些关键技术没有解决， 在临床应用中碰壁也是正常的。 1996年进入理性期。对临床试验进行评估，提 出关键问题进行研究，从狂热转入理性化的 正常轨道。
恶性肿瘤基因诊断过程
归纳： 从恶性肿瘤基因诊断了解基因诊断
的一般程序
１构建基因探针（已知该致病基因的核酸序列） ２获取待测组织单链ＤＮＡ（进行ＰＣＲ扩增，后 加热得到） ３将待测组织单链转到尼龙膜上（观察基因探针和它能 否进行杂交） 结果上：有杂交ＤＮＡ分子的说明待测组织中 有已知该致病基因的核酸序列
基因诊断和基因治疗
5´
3´
(CCT GTG G)
×
正常基因
5´
3´
突变基因
镰状红细胞贫病的限制性内切酶谱分析
目录
正常人 突变携带者 患者 镰状红细胞贫血病的限制性内切酶谱分析
目录
PCR-SSCP技术检测DNA突变
传染病的基因诊断
Gene Diagnosis of Infectious Diseases
一、病毒性疾病
SNP与RFLP和STR标记的主要不同之处在于，它 不再以DNA片段的长度变化作为检测手段，而直接 以序列变异作为标记。
三、人类疾病与基因密切相关
1、基因结构改变导致蛋白质的结构或数量发 生变化导致疾病
2、基因表达异常 3、病原生物基因入侵导致疾病 4、可遗传的基因组变异导致人类疾病易感性
包装。
反转录病毒载体的特点
1）反转录病毒包膜上糖蛋白，能够被许多哺 乳动物细胞膜上的特异性受体识别，从而使 反转录病毒携带的遗传物质高效地进入靶细 胞。
2)前病毒通过LTR高效整合至靶细胞基因组中， 有利于外源基因在靶细胞中的永久表达。
3) 病毒颗粒以出芽的方式分泌至辅助细胞培 养的上清液中，易于分离制备。
定义：将“自杀”基因导入宿主细胞中，这种基 因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒 性代谢物，诱导靶细胞产生“自杀”效应，从而 达到清除肿瘤细胞的目的。
应用：是恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。
自杀基因的作用机制
（五）基因免疫治疗
通过将抗癌免疫增强的细胞因子或 MHC基因导入肿瘤组织，以增强肿瘤微 环境中的抗癌免疫反应。
定义：指将特定的目的基因导入特定细胞，通过 定位重组，导入的正常基因，以置换基因组内原 有的缺陷基因。
基因诊断和基因治疗
技术挑战
检测灵敏度和特异性
提高基因诊断的灵敏度和特异性是关键技术挑战，以确保准确检 测出基因突变。
基因治疗载体
寻找安全、有效的基因治疗载体是另一个技术难题，以确保基因 能够准确传递至病变细胞。
基因编辑精度
提高基因编辑技术的精度，降低脱靶效应，是当前基因治疗领域 的重要挑战。
伦理挑战
01
02
03
人类基因编辑
02
03
技术创新驱动
政策支持
基因技术的不断创新和发展将进 一步推动基因诊断和基因治疗市 场的增长。
政府对基因诊断和基因治疗的政 策支持将有助于市场的快速发展 。
社会影响
提高疾病预防和治疗效果
基因诊断和基因治疗有助于更早发现遗传性疾病，提高预防和治 疗效果。
改变医疗模式
基因诊断和基因治疗将推动医疗模式从传统治疗向精准医疗转变。
体内基因治疗是将含有正常基 因的载体直接注射到患者体内 ，使载体感染病变细胞并导入 正常基因。
体外基因治疗则是将患者的病 变细胞取出，在体外进行基因 改造后再回输到患者体内。
基因治疗的应用
基因治疗在遗传性疾病、肿瘤 、感染性疾病等领域具有广泛
的应用前景。
在遗传性疾病方面，基因治疗 可以通过纠正缺陷基因的表达
基因诊断的原理
基因诊断基于遗传学和分子生物学原 理，通过检测基因序列的变异来分析 个体的遗传特征。
基因序列的变异包括点突变、插入、 缺失、重复等，这些变异可能导致蛋 白质表达异常或功能丧失，进而引发 疾病。
基因诊断的方法
01
基因诊断的方法包括基因测序、单基因遗传病检测、染色体异 常检测等。
02
基因测序是最常用的方法，它能够检测基因组中所有基因的序
查锡良《生物化学与分子生物学》(第8版)笔记和考研真题详解
第五章维生素与无机盐
5.1复习笔记 5.2考研真题详解
第六章糖代谢 第七章脂质代谢
第八章生物氧化 第九章氨基酸代谢
第十一章非营养物 质代谢
第十章核苷酸代谢
第十二章物质代谢 的整合与调节
第六章糖代谢
6.1复习笔记 6.2考研真题详解
第七章脂质代谢
7.1复习笔记 7.2考研真题详解
第八章生物氧化
8.1复习笔记 8.2考研真题详解
第九章氨基酸代谢
9.1复习笔记 9.2考研真题详解
第十章核苷酸代谢
10.1复习笔记 10.2考研真题详解
第十一章非营养物质代谢
11.1复习笔记 11.2考研真题详解
第十二章物质代谢的整合与调节
12.1复习笔记 12.2考研真题详解
第十四章 DNA的生 物合成
查锡良《生物化学与分子生物 学》（第8版）笔记和考研真题
详解
读书笔记模板
01 思维导图
03 目录分析 05 读书笔记
目录
02 内容摘要 04 作者介绍 06 精彩摘录
思维导图
本书关键字分析思维导图
知识
技术
分子生物 学
精华
分子
复习
代谢
笔记
真题
教材 复习
生物
第版
笔记
结构
真题
功能
基因
物质
内容摘要
内容摘要
第十三章真核基因 与基因组
第十五章 DNA损伤 与修复
第十六章 RNA的生 物合成
第十七章蛋白质的生 物合成
第十八章基因表达调 控
第十九章细胞信号转 导的分子机制
第十三章真核基因与基因组
人教版高中生物选修2《1.2基因诊断与基因治疗》 课件(共28张PPT)
4、引发的社会和伦理问题
基因疗法目前着重于纠正基因缺陷和 治疗危害生命的疾病，有规章制度用于管 理这类研究。但未来的几十年，当基因治 疗技术变得简单和容易实现时，社会将需 要处理更加复杂的问题。
基因治疗可能从遗传物质上改变人 的精子或卵子，从而永远改变了人的遗 传基因。另外一个可能是基因干涉会提 高人的能力，例如提高记忆力和智力。
5、基因诊断技术的应用
• （1）遗传病的产前诊断。 • Ａ通过基因诊断，可检测胎儿性别。 • Ｂ可进行高发性的遗传病诊断，为优生优育作出 了贡献，如地中海贫血、镰刀状贫血、凝血因子 缺乏等基因诊断已在临床应用多年。 • （2）致病病原体的检测。 • 如病毒（乙肝）、细菌（结核）、原虫（梅毒螺 旋体）等病原体的检测。 • （3）癌基因的检测和诊断。 • 如白血病、肺癌、神经胶质瘤等疾病
3、基因治疗对肿瘤的治疗方案
杀死肿瘤 细胞
{ 抑制癌基因转录 的DNA
片断导入癌细胞
抑制癌细胞增生基因导 入癌细胞
提高免疫力--- 提高机体免疫力基因导 入免疫系统
•与传统药物治疗方 法相比，基因治疗 具有哪些优点？
•基因治疗是一种根本性的治疗，它可以 通过取代突变的致病基因，也可以通过改 变病变细胞的基因结构，或者通过导入能 增强人体内免疫能力的基因等方式，来达 到治疗的目的。与传统的药物治疗相比， 以上这些措施，都是从根本上对疾病进行 控制。
1、抗生素的概念
2、青霉素、头孢菌素的作用机制
3、合理使用抗生素的措施
基因
蛋白质
性状 临床 诊断
基因 诊断
生化 诊断
第 二 节
基 因 诊 断 与 基 因 治 疗
• 1.说出基因诊断的基本含义和基本原 理。 • 2、描述基因诊断在恶性肿瘤早期诊 断中的突出作用。 • 3.简述基因芯片的基本含义及在生物 医学方面的应用。 • 4.说出基因治疗的基本含义、基本步 骤、优点及其前景。
高二生物基因诊断和基因治疗1：基因治疗和基因诊断的区别
高二生物基因诊断和基因治疗1:基因治疗和基因诊断的区别第1节基因诊断和基因治疗【教学目标】知识与能力方面：1.简述基因诊断的基本含义和基本原理。
2.描述基因诊断在恶性肿瘤早期诊断中的重要作用。
3.举例说明基因治疗的基本含义和基本原理、优点及前景。
4.进一步体验科学的发展促进人类健康方面的重要作用。
过程与方法方面：情感态度、价值观方面：【教学重点】1.简述基因诊断的基本含义和基本原理。
2.描述基因诊断在恶性肿瘤早期诊断中的重要作用。
3.举例说明基因治疗的基本含义和基本原理、优点及前景。
【教学难点】基因诊断的原理，基因芯片的应用。
【教学方法】讲授法和学生自主合作学习相结合【教学课时】2课时。
【教学过程】教师：如何利用基因诊断来确认SARS病毒？哪些疾病可以基因诊断来检测？（学生活动）学生阅读教材解答问题。
基因诊断适应检测疾病：1.由入侵病原微生物基因的表达引起的疾病。
2.自身遗传物质变异引起的。
教师：什么是基因诊断？基因诊断的原理？基因诊断的过程是？DNA分子探针，DNA分子杂交原理，学生分组探究学习结束后，进行交流。
图示回答，并黑板展示：1．基因诊断（1）原理DNA分子杂交原理（2）过程（3）基因诊断现状基因诊断具有高度的敏感性和特异性，且简便、快捷，因此在病毒、细菌、支原体、衣原体、立克次体及寄生虫感染诊断中得到了广泛应用。
基因诊断本身是在分子遗传学的基础上发展起来的，在遗传病的诊断方面成绩最为突出，也最有发展前途，对许多已明确致病基因及其突变类型的遗传病诊断效果良好。
即使不明确致病基因，也可利用遗传标志进行连锁分析来诊断某些遗传病。
肿瘤是一类多基因病，其发展过程复杂，临床表现多样，涉及到多个基因的变化并与多种因素有关，因而相对于感染性疾病及单基因遗传病来说，肿瘤的基因诊断难度更大得多。
但肿瘤的发生和发展从根本上离不开基因的变化，所以基因诊断在肿瘤疾病中也会有广阔的前景。
专家认为，基因诊断至少应有三大原则：第一，基因诊断首先要有严格的实验室标准，保证基因不被污染；第二，诊断的敏感性和准确性需要设立标准线；第三，基因诊断必须有严格的伦理学要求，其中包括隐私保密、知情同意等等（3）基因芯片通过微技术手段将大量特定序列的DNA片段（探针）有序地固定在尼龙膜、玻片或硅片上，从而能大量，快速、平行地对DNA分子的碱基序列进行测定和定量分析。
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A→T
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正常基因
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突变基因
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镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
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正常人
突变携带着 患者
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目录
2、DNA-RFLP分析法
中性突变是指在人基因组中，平均 每200对碱基可发生一对变异的现象。
DNA多态性是指中性突变导致个 体间核苷酸序列的差异。
是指PCR产物变性后，经聚丙 烯酰胺凝胶电泳，正常基因和变异 基因的迁移位置不同，借此可分析 确定致病基因的存在。
目录
﹣
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正常人
纯合突变 杂合突变
Leber 遗传性神经病患者 PCR/SSCP分析 （线粒体DNA第11778位G→A所致）
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（三）、基因测序(gene sequencing)
即测定某一基因的碱基序列。
目录
（一）、核酸分子杂交 (molecular hybridization)技术
核酸分子杂交可用以检测 样本中是否存在与探针序列互 补的同源核酸序列。
核酸探针 是一类具有放射 性标记或化学标记的并与目的 目的DNA或RNA分子序列互补 的寡核苷酸片段。
目录
探针是能够同某种待研究的核 酸序列或蛋白多肽链特异结合的任 何分子，经标记之后可用来检测目 的DNA/RNA 或蛋白质分子。
限制性片段长度多态性是指DNA多 态性若发生在限制性内切酶识别位点 上，酶切水解该DNA片段就会产生长度 不同的片段。
目录
RFLP分析法
目录
3、ASO杂交法
根据已知基因突变位点的核苷 酸序列，人工合成相应于正常和突 变基因碱基序列的两种寡核苷酸探 针，用它们分别与受检者DNA进行 分子杂交来检测是否存在等位基因 突变。
目录
目录
基因芯片的应用
1、在诊断中的应用 核酸序列分析、基因表达分析、寻找
新基因、突变基因和基因多态性检测等 2、在药学研究中的应用
药物筛选、药物作用机制研究、耐药 菌株、药敏检测、毒理学研究、环境化 学毒物的筛int)
在人基因组DNA中有高度可变的“小卫星” 区域，采用“小卫星”基因探针，在同一限 制酶切产物的DNA杂交图谱上，同一个体不 同组织来源的DNA的谱带完全一致，而不同 个体之间（同卵双生除外）谱带都不相同， 如同人的指纹具有高度个体特异性一样，因 此这种杂交图谱被称为DNA指纹或遗传指纹 （genetic fingerprint）。
tandem repeat）
目录
单链构象多态性 (single strand conformation polymorphism, SSCP)
SSCP是指相同长度的单链DNA因其碱 基序列不同，甚至单个碱基不同，都可能 形成不同的空间构象，从而在中性聚丙烯 酰胺凝胶电泳时泳动速率不同的现象。
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PCR-SSCP分析
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1、基本工作原理
Template DNA 5
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Cycle 1
Primer 1 5 Primer 2
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Cycle 2
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Cycle 3
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25～30 次循环后，模板DNA的含量 可以扩大100万倍以上。
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2、常用的PCR方法：
实验流程：提取DNA→(限制酶 切)→凝胶电泳→膜转移→杂交→放 射自显影→分析
目录
建立在核酸杂交技术基础上的常用基因诊断方法
1、限制性内切酶(restriction endonuclease) 酶谱分析法
2、DNA限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism, RFLP)分 析法
和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否 正常，从而对疾病作出诊断的方法。
（二）、分类 DNA诊断—以DNA为检测对象的诊断方法。 RNA诊断—以mRNA为检测对象的诊断方法。
目录
（三）、特点
针对性强 特异性高 灵敏度高 适用性强，诊断范围广
目录
二、 基因诊断常用技术方法
（一）、核酸分子杂交技术 （二）、聚合酶链反应 （三）、基因测序 （四）、基因芯片 （五）、DNA指纹
3、等位基因特异寡核苷酸 (allele specific oligonucleotide, ASO)探针杂交法
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1、限制性内切酶酶谱分析法
是利用限制性内切酶和特异性 DNA探针来检测是否存在基因变异 的一种方法。
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镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析
MstⅡ酶切位点(CCTNAGG)
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ASO杂交法
﹣
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探针：M N M N M N M N 正常基因 纯合突变 杂合突变 基因缺陷 （新的突变类型？）
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（二）、聚合酶链反应
(polymerase chain reaction, PCR)
是利用特异的引物，特异地扩 增目的DNA的方法。
实验流程：提取DNA→PCR→ 凝胶电泳→显色→分析
实验流程：提取DNA→分离出有关基因 →测序→分析诊断 基因测序的方法： 化学裂解法 DNA链末端合成终止法 DNA自动测序
目录
（四）、基因芯片（gene chip)
基因芯片，又称DNA芯片、DNA阵 列、寡核苷酸微芯片（DNA chip、DNA arrays、oligonucleotide microchip）—是指将许多特定的寡核苷酸片段 或基因片段作为探针，有规律地排列固定 于支持物上，然后与待测的标记样品的基 因按碱基配对原理进行杂交，再通过激光 聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描，并 配以计算机系统对每一探针上的荧光信号 作出比较和检测，从而迅速得出定性和定 量的结果。
常规PCR、巢式PCR、多重 PCR、多种PCR、不对称PCR、反 转录PCR、定量反转录PCR、 mRNA差异显示PCR、原位PCR、 实时PCR等等。
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3、在PCR技术基础上的常用基因诊断方法
PCR-SSCP法* PCR-ASO法 PCR-RFLP法 PCR-限制酶谱法 PCR-STR（短串联重复序列，short
第21章基因诊断与基因治疗第二十一章
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基因(gene)
基因是为生物活性产物编码的 DNA功能片断，这些产物主要是蛋 白质或各种RNA。
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基因变异致病类型
内源基因的变异 基因结构突变 基因表达异常
外源基因的入侵
目录
第一节
基因诊断
Gene Diagnosis
目录
一、基因诊断的概念和特点
（一）、定义 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术