小鼠肺泡灌洗

把小鼠喉咙处皮肤剪开，用镊子把气管周围的组织分离开，气管暴露出来。注射器7号针头，针尖剪掉，再磨平，把动物仰位固定，针头从嘴巴里进去，伸到气管里。和平时灌胃一样，只是现在伸到气管。在甲状腺（气管显得稍宽处）下面，针头就伸到这里，大约甲状腺过3毫米处。然后拿一根线，从气管下穿过，把针头和气管一起结扎了，其实就是把针头固定在里面，不让它跑出来。打结时用点力，手拨动针头时明显感觉针头动不了就可以了。然后注射器吸取液体推进气管，第一次一般吸不完全，没关系，第二次的液体推进去后就能吸出来很多了。我基本能全部吸出来的。希望能帮上忙。

标题：小鼠肺泡灌洗标准操作规程

关键词：肺泡灌洗；细胞分类计数；细胞因子

目的：检查小鼠各种病理生理状态(特别是肺部疾病)下，肺部出现的各种病理改变。

例：哮喘模型中检测嗜酸细胞的分类数有否提高，灌洗液中各种细胞因子，如IL-4,IL-5,IL-10,IFN-r等水平。主体内容（操作步骤）：实验的准备

实验的器材、仪器、药品：4℃遇冷的单纯PBS和4℃遇冷的含1%BSA的PBS；手术器械：眼科剪，眼科镊，穿刺针或4号半头皮针；血细胞计数板；低温离心机

实验操作规程：灌洗分单侧和双侧。单侧一般为颈部和胸部解剖，气管和一侧肺叶结扎。再用穿刺针插入气管上端，0.3mlPBS反复冲洗,一般为3遍，每遍冲洗次数根据需要决定，一般3-5次即可。双侧灌洗则只需要进行颈部解剖，暴露气管进行插管。PBS灌洗量增高到0.8ml.灌洗次数同上。结果判定：1.回收的灌洗液4℃，1500r离心10分钟，回收上清置于-20℃等待进行细胞因子检测；

2.用1ml含有1%BSA的PBS重悬细胞沉淀，取10ul重悬液进行细胞计数。余液再次4℃离心，参数同上；

3.离心后去上清，不需太彻底，可根据第二步细胞计数所得结果和需要涂片张数决定需要残留多少上清重悬细胞沉淀。一般如果细胞总数有10*6次方/ml的话，用80-100ul重悬可以涂三张片，这样玻片上细胞密度比较适中。

4.涂片后待玻片自然晾干，然后置于10%中性甲醛溶液中固定10分钟以上，随后就可以进行常规HE染色。5。染色后就可以进行细胞分类计数，计算300个以上细胞，结果就比较可靠了。

使用静脉留置针，颈部解剖显露气管，插入留置针，用细线打结固定，拔出针芯。链接注射器，即可开始灌洗！本实验室是这么做的，很方便，效果很好