小鼠肺泡灌洗
肺泡灌洗液细胞计数
肺泡灌洗液细胞计数1、开胸，游离出气管，，靠喉部结扎剪断气管。
2、向下贴着胸后壁分离出整个心肺。
3、留置针插入气管，350umL冰冻生理盐水灌洗，共3次，每次反复灌吸3个回合。
4、灌洗液1200g，4℃离心10分钟。
5、取上清保存-20℃冰箱用于蛋白检测，重悬浮下部细胞用于细胞计数。
1.小鼠肺泡灌洗时总量为350uL×3次，估计收集的好的话，有1mL回收。
立即放入ice中。
2.离心，弃上清，在沉淀中加入200uL 红细胞裂解液（Red Blood Cell Lysis Buffer），1分钟后加入1mL NS或者PBS，离心，3，弃上清，如果沉淀的红色还是很厉害，可以再做一次第二步。
4，沉淀用NS或者PBS 100mL 重悬，取10mL在计数板计数。
整个过程应该都在on ice的状态下进行，以防细胞死亡。
- Centrifuge 2000rpm 4°C 5min BAL- preparing CASY: empty measurement: if count >50 units, cleaning program, repeat empty measurement- fill tube with 10ml CASY fluid- SN of BAL to new Eppendorf tube, put in freezer- Pellet resuspend with 200µl cold PBS, shake it —> 10µl in CASY tube with 10ml CASY fluid - measure tube with CASY machine- after measurement, hit CLEAN, put a CASY tube under the probe, CYSA should never stay without tube covering the probe。
小鼠支气管肺泡灌洗术的改进
小鼠支气管肺泡灌洗术的改进姚茹;张锐虎;王璐;陈朝阳【摘要】目的改进制备小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)的方法.方法动物分为3组,第1组和第2组采用传统方法:使用静脉留置针对小鼠全肺进行支气管肺泡灌洗术;第3组采用改进方法:使用自制注射器对小鼠全肺进行支气管肺泡灌洗术.每只动物灌洗3次,每次0.5 mL,并计时.支气管肺泡灌洗液离心,分离上清液准确测量其体积.结果灌洗液收集时间比较,第1组和第2组每只小鼠用时约10 min,第3组每只小鼠用时约4 min,差异有显著性(P< 0.05);小鼠支气管肺泡灌洗液体积测量比较,第3组分别多于第1组和第2组,差异有显著性(P< 0.05).结论改进后的方法可简便、经济、高效地收集支气管肺泡灌洗液,特别适合初学研究者使用.%Objective To improve the preparation of bronchoalveolar lavage fluid(BALF)in mice. Methods BALB/c mice were divided into 3 groups. In the first and second groups, the whole lung lavage was performed with the traditional method,using a vein detained needle and lavaged with sterile saline. The mice in the third group got whole lung lavage by the improved method, namely, using a self-made plastic rigid pipe connected with a syringe. Each mouse was lavaged for 3 times,with 0.5 mL of sterile saline for each time, and the time consumption was recorded. The collected BALF was centrifuged,the supernatant was separated and its volume was measured accurately. Results The time spent for BALF collection in each mouse in the third group was(4 ± 0.62)min, significantly shorter than that of(10 ± 0.75) and(12 ± 0.88)min,respectively in the first and second groups(P< 0.05). The volume of BALF collected in each mouse of the third g roup was(1.34 ±0.16)mL,significantly higher than that of(1.03 ± 0.25)and(1.13 ± 0.22)mL, respectively in the first and second groups(P< 0.05). Conclusions The improved method of BALF collection described in our study issimple,economical and efficient,and is useful for beginners especially.【期刊名称】《中国比较医学杂志》【年(卷),期】2017(027)011【总页数】4页(P80-83)【关键词】小鼠;支气管肺泡灌洗液;技术改进【作者】姚茹;张锐虎;王璐;陈朝阳【作者单位】山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西省实验动物与人类疾病动物模型重点实验室,太原 030001;山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西省实验动物与人类疾病动物模型重点实验室,太原 030001;山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西省实验动物与人类疾病动物模型重点实验室,太原030001;山西医科大学实验动物中心,太原 030001;山西省实验动物与人类疾病动物模型重点实验室,太原 030001【正文语种】中文【中图分类】R-33小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid，BALF)主要用于细胞总数和分类计数、T淋巴细胞亚群、可溶成分、尘粒和矿物质以及感染性病原体等方面的检测，进一步为有关疾病的特征、诊断及预后等提供依据，为收集足够的灌洗液，医学生物研究者采用很多方法，但仍没有得到支气管灌洗的统一标准方法[1-3]。
纳米铁材料对小鼠肺灌洗液中白细胞和羟脯氨酸的影响
Ｖｏ ． Ｎ＿ １４１ Ｏ ３
Ｊ ｎ ２ ０ ｕ ．０８
纳 米 毒 理 学 研 究
文 章 编 号 ：０ ６ — ９ ２ ２ ０ ） ３０ ０ — ４ ４ ５７ ４ （０ ８ ０ —０ １０
纳 米 铁 材 料 对 小 鼠肺 灌 洗 液 中 白细 胞 和 羟 脯 氨 酸 的影 响
丁 ， 峰 宋文华 ， 白 茹。 艳。 ， 刘 ， 张文佳。 张金洋 ， 高敏苓 ，
１ ４ Ｂ Ｆ收集 及肺 脏器 系数 测定 ． ＡＬ
在 第 １ ０ｄ采 用 颈 椎脱 臼 法处 死 小 鼠 ， 重 ， ３ 称 用 ７℃无 菌 生理 盐 水 进 行 肺 泡 灌 洗 ６次 ， 一 次 ０ ８ 第 ． ｍＬ， 第二 、 三次 ０ ７ｍＬ， 三次 为 ０ ６ｍＬ， ． 后 ． 收集 灌洗 液 ， ３５ ０ｒ・ ｉ－离 心 １ ｉ ， 离上 清液 待测 ， 以 ０ ｒ ｎ １ ａ ０ｒ ｎ 分 ａ 底 层 细胞 用 Ｈａ ｋＳ液 重悬 用 于 细胞计 数 ． 开胸 腔取 出肺 脏 ， 除无 关 组 织 ， ｎ’ 打 剔 用无 菌 生 理盐 水 冲 洗肺 脏
维普资讯
第 ４ 卷 第 ３期 １ ２０ ０ ８年 ６月
南 开 大 学 学 报（ 自然 科 学 版 ） Ａ ｔ ｃ ｎｉｒ ｍ Ｎａ ｕ ａｉ ｍ Ｕ ｉｅｓ ａｉ Ｎａ ｋ ｉ ｓ ｃａＳ ｉ ｔ ｕ ｔ ｒ ｌ ｎ ｖ ｒ ｔ ｔ ｎ ａ ｅ ｉ ｅ ａ ｕ ｉ ｓ ｎ ｓ
定实验 基 础．
１ 材料 与方 法
１ １ 实 验 动 物 ．
健康 雄性 ＫＭ 小 鼠 ， 重 １ ￣２ ， 体 ８ ２ｇ 由河北 省 实验 动 物 中心 提供 ， 产 许 可证 号 ：１ ０ ０ 用 小 鼠全 价 生 ６０ ２． 颗粒 饲料 喂养 ， 自由进食 与 饮水 ．
小鼠哮喘实验报告
一、实验目的本研究旨在建立一种以粉尘螨提取液为致敏原的小鼠哮喘模型，并对其进行评估，以期为哮喘的病理生理研究及药物开发提供可靠的动物模型。
二、实验材料与方法1. 实验动物选用健康、体重约为20g的C57BL/6小鼠40只，随机分为哮喘组（n=20）和对照组（n=20）。
2. 实验试剂与仪器（1）试剂：粉尘螨提取液、生理盐水、豚鼠血清、乙二胺四乙酸（EDTA）、淋巴细胞分离液、RPMI-1640培养基、胎牛血清、ELISA试剂盒、荧光标记的IgE抗体、免疫组化试剂盒等。
（2）仪器：生物安全柜、超净工作台、酶标仪、倒置显微镜、组织切片机、石蜡切片机、病理切片扫描仪、肺功能检测仪等。
3. 实验方法（1）哮喘模型的建立哮喘组小鼠于实验第0、7、14天分别以粉尘螨提取液腹腔致敏，共3次，每次剂量为50μl。
对照组小鼠以同等剂量的生理盐水代替。
于实验第28天起，哮喘组小鼠以粉尘螨提取液滴鼻激发，连续7天，每天激发剂量为50μl。
对照组小鼠以同等剂量的生理盐水代替。
（2）哮喘模型评估1）肺泡灌洗液细胞计数和分类在最后一次滴鼻激发24小时后，对小鼠进行肺泡灌洗。
收集肺泡灌洗液，进行细胞计数和分类，包括淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞等。
2）肺组织病理学检测取肺组织，进行HE染色，观察肺组织炎症细胞浸润、杯状细胞增生、黏液过度分泌及气道重塑等情况。
3）血清总IgE和rDer f 2-sIgE含量检测采用ELISA试剂盒检测哮喘组小鼠血清总IgE和rDer f 2-sIgE含量。
4）支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4和IFN-含量检测采用ELISA试剂盒检测哮喘组小鼠BALF中IL-4和IFN-含量。
三、实验结果1. 肺泡灌洗液细胞计数和分类哮喘组小鼠肺泡灌洗液中细胞总数和嗜酸性粒细胞较正常组极显著增加（P<0.01）。
2. 肺组织病理学检测哮喘组小鼠肺组织可见明显的炎性细胞浸润，包括淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞。
小鼠廓清指数实验报告
实验目的：本研究旨在通过测定小鼠的廓清指数，评估其肺泡巨噬细胞的吞噬功能，为进一步研究小鼠的免疫防御机制提供实验依据。
实验材料：1. 实验动物：昆明小鼠，体重20-25g，雌雄各半。
2. 试剂与仪器：- 肺泡灌洗液：生理盐水100ml，加入1%戊二醛0.5ml，0.1%台盼蓝0.5ml。
- 荧光素标记的炭粒（Fluorescein-labeled Carbon Particles，FLCP）。
- 移液器、计数板、显微镜、离心机等。
实验方法：1. 将小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。
2. 实验组：将小鼠置于超净工作台内，用肺泡灌洗液进行灌洗，收集肺泡巨噬细胞。
3. 对照组：不进行灌洗，仅收集肺泡巨噬细胞。
4. 将收集到的肺泡巨噬细胞悬液用生理盐水洗涤3次，离心沉淀。
5. 取出沉淀，用荧光素标记的炭粒进行染色，显微镜下观察计数。
6. 计算小鼠廓清指数。
实验结果：实验组小鼠的肺泡巨噬细胞吞噬炭粒的数量显著高于对照组（P<0.05），表明实验组小鼠的肺泡巨噬细胞吞噬功能较强。
实验分析：小鼠廓清指数是评估肺泡巨噬细胞吞噬功能的重要指标。
本实验结果表明，实验组小鼠的肺泡巨噬细胞吞噬功能较强，可能与以下因素有关：1. 实验组小鼠在灌洗过程中，肺泡巨噬细胞与荧光素标记的炭粒接触机会增多，导致其吞噬功能增强。
2. 实验组小鼠在灌洗过程中，肺泡巨噬细胞可能受到一定程度的刺激，使其吞噬功能得到激活。
实验结论：本实验通过测定小鼠廓清指数，证实了肺泡巨噬细胞在免疫防御中的重要作用。
实验结果表明，小鼠的肺泡巨噬细胞吞噬功能较强，为进一步研究小鼠的免疫防御机制提供了实验依据。
实验建议：1. 在实验过程中，注意操作规范，避免污染。
2. 增加实验动物数量，提高实验结果的可靠性。
3. 优化实验条件，如调整灌洗液的浓度、温度等，以提高实验结果的准确性。
参考文献：[1] 张丽华，李娜，王丽华. 肺泡巨噬细胞吞噬功能检测方法的研究进展[J]. 中国免疫学杂志，2012，28（5）：345-348.[2] 陈思，张丽华，李娜，等. 肺泡巨噬细胞在肺部感染中的作用及机制研究[J]. 中国免疫学杂志，2013，29（4）：243-247.。
大、小鼠支气管肺泡灌洗术的研究进展
２０１７年１２月第２７卷㊀第１２期中国比较医学杂志ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥＭＥＤＩＣＩＮＥＤｅｃｅｍｂｅｒ，２０１７Ｖｏｌ．２７㊀Ｎｏ．１２［基金项目］贵州省科技计划（黔科合外Ｇ字［２０１５］７００１号）；中央引导地方科技科技发展专项（黔科中引地［２０１６］４００１号）；环境化学与生态毒理学国家重点实验室开放基金（ＫＦ２０１６－２１）；遗传资源与进化国家重点实验室开放课题（ＧＲＥＫＦ１７－１５）㊂［作者简介］龙隆（１９９１－）男，硕士研究生，专业：公共卫生－环境医学与卫生监督㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：４９７１９２９７９＠ｑｑ．ｃｏｍ［通讯作者］谭红（１９５９－）女，研究员，研究方向：食品安全㊁环境监测㊁新化学物质毒理测试研究㊂Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｔａｎ⁃ｈｏｎｇ＠ｔｏｍ．ｃｏｍ研究报告大㊁小鼠支气管肺泡灌洗术的研究进展龙㊀隆１，２，赵显莉２，谭㊀红２∗，张爱华１，杨鸿波２，何锦林２（１．贵州医科大学公共卫生学院，贵阳㊀５５００２５；２．贵州省分析测试研究院，贵阳㊀５５０００２）㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀支气管肺泡灌洗术是研究呼吸系统及其病变的一种重要的动物实验技术，它可以获得呼吸道及肺部深处多种生化因子㊁炎症介质和免疫细胞等，为动物实验研究提供重要的评价指标和参考依据，是探讨呼吸系统性疾病的一种有效可靠的方法㊂目前应用于人的支气管肺泡灌洗术已经逐步标准化并在临床广泛开展，但没有一套针对实验动物大小鼠的支气管肺泡灌洗操作的标准㊂支气管肺泡灌洗液的检测结果受诸多因素共同影响，如灌洗液㊁灌注压力㊁灌洗量和回收量以及灌洗液在肺部停留时间等，成功而高效获取灌洗标本是研究和评价呼吸系统性疾病的关键所在㊂本文总结了目前国内外研究人员常用的灌洗操作方法，为今后进一步开展相关的实验研究提供参考㊂ʌ关键词ɔ㊀支气管肺泡灌洗术；动物实验；呼吸系统ʌ中图分类号ɔＲ－３３㊀㊀ʌ文献标识码ɔＡ㊀㊀ʌ文章编号ɔ１６７１⁃７８５６（２０１７）１２⁃０１１５⁃０５ｄｏｉ：１０ ３９６９．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－７８５６ ２０１７ １２ ０２０ＲｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｉｎｒａｔｓａｎｄｍｉｃｅＬＯＮＧＬｏｎｇ１，２，ＺＨＡＯＸｉａｎ⁃ｌｉ２，ＴＡＮＨｏｎｇ２∗，ＺＨＡＮＧＡｉ⁃ｈｕａ１，ＹＡＮＧＨｏｎｇ⁃ｂｏ２，ＨＥＪｉｎ⁃ｌｉｎ２（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈｏｆＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５００２５，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｕｉｚｈｏｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｅｓｔｉｎｇａｎｄＡｎａｌｙｓｉｓ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００２）㊀㊀ʌＡｂｓｔｒａｃｔɔ㊀Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔａｎｉｍａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｓｔｅｍａｎｄｉｔｓｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓ．Ｉｔｃａｎａｃｑｕｉｒｅａｖａｒｉｅｔｙｏｆｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｆａｃｔｏｒｓ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｍｅｄｉａｔｏｒｓａｎｄｉｍｍｕｎｅｃｅｌｌｓｆｒｏｍｔｈｅｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔａｎｄｌｕｎｇｓ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｅｖａｌｕａｔｉｏｎｉｎｄｅｘａｎｄｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒａｎｉｍａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｉｓａｎｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｉａｇｎｏｓｉｓｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｉｔｈａｓｂｅｅｎｇｒａｄｕａｌｌｙｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄａｎｄｗｉｄｅｌｙｕｓｅｄｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｐｒａｃｔｉｃｅａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅｒｅｉｓｎｏｓｅｔｏｆｓｔａｎｄａｒｄｆｏｒｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｉｎｒａｔｓａｎｄｍｉｃｅ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄａｒｅａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｍａｎｙｆａｃｔｏｒｓ，ｓｕｃｈａｓｔｈｅｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ，ｓｕｃｔｉｏｎｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｔｈｅａｍｏｕｎｔｏｆｌａｖａｇｅａｎｄｒｅｃｏｖｅｒｙ，ａｎｄｔｈｅｒｅｔｅｎｔｉｏｎｔｉｍｅｏｆｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄｉｎｔｈｅｌｕｎｇｓ．Ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔａｃｑｕｉｓｉｔｉｏｎｏｆｌａｖａｇｅｓｐｅｃｉｍｅｎｓｉｓｔｈｅｋｅｙｔｏｔｈｅｓｔｕｄｙａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｔｈｉｓｐａｐｅｒｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｃｕｒｒｅｎｔｌａｖａｇｅｍｅｔｈｏｄｓｃｏｍｍｏｎｌｙｕｓｅｄｂｙｄｏｍｅｓｔｉｃａｎｄｆｏｒｅｉｇｎｒｅｓｅａｒｃｈｅｒｓ，ａｎｄｐｒｏｖｉｄｅｓａｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｆｕｒｔｈｅｒｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｔｈｅｔｈｉｓｆｉｅｌｄ．ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀ＢｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒＬａｖａｇｅ；Ａｎｉｍａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ；Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｓｙｓｔｅｍ㊀㊀支气管肺泡灌洗术（ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅ，ＢＡＬ）是研究人和动物呼吸系统性疾病的一种十分重要的实验技术，该技术方法在临床试验和动物实验研究中都得到了广泛应用与研究［１－３］，但在实验动物相关研究中并未得到应有的重视㊂如今有关大小鼠的实验与日俱增，在实验研究中的地位越发重要，而环境空气污染愈发严重，对人健康危害极大［４］，了解动物呼吸系统的病变，并将其研究成果应用于我们人类显得格外重要，尤其是在吸入毒性试验中，同时支气管肺泡灌洗液（ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ，ＢＡＬＦ）也广泛用于研究吸入纳米颗粒物㊁大气颗粒物以及工人们在某些特定的职业场所吸入空气中的悬浮颗粒物后所引起的肺损伤，例如实验动物染毒后ＢＡＬＦ中的肺泡巨噬细胞㊁中性粒细胞的数量㊁磷脂和总蛋白的浓度的显著性改变，是肺部炎症损伤程度的重要生物标志物［５］，ＢＡＬＦ的检测结果显得十分关键［６－８］㊂但目前国内外学者对于实验动物大小鼠支气管肺泡的灌洗并没有形成一种准确㊁可靠而规范的一套操作方法，研究人员的肺泡灌洗方法千差万别，导致相关实验研究之间缺乏可比性，ＢＡＬＦ的检测结果受到诸多因素影响，不同的灌洗操作方法对ＢＡＬＦ意义重大，对灌洗液的回收率和灌洗液中细胞及细胞因子活性的影响都不容忽视，这一点细小的差异可能会对整个实验研究结果产生深远的影响，如灌洗液被污染混入血液㊁抽吸压力大小㊁灌洗量和灌洗液的种类等㊂因此，建立一种可靠㊁准确㊁成功率高的标准灌洗方法尤为重要，本文总结了国内外学者的支气管肺泡灌洗方法，为今后进一步开展相关实验研究提供参考和依据㊂１㊀麻醉动物手术前的麻醉不仅是为了减轻动物的痛苦，满足动物福利的要求，也是为了保证动物手术顺利进行的前提，目前国外大多数实验研究采用的麻醉方式都是通过腹腔注射（ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＩＰ）戊巴比妥钠，戊巴比妥钠已经成为了国外学者首选的麻醉药，在比较发达的国家和地区，则倾向采用更为安全㊁效率更高的吸入异氟烷麻醉，异氟烷被动物吸入体内后几乎不参与体内代谢，对实验结果干扰较小㊂国内使用的吸入麻醉药还包括乙醚，但乙醚会对动物的呼吸道造成强烈的刺激㊂吸入麻醉相比传统的麻醉方式具有以下明显的优点：麻醉作用快㊁动物苏醒迅速㊁麻醉深度易于控制以及实验动物的病死率低，然而吸入麻醉成本较高，术前准备及麻醉操作相对复杂，国内应用并不多见㊂而国内实验人员选择的麻醉药除了戊巴比妥钠外也有用水合氯醛，尽管戊巴比妥钠和水合氯醛等麻醉剂使用较为方便，麻醉过程平衡且稳定，维持时间长，但也存在明显的缺点：动物苏醒时间较长，更重要的是麻醉药对呼吸系统和循环系统存在明显的抑制作用［９－１０］，给开展部分实验带来较大的干扰㊂因此麻醉药和麻醉剂量要依据自己实验的要求和目的来选择，不同品系的大小鼠对不同种类麻醉药的敏感性也不同，这就需要我们根据自己实践的结果并结合参考文献来选择适合的麻醉方式㊂现阶段常用的大小鼠腹腔注射戊巴比妥钠麻醉剂量为３０ ５０ｍｇ／ｋｇ，浓度１％ ３％，水合氯醛麻醉剂量为３００ ４００ｍｇ／ｋｇ，浓度１０％，乌拉坦由于具有较强的致癌作用应用较少㊂当下同时研究授试物与麻醉药对机体联合及交互作用的研究并不多见，部分药物的动力学及药效学尚不完全清楚，这也许会给实验结果带来困扰，是授试物造成的结局亦或是麻醉药影响了特定生化指标的改变还需要更进一步的探讨㊂２㊀灌洗液选择合适的灌洗液是目前ＢＡＬ中争议最大的环节，也是整个灌洗过程中最混乱的一部分，国内外实验人员在选择灌洗液种类㊁温度以及灌洗量上都存在较大差异㊂常用的灌洗液包括生理盐水（ｐＨ６ ２ ７ ４）㊁磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ，ｐＨ７ ４）以及Ｄ⁃Ｈａｎｋｓ液（ｐＨ７ ９）㊂史菲等［１１］通过导管吸取３７ħ预热的生理盐水缓慢注入大鼠左侧肺内，并来回抽吸１０次，每只大鼠的单次肺泡灌洗量为２ ５ｍＬ㊂曹君等［１２］选用无菌ＰＢＳ对小鼠进行单侧肺泡灌洗，单次灌洗量为０ ５ｍＬ㊂国内学者大多选用生理盐水和磷酸盐缓冲液［３，１２］进行灌洗，但很少有学者约定灌洗液的温度和ｐＨ值，值得一提的是，国外实验人员偏爱ｐＨ７ ４含有钙镁离子并且预热的ＰＢＳ，他们认为其更有利于灌洗液中细胞因子的活性［１３－１５］㊂灌洗液的种类㊁ｐＨ值以及温度高低的差异可能对呼吸道的刺激作用不同，对收集的灌洗液中细胞因子活性的影响也不一样，给灌洗液后续检测分析结果带来一定干扰，国内的相关研究几乎处于一片空白㊂能否进行成功的灌洗，收集到准确而可靠的结果，标准化ＢＡＬ的操作，选择合适的灌洗液显得尤为重要，很多试验中并没有对该问题引起重视，在实验方法中简略描述，今后相关实验研究需要注重ＢＡＬＦ的收集方法且具体化，并增加必要的讨论㊂３㊀灌洗部位大小鼠的肺叶分部与我们人存在明显差异，左肺为单叶，右肺由上㊁中㊁下及副叶组成，因此根据实验目的决定是全肺灌洗或单肺灌洗，如果要求灌洗标本更多，则选取灌洗全肺或右肺，如果对组织病理学要求更高，则选择左肺进行灌洗，国内外实验人员对于选取实验动物灌洗部位也有着明显的差别，国内实验人员通常灌洗左肺［１，１１］，为了避免气管插管进入复杂的右肺肺叶，也有学者灌洗全肺［１３］，虽然全肺灌洗可以获得更多的灌洗标本，但也在一定程度上限制了动物的有效利用，同时增加实验动物数量，违反了实验动物的减量化（ｒｅｄｕｃｉｎｇ）㊁再利用（ｒｅｕｓｉｎｇ）和再循环（ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ）原则，反之，国外学者更偏向于结扎左主支气管灌洗右肺［１４－１６］，Ｓｈｉｎ等［１４］用３ｍＬ预热的含有Ｃａ２＋㊁Ｍｇ２＋离子的磷酸盐缓冲液对右肺进行了１４次灌洗㊂Ｋｉｍ等［１５］同样使用了含有Ｃａ２＋㊁Ｍｇ２＋离子的磷酸盐缓冲液对右肺进行了４次灌洗，他们的操作方法基本一致㊂国外学者认为ＢＡＬ是一项十分重要的操作技术，ＢＡＬＦ中各种细胞因子㊁免疫因子以及细胞涂片等的检测结果至关重要，大小鼠右肺组织明显多于左肺，因而灌洗右肺能够获得更多的标本，可供参考的数据更多更准确，也遵循了动物福利，这也是他们绝大部分实验选择灌洗右肺的根本原因㊂４㊀灌洗方式灌洗方式是指离体操作或在体操做，在体灌洗只需通过手术暴露实验动物整个肺组织及气管并行插管后对其进行灌洗，相比之下，离体灌洗就稍显复杂，还需要将肺部及气管完整的取出后再进行灌洗，两种方式都存在明显的利弊，虽然在体灌洗对ＢＡＬＦ中的细胞因子活性影响较小，但灌洗液回收率比较低，尽管离体灌洗时灌洗液回收量比较大，然而对细胞活性影响比较大，同时离体灌洗还需要对肺部进行手术分离，稍有不慎就可能刺穿肺叶，影响灌洗，导致整个实验失败，使得灌洗操作变得更加复杂，费时费力，值得注意的是在对小鼠进行操作时应格外小心，如果没有剥离干净，在行气管插管时，血管可能被手术器械挑破，导致血液流出不仅会干扰插管的视野，还会导致ＢＡＬＦ污染，影响ＢＡＬＦ生化因子和细胞成分的分析㊂当前并没有实验研究明确揭示在体灌洗与离体灌洗的差异，对细胞活性有着怎样的影响，国内外研究人员也并未对其进行深入探讨，这应当是今后相关实验研究的一个重点㊂５㊀灌洗液的处理收集到ＢＡＬＦ之后，为了分离灌洗液中的多种成分，将对其离心，使相关细胞因子留在上清液中用于相关细胞因子的检测，而细胞等成分则沉淀下来通过重悬，给沉淀细胞一个合适的环境，并使其形态保持完整性后行染色涂片㊁细胞计数以及显微镜镜检㊂国内外实验研究人员对于离心速度㊁离心时间㊁离心温度和细胞重悬所用的液体都没有一个统一的标准，这也使得相关实验数据的结果缺乏可比性㊂国外实验人员ＢＡＬ汇总如表１所示㊂６㊀灌洗过程的注意事项及讨论６ １㊀气管插管的选取由于大小鼠实验动物的气管管径不同，行ＢＡＬ时所使用的导管也略有不同，小鼠气管直径１ ５ｍｍ左右，大鼠气管２ ２ ５ｍｍ左右，灌洗套管太粗不容易插进去，还会损伤气管，致使起到穿孔，灌洗管太细又容易导致液体外溢，使回收率降低，因此选用适合的导管十分关键㊂史菲等［１１］采用外径为１ ８ｍｍ的静脉导管作为气管插管㊂酆孟洁等［２８］使用２４Ｇ静脉留置套管针收集小鼠ＢＡＬＦ，在灌洗液中观察到大量嗜酸性粒细胞，成功收集到了哮喘小鼠模型ＢＡＬＦ㊂曹君等［１２］采用２２Ｇ静脉留置针套管行气管插管收集ＢＡＬＦ，与酆孟洁等使用的气管插管方法基本一致㊂６ ２㊀抽吸力度和速度灌洗操作过程中的抽吸速度㊁抽吸力度和抽洗次数同样也是收集ＢＡＬＦ的关键，极容易被人忽视，在灌洗过程中，抽吸速度过快㊁力度过大，不仅灌洗不彻底，影响实验结果，还会导致管腔压力剧增，灌洗液溢出，甚至细胞变形破裂，包浆丢失，灌注压力过大会使灌洗液从肺组织表面渗出，抽吸力度过大易导致气管和静脉导管变形，反而不容易吸出液体㊂反复抽吸的次数过多，虽然收集到的标本中的细胞会相应增多，但灌洗量却会随之减少，导致回收率降低，此外抽吸次数过多还可能导致细胞受挤压变形而破裂严重干扰实验结果，国外研究人员大多抽吸２ ４次㊂表１㊀支气管肺泡灌洗术汇总表Ｔａｂ．１㊀Ｓｕｍｍａｒｙｏｆｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ动物模型Ａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓ术前处理Ｐｒｅｏｐｅｒａｔｉｖｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ灌洗液Ｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄ灌洗部位Ｌａｖａｇｅｓｉｔｅｓ灌洗次数Ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ离心速度和时间Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎｓｐｅｅｄａｎｄｔｉｍｅ参考文献ＲｅｆｅｒｅｎｃｅｓＦ３４４大鼠Ｆ３４４／ＤｕＣｒｌＣｒｌｊｒａｔｓ腹腔注射戊巴比妥钠ＰｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌａｎｅｓｔｈｅｓｉａＰＢＳ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ２７００ｒ／ｍｉｎ，５ｍｉｎ１９６０ｒ／ｍｉｎ，４ħ，１０ｍｉｎ［１７］Ｆ３４４大鼠Ｆ３４４／ＤｕＣｒｌＣｒｌｊｒａｔｓ戊巴比妥钠麻醉ＰｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌａｎｅｓｔｈｅｓｉａＰＢＳ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ２７００ｒ／ｍｉｎ，５ｍｉｎ１９６０ｒ／ｍｉｎ，４ħ，１０ｍｉｎ［１８］Ｆ３４４大鼠（Ｆ３４４）／ＣｒｌＢＲｒａｔｓ安乐死ＥｕｔｈａｎａｓｉａＰＢＳ全肺Ｗｈｏｌｅｌｕｎｇ５［２７］Ｆ３４４大鼠Ｆ３４４／ＤｕＣｒｌＣｒｌｊｒａｔｓ戊巴比妥ＰｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌａｎｅｓｔｈｅｓｉａＰＢＳ左肺Ｌｅｆｔｌｕｎｇ３１０００ｒ／ｍｉｎ４ħ１０ｍｉｎ［２５］Ｆ３４４大鼠Ｆｉｓｃｈｅｒ３４４ｒａｔｓ安乐死ＥｕｔｈａｎａｓｉａＰＭＮｂｕｆｆｅｒ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ１０ １３ｍＬ１５００ｒ／ｍｉｎ４ħ１５ｍｉｎ［２６］ＳＤ大鼠ＳＤｒａｔｓ１ｍＬ／ｋｇ戊巴比妥钠Ｅｎｔｏｂａｒ（１ｍＬ／ｋｇ）Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＰＢＳ（ｐＨ７ ４）右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ１４ｍｌ１７００ｒ／ｍｉｎ７ｍｉｎ［１４］ＳＤ大鼠ＳＤｒａｔｓ安乐死Ｅｕｔｈａｎａｓｉａ０ ９％Ｎａｃｌ（ｐＨ７ ４）右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ４１７００ｒ／ｍｉｎ７ｍｉｎ［２０］ＳＤ大鼠ＳＤｒａｔｓ戊巴比妥钠１ｍＬ／ｋｇＥｎｔｏｂａｒ（１ｍＬ／ｋｇ，ｉ．ｐ）Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＰＢＳ（ｐＨ７ ４）右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ４１７００ｒ／ｍｉｎ７ｍｉｎ［１５］Ｗｉｓｔａｒ大鼠Ｗｉｓｔａｒｒａｔｓ硫喷妥钠安乐死Ｔｈｉｏｐｅｎｔｏｎｅｉ．ｐ．Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＰＢＳ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ２１５００ｒ／ｍｉｎ，４ħ１０ｍｉｎ［１６］Ｗｉｓｔａｒ大鼠Ｗｉｓｔａｒｒａｔｓ麻醉放血ＥｘｓａｎｇｕｉｎａｔｉｏｎＰＢＳ全肺Ｗｈｏｌｅｌｕｎｇ２［２３］Ｗｉｓｔａｒ大鼠Ｗｉｓｔａｒｒａｔｓ戊巴比妥钠Ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌｉ．ｐ．ＰＢＳ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ１５１５００ｒ／ｍｉｎ１０ｍｉｎ［２４］Ｗｉｓｔａｒ大鼠Ｗｉｓｔａｒｒａｔｓ异氟醚麻醉ＩｓｏｆｌｕｒａｎｅａｎｅｓｔｈｅｓｉａＰＢＳ右肺Ｒｉｇｈｔｌｕｎｇ２［１９］Ｃ５７ＢＬ／６小鼠Ｃ５７ＢＬ／６Ｊｍｉｃｅ戊巴比妥钠Ｐｅｎｔｏｂａｒｂｉｔａｌｉ．ｐ．Ｃａ２＋Ｍｇ２＋ＰＢＳ（ｐＨ７ ４）全肺Ｗｈｏｌｅｌｕｎｇ４１９６０ｒ／ｍｉｎ４ħ５ｍｉｎ［２１］ＣＤ１小鼠ＣＤ１ｍｉｃｅ安乐死ＥｕｔｈａｎａｓｉａＤＰＢＳ全肺Ｗｈｏｌｅｌｕｎｇ３６４００ｒ／ｍｉｎ１５ｍｉｎ［２２］６ ３㊀灌洗量和停留时间众所周知大鼠肺组织容量大于小鼠，因此大鼠和小鼠的肺泡灌洗量也有所区别，灌洗液量过大将导致肺内压力急剧升高，严重时可导致灌洗液由肺组织包膜渗入胸腔中，过小则会导致回收不全，影响实验结果㊂常用的大鼠肺泡单次灌洗量为３ ５ｍＬ，小鼠为０ ２ １ｍＬ，除此之外，灌洗液在肺组织内停留时间的长短对实验结果的影响也不容忽视，停留时间过短也会导致灌洗液回收不彻底，目前，绝大多数实验都将１５ ３０ｓ作为灌洗液在肺组织内最合适的停留时间㊂６ ４㊀回收率值得提出的是，我们不难发现肺泡灌洗操作过程一点的不同，ＢＡＬＦ的回收率千差万别，同时ＢＡＬＦ回收率也饱受争议，在实际操作过程中想要每一个灌洗标本都得到一个较高的回收率并不容易，尤其是第一个灌洗标本的回收量是最少的，再者如果只行单侧肺泡灌洗，回收率将进一步降低，回收率是否应当纳入标准肺泡灌洗还需更进一步的探讨㊂鉴于ＢＡＬ对今后开展呼吸系统相关研究的意义重大［２９－３３］，必然会对研究实验动物呼吸道㊁肺部疾病做出更大贡献，同时也应该看到灌洗液的种类㊁灌洗方式以及灌洗操作等均会对ＢＡＬＦ的检测结果产生干扰，在研究不同疾病时，ＢＡＬ的操作可能不尽相同，因此有必要对其深入探讨，相关研究有待进一步深化㊂参考文献：［１］㊀宋一平，崔德健，茅培英，等．慢性阻塞性肺疾病大鼠模型气道重塑及生长因子的研究［Ｊ］．中华结核和呼吸杂志，２００１，２４（５）：２８３－２８７．［２］㊀ＫｅｌｌｙＥＡ，ＲｏｄｒｉｇｕｅｚＲＲ，ＢｕｓｓｅＷＷ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｓｅｇｍｅｎｔａｌｂｒｏｎｃｈｏｐｒｏｖｏｃａｔｉｏｎｗｉｔｈａｌｌｅｒｇｅｎｏｎａｉｒｗａｙｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，１９９７，１５６（５）：１４２１－１４２８．［３］㊀湛孝东，姜玉新，李良怿，等．不同浓度卵蛋白变应原对小鼠哮喘模型建立的影响［Ｊ］．中国实验动物学报，２０１２，２０（４）：１６－２０．［４］㊀黄鹂鸣，王格慧，王荟，等．南京市空气中颗粒物ＰＭ１０㊁ＰＭ２ ５污染水平［Ｊ］．中国环境科学，２００２，２２（４）：３３４－３３７．［５］㊀ＨｅｎｄｅｒｓｏｎＲＦ．Ｕｓｅｏｆｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｔｏｄｅｔｅｃｔｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙｔｒａｃｔｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｉｎｈａｌｅｄｍａｔｅｒｉａｌ［Ｊ］．ＥｘｐＴｏｘｉｃｏｌＰａｔｈｏｌ，２００５，５７（１）：１５５－１５９．［６］㊀ＷａｒｈｅｉｔＤＢ，ＬａｕｒｅｎｃｅＢＲ，ＲｅｅｄＫＬ，ｅｔａｌ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｐｕｌｍｏｎａｒｙｔｏｘｉｃｉｔｙａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｓｉｎｇｌｅ⁃ｗａｌｌｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌＳｃｉ，２００４，７７（１）：１１７－１２５．［７］㊀ＬａｍＣＷ，ＪａｍｅｓＪＴ，ＭｃｃｌｕｓｋｅｙＲ，ｅｔａｌ．Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄａｓｓｅｓｓｍｅｎｔｏｆｐｏｔｅｎｔｉａｌｏｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌａｎｄｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｈｅａｌｔｈｒｉｓｋｓ［Ｊ］．ＣｒｉｔＲｅｖＴｏｘｉｃｏｌ，２００６，３６（３）：１８９－２１７．［８］㊀ＢｅｒｍｕｄｅｚＥ，ＭａｎｇｕｍＪＢ，ＡｓｇｈａｒｉａｎＢ，ｅｔａｌ．Ｌｏｎｇ⁃ｔｅｒｍｐｕｌｍｏｎａｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆｔｈｒｅｅｌａｂｏｒａｔｏｒｙｒｏｄｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓｔｏｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃｉｎｈａｌａｔｉｏｎｏｆｐｉｇｍｅｎｔａｒｙｔｉｔａｎｉｕｍｄｉｏｘｉｄｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌＳｃｉ，２００２，７０（１）：８６－９７．［９］㊀周昆，屈彩芹．动物实验常用麻醉剂的比较与选择［Ｊ］．实验动物科学，２００８，２５（２）：４１－４３．［１０］㊀李志勇，孙建宁，张硕峰．水合氯醛和戊巴比妥钠对ＳＤ大鼠麻醉效果的比较［Ｊ］．四川动物，２００８，２７（２）：２９９－３０２．［１１］㊀史菲，邱晨．大鼠支气管肺泡灌洗术标准化操作的探讨［Ｊ］．中国现代医学杂志，２００２，１２（２４）：６７－６９．［１２］㊀曹君，陈平，杨悦，等．烟雾暴露所致肺气肿小鼠模型的建立与评价［Ｊ］．中国实验动物学报，２０１０，１８（４）：２７８－２８２．［１３］㊀应杏秋，曾群力，祝慧娟，等．纳米ＳｉＯ２与标准ＳｉＯ２致大鼠急性肺损伤的作用［Ｊ］．中华劳动卫生职业病杂志，２００６，２４（２）：１１６－１１７．［１４］㊀ＳｈｉｎＪＨ，ＨａｎＳＧ，ＫｉｍＪＫ，ｅｔａｌ．５ｄａｙｒｅｐｅａｔｅｄｉｎｈａｌａｔｉｏｎａｎｄ２８ｄａｙｐｏｓｔｅｘｐｏｓｕｒｅｓｔｕｄｙｏｆｇｒａｐｈｅｎｅ［Ｊ］．Ｎａｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１５，９（８）：１０２３－１０３１．［１５］㊀ＫｉｍＪＫ，ＳｈｉｎＪＨ，ＬｅｅＪＳ，ｅｔａｌ．２８⁃ｄａｙｉｎｈａｌａｔｉｏｎｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｇｒａｐｈｅｎｅｎａｎｏｐｌａｔｅｌｅｔｓｉｎＳｐｒａｇｕｅ⁃Ｄａｗｌｅｙｒａｔｓ［Ｊ］．Ｎａｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１６，１０（７）：８９１－９０１．［１６］㊀ＦｒａｎｃｉｓＡＰ，ＧａｎａｐａｔｈｙＳ，ＰａｌｌａＶＲ，ｅｔａｌ．Ｏｎｅｔｉｍｅｎｏｓｅ⁃ｏｎｌｙｉｎｈａｌａｔｉｏｎｏｆＭＷＣＮＴｓｅｘｐｌｏｒｉｎｇｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔｏｘｉｃｉｔｙｂｙｉｎｔｅｒｍｉｔｔｅｎｔｓａｃｒｉｆｉｃｅｉｎＷｉｓｔａｒｒａｔｓ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌＲｅｐ，２０１５，２（３）：１１１－１２０．［１７］㊀ＵｍｅｄａＹ，ＫａｓａｉＴ，ＳａｉｔｏＭ，ｅｔａｌ．Ｔｗｏ⁃ｗｅｅｋｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｍｕｌｔｉ⁃ｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓｂｙｗｈｏｌｅ⁃ｂｏｄｙｉｎｈａｌａｔｉｏｎｅｘｐｏｓｕｒｅｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．ＪＴｏｘｉｃｏｌＰａｔｈｏｌ，２０１３，２６（２）：１３１－１４０．［１８］㊀ＫａｓａｉＴ，ＵｍｅｄａＹ，ＯｈｎｉｓｈｉＭ，ｅｔａｌ．Ｔｈｉｒｔｅｅｎｗｅｅｋｓｔｕｄｙｏｆｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｆｉｂｅｒｌｉｋｅｍｕｌｔｉｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓｗｉｔｈｗｈｏｌｅｂｏｄｙｉｎｈａｌａｔｉｏｎｅｘｐｏｓｕｒｅｉｎｒａｔｓ［Ｊ］．Ｎａｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１５，９（４）：４１３－４２２．［１９］㊀Ｍａ⁃ＨｏｃｋＬ，ＳｔｒａｕｓｓＶ，ＴｒｅｕｍａｎｎＳ，ｅｔａｌ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｉｎｈａｌａｔｉｏｎｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｍｕｌｔｉ⁃ｗａｌｌｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓ，ｇｒａｐｈｅｎｅ，ｇｒａｐｈｉｔｅｎａｎｏｐｌａｔｅｌｅｔｓａｎｄｌｏｗｓｕｒｆａｃｅｃａｒｂｏｎｂｌａｃｋ［Ｊ］．ＰａｒｔＦｉｂｒｅＴｏｘｉｃｏｌ，２０１３，１０（１）：２３－４２．［２０］㊀ＨａｎＳＧ，ＫｉｍＪＫ，ＳｈｉｎＪＨ，ｅｔａｌ．ＰｕｌｍｏｎａｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆＳｐｒａｇｕｅ⁃Ｄａｗｌｅｙｒａｔｓｉｎｓｉｎｇｌｅｉｎｈａｌａｔｉｏｎｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｇｒａｐｈｅｎｅｏｘｉｄｅｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ［Ｊ］．ＢｉｏｍｅｄＲｅｓＩｎｔ，２０１５ ２０１５ＡｒｔｉｃｌｅＩＤ３７６７５６．［２１］㊀ＭｅｒｃｅｒＲＲ，ＳｃａｂｉｌｌｏｎｉＪＦ，ＨｕｂｂｓＡＦ，ｅｔａｌ．Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｆｉｂｒｏｔｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｆｏｌｌｏｗｉｎｇｉｎｈａｌａｔｉｏｎｅｘｐｏｓｕｒｅｔｏｍｕｌｔｉ⁃ｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓ［Ｊ］．ＰａｒｔＦｉｂｒｅＴｏｘｉｃｏｌ，２０１３，１０（１）：３３－４７．［２２］㊀ＢｌｕｍＪＬ，ＲｏｓｅｎｂｌｕｍＬＫ，ＧｒｕｎｉｇＧ，ｅｔａｌ．Ｓｈｏｒｔ⁃ｔｅｒｍｉｎｈａｌａｔｉｏｎｏｆｃａｄｍｉｕｍｏｘｉｄｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓａｌｔｅｒｓｐｕｌｍｏｎａｒｙｄｙｎａｍｉｃｓａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｌｕｎｇｉｎｊｕｒｙ，ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ，ａｎｄｒｅｐａｉｒｉｎａｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌ［Ｊ］．ＩｎｈａｌＴｏｘｉｃｏｌ，２０１４，２６（１）：４８－５８．［２３］㊀ＬａｎｄｓｉｅｄｅｌＲ，Ｍａ⁃ＨｏｃｋＬ，ＨｏｆｍａｎｎＴ，ｅｔａｌ．Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｓｈｏｒｔ⁃ｔｅｒｍｉｎｈａｌａｔｉｏｎｓｔｕｄｉｅｓｔｏａｓｓｅｓｓｔｈｅｉｎｈａｌａｔｉｏｎｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ［Ｊ］．ＰａｒｔＦｉｂｒｅＴｏｘｉｃｏｌ，２０１４，１１（１）：１６－４２．［２４］㊀ＫａｄｏｙａＣ，ＬｅｅＢＷ，ＯｇａｍｉＡ，ｅｔａｌ．Ａｎａｌｙｓｉｓｏｆｐｕｌｍｏｎａｒｙｓｕｒｆａｃｔａｎｔｉｎｒａｔｌｕｎｇｓａｆｔｅｒｉｎｈａｌａｔｉｏｎｏｆｎａｎｏｍａｔｅｒｉａｌｓ：ｆｕｌｌｅｒｅｎｅｓ，ｎｉｃｋｅｌｏｘｉｄｅａｎｄｍｕｌｔｉ⁃ｗａｌｌｅｄｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓ［Ｊ］．Ｎａｎｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，２０１６，１０（２）：１９４－２０３．［２５］㊀ＡｉｓｏＳ，ＹａｍａｚａｋｉＫ，ＵｍｅｄａＹ，ｅｔａｌ．ＰｕｌｍｏｎａｒｙｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌｌｙｉｎｓｔｉｌｌｅｄｍｕｌｔｉｗａｌｌｃａｒｂｏｎｎａｎｏｔｕｂｅｓｉｎｍａｌｅＦｉｓｃｈｅｒ３４４ｒａｔｓ［Ｊ］．ＩｎｄＨｅａｌｔｈ，２０１０，４８（６）：７８３－７９５．［２６］㊀ＭｏｒｉｍｏｔｏＹ，ＩｚｕｍｉＨ，ＹｏｓｈｉｕｒａＹ，ｅｔａｌ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙｔｏｘｉｃｉｔｙｏｆｗｅｌｌ⁃ｄｉｓｐｅｒｓｅｄｃｅｒｉｕｍｏｘｉｄｅｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇｉｎｔｒａｔｒａｃｈｅａｌｉｎｓｔｉｌｌａｔｉｏｎａｎｄｉｎｈａｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＮａｎｏｐａｒｔＲｅｓ，２０１５，１７（１１）：４４２－４５８．［２７］㊀ＢｅｒｍｕｄｅｚＥ，ＭａｎｇｕｍＪＢ，ＷｏｎｇＢＡ，ｅｔａｌ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅｓｏｆｍｉｃｅ，ｒａｔｓ，ａｎｄｈａｍｓｔｅｒｓｔｏｓｕｂｃｈｒｏｎｉｃｉｎｈａｌａｔｉｏｎｏｆｕｌｔｒａｆｉｎｅｔｉｔａｎｉｕｍｄｉｏｘｉｄｅｐａｒｔｉｃｌｅｓ［Ｊ］．ＴｏｘｉｃｏｌＳｃｉ，２００４，７７（２）：３４７－３５７．［２８］㊀酆孟洁，邱晨，刘雯雯．支气管肺泡灌洗术在哮喘小鼠模型中的应用［Ｊ］．国际检验医学杂志，２０１２，３３（１９）：２３０５－２３０６．［２９］㊀ＣｈａｎｅｚＰ，ＶｉｇｎｏｌａＡＭ，Ｏ ＳｈａｕｇｎｅｓｓｙＴ，ｅｔａｌ．ＣｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｒｅｖｅｒｓｉｂｉｌｉｔｙｉｎＣＯＰＤｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｆｅａｔｕｒｅｓｏｆａｓｔｈｍａ［Ｊ］．ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，１９９７，１５５（５）：１５２９－１５３４．［３０］㊀ＶａｓａｋｏｖａＭ，ＳｔｅｒｃｌｏｖａＭ，ＫｏｌｅｓａｒＬ，ｅｔａｌ．ＣｙｔｏｋｉｎｅｇｅｎｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓａｎｄＢＡＬＦｃｙｔｏｋｉｎｅｌｅｖｅｌｓｉｎｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｌｕｎｇｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＲｅｓｐｉｒＭｅｄ，２００９，１０３（５）：７７３－７７９．［３１］㊀ＤｒｅｎｔＭ，ｖａｎＮｉｅｒｏｐＭＡ，ＧｅｒｒｉｔｓｅｎＦＡ，ｅｔａｌ．ＡｃｏｍｐｕｔｅｒｐｒｏｇｒａｍｕｓｉｎｇＢＡＬＦ⁃ａｎａｌｙｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓａｓａｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｔｏｏｌｉｎｉｎｔｅｒｓｔｉｔｉａｌｌｕｎｇｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．ＡｍＪＲｅｓｐｉｒＣｒｉｔＣａｒｅＭｅｄ，１９９６，１５３（２）：７３６－７４１．［３２］㊀ｖａｎＲｉｊｔＬＳ，ＫｕｉｐｅｒｓＨ，ＶｏｓＮ，ｅｔａｌ．Ａｒａｐｉｄｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒｌａｖａｇｅｆｌｕｉｄｃｅｌｌｓｉｎｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓｏｆａｓｔｈｍａ［Ｊ］．ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ，２００４，２８８（１－２）：１１１－１２１．［３３］㊀毕玉田，王彦，吴奎，等．屋尘螨致敏／激发小鼠气道变态反应性炎症模型的构建［Ｊ］．中国实验动物学报，２００７，１５（５）：３３８－３４１．收稿日期 ２０１７－０４－１９。
噻托溴铵通过抑制NLRP3炎症小体活性在慢性阻塞性肺疾病中发挥抗炎作用
噻托溴铵通过抑制NLRP3炎症小体活性在慢性阻塞性肺疾病中发挥抗炎作用*徐慧1， 曹伟涛1， 白鸽2， 罗承娜1， 刘俊1， 赵子文1， 刘朝晖1△， 赵祝香1△（1华南理工大学医学院附属第二医院，广州市第一人民医院呼吸内科，广东 广州 510180；2广州医科大学附属第一医院，广州呼吸疾病研究所呼吸疾病国家重点实验室，广东 广州 510120）［摘要］ 目的：建立小鼠慢性阻塞性肺疾病（COPD ）模型，探讨噻托溴铵（TIO ）是否能够通过调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体活性发挥肺保护作用。
方法：全身暴露香烟烟雾法构建COPD 小鼠模型，部分采用TIO 进行干预，分析小鼠的一般情况、肺功能指标、病理改变和肺部炎症细胞数量的变化。
ELISA 法检测小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF ）上清中白细胞介素1β（IL -1β）和IL -18的水平；Western blot 法检测小鼠肺组织NLRP3及caspase -1蛋白的表达。
结果：与对照组比较，COPD 组小鼠体重、第100毫秒用力呼气容积（FEV100）、FEV100/用力肺活量（FVC ）和动态肺顺应性（Cdyn ）均明显下降（P <0.05），气道阻力（RI ）明显升高（P <0.05），FVC 水平无显著差异，肺组织平均肺泡间隔、BALF 中炎症细胞、IL -1β和IL -18水平和肺组织中NLRP3及caspase -1蛋白表达均显著升高（P <0.05）。
与COPD 组比较，COPD+TIO 组小鼠体重、FVC 和Cdyn 水平无显著差异，FEV100和FEV100/FVC 明显升高（P <0.05），RI 明显下降（P <0.05），肺组织平均肺泡间隔，BALF 中炎症细胞、IL -1β和IL -18水平，以及肺组织中NLRP3和caspase -1蛋白表达均显著降低（P <0.05）。
昆布多糖对哮喘小鼠IL-33、VEGF、α-SMA及气道重塑的影响
昆布多糖对哮喘小鼠IL-33、VEGF、α-SMA及气道重塑的影响摘要】目的观察昆布多糖对哮喘小鼠肺泡灌洗液(BALF) 内白细胞介素-33（IL-33）、血管内皮生长因子（VEGF）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的影响及气管重塑的影响。
方法将40只SPF昆明系小鼠随机分为哮喘模型组、激素吸入组、昆布多糖组和对照组4组，每组10只。
经OVA致敏激发制模成功后，哮喘模型组用生理盐水0．3 ml灌胃干预，激素吸入组雾化吸入布地奈德混悬液0.4ml干预，昆布多糖组采用昆布多糖50 mg／kg灌胃干预，均每日1次。
对照组采用生理盐水代替0VA致敏激发和灌胃干预。
苏木精-伊红染色观察各组哮喘小鼠肺组织病理学形态的变化，用免疫组化法测定小鼠BALF中IL-33、VEGF及α-SMA的水平。
结果与模型组比较，昆布多糖组及激素吸入组BALF中IL-33、VEGF、α-SMA显著降低 (P均<0.01)；与对照组比较，昆布多糖及激素吸入组各指标差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，昆布多糖组与激素吸入组IL-33、VEGF及α-SMA差异均有统计学意义(P<0.05或P<O.01)。
结论昆布多糖能在一定程度上抑制急性哮喘小鼠的气道炎症，减轻气道重塑的发生。
【关键词】昆布多糖；支气管哮喘；血管内皮生长因子; 白细胞介素-33；α-平滑肌肌动蛋白【中图分类号】R965 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）32-0011-02支气管哮喘是一种常见病和多发病，据统计，全球哮喘的患病率为1％～18％，估计全世界有3亿哮喘病患者，每年因哮喘发作死亡的人数高达18万人[1]。
昆布多糖又称海带多糖，是从中药昆布中分离出的硫酸多糖成分，具有调节免疫，抗炎、抗纤维化、抗肿瘤、抗凝血，降血压、血脂，抗病毒和抗菌等功能[2]。
有研究表明，昆布多糖可促进T／B淋巴细胞分化及抗体生成，发挥抗炎作用[3]。
小鼠肺组织灌注做病理
小鼠肺组织灌注做病理小鼠肺组织灌注是一种常见的病理实验方法，用于研究肺部疾病的病理变化。
该方法通过灌注特定的染料或荧光标记物进入小鼠肺组织，从而观察和分析肺部组织的病理变化。
以下是对小鼠肺组织灌注做病理的详细描述。
首先，需要准备实验所需的材料和设备。
这些包括小鼠、注射器、灌注液、染料或荧光标记物、显微镜等。
确保材料和设备的质量和卫生。
在进行实验前，应对小鼠进行麻醉和准备。
选择适合的麻醉方法，如麻醉药物注射或麻醉气体。
确保小鼠处于麻醉状态下，以减少其疼痛和不适。
接下来，将小鼠固定在实验台上，以便进行灌注。
使用注射器和灌注液将染料或荧光标记物注射到小鼠的血管系统中。
确保注射的过程安全、准确，并避免损伤小鼠的血管和组织。
注射完成后，允许染料或荧光标记物在小鼠的血管系统中流动一段时间，以确保其充分分布到肺组织中。
通常，这个时间段为几分钟到几小时，具体根据实验的需要而定。
在染料或荧光标记物充分分布到肺组织后，可以进行观察和分析。
使用显微镜观察小鼠肺组织的病理变化，包括血管扩张、血管破裂、炎症细胞浸润等。
根据实验的目的和需要，可以使用不同的显微镜技术，如荧光显微镜、透射电子显微镜等，以获取更详细和精确的信息。
在观察和分析的过程中，应注意记录和描述肺组织的病理变化。
这包括记录变化的类型、程度和分布，以及与实验设计和假设的相关性。
这些信息将有助于对病理变化的机制和影响进行进一步的研究和解释。
最后，根据实验的结果和发现，可以进行数据分析和统计。
使用适当的统计方法，比如t检验或方差分析，对不同组间的数据进行比较和分析。
根据统计结果，可以得出结论和提出相关的假设。
总结而言，小鼠肺组织灌注做病理是一种常用的研究肺部疾病的实验方法。
通过注射染料或荧光标记物，观察和分析肺组织的病理变化，可以进一步了解肺部疾病的发病机制和影响。
这个方法的实施需要注意实验材料和设备的质量和卫生，确保小鼠的麻醉和灌注过程的安全和准确。
通过记录、描述和分析肺组织的病理变化，可以获得有关肺部疾病的重要信息，为进一步的研究和临床治疗提供基础。
小鼠肺泡巨噬细胞的提取、纯化及活性检测
小鼠肺泡巨噬细胞的提取、纯化及活性检测
邹丹;全宏勋;胡群员
【期刊名称】《中国公共卫生》
【年(卷),期】2003(19)9
【摘要】目的探讨从小鼠提取肺泡巨噬细胞 (PAM)的可行性。
方法采用支气管肺泡灌洗法从小鼠、大鼠肺内采集游离细胞 ,用贴壁法提取肺泡巨噬细胞 ,并以酸性磷酸酶 (ACP)法和吞噬鸡红细胞实验检测巨噬细胞的纯度。
结果单位肺组织2种鼠的肺泡巨噬细胞收获量无显著性差异。
结论采用灌洗法提取小鼠肺泡巨噬细胞是一种简便易行的办法。
【总页数】2页(P1087-1088)
【关键词】小鼠;肺泡巨噬细胞;提取;纯化
【作者】邹丹;全宏勋;胡群员
【作者单位】河南职工医学院组织学与胚胎学教研室
【正文语种】中文
【中图分类】R392-33
【相关文献】
1.杏鲍菇提取物对小鼠巨噬细胞免疫活性的研究 [J], 樊铭聪;李文香;胡欣蕾;孙亚男;于戈
2.香烟提取物对大鼠肺泡巨噬细胞活性及基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶组织抑制剂1平衡的影响 [J], 李亚清;张珍祥;徐永健;倪望;陈仕新;马丹;杨朝
3.儿童肿瘤化疗后粒细胞减少期并发ARDS肺泡巨噬细胞活性检测 [J], 钱娟;蒋黎明;李璧如;赵醴;杨燕文;任宏;王莹
4.中性红染料摄入法检测人肺泡巨噬细胞蚕噬活性探讨 [J], 李铁民;梁再赋
5.人肺泡灌洗液巨噬细胞吞噬功能和血清巨噬细胞集落刺激因子抗体检测水平对肺泡蛋白沉积症的临床意义(附51例分析) [J], CHEN Lulu;WENG Heng;LI Hongyan;PAN Jianguang;HUANG Yansheng;ZHONG Yanfeng
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小鼠肺泡巨噬细胞的分离与培养
小鼠肺泡巨噬细胞的分离与培养巨噬细胞通常有两个不同的亚群：经典激活M1型，具有促炎作用。
可被LPS单独或与Th1细胞因子(如IFN-γ，GM-CSF)联合极化，并产生促炎细胞因子，IL-1β、IL-6、IL-12、IL-23和TNF-α；第二种是交替激活M2型巨噬细胞，具有抗炎和免疫调节作用，被Th2细胞因子IL-4和IL-13极化，产生IL-10和TGF-β等抗炎细胞因子。
目前实验常用的细胞系有RAW264.7，THP-1以及原代BMDM细胞等，而肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophages, AM)比较少用但研究很有必要。
AM是肺的常驻组织巨噬细胞，在出生前后定植于肺部，在成年生物体中无需单核细胞的贡献即可长期自我维持，对免疫调节和表面活性剂稳态至关重要。
由于AM定位于肺泡的空气空间，所以直接暴露于吸入的空气和病原体或其他雾化颗粒中。
我们可以通过支气管肺泡灌洗法(BAL)清洗肺部收集。
一、方法：通过支气管肺泡灌洗(BAL)获取肺泡巨噬细胞。
1. 为每只老鼠准备一个15mL的锥形管，管内装有3mL完整的培养基。
2.将BAL缓冲液(PBS+EDTA)在水浴中加热至37°C，在整个过程中要注意保持温度。
3.在不破坏颈静脉或气管的情况下，采用颈椎脱位法对小鼠实施安乐死，避免AM暴露于CO2或异氟醚中，影响AM的功能特性。
4. 使用解剖工具，切除皮肤、胸腔和肌肉，露出肺和气管，避免割伤或破裂血管。
5. 用一把细剪刀在喉头下方的气管上部做一个小切口，气管朝下的部分(远离实验者)应保持完整，不要切开整个气管。
6. 使用切口插入一根稍钝的18-G套管，将套管插入气管向肺方向深5mm，注意不要损伤肺组织。
7. 将1mL注射器吸取1mL温热BAL缓冲液连接到插入的套管上。
8. 注射缓冲液1mL，另一只手固定套管位置。
9. 拉动柱塞收集注射器中的BAL液。
回收率约为800 ~ 900 μL。
注意气压不宜过高，否则肺泡破裂，BAL液流失。
小鼠实验方法1
小鼠不同组织细胞的提取1.麻醉小鼠：将小鼠以0.1ml/10g的量注射4%水合氯醛进行麻醉，3-5分钟待小鼠麻醉后用小图钉将小鼠四肢固定于泡沫板上并喷洒适量酒精于小鼠皮肤表面，用吸水纸轻轻吸干。
2.肺泡灌洗液的制备和细胞分离：用剪刀剪开小鼠颈部皮肤用小图钉固定，分离颈部脂肪组织与肌肉层暴露气管，用一毫升注射器针头在气管接近咽喉上端轻轻扎孔，将灌洗软管由开孔处引入气管内约0.5cm，并用细线将气管与软管扎好避免灌洗时漏液。
用一毫升注射器吸取Hank’s液反复灌洗(300μl/次，灌洗4次)，并在灌洗时进行胸部轻轻按摩，收集灌洗液体1800转室温离心8分钟，收集上清备用，后用完全1640重悬离心管底部细胞并计数。
3.小鼠心脏灌注：将小鼠由腹部剪开至胸腔，打开胸腔暴露心脏，于右心房开一小口，针头由左心室心尖进入，用1×PBS进行灌注至灌洗液无明显红色、肝脏等器官泛白止。
4.气管组织单细胞悬液的制备：分离气管周围多余组织，取气管，放入装有Hank’s的15ml离心管中置于冰上，提取细胞时先用Hank’s洗涤两遍，于六孔板中剪碎气管组织并加入2‰的胶原酶(10ml不完全1640+10μlDNase+20mgⅠ型胶原酶)消化1.5h后取消化液过滤、洗涤并离心，弃上清后用完全1640重悬并计数。
5.肺组织单细胞悬液的制备：分离肺部周围多余组织，取全肺，放入装有Hank’s的15ml离心管中置于冰上，提取细胞时先用Hank’s洗涤两遍，于六孔板中剪碎肺组织并加入2‰的胶原酶(10ml不完全1640+10μlDNase+20mgⅠ型胶原酶)消化1.5h后取消化液过滤、洗涤并离心；获得的细胞里含有部分红细胞，用红细胞裂解液重悬裂解5分钟后加入Hank’s终止裂解并过滤，1800转室温离心8分钟，弃上清，用完全1640重悬并计数。
6.脾组织单细胞悬液的制备：分离脾部周围多余组织，取全脾，放入装有Hank’s的15ml离心管中置于冰上，提取细胞时先用Hank’s洗涤两遍，于100μlm filter中用高压灭菌五毫升注射器的活塞轻轻研磨，边研磨边加入Hank’s冲洗；将获得的滤液离心弃上清，用过Hank’s重悬平铺在ficoll液面上2200转室温离心20分钟(升7降0)。
小鼠肺泡灌洗
把小鼠喉咙处皮肤剪开，用镊子把气管周围的组织分离开，气管暴露出来。
注射器7号针头，针尖剪掉，再磨平，把动物仰位固定，针头从嘴巴里进去，伸到气管里。
和平时灌胃一样，只是现在伸到气管。
在甲状腺（气管显得稍宽处）下面，针头就伸到这里，大约甲状腺过3毫米处。
然后拿一根线，从气管下穿过，把针头和气管一起结扎了，其实就是把针头固定在里面，不让它跑出来。
打结时用点力，手拨动针头时明显感觉针头动不了就可以了。
然后注射器吸取液体推进气管，第一次一般吸不完全，没关系，第二次的液体推进去后就能吸出来很多了。
我基本能全部吸出来的。
希望能帮上忙。
标题：小鼠肺泡灌洗标准操作规程关键词：肺泡灌洗；细胞分类计数；细胞因子目的：检查小鼠各种病理生理状态(特别是肺部疾病)下，肺部出现的各种病理改变。
例：哮喘模型中检测嗜酸细胞的分类数有否提高，灌洗液中各种细胞因子，如IL-4,IL-5,IL-10,IFN-r等水平。
主体内容（操作步骤）：实验的准备实验的器材、仪器、药品：4℃遇冷的单纯PBS和4℃遇冷的含1%BSA 的PBS；手术器械：眼科剪，眼科镊，穿刺针或4号半头皮针；血细胞计数板；低温离心机实验操作规程：灌洗分单侧和双侧。
单侧一般为颈部和胸部解剖，气管和一侧肺叶结扎。
再用穿刺针插入气管上端，0.3mlPBS反复冲洗,一般为3遍，每遍冲洗次数根据需要决定，一般3-5次即可。
双侧灌洗则只需要进行颈部解剖，暴露气管进行插管。
PBS灌洗量增高到0.8ml.灌洗次数同上。
结果判定：1.回收的灌洗液4℃，1500r离心10分钟，回收上清置于-20℃等待进行细胞因子检测；2.用1ml含有1%BSA的PBS重悬细胞沉淀，取10ul重悬液进行细胞计数。
余液再次4℃离心，参数同上；3.离心后去上清，不需太彻底，可根据第二步细胞计数所得结果和需要涂片张数决定需要残留多少上清重悬细胞沉淀。
一般如果细胞总数有10*6次方/ml的话，用80-100ul重悬可以涂三张片，这样玻片上细胞密度比较适中。
制备小鼠支气管肺泡灌洗液方法的改进
部分支气管灌洗 液会 从小 鼠的 口鼻 中溢 出 ， 体 积波 动较 大 ， 结果不理想 。经探索 和实践 ， 本 实验使用结扎远心端气 管并
直接采用 ２ ｍ Ｌ注射器制备 支气 管肺 泡灌洗 液 ， 取得 了 良好
的效果 ， 并 节 约 了费 用 ， 现介绍如下 。 １ 材 料 与 方 法
许 可证号 Ｓ Ｃ Ｘ Ｋ 一 ２ ０ １ ２ － ０ ０ ０ ４ 。标记 动 物后 ， 分笼 颗粒 饲 料饲 养， 温度 ｌ ８— ２ ４℃ ， 光 暗周 期 １ ２ ｈ ， 自由饮 水进 食。本实 验 符合河北北方学 院实验动物伦理委 员所 制定 的伦 理学 标准 。
支气管肺泡灌洗术是 一种通过对支气管肺泡灌 洗技术 ， 获取肺泡灌洗液进行 免疫 细胞 、 炎 症因子和可溶性物质 检查
学分析 ， 结果以 ±Ｓ 表示 ， 采 用独立样 本 ｔ 检验进 行两组 间
Ｄｉ ａ ｇ ｎ Ｃ ｙ ｔ ｏ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ， ２ ０ ０ ４， ３ ０ （ １ ） ： ７—１ ３ ．
［ ２ ］ Ｔ ａ ｅ Ｈ Ｊ ，Ｌ ｉ ｍ Ｄ Ｊ ，Ｂ ａ ｅ ｋ Ｋ Ｈ，ｅ ｔ ａ １ ．Ｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｔ ｉ ｃ ｖ ａ ｌ ｕ ｅ ｏ ｆ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ．
制备 小 鼠支 气 管 肺 泡 灌 洗 液 方 法 的 改进
张效 云 ， 辇 晓峰 ， 王文 栋
关键词 ： 支气 管肺 泡灌洗液 ； 细胞计数 ； 注射 器
中图分类号 ： Ｒ ３ ３ ２ 文 献 标 志码 ： Ｂ 文章 编 号 ： １ ０ ０ １ — ７ ３ ９ ９ （ ２ ０ １ ７ ） ０ １ — ０ １ ０ ９— ０ ２
接受 日期 ： ２ ０ １ ６—１ １ —３ ０ 基金项 目： 张家 口市科技局 自然科学基金资助 （ １ ２ １ １ ０ ４６ ０ Ｄ一 １ ） 作者单位 ： 河北省张家 口市河北北方 学院 医学检验学 院生化 教研室
小鼠肺泡灌洗液收集
小鼠肺泡灌洗液收集
20161008
实验材料
1. 1.5mL 离心管
2.5mL 流式管
3.18-G滞留针
4.眼科器械
5.EDTA-生理盐水/PBS/HBSS
6.3-4%福尔马林（甲醛）溶液
实验步骤
1.小鼠眼球取血
2.处死小鼠，剪开胸廓，暴露气管
3.气管上切开小口，将滞留针插入气管，滞留针头伸入一半长度（切忌过度伸
入，以防刺穿肺脏）
4.注射器中吸入0.5mL EDTA-生理盐水，接上滞留针头，注射入肺内
5.轻按摩胸腔10s，吸出EDTA-生理盐水，加入1.5mL离心管
6.重复一次，加入同一个1.5 mL 离心管
7. 1.5mL 离心管离心：300g 5min。
收集沉淀细胞用于流式检测，上清用于细
胞因子和Ig检测
8.重复抽吸8次，加入5mL 流式管同样离心细胞与之前混合后细胞计数备用
9.1/2肺脏加入3-4%福尔马林溶液，作为切片染色样本
10.½肺脏用于组织裂解，流式染色
11.。
小鼠支气管肺泡灌洗液(balf)中的白细胞分类
小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中的白细胞分类在研究小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中的白细胞分类之前，我们首先需要了解BALF的概念和特点。
BALF是一种常用的实验方法，通过向小鼠气道灌注生理盐水，然后通过肺部灌洗的方式收集肺泡灌洗液。
在收集到的BALF中，包含了众多细胞成分，其中白细胞是其中之一。
而白细胞的分类对于研究小鼠肺部疾病的病理过程和免疫反应有着重要的意义。
在BALF中，白细胞主要分为淋巴细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和单核细胞。
这些不同类型的白细胞在小鼠肺部免疫应答中起着不同的作用，因此对它们进行准确的分类和分析，有助于科学家深入了解小鼠肺部疾病的发生和发展机制。
我们来谈谈淋巴细胞。
BALF中的淋巴细胞是一种重要的免疫细胞，它们主要参与体液免疫反应。
淋巴细胞的分类又可以分为T淋巴细胞和B淋巴细胞，它们在抗体介导的免疫应答和细胞介导的免疫应答中起着重要作用。
在研究小鼠支气管肺泡灌洗液中的淋巴细胞时，需要准确地区分T淋巴细胞和B淋巴细胞，并分析它们在肺部免疫过程中的作用和数量变化。
中性粒细胞在BALF中也是一个重要的细胞类型。
它们是免疫系统中的重要组成部分，主要参与细胞因子介导的免疫反应和炎症过程。
中性粒细胞的增多和活化常常伴随着肺部炎症性疾病的发生，因此对BALF中的中性粒细胞进行分类和分析，可以帮助科学家更全面地了解小鼠肺部疾病的免疫炎症过程，为疾病的诊断和治疗提供重要依据。
嗜酸性粒细胞和单核细胞在BALF中也具有重要意义。
嗜酸性粒细胞是一类主要参与过敏反应和寄生虫感染的免疫细胞，它们的数量变化可以反映小鼠肺部的过敏炎症情况。
而单核细胞则是一类具有多功能性的免疫细胞，它们可以分化为巨噬细胞和树突状细胞，参与免疫调节和抗原递呈过程。
在研究小鼠支气管肺泡灌洗液中的白细胞时，对嗜酸性粒细胞和单核细胞的分类和分析同样具有重要意义。
对BALF中的白细胞进行准确的分类和分析，可帮助科学家全面了解小鼠肺部的病理过程和免疫反应。
小鼠肺泡灌洗
把小鼠喉咙处皮肤剪开，用镊子把气管周围的组织分离开，气管暴露出来。
注射器7号针头，针尖剪掉，再磨平，把动物仰位固定，针头从嘴巴里进去，伸到气管里。
和平时灌胃一样，只是现在伸到气管。
在甲状腺（气管显得稍宽处）下面，针头就伸到这里，大约甲状腺过3毫米处。
然后拿一根线，从气管下穿过，把针头和气管一起结扎了，其实就是把针头固定在里面，不让它跑出来。
打结时用点力，手拨动针头时明显感觉针头动不了就可以了。
然后注射器吸取液体推进气管，第一次一般吸不完全，没关系，第二次的液体推进去后就能吸出来很多了。
我基本能全部吸出来的。
希望能帮上忙。
标题：小鼠肺泡灌洗标准操作规程关键词：肺泡灌洗；细胞分类计数；细胞因子目的：检查小鼠各种病理生理状态(特别是肺部疾病)下，肺部出现的各种病理改变。
例：哮喘模型中检测嗜酸细胞的分类数有否提高，灌洗液中各种细胞因子，如IL-4,IL-5,IL-10,IFN-r等水平。
主体内容（操作步骤）：实验的准备实验的器材、仪器、药品：4℃遇冷的单纯PBS和4℃遇冷的含1%BSA的PBS；手术器械：眼科剪，眼科镊，穿刺针或4号半头皮针；血细胞计数板；低温离心机实验操作规程：灌洗分单侧和双侧。
单侧一般为颈部和胸部解剖，气管和一侧肺叶结扎。
再用穿刺针插入气管上端，0.3mlPBS反复冲洗,一般为3遍，每遍冲洗次数根据需要决定，一般3-5次即可。
双侧灌洗则只需要进行颈部解剖，暴露气管进行插管。
PBS灌洗量增高到0.8ml.灌洗次数同上。
结果判定：1.回收的灌洗液4℃，1500r离心10分钟，回收上清置于-20℃等待进行细胞因子检测；2.用1ml含有1%BSA的PBS重悬细胞沉淀，取10ul重悬液进行细胞计数。
余液再次4℃离心，参数同上；3.离心后去上清，不需太彻底，可根据第二步细胞计数所得结果和需要涂片张数决定需要残留多少上清重悬细胞沉淀。
一般如果细胞总数有10*6次方/ml的话，用80-100ul重悬可以涂三张片，这样玻片上细胞密度比较适中。
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把小鼠喉咙处皮肤剪开，用镊子把气管周围的组织分离开，气管暴露出来。
注射器7号针头，针尖剪掉，再磨平，把动物仰位固定，针头从嘴巴里进去，伸到气管里。
和平时灌胃一样，只是现在伸到气管。
在甲状腺（气管显得稍宽处）下面，针头就伸到这里，大约甲状腺过3毫米处。
然后拿一根线，从气管下穿过，把针头和气管一起结扎了，其实就是把针头固定在里面，不让它跑出来。
打结时用点力，手拨动针头时明显感觉针头动不了就可以了。
然后注射器吸取液体推进气管，第一次一般吸不完全，没关系，第二次的液体推进去后就能吸出来很多了。
我基本能全部吸出来的。
希望能帮上忙。
标题：小鼠肺泡灌洗标准操作规程
关键词：肺泡灌洗；细胞分类计数；细胞因子
目的：检查小鼠各种病理生理状态(特别是肺部疾病)下，肺部出现的各种病理改变。
例：哮喘模型中检测嗜酸细胞的分类数有否提高，灌洗液中各种细胞因子，如IL-4,IL-5,IL-10,IFN-r等水平。
主体内容（操作步骤）：实验的准备
实验的器材、仪器、药品：4℃遇冷的单纯PBS和4℃遇冷的含1%BSA的PBS；手术器械：眼科剪，眼科镊，穿刺针或4号半头皮针；血细胞计数板；低温离心机
实验操作规程：灌洗分单侧和双侧。
单侧一般为颈部和胸部解剖，气管和一侧肺叶结扎。
再用穿刺针插入气管上端，0.3mlPBS反复冲洗,一般为3遍，每遍冲洗次数根据需要决定，一般3-5次即可。
双侧灌洗则只需要进行颈部解剖，暴露气管进行插管。
PBS灌洗量增高到0.8ml.灌洗次数同上。
结果判定：1.回收的灌洗液4℃，1500r离心10分钟，回收上清置于-20℃等待进行细胞因子检测；
2.用1ml含有1%BSA的PBS重悬细胞沉淀，取10ul重悬液进行细胞计数。
余液再次4℃离心，参数同上；
3.离心后去上清，不需太彻底，可根据第二步细胞计数所得结果和需要涂片张数决定需要残留多少上清重悬细胞沉淀。
一般如果细胞总数有10*6次方/ml的话，用80-100ul重悬可以涂三张片，这样玻片上细胞密度比较适中。
4.涂片后待玻片自然晾干，然后置于10%中性甲醛溶液中固定10分钟以上，随后就可以进行常规HE染色。
5。
染色后就可以进行细胞分类计数，计算300个以上细胞，结果就比较可靠了。
使用静脉留置针，颈部解剖显露气管，插入留置针，用细线打结固定，拔出针芯。
链接注射器，即可开始灌洗！本实验室是这么做的，很方便，效果很好。