微生实验报告 2012.12.5 实验十一、细菌常用生理生化反应实验接种

微生实验报告

姓名：王晶晖

专业年级：2011级生物技术

学号：040312011032

实验十一细菌常用生理生化反应实验接种

一、实验目的

１．学习各种生理生化反应实验的原理

２．学习各种生理生化反应实验的接种方式并熟练掌握各种接种方法

二、实验原理

１．葡萄糖发酵实验原理：

糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸（如乳酸、醋酸、丙酸等）和气体（如氢气、甲烷、二氧化碳等）；产酸后溴甲酚紫指示剂可由紫色pH(6.8)变为黄色（pH5.2），产气的细菌可使半固体培养基中存有气泡．

２．V. P. 反应和甲基红试验原理：

V. P. 反应：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸脱羧通过缩合和脱羧后转变成乙酰甲基甲醇（亦称三羟基丁酮），然后被还原为2，3－丁二醇，乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被空气中的氧气氧化成为二乙酰，二乙酰再与蛋白胨中的精氨酸的胍基起作用生成红色化合物。此为V．P．正反应（若培养基中胍基太少，可加少量肌酸等胍基化合物）。在试管中加入α-萘酚时，可促进反应进行。

甲基红反应：某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中的糖先分解为丙酮酸，丙酮酸再被分解为甲酸、乙酸、乳酸等。有机酸的产生可由加入甲基红指示剂的变色进行检测。甲基红变色范围为pH4．2（红）～6．3（黄）。细菌分解葡萄糖产酸，将培养液由原来的橘黄色变为红色，此为M．R．正反应。

３．吲哚实验原理：

某些细菌能够分解培养基内蛋白胨中的色氨酸，产主吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合。形成玫瑰吲哚，为红色化合物，其反应如下：

４．硝酸盐还原实验原理：

某些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨和氮气等。如果细菌能把培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐，当培养基中加入格利斯亚硝酸试剂时，则培养液呈粉红色或红色，为正反应。

如果在培养液中加入格利斯亚硝酸试剂后溶液不出现红色，则有两种可能性：

1）细菌不能还原硝酸盐，故培养后的培养液中仍有硝酸盐存在，此为负反应。

2）硝酸盐被细菌还原为亚硝酸盐后，亚硝酸盐继续被还原成氨和氮气，故培养液中也没有硝酸盐存在，此反应为正反应。

培养液中硝酸盐存在与否可用下列方法检查：在培养液中加入锌粉（使硝酸盐还原为亚硝酸盐）再加入格利斯亚硝酸试剂，如溶液呈红色，则说明原来的硝酸盐未被还原，此系负反应。但如果在培养液中加入锌粉及格利斯亚硝酸试剂，溶液不呈现红色，则说明培养液中己不存在硝酸盐，故为正反应。

５．柠檬酸盐实验原理：

肠杆菌科各属细菌利用柠檬酸的能力不同，有的菌可利用柠檬酸钠作为碳源，有的则不能。某些菌分解柠檬酸形成CO2、由于培养基中钠离子的存在而形成碳酸钠，使培养基碱性增加，根据培养基中的指示剂变色情况来判断试验结果。指示剂可用1％的溴麝香草酚蓝酒精溶液，变色范围为pH6.3（黄）～7．6（蓝）．

６．明胶水解实验：

某些细菌能分泌明胶酶分解明胶，产生小分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力，则平板培养基中的明胶被分解成小分子的物质，在平板上加上蛋白凝固剂后，明胶被分解部分的培养基呈现透明的状态，可以使菌落周围出现透明圈。

7 .淀粉水解实验原理

有些细菌具有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为麦芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再变蓝色 ,在平板上加上碘液后，有淀粉的部分培养基遇淀粉变为兰色, 淀粉被分解部分的培养基呈现透明的状态，可以使菌落周围出现透明圈。8．硫化氢产生实验原理

某些细菌能分解含硫氨基酸产生硫化氢，硫化氢遇重金属盐如铅盐、铁盐时则生成黑色硫化铅或硫化铁沉淀，从而可确定硫化氢的产生。在培养基中加入柠檬酸铁铵,培养后观察是否有黑色沉淀产生。培养基中加入硫代硫酸钠是为了保持低的氧化还原电位,防止产生的硫化氢被空气中的氧氧化,采用固体穿刺接种也是为了更好的保持低的氧化还原电位.

三、实验器材

1．培养基：生理生化反应用的各种平板, 斜面,液体,半固体培养基.

2．器材：试管架，酒精灯，火柴，接种环(针)，牛皮纸, 记号笔等.

3．菌种: 大肠杆菌,产气杆菌, 变形杆菌,枯草杆菌,恶臭假单胞菌.

四、实验操作

(一) 接种: 标记按下表接种

(二) 培养

将接种好的培养基放在37℃培养箱中培养,两天后观察.

两天后(时间待定)观察.

五、思考题

1、微生物鉴定的基本步骤是什么?

答：分离菌株，扩增培养，制片观察形态，必要时要染色再进行生化试验（不同菌株有不同实验）。

2、常用于微生物分类鉴定的形态学特征有哪些?

答：细胞形态及其染色特性、菌落特征、特殊的细胞结构、运动性、等3、常用于微生物分类鉴定的生理生化特征有哪些?

答：生长温度、氧、pH、渗透压；宿主种类、与宿主的关系。