常见临床标本的细菌学检验
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A A
+
+ （+）
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耶尔森氏菌属
肥杆菌属 致病性杆菌属 克沃尔氏菌属 拉思氏菌属
K/d
K K A A
A
A A A A
d/+ （+）
（+）/+
-
+ +/（+） -
西地西菌属
塔特母氏菌属
K/d
-
A
A
-
-
-
注：A 产酸； K 产碱； + 90-100%菌株阳性；（+）76-89%菌 株阳性 ；d 26-75%菌株阳性； - 0-10%菌株菌阳性
AD
15
1N
16
SO
1
-
4
-
2
-
1
+
4
-
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1
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1
0
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细菌编码052100 摩根氏变形杆菌
查编码鉴定手册得
操作步骤：取3-4个同细菌菌落用 4mlNS制成悬液，每孔加0.2ml，加 盖。35℃ 4h 观察结果（某些项目要 加入相应试剂）。
H2S N PD I LD OD M U VP E ONPG SKA AR AD 1N SO
序号 1
实验名称 H2S
英文缩写 H 2S
阴性 无色
阳性 棕色、黑色
2
3
硝酸盐还原
苯丙胺酸
N
P
淡黄/白色
白色
粉红
绿色
4
吲哚
I
白色
粉红
序号 实验名称 英文缩写 5 赖胺酸 LD 6 乌胺酸 OD 7 丙二酸盐 M 8 尿素 U 9 V—P VP 10 七叶苷 E 11 ONPG ONPG 12 蔗糖 S 13 阿拉伯糖 A 14 侧金盏花醇 AD 15 肌醇 1N 16 山梨醇 SO
七、肠杆菌微量快速鉴定
一、机理：不同种细菌有不同酶系。首 先获得待测菌的纯培养物，制成悬液， 将其示为酶 予成酶 酶+低物+显色剂（或其他添加剂）→观察现象
二、装置：反应板16孔内含16和底物等径真空，
低温干燥，密封保存备用。
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
常见临床标本的细菌学检验
一、常见临床标本 1、血液 2、尿液 3、粪便、肛拭子 4、脓汁及脓拭子 5、穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液、 脑脊液、鞘膜液） 6、痰 7、胆汁 8、咽拭子 9、空气
二、标本采集的一般原则
1、应在病程的一定阶段（一般为发病早期）尽 可能在施实抗生素疗法、化学方法、血清学疗 法之前采集标本。 2、方法要恰当,标本应来自真正的感染部位，避 免其它微生物特别是正常微生物的污染。 3、所有采集的标本均应置于无菌容器中（灭菌 不能使用消毒剂）加入适当保存液 。 4、标本应尽快接种（最好是床边接种），若必 须传送时，应根据培养目的作保温、冷藏、厌 氧运送。防止污染及扩散。 5、检样不宜过少，否则易干燥死亡。
6、粪便 （含肛拭子） 增菌（一般不进行）
可疑菌落 （透明/半、 无酸色）
T.T增菌液（四硫磺酸盐肉汤）
M.M增菌液(MgCL2孔雀绿肉汤) 沙门氏菌
S.F增菌液（亚硫酸盐肉汤）
煌绿增菌液 亚硒酸盐增液
沙—志 志贺氏菌
霍乱弧菌
G.N
碱性蛋白胨水
革兰氏染色
球菌 G+杆菌:根据菌落特征,细 菌染色性,形态排列选择恰当 生化反应,免疫学反应及动物 试验 报告 G-杆菌 KIA
3、厌氧菌：一定要由伤口深 处取样，半小时内接种完毕。
（四）咽拭子： 1、由咽部扁桃体处采集分泌 物（注意部位、方式） 2、如凝为白喉患者，则应先 除去咽不表层分泌物去深层组织分泌物， 再取样。 3、凝为百日咳患者，可采用 咳碟法。
（五）痰： 1、先让病人用清水嗉口数次， 以除去口腔内大量杂菌。 2、取清晨第一口咳出的痰， （晨痰） 3、作结核杆菌培养可收集24h 痰。（冰箱保存）
4、痰
TB培养
BA（直径=9.0cm，接种量0.01ml）
注：将标本充分划开
5、尿液 集菌（3000n/min 15`） 革兰氏染色 无菌落 BA 有菌落 沉渣
报告：无菌生长 染色镜检
菌落计数
报告：检出***菌
**个/ml
<1万/ml（或2种以上菌）污染，1-10万/ml可疑 无可疑菌落 >10万/ml感染 报告：无致 SS、MaC（强弱各1个） 病菌生长
3、肾盂尿，应标明右、 左，每侧分3份留联 （导尿管插入输尿 管。） 4、通常宜取清晨第一 次尿。
5、采集后应立即送检， 接种，一般不得超 过1h，冰箱保存， 不过6h。
四、常见临床标本鉴定程序
• 染色镜检 变浊、色、 质→ BA→酚红葡萄糖肉汤
4 、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤 中加入相应对抗剂。 磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml.
青霉素→2u青霉素酶/ml
其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
（二）粪便：
1、应尽量在用药前自然排便；取 有胧血、粘液部分2-3 g（新鲜）液壮便应取絮 壮物1-2ml于无菌广口瓶中。
斜面 A/K K K d A A K/A K/A K/A K 底层 A A A A A A A A A A 产气 H2S 动力 +/（+）/+/d/+ + + d + + + + -/+ +/+/+/-/d + +/+/d +/+
斜面
低层
产气
H2S
动力
变形杆菌属
普罗菲登斯菌属 摩根氏菌属
K
K K
A
阴性 黄色 黄色 黄缘色 黄色 白色 白色 白色 紫色 紫色 紫色 紫色 紫色
阳性 紫兰色 桔色 湖兰色 粉红 粉红 棕黑色 黄色 黄色 黄色 黄色 黄色 黄色
1
H2S 4
2
N 2
3
PD 1
4
I 4
5
LD 2
6
OD 1
7
M 4
8
U 2
-
0
-
+
5
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2
9
VP
10
E
11
ONPG
12
SAK
13
AR
14
A· t
XX个/M3=
N
A· t 100*5
*10
*1000=
50000N
→39.32N A· t （49.0；20’）
结果报告应注明 “普通琼脂平板培养”/“血 琼
肠杆菌科各属KIA结果
埃希氏菌属 志贺氏菌属 沙门氏菌属 枸橼酸盐菌属 克雷伯氏菌属 肠杆菌属 欧文氏菌属 沙雷氏菌属 哈夫尼亚菌属 爱得华氏菌属
三、常见标本的采集（一般由 临床医师执行）
（一）血液： 1、一般在发热高峰期采集（发热初 期1-2天，此时阳性率较高）尽量在实施血清疗 法、化学疗法和抗生素疗法之前进行。 2、采血部位：一般为静脉（动脉阳 性率更高些）。 3、采血量：5-1ml，直接加入酚红 葡萄糖肉汤中（血/肉汤=1：10）（防止血凝、 稀释Ab等因子）如不能直接接种应置入已灭菌 适量20%枸橼酸盐瓶中。尽快送检。
菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润 湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度
+/+
根据KIA结果选择适当生化反应项目 I M Vi C 七叶
+ —
-/+
I _
+ —
MAN
— +
SUC _ C
— +
U _
— +
PA _
I项“+”非沙门氏菌 I项“+”非志贺氏菌 +
变+普
-/- → I
葡
C 不动杆菌 绿脓杆菌
+/- → 一般不会出现，可考虑接种不当，空 气污染
根据生化反应结果，结合相应血清学实验 报告结果
五、空气细菌计数
将直径9 .0cm/普通琼脂平板/血琼脂平板 按五点法/三点法打开盖暴露20’，盖好 →37℃ 24h计数菌落数，称出平均每个板 菌落数N
奥梅梁斯基法则：
100cm2 5’→10L A t →100*50 *10L
2、如无法获取粪便，应用直肠拭子， 小儿入肛门2-3cm。成人入肛门4-5cm. 取直肠粘液入无菌试管/保存液。
3、如需保送运送测量PH7.0甘油PSB 中（0.033mol/L PSB与等体积甘油混 匀。PH7.0)
( 三）、脓汁 1、创伤：先以无菌N· S清洗创 口周围，再以棉签来取脓汁/分泌物→脓 拭子置无菌试管。 2、脓肿：先消毒患部表面皮 肤，再以注射器抽吸/切开脓时接留脓汁12ml置无菌试管。
无改变→BA 报告：无菌生长 无菌落 BA
无菌落
有菌落→染色镜检 变浊、色、质→BA→菌落→染色镜检
2穿刺液→
血肉汤→
无改变→BA→ 报告：无菌生长 染色
有菌落
无菌落
BA 3，拭子（咽、脓）
菌落分类、 编号、染色 镜检
染色镜检 注：接种血平板时，拭子作原划线、接种 环划开
BA
菌落分类、编号、染色 罗氏斜面（先消化处理） 4%NaOH 6%H2SO4
（六）胆汁：
1、行十二指肠引 流水收集“胆汁乙”1015ml。
（ 胆汁甲—胆总管 ）
胆汁乙—胆素 （柠黄色） 胆汁丙—肝胆管 （金黄色）
胆汁丁—十二指
（七）穿刺液： 1：原则上由临床医生先 穿刺获得。 2：采样量：胸水，腹水： 5-10ml 3：如需抗凝：3.8%枸橼
酸钠。1：10
（八）尿液： 1、一般用导尿.5-10ml，也可 用中段尿.（应消注明），留中段尿应冲 洗尿道口/外阴部（1：1000高锰酸钾， 2%红汞.1：1000新洁尔灭，先消毒液冲 洗，再无菌纱布或干棉球拭干）。 2、作结核杆菌培养，留取 24h尿，将沉淀部分送检。
+
+ （+）
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耶尔森氏菌属
肥杆菌属 致病性杆菌属 克沃尔氏菌属 拉思氏菌属
K/d
K K A A
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西地西菌属
塔特母氏菌属
K/d
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注：A 产酸； K 产碱； + 90-100%菌株阳性；（+）76-89%菌 株阳性 ；d 26-75%菌株阳性； - 0-10%菌株菌阳性
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15
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细菌编码052100 摩根氏变形杆菌
查编码鉴定手册得
操作步骤：取3-4个同细菌菌落用 4mlNS制成悬液，每孔加0.2ml，加 盖。35℃ 4h 观察结果（某些项目要 加入相应试剂）。
H2S N PD I LD OD M U VP E ONPG SKA AR AD 1N SO
序号 1
实验名称 H2S
英文缩写 H 2S
阴性 无色
阳性 棕色、黑色
2
3
硝酸盐还原
苯丙胺酸
N
P
淡黄/白色
白色
粉红
绿色
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吲哚
I
白色
粉红
序号 实验名称 英文缩写 5 赖胺酸 LD 6 乌胺酸 OD 7 丙二酸盐 M 8 尿素 U 9 V—P VP 10 七叶苷 E 11 ONPG ONPG 12 蔗糖 S 13 阿拉伯糖 A 14 侧金盏花醇 AD 15 肌醇 1N 16 山梨醇 SO
七、肠杆菌微量快速鉴定
一、机理：不同种细菌有不同酶系。首 先获得待测菌的纯培养物，制成悬液， 将其示为酶 予成酶 酶+低物+显色剂（或其他添加剂）→观察现象
二、装置：反应板16孔内含16和底物等径真空，
低温干燥，密封保存备用。
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
常见临床标本的细菌学检验
一、常见临床标本 1、血液 2、尿液 3、粪便、肛拭子 4、脓汁及脓拭子 5、穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液、 脑脊液、鞘膜液） 6、痰 7、胆汁 8、咽拭子 9、空气
二、标本采集的一般原则
1、应在病程的一定阶段（一般为发病早期）尽 可能在施实抗生素疗法、化学方法、血清学疗 法之前采集标本。 2、方法要恰当,标本应来自真正的感染部位，避 免其它微生物特别是正常微生物的污染。 3、所有采集的标本均应置于无菌容器中（灭菌 不能使用消毒剂）加入适当保存液 。 4、标本应尽快接种（最好是床边接种），若必 须传送时，应根据培养目的作保温、冷藏、厌 氧运送。防止污染及扩散。 5、检样不宜过少，否则易干燥死亡。
6、粪便 （含肛拭子） 增菌（一般不进行）
可疑菌落 （透明/半、 无酸色）
T.T增菌液（四硫磺酸盐肉汤）
M.M增菌液(MgCL2孔雀绿肉汤) 沙门氏菌
S.F增菌液（亚硫酸盐肉汤）
煌绿增菌液 亚硒酸盐增液
沙—志 志贺氏菌
霍乱弧菌
G.N
碱性蛋白胨水
革兰氏染色
球菌 G+杆菌:根据菌落特征,细 菌染色性,形态排列选择恰当 生化反应,免疫学反应及动物 试验 报告 G-杆菌 KIA
3、厌氧菌：一定要由伤口深 处取样，半小时内接种完毕。
（四）咽拭子： 1、由咽部扁桃体处采集分泌 物（注意部位、方式） 2、如凝为白喉患者，则应先 除去咽不表层分泌物去深层组织分泌物， 再取样。 3、凝为百日咳患者，可采用 咳碟法。
（五）痰： 1、先让病人用清水嗉口数次， 以除去口腔内大量杂菌。 2、取清晨第一口咳出的痰， （晨痰） 3、作结核杆菌培养可收集24h 痰。（冰箱保存）
4、痰
TB培养
BA（直径=9.0cm，接种量0.01ml）
注：将标本充分划开
5、尿液 集菌（3000n/min 15`） 革兰氏染色 无菌落 BA 有菌落 沉渣
报告：无菌生长 染色镜检
菌落计数
报告：检出***菌
**个/ml
<1万/ml（或2种以上菌）污染，1-10万/ml可疑 无可疑菌落 >10万/ml感染 报告：无致 SS、MaC（强弱各1个） 病菌生长
3、肾盂尿，应标明右、 左，每侧分3份留联 （导尿管插入输尿 管。） 4、通常宜取清晨第一 次尿。
5、采集后应立即送检， 接种，一般不得超 过1h，冰箱保存， 不过6h。
四、常见临床标本鉴定程序
• 染色镜检 变浊、色、 质→ BA→酚红葡萄糖肉汤
4 、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤 中加入相应对抗剂。 磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml.
青霉素→2u青霉素酶/ml
其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
（二）粪便：
1、应尽量在用药前自然排便；取 有胧血、粘液部分2-3 g（新鲜）液壮便应取絮 壮物1-2ml于无菌广口瓶中。
斜面 A/K K K d A A K/A K/A K/A K 底层 A A A A A A A A A A 产气 H2S 动力 +/（+）/+/d/+ + + d + + + + -/+ +/+/+/-/d + +/+/d +/+
斜面
低层
产气
H2S
动力
变形杆菌属
普罗菲登斯菌属 摩根氏菌属
K
K K
A
阴性 黄色 黄色 黄缘色 黄色 白色 白色 白色 紫色 紫色 紫色 紫色 紫色
阳性 紫兰色 桔色 湖兰色 粉红 粉红 棕黑色 黄色 黄色 黄色 黄色 黄色 黄色
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H2S 4
2
N 2
3
PD 1
4
I 4
5
LD 2
6
OD 1
7
M 4
8
U 2
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VP
10
E
11
ONPG
12
SAK
13
AR
14
A· t
XX个/M3=
N
A· t 100*5
*10
*1000=
50000N
→39.32N A· t （49.0；20’）
结果报告应注明 “普通琼脂平板培养”/“血 琼
肠杆菌科各属KIA结果
埃希氏菌属 志贺氏菌属 沙门氏菌属 枸橼酸盐菌属 克雷伯氏菌属 肠杆菌属 欧文氏菌属 沙雷氏菌属 哈夫尼亚菌属 爱得华氏菌属
三、常见标本的采集（一般由 临床医师执行）
（一）血液： 1、一般在发热高峰期采集（发热初 期1-2天，此时阳性率较高）尽量在实施血清疗 法、化学疗法和抗生素疗法之前进行。 2、采血部位：一般为静脉（动脉阳 性率更高些）。 3、采血量：5-1ml，直接加入酚红 葡萄糖肉汤中（血/肉汤=1：10）（防止血凝、 稀释Ab等因子）如不能直接接种应置入已灭菌 适量20%枸橼酸盐瓶中。尽快送检。
菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润 湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度
+/+
根据KIA结果选择适当生化反应项目 I M Vi C 七叶
+ —
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MAN
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SUC _ C
— +
U _
— +
PA _
I项“+”非沙门氏菌 I项“+”非志贺氏菌 +
变+普
-/- → I
葡
C 不动杆菌 绿脓杆菌
+/- → 一般不会出现，可考虑接种不当，空 气污染
根据生化反应结果，结合相应血清学实验 报告结果
五、空气细菌计数
将直径9 .0cm/普通琼脂平板/血琼脂平板 按五点法/三点法打开盖暴露20’，盖好 →37℃ 24h计数菌落数，称出平均每个板 菌落数N
奥梅梁斯基法则：
100cm2 5’→10L A t →100*50 *10L
2、如无法获取粪便，应用直肠拭子， 小儿入肛门2-3cm。成人入肛门4-5cm. 取直肠粘液入无菌试管/保存液。
3、如需保送运送测量PH7.0甘油PSB 中（0.033mol/L PSB与等体积甘油混 匀。PH7.0)
( 三）、脓汁 1、创伤：先以无菌N· S清洗创 口周围，再以棉签来取脓汁/分泌物→脓 拭子置无菌试管。 2、脓肿：先消毒患部表面皮 肤，再以注射器抽吸/切开脓时接留脓汁12ml置无菌试管。
无改变→BA 报告：无菌生长 无菌落 BA
无菌落
有菌落→染色镜检 变浊、色、质→BA→菌落→染色镜检
2穿刺液→
血肉汤→
无改变→BA→ 报告：无菌生长 染色
有菌落
无菌落
BA 3，拭子（咽、脓）
菌落分类、 编号、染色 镜检
染色镜检 注：接种血平板时，拭子作原划线、接种 环划开
BA
菌落分类、编号、染色 罗氏斜面（先消化处理） 4%NaOH 6%H2SO4
（六）胆汁：
1、行十二指肠引 流水收集“胆汁乙”1015ml。
（ 胆汁甲—胆总管 ）
胆汁乙—胆素 （柠黄色） 胆汁丙—肝胆管 （金黄色）
胆汁丁—十二指
（七）穿刺液： 1：原则上由临床医生先 穿刺获得。 2：采样量：胸水，腹水： 5-10ml 3：如需抗凝：3.8%枸橼
酸钠。1：10
（八）尿液： 1、一般用导尿.5-10ml，也可 用中段尿.（应消注明），留中段尿应冲 洗尿道口/外阴部（1：1000高锰酸钾， 2%红汞.1：1000新洁尔灭，先消毒液冲 洗，再无菌纱布或干棉球拭干）。 2、作结核杆菌培养，留取 24h尿，将沉淀部分送检。