常见临床标本的细菌学检验

（六）胆汁：
1、行十二指肠引 流水收集“胆汁乙”1015ml。
（ 胆汁甲—胆总管 ）
胆汁乙—胆素 （柠黄色） 胆汁丙—肝胆管 （金黄色）
胆汁丁—十二指
（七）穿刺液： 1：原则上由临床医生先 穿刺获得。 2：采样量：胸水，腹水： 5-10ml 3：如需抗凝：3.8%枸橼
酸钠。1：10
（八）尿液： 1、一般用导尿.5-10ml，也可 用中段尿.（应消注明），留中段尿应冲 洗尿道口/外阴部（1：1000高锰酸钾， 2%红汞.1：1000新洁尔灭，先消毒液冲 洗，再无菌纱布或干棉球拭干）。 2、作结核杆菌培养，留取 24h尿，将沉淀部分送检。
A A
+
+ （+）
+/+/-
+
+ +
耶尔森氏菌属
肥杆菌属 致病性杆菌属 克沃尔氏菌属 拉思氏菌属
K/d
K K A A
A
A A A A
d/+ （+）
（+）/+
-
+ +/（+） -
西地西菌属
塔特母氏菌属
K/d
-
A
A
-
-
-
注：A 产酸； K 产碱； + 90-100%菌株阳性；（+）76-89%菌 株阳性 ；d 26-75%菌株阳性； - 0-10%菌株菌阳性
常见临床标本的细菌学检验

一、常见临床标本 1、血液 2、尿液 3、粪便、肛拭子 4、脓汁及脓拭子 5、穿刺液（胸水、腹水、心包液、关节液、 脑脊液、鞘膜液） 6、痰 7、胆汁 8、咽拭子 9、空气
二、标本采集的一般原则
1、应在病程的一定阶段（一般为发病早期）尽 可能在施实抗生素疗法、化学方法、血清学疗 法之前采集标本。 2、方法要恰当,标本应来自真正的感染部位，避 免其它微生物特别是正常微生物的污染。 3、所有采集的标本均应置于无菌容器中（灭菌 不能使用消毒剂）加入适当保存液 。 4、标本应尽快接种（最好是床边接种），若必 须传送时，应根据培养目的作保温、冷藏、厌 氧运送。防止污染及扩散。 5、检样不宜过少，否则易干燥死亡。
4 、如病人已实施治疗，应在酚红葡萄糖肉汤 中加入相应对抗剂。 磺胺类药物→对氨基苯甲酸5mg/100ml.
青霉素→2u青霉素酶/ml
其他抗生素→MgSO4 5mg/100ml
（二）粪便：
1、应尽量在用药前自然排便；取 有胧血、粘液部分2-3 g（新鲜）液壮便应取絮 壮物1-2ml于无菌广口瓶中。
无改变→BA 报告：无菌生长 无菌落 BA
无菌落
有菌落→染色镜检 变浊、色、质→BA→菌落→染色镜检


2穿刺液→
血肉汤→
无改变→BA→ 报告：无菌生长 染色
有菌落
无菌落
BA 3，拭子（咽、脓）
菌落分类、 编号、染色 镜检
染色镜检 注：接种血平板时，拭子作原划线、接种 环划开
BA
菌落分类、编号、染色 罗氏斜面（先消化处理） 4%NaOH 6%H2SO4
AD
15
1N
16
SO
1
-
4
-
2
-
1
+
4
-
2
-
1
-
4
-
1
0
0
细菌编码052100 摩根氏变形杆菌
查编码鉴定手册得
操作步骤：取3-4个同细菌菌落用 4mlNS制成悬液，每孔加0.2ml，加 盖。35℃ 4h 观察结果（某些项目要 加入相应试剂）。
6、粪便 （含肛拭子） 增菌（一般不进行）
可疑菌落 （透明/半、 无酸色）
T.T增菌液（四硫磺酸盐肉汤）
M.M增菌液(MgCL2孔雀绿肉汤) 沙门氏菌
S.F增菌液（亚硫酸盐肉汤）
煌绿增菌液 亚硒酸盐增液
沙—志 志贺氏菌
霍乱弧菌
G.N
碱性蛋白胨水
革兰氏染色
球菌 G+杆菌:根据菌落特征,细 菌染色性,形态排列选择恰当 生化反应,免疫学反应及动物 试验 报告 G-杆菌 KIA
菌落描述:颜色,大小,溶血性,透明度,硬度,润 湿度,表面光滑度,粘稠度,凸起度,边缘整齐度
+/+
根据KIA结果选择适当生化反应项目 I M Vi C 七叶
+ —
-/+
I _
+ —
MAN
— +
SUC _ C
— +
U _
— +
PA _
I项“+”非沙门氏菌 I项“+”非志贺氏菌 +
变+普
-/- → I
斜面 A/K K K d A A K/A K/A K/A K 底层 A A A A A A A A A A 产气 H2S 动力 +/（+）/+/d/+ + + d + + + + -/+ +/+/+/-/d + +/+/d +/+
斜面
低层
产气
H2S
动力
变形杆菌属
普罗菲登斯菌属 摩根氏菌属
K
K K
A
A· t
XX个/M3=
N
A· t 100*5
*10
*1000=
50000N
→39.32N A· t （49.0；20’）
结果报告应注明 “普通琼脂平板培养”/“血 琼
肠杆菌科各属KIA结果
埃希氏菌属 志贺氏菌属 沙门氏菌属 枸橼酸盐菌属 克雷伯氏菌属 肠杆菌属 欧文氏菌属 沙雷氏菌属 哈夫尼亚菌属 爱得华氏菌属
阴性 黄色 黄色 黄缘色 黄色 白色 白色 白色 紫色 紫色 紫色 紫色 紫色
阳性 紫兰色 桔色 湖兰色 粉红 粉红 棕黑色 黄色 黄色 黄色 黄色 黄色 黄色
1
H2S 4
2
N 2
3
PD 1
4
I 4
5
LD 2
6
OD 1
7
M 4
8
U 2
-
0
-
+
5
+
-
+
2
9
VP
10
E
11
ONPG
12
SAK
13
AR
14
4、痰
TB培养
BA（直径=9.0cm，接种ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ0.01ml）
注：将标本充分划开
5、尿液 集菌（3000n/min 15`） 革兰氏染色 无菌落 BA 有菌落 沉渣
报告：无菌生长 染色镜检
菌落计数
报告：检出***菌
**个/ml
<1万/ml（或2种以上菌）污染，1-10万/ml可疑 无可疑菌落 >10万/ml感染 报告：无致 SS、MaC（强弱各1个） 病菌生长
3、肾盂尿，应标明右、 左，每侧分3份留联 （导尿管插入输尿 管。） 4、通常宜取清晨第一 次尿。
5、采集后应立即送检， 接种，一般不得超 过1h，冰箱保存， 不过6h。
四、常见临床标本鉴定程序
• 染色镜检 变浊、色、 质→ BA→ 菌落→ 染色镜检 有菌落



1血液→酚红葡萄糖肉汤
H2S N PD I LD OD M U VP E ONPG SKA AR AD 1N SO
序号 1
实验名称 H2S
英文缩写 H 2S
阴性 无色
阳性 棕色、黑色
2
3
硝酸盐还原
苯丙胺酸
N
P
淡黄/白色
白色
粉红
绿色
4
吲哚
I
白色
粉红
序号 实验名称 英文缩写 5 赖胺酸 LD 6 乌胺酸 OD 7 丙二酸盐 M 8 尿素 U 9 V—P VP 10 七叶苷 E 11 ONPG ONPG 12 蔗糖 S 13 阿拉伯糖 A 14 侧金盏花醇 AD 15 肌醇 1N 16 山梨醇 SO
2、如无法获取粪便，应用直肠拭子， 小儿入肛门2-3cm。成人入肛门4-5cm. 取直肠粘液入无菌试管/保存液。
3、如需保送运送测量PH7.0甘油PSB 中（0.033mol/L PSB与等体积甘油混 匀。PH7.0)
( 三）、脓汁 1、创伤：先以无菌N· S清洗创 口周围，再以棉签来取脓汁/分泌物→脓 拭子置无菌试管。 2、脓肿：先消毒患部表面皮 肤，再以注射器抽吸/切开脓时接留脓汁12ml置无菌试管。
七、肠杆菌微量快速鉴定
一、机理：不同种细菌有不同酶系。首 先获得待测菌的纯培养物，制成悬液， 将其示为酶 予成酶 酶+低物+显色剂（或其他添加剂）→观察现象

二、装置：反应板16孔内含16和底物等径真空，
低温干燥，密封保存备用。
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
3、厌氧菌：一定要由伤口深 处取样，半小时内接种完毕。
（四）咽拭子： 1、由咽部扁桃体处采集分泌 物（注意部位、方式） 2、如凝为白喉患者，则应先 除去咽不表层分泌物去深层组织分泌物， 再取样。 3、凝为百日咳患者，可采用 咳碟法。
（五）痰： 1、先让病人用清水嗉口数次， 以除去口腔内大量杂菌。 2、取清晨第一口咳出的痰， （晨痰） 3、作结核杆菌培养可收集24h 痰。（冰箱保存）
三、常见标本的采集（一般由 临床医师执行）
（一）血液： 1、一般在发热高峰期采集（发热初 期1-2天，此时阳性率较高）尽量在实施血清疗 法、化学疗法和抗生素疗法之前进行。 2、采血部位：一般为静脉（动脉阳 性率更高些）。 3、采血量：5-1ml，直接加入酚红 葡萄糖肉汤中（血/肉汤=1：10）（防止血凝、 稀释Ab等因子）如不能直接接种应置入已灭菌 适量20%枸橼酸盐瓶中。尽快送检。
葡
C 不动杆菌 绿脓杆菌
+/- → 一般不会出现，可考虑接种不当，空 气污染
根据生化反应结果，结合相应血清学实验 报告结果
五、空气细菌计数

将直径9 .0cm/普通琼脂平板/血琼脂平板 按五点法/三点法打开盖暴露20’，盖好 →37℃ 24h计数菌落数，称出平均每个板 菌落数N
奥梅梁斯基法则：
100cm2 5’→10L A t →100*50 *10L