五分类血球仪检测原理

MEK7222/8222 白细胞分类的测定原理

MEK-7222/8222，计数原理是wbc/rbc/plt电阻法，分类是使白细胞通过鞘流进入鞘流池内，然后通过检测对白细胞照射时发生的散射光，对白细胞进行分类。

这些散射光，根据血细胞的容积、血细胞的复杂性（有无颗粒、核的构造等）的不同，光的强度和方向有所不同，因此，通过以激光直进方向和同方向小角度的散射光（以下称为Size）、激光直进方向和同方向大角度的散射光（以下成为Complexity）、与激光直进方向相对垂直的方向的散射光（以下称为Granularity）为参数的散点图，可以对淋巴细胞、单核细胞、嗜中性白细胞、嗜酸性白细胞、嗜碱性白细胞进行分类。另外，Size表示血细胞的大小、Complexity表示血细胞的复杂度、Granularity表示血细胞的颗粒的程度。

这种方法提供了三个散射图，MAIN散点图NE-EO散点图MO-BA散点图

Neutrophil Count(嗜中性白细胞) NEC

Lymphocyto Count（淋巴细胞）LYC

Monocyto Count（单核细胞）MOC

Eosinophil Count（嗜酸性白细胞）EOC

Basophil Count（嗜碱性白细胞）BAC

散点图有下列三种。纵轴是Size、横轴是Complexity的散点图（以下称为S-C散点图）；纵轴是Size、横轴是Granularity的单核细胞/嗜碱性白细胞分类用散点图（以下称为MO-BA分类用散点图）；纵轴是Size、横轴是Granularity的嗜中性白细胞/嗜酸性白细胞分类用散点图（以下称为NE-EO分类用散点图）。

淋巴细胞分布在S-C散点图的LY区域。单核细胞及嗜碱性白细胞分布在S-C散点图的MO-BA区域。进一步展开到MO-BA分类用散点图时，则单核细胞分布在MO区域，嗜碱性白细胞分布在BA区域。嗜中性白细胞及嗜酸性白细胞分布在S-C散点图的NE-EO区域，进一步展开到NE-EO分类用散点图时，嗜中性白细胞分布在NE区域，而嗜酸性白细胞分布在EO区域。

通俗的说法是，这个分类原理只有三个角度，国内的介绍材料上说是4角度，这纯属误导，是把激光直射也算上了，在mek的官方材料上根本没有这个说法。在主散射图上就是淋巴lym，单核和嗜碱通道mo+ba, 中性和嗜酸通道ne+eo,就是说在小角度光散射确定了体积的情况下结合大角度光散射能够测出的分群只有三个，其中淋巴是确定的。在mo+ba散射图上，清楚的分出了单核和嗜碱，就是说在小角度光散射确定了细胞体积的基础上，结合垂直角度光散射能够区分出两个分群，单核和嗜碱都是确定的，还有一个附属分类就是lic,即巨大不成熟细胞或者被称作为淋巴影子细胞，在这个仪器上并不单独出示lic数据。在ne+eo散射图上，清楚的分出了中性和嗜酸，就是说在小角度光散射确定了细胞体积的基础上，结合垂直角度光散射能够区分出两个分群，中性和嗜酸都是确定的。但是要说明是，我个人认为这五项分类当中有一项是计算出来的，而且，这个仪器在激光部分失灵或者五分类无法工作的情况下，应该可以充当三分类使用，因为wbc有着单独的计数通道，而且也出现wbc直方图，因此，有了直方图通过软件就可以进行分类的，但是官方没有具体的说法。ABX PENTRA 计数分类测定方法及原理：

1、RBC/PLT: 电阻法WBC/BAS计数：电阻法，由于采用差别溶解技术，WBC和BAS被一同计数出来，利用界标线进行判别，提供B AS直方图和WBC,BAS # %数值。

上图就是差别溶解之后取得的直方图，WBC总数就是图中WBC和BAS部分的总和，在BAS区域中由于数值很少，因此经常是空白，这时由于针式打印机无法细腻的打印出来的结果，如下图：

4、双鞘流（DHSS）分类计数，整个过程如下，血液标本进入LMNE混合池试剂混合形成混合溶液，孵育时间为12秒，这时RBC/PLT/ BAS细胞已经被试剂破坏掉，在鞘流泵作用下进鞘流池进行双鞘流计数，首先经过红宝石孔进行电阻法计数，判断细胞体积，然后在20 0ms之内通过鞘流直径为42um的鞘流通道进行光吸收测定判断细胞内容物，整个计数时间为12秒。这样形成分类散射图，并提供lym, gra,mon,eo,lic,aly的绝对值和百分比。

双鞘流计数是abx的专利技术，详细原理如下：

根据上图可以看到，在进行双鞘流计数的时候，首先进行的是鞘流电阻计数，对细胞进行体积测定，然后再进行光吸收比率测定，对细胞内容物进行测定，最终将这个细胞在散射涂上标注出来，在双鞘流的上下两端分别加上恒流电源，以保证电阻法测量，孵育后的溶液在右侧鞘流泵的作用下经过6号口进入鞘流池从1号口流出，为了保证这些检测细胞能够正确的通过计数孔和鞘流通道，需要利用外来鞘流来进行矫正，这样，在5，7号口通过左侧鞘流泵注入稀释液来形成第一股鞘流，保护所测混合溶液能够直接通过计数孔并且保证其不发生偏移和扭曲，保证结果准确，混合溶液通过计数孔后，2，4口通过中间鞘流泵注入稀释液形成第二股鞘流，来保证吸光度测量的正常。

五、图形及其界标范围的设定：

分类图形及界标设定

上图是一个标准的分类散射图的样本，清晰的标明了各个细胞形态所处的范围和位置。因此，PENTRA 的双鞘流可以理解为电阻法加光吸收度测定，电阻法类似上面所讲的小角度激光测定体积，光吸收度测定就是测定形态，根据细胞染色原理，不同的白细胞染色后，细胞质和细胞核所形成的颜色不同，那么测定其通过去的光的波长可以知道其本身的颜色，因此这种方法一经问世，立即引起全世界范围的关注，特别是库尔特，库尔特认为这种方法如此简单成本和实现起来均好于库尔特本身的VCS技术，因此洽谈购买，但是ABX宁可自己实现起来结构不尽合理也不愿意出卖，因此就有了双方妥协的产物BACKMAN-COULTER ACT 5DIFF这个OEM ABX的五分类产品。在这一个电阻体积，一个吸光度测定的实现中，成功的分出了4项分群，LMNE既淋巴、单核、中性和嗜酸，并且还有两个附属分群，LIC和ALY既巨大不成熟细胞和异常淋巴细胞，在仪器状态良好和试剂过关的情况下，这6项分群及提示可靠性极高；由于细胞染色后单核和嗜碱很难被区分，所以，就有了前面的差别溶解技术的WBC总数和BASO的电阻法分群，因此以前的PENTRA宣传材料上有7分类之说，后来有些不严谨和炒作之嫌，改回现在的5+2分群宣传。顺便提一下，仅WBC分类图形是由一个散射图和一个直方图来实现的，如果加上RET的话，会增加三个散射图并增加一个水平90度的光散接受，这是单独给RET的。