悬浮培养与传统工艺两种方法制备猪口蹄疫疫苗的质量比较
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中国兽医杂志
２ ０ １ ７ 年（ 第５ ３ 卷） 第 ２期 ９ ７
悬 浮 培 养 与 传 统 工 艺 两 种 方 法 制备猪 Ｉ ３ ＇ 蹄 疫 疫 苗 的 质 量 比 较
贾智 丽
（ 包头轻工职业技术学院 ，内蒙占 包头 ｏ １ ４ ０ ３ ５ ） 摘要 ： 为 比较悬浮培养与转瓶培养生 产的猪 口蹄疫 疫苗 的质量 ， 通 过病毒 含量浸 ０ 定、 灭活检验 、 内毒 素 Hale Waihona Puke Baidu量测定 、 成 品 理 化性状 、 无菌检验 、 安全检验 、 效力检验等方 面开展试验 ， 以比较两种工艺的优缺点。根据 试验结果得 出， 经细胞悬 浮培养
性 在 我 国 ， 口蹄 疫属 于 一 类 动 物 传 染 病 。本 试 验 通 过对转 瓶 培 养 和 全 悬 浮 细 胞 培 养 生 产 的 猪 口蹄 疫疫 苗进 行 质量 检验 ， 来 比较 两 种 工 艺 下疫 苗 质 量
的优缺 点 ， 从 而为 口蹄 疫 疫 苗 生 产 的 升级 换 代 提 供
（ Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３株 ＋Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 ） 制造及检验规程 ， 灭 活 液 原样 接种 乳 鼠后 ， 观察 ７ ｄ不 得 出现 口蹄 疫 症 状 和
鼠毒经 Ｂ ＨＫ ２ ｌ细胞 传代适 应 的细胞 毒 ； 检 验用 毒种
为Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３株 和 Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 乳 鼠毒 ， 均 由 中 国农业 科 学 院兰 州兽 医研 究 所 国家 口蹄疫 参考 实 验 室 鉴 定 、
可靠 的 实验依 据 、
１ 材料 与方 法
１ ． １ 毒种
制 造 及检验 用 毒 种 为猪 口蹄疫 Ｏ型 病
毒Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３株 和 Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 。疫 苗 制 造 用 毒 种 为乳
低于 ｌ ０ ” Ｌ Ｄ 。
１ ． ４ ． ２ 灭 活 检 验 按 猪 口蹄 疫 Ｏ 型 灭 活 疫 苗
限公 司提供 ； Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检测 用 Ｏ型 口蹄 疫 抗 体 液 相 阻 断检 测 试 剂盒 ， 批号为 ２ ０ １ ２ ０ ３ ｌ ６ ０ １ ， 由 中 国农 业 科 学院 兰州 兽医 研究 所提 供 。
鲎 试 剂批 号 为 １ ２ ０ ２ ０ ２ ２ ， 由广 东 湛 江 安度 斯 生 物 有
１ ． ４ ． ３ 内毒 素 含量 测 定 按 《 中华 人 民共 和 国 兽 药典 ￣ ２ ０ １ ０版 ¨ 检验 ， 内毒 素 含量应 ￣ ＜５ ０ Ｅ Ｕ ／ ｍＬ 。
１ ． ４ ． ４ 成 品理 化性 状 检 验 外 观性 状 、 剂型 、 稳 定 性、 黏度检 验 ， 符合 检验规 程 。 １ ． ４ ． ５ 无 菌 检 验 按 《 中 华 人 民共 和 国兽 药 典 》 ２ ０ １ ０版 三部 …检 验 。 １ ． ４ ． ６ 安 全 检 验 按 猪 口蹄 疫 Ｏ 型 灭 活 疫 苗 （ Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３株 ＋Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 ） 制造及检验规程 ， 用 体 重 （ ３ ５ ０～ ４ ５ ０ ） ｇ的 豚 鼠 ２只 ， 皮下注射疫 苗 ２ ． ０ ｍ Ｌ ； 用体 重 （ （ １ ８～ ２ ２ ） ｇ的小 鼠 ５只 ， 每 只皮下 注射 疫 苗 ０ ． ５ ｍ Ｌ 。连续 观 察 ７ ｄ ， 均 不 得 出 现 因注 射 疫 苗 引
后获得 的病 毒含量 、 制备疫苗效价 都有 明显 提高， 中间产品 内毒素含 量值有大 幅降低 ， 在实际接种 动物后 ， 会 大大降低 副反
应 发生率 ， 同时疫苗 的免疫效 价以及持续期均会有所 升高。表 明 ， 悬 浮培养工艺的疫苗质量高于转瓶培养工艺 。 关键词 ： 口蹄疫 ； 疫苗； 细胞悬浮培养 ； 转 瓶培养
种动物 性 传 染 病 ， 表 现 为急 性 、 热 性 和 高 度接 触
Ｍｕ ｅ ｎ ｃ ｈ法计算 Ｔ Ｃ Ｉ Ｄ 每０ ． １ ｍ Ｌ病 毒 含量 Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３ 株应不低 于 １ ０ Ｔ Ｃ Ｉ Ｄ ∞； Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 应 不 低 于 ｌ ０ Ｔ Ｃ Ｉ Ｄ Ｌ Ｄ ， 测定 ， 用 Ｐ Ｂ Ｓ或 细 胞 维 持 液 将 生 产 毒 液作 １ ０倍 系 列 稀 释 ， 取 １ ０～、 １ ０ ～、 ｌ ０ ３个 稀 释 度， 每个 稀释 度 颈 背 部 皮 下 接 种 ２～３ 日龄 乳 鼠 ４ 只， 每 只注 射 ０ ． ２ ｍ Ｌ 。观 察 ３～５ ｄ ， 根据 发病 死 亡 乳 鼠数按 Ｒ ｅ ｅ ｄ ． Ｍｕ ｅ ｎ ｃ ｈ法 计算 Ｌ Ｄ 每０ ． ２ ｍ Ｌ病 毒 含量 ， Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３株应 不 低 于 １ ０ Ｌ Ｄ Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 应 不
中图 分 类 号 ： ￥ ８ ５ ８ ． ２ 文献标志码 ： Ｂ
文章编号 ： ０ ５ ２ ９ － ６ ０ ０ ５ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ２ － ０ ０ ９ ７ － ０ ３
口蹄 疫 （ Ｆ ＭＤ） 是 由 口蹄疫 病毒 （ Ｆ ＭＤ Ｖ） 引起 的
一
培养观察 ４ ８～７ ２ ｈ ， 根据 Ｃ Ｐ Ｅ产 生 情 况 按 Ｒ ｅ ｅ ｄ —
状 和 死亡 。
抗体的 ３ ０～ ４ ０ Ｅ ｌ 龄的健康 易感仔猪 ， 体重约 （ １ ８～ ２ ２ ） ｇ
健康小 鼠（ 清洁级 ） ， 体重 （ ３ ５ ｏ～ ４ ５ ０ ） ｇ豚鼠。 １ ． ３ 试剂 内毒 素 检 测 用 标 准 品 批 号 为 ２ ０ １ １ ７ ４ 、
保 管和提 供 。
１ ． ２ 动物 ２～３日龄健康 乳 鼠（ 清 洁级 ） ， 无 口蹄疫
死亡 。盲 传 乳 鼠观 察 ５ ｄ不 得 出现 口蹄 疫 症 状 和 死 亡 。将 灭 活 液 注 射 仔 猪 ２头 ， 每 头 耳 根 后 分 点
注射 共 ５ ｍ Ｉ 。仔 猪 观 察 ｌ ０ ｄ ， 不 得 出 现 口蹄 疫 症
２ ０ １ ７ 年（ 第５ ３ 卷） 第 ２期 ９ ７
悬 浮 培 养 与 传 统 工 艺 两 种 方 法 制备猪 Ｉ ３ ＇ 蹄 疫 疫 苗 的 质 量 比 较
贾智 丽
（ 包头轻工职业技术学院 ，内蒙占 包头 ｏ １ ４ ０ ３ ５ ） 摘要 ： 为 比较悬浮培养与转瓶培养生 产的猪 口蹄疫 疫苗 的质量 ， 通 过病毒 含量浸 ０ 定、 灭活检验 、 内毒 素 Hale Waihona Puke Baidu量测定 、 成 品 理 化性状 、 无菌检验 、 安全检验 、 效力检验等方 面开展试验 ， 以比较两种工艺的优缺点。根据 试验结果得 出， 经细胞悬 浮培养
性 在 我 国 ， 口蹄 疫属 于 一 类 动 物 传 染 病 。本 试 验 通 过对转 瓶 培 养 和 全 悬 浮 细 胞 培 养 生 产 的 猪 口蹄 疫疫 苗进 行 质量 检验 ， 来 比较 两 种 工 艺 下疫 苗 质 量
的优缺 点 ， 从 而为 口蹄 疫 疫 苗 生 产 的 升级 换 代 提 供
（ Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３株 ＋Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 ） 制造及检验规程 ， 灭 活 液 原样 接种 乳 鼠后 ， 观察 ７ ｄ不 得 出现 口蹄 疫 症 状 和
鼠毒经 Ｂ ＨＫ ２ ｌ细胞 传代适 应 的细胞 毒 ； 检 验用 毒种
为Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３株 和 Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 乳 鼠毒 ， 均 由 中 国农业 科 学 院兰 州兽 医研 究 所 国家 口蹄疫 参考 实 验 室 鉴 定 、
可靠 的 实验依 据 、
１ 材料 与方 法
１ ． １ 毒种
制 造 及检验 用 毒 种 为猪 口蹄疫 Ｏ型 病
毒Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３株 和 Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 。疫 苗 制 造 用 毒 种 为乳
低于 ｌ ０ ” Ｌ Ｄ 。
１ ． ４ ． ２ 灭 活 检 验 按 猪 口蹄 疫 Ｏ 型 灭 活 疫 苗
限公 司提供 ； Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ检测 用 Ｏ型 口蹄 疫 抗 体 液 相 阻 断检 测 试 剂盒 ， 批号为 ２ ０ １ ２ ０ ３ ｌ ６ ０ １ ， 由 中 国农 业 科 学院 兰州 兽医 研究 所提 供 。
鲎 试 剂批 号 为 １ ２ ０ ２ ０ ２ ２ ， 由广 东 湛 江 安度 斯 生 物 有
１ ． ４ ． ３ 内毒 素 含量 测 定 按 《 中华 人 民共 和 国 兽 药典 ￣ ２ ０ １ ０版 ¨ 检验 ， 内毒 素 含量应 ￣ ＜５ ０ Ｅ Ｕ ／ ｍＬ 。
１ ． ４ ． ４ 成 品理 化性 状 检 验 外 观性 状 、 剂型 、 稳 定 性、 黏度检 验 ， 符合 检验规 程 。 １ ． ４ ． ５ 无 菌 检 验 按 《 中 华 人 民共 和 国兽 药 典 》 ２ ０ １ ０版 三部 …检 验 。 １ ． ４ ． ６ 安 全 检 验 按 猪 口蹄 疫 Ｏ 型 灭 活 疫 苗 （ Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３株 ＋Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 ） 制造及检验规程 ， 用 体 重 （ ３ ５ ０～ ４ ５ ０ ） ｇ的 豚 鼠 ２只 ， 皮下注射疫 苗 ２ ． ０ ｍ Ｌ ； 用体 重 （ （ １ ８～ ２ ２ ） ｇ的小 鼠 ５只 ， 每 只皮下 注射 疫 苗 ０ ． ５ ｍ Ｌ 。连续 观 察 ７ ｄ ， 均 不 得 出 现 因注 射 疫 苗 引
后获得 的病 毒含量 、 制备疫苗效价 都有 明显 提高， 中间产品 内毒素含 量值有大 幅降低 ， 在实际接种 动物后 ， 会 大大降低 副反
应 发生率 ， 同时疫苗 的免疫效 价以及持续期均会有所 升高。表 明 ， 悬 浮培养工艺的疫苗质量高于转瓶培养工艺 。 关键词 ： 口蹄疫 ； 疫苗； 细胞悬浮培养 ； 转 瓶培养
种动物 性 传 染 病 ， 表 现 为急 性 、 热 性 和 高 度接 触
Ｍｕ ｅ ｎ ｃ ｈ法计算 Ｔ Ｃ Ｉ Ｄ 每０ ． １ ｍ Ｌ病 毒 含量 Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３ 株应不低 于 １ ０ Ｔ Ｃ Ｉ Ｄ ∞； Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 应 不 低 于 ｌ ０ Ｔ Ｃ Ｉ Ｄ Ｌ Ｄ ， 测定 ， 用 Ｐ Ｂ Ｓ或 细 胞 维 持 液 将 生 产 毒 液作 １ ０倍 系 列 稀 释 ， 取 １ ０～、 １ ０ ～、 ｌ ０ ３个 稀 释 度， 每个 稀释 度 颈 背 部 皮 下 接 种 ２～３ 日龄 乳 鼠 ４ 只， 每 只注 射 ０ ． ２ ｍ Ｌ 。观 察 ３～５ ｄ ， 根据 发病 死 亡 乳 鼠数按 Ｒ ｅ ｅ ｄ ． Ｍｕ ｅ ｎ ｃ ｈ法 计算 Ｌ Ｄ 每０ ． ２ ｍ Ｌ病 毒 含量 ， Ｏ Ｚ Ｋ ／ ９ ３株应 不 低 于 １ ０ Ｌ Ｄ Ｏ Ｒ ／ ８ ０株 应 不
中图 分 类 号 ： ￥ ８ ５ ８ ． ２ 文献标志码 ： Ｂ
文章编号 ： ０ ５ ２ ９ － ６ ０ ０ ５ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ２ － ０ ０ ９ ７ － ０ ３
口蹄 疫 （ Ｆ ＭＤ） 是 由 口蹄疫 病毒 （ Ｆ ＭＤ Ｖ） 引起 的
一
培养观察 ４ ８～７ ２ ｈ ， 根据 Ｃ Ｐ Ｅ产 生 情 况 按 Ｒ ｅ ｅ ｄ —
状 和 死亡 。
抗体的 ３ ０～ ４ ０ Ｅ ｌ 龄的健康 易感仔猪 ， 体重约 （ １ ８～ ２ ２ ） ｇ
健康小 鼠（ 清洁级 ） ， 体重 （ ３ ５ ｏ～ ４ ５ ０ ） ｇ豚鼠。 １ ． ３ 试剂 内毒 素 检 测 用 标 准 品 批 号 为 ２ ０ １ １ ７ ４ 、
保 管和提 供 。
１ ． ２ 动物 ２～３日龄健康 乳 鼠（ 清 洁级 ） ， 无 口蹄疫
死亡 。盲 传 乳 鼠观 察 ５ ｄ不 得 出现 口蹄 疫 症 状 和 死 亡 。将 灭 活 液 注 射 仔 猪 ２头 ， 每 头 耳 根 后 分 点
注射 共 ５ ｍ Ｉ 。仔 猪 观 察 ｌ ０ ｄ ， 不 得 出 现 口蹄 疫 症