植物多倍体的诱导
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
秋水仙素诱导植物多倍体实验
——第四组
实 验 原 理
02 01 03
ห้องสมุดไป่ตู้
实 验 步 骤
04 05
实 验 目 的
实 验 用 品
预 期 实 验 结 果
一、实验目的
• 1、掌握植物多倍体人工诱导技术及多倍体 鉴定方法；
• 2、了解人工诱发多倍体植物的原理、方法 及其在植物育种上的作用； • 3、观察多倍体植物，鉴别植物染色体数目 的变化及引起植物其他器官的变异情况
三、实验用品
1.实验材料 洋葱（2n=16）
2.器具 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、剪刀 、镊子、解剖针、小试管、刀片、载玻片、 盖玻片、烧杯等。 3.试剂 0.02%秋水仙素，无水乙醇，冰醋酸，1% 盐酸，龙胆紫染液
四、实验步骤
1.培养材料
2. 固定
用蒸馏水冲洗根尖2 次 , 切取根尖末端 0.51cm 投入卡诺氏固定 液(无水乙醇:冰醋酸 =3:1) 烧杯中, 固定 2h 。
剪去洋葱的老根，置 于清水中发根，然后 转 移 到 0.02% 秋 水仙 素中培养， 25℃培养， 直到根尖膨大并长长。
5.染色
在载片上切取根尖膨 大处的前部(呈乳白色 的区域 ), 用镊子 ( 或另 一 载片 ) 将 其挤 碎 , 在 载片上有材料之处加 一滴龙胆紫染液, 染色 8~10 min。
6.压片
覆一盖片, 用铅笔硬头 敲击压片, 然后隔吸水 纸用拇指展平,吸去多 余染液。
7.观察
低倍镜下寻找染色体 分散良好的分裂相,换 高倍镜观察染色体数 目。
五、预期实验结果
• 正常洋葱根尖细胞染色体： 秋水仙素处理后洋葱根尖 细胞染色体：
2n=4x=32
2n=16
2n=8x=64
六、注意事项
二、实验原理
• 秋水仙素的作用在于阻止分裂细胞形成纺锤丝 ，而对染色体的结构和复制无显著影响。若浓 度适合，药物在细胞中扩散后，不致发生严重 的毒害，细胞经一定时期后仍可恢复正常，继 续分裂，只是染色体数目加倍成为多倍性细胞 ，并在此基础上进一步发育成为多倍体植物。 • 秋水仙素因有剧毒，故使用时要特别注意，切 勿使药液进入眼内或口中。
3.洗涤
用无水乙醇配出 50% 的 乙 醇 ， 一 取出固定 完毕的根尖先用50% 的乙醇浸泡 5min ，用 蒸馏水浸洗2次，每 次5~10min。
4.解离
先将1%盐酸放在试管中置 60 ℃水浴锅中预热，然后 把洗涤干净的根尖转移至 预热的试管中进行解离 10min （ 以 根 尖 伸 长 区 透 明、分生区呈乳白色时停 止解离为宜），然后加水 浸洗2次每次5min。
• （1）培养洋葱根尖时，水不可放多，待根尖长出后，使根 尖分生区接触到水面即可；水至少一天一换，若有浑浊，立 即更换。 • （2）剪下洋葱根尖时注意时间，正午时分最合适，因为此 时洋葱根尖分生区有丝分裂最为活跃，此时固定，可以观察 到最多的分裂相。 • （3）解离时间要控制好，时间太短，效果不够；时间太长 ，解离过度破坏细胞。 • （4）漂洗不能少，染色时间要足够，否则染色不够深影响 观察，但染色时间过长则细胞质也会部分被染色，影响观察 效果 • （5）压片对于最终效果来说十分关键，需要尽力并用上多 种手段，但是切记只可纵向压，不可横向搓。
七、思考题
1 .绘制你所看到的洋葱根尖处理的细胞 分裂中期染色体图像？ 2.根尖经秋水仙素处理之后为什么会发 生膨大?
——第四组
实 验 原 理
02 01 03
ห้องสมุดไป่ตู้
实 验 步 骤
04 05
实 验 目 的
实 验 用 品
预 期 实 验 结 果
一、实验目的
• 1、掌握植物多倍体人工诱导技术及多倍体 鉴定方法；
• 2、了解人工诱发多倍体植物的原理、方法 及其在植物育种上的作用； • 3、观察多倍体植物，鉴别植物染色体数目 的变化及引起植物其他器官的变异情况
三、实验用品
1.实验材料 洋葱（2n=16）
2.器具 显微镜、恒温培养箱、恒温水浴锅、剪刀 、镊子、解剖针、小试管、刀片、载玻片、 盖玻片、烧杯等。 3.试剂 0.02%秋水仙素，无水乙醇，冰醋酸，1% 盐酸，龙胆紫染液
四、实验步骤
1.培养材料
2. 固定
用蒸馏水冲洗根尖2 次 , 切取根尖末端 0.51cm 投入卡诺氏固定 液(无水乙醇:冰醋酸 =3:1) 烧杯中, 固定 2h 。
剪去洋葱的老根，置 于清水中发根，然后 转 移 到 0.02% 秋 水仙 素中培养， 25℃培养， 直到根尖膨大并长长。
5.染色
在载片上切取根尖膨 大处的前部(呈乳白色 的区域 ), 用镊子 ( 或另 一 载片 ) 将 其挤 碎 , 在 载片上有材料之处加 一滴龙胆紫染液, 染色 8~10 min。
6.压片
覆一盖片, 用铅笔硬头 敲击压片, 然后隔吸水 纸用拇指展平,吸去多 余染液。
7.观察
低倍镜下寻找染色体 分散良好的分裂相,换 高倍镜观察染色体数 目。
五、预期实验结果
• 正常洋葱根尖细胞染色体： 秋水仙素处理后洋葱根尖 细胞染色体：
2n=4x=32
2n=16
2n=8x=64
六、注意事项
二、实验原理
• 秋水仙素的作用在于阻止分裂细胞形成纺锤丝 ，而对染色体的结构和复制无显著影响。若浓 度适合，药物在细胞中扩散后，不致发生严重 的毒害，细胞经一定时期后仍可恢复正常，继 续分裂，只是染色体数目加倍成为多倍性细胞 ，并在此基础上进一步发育成为多倍体植物。 • 秋水仙素因有剧毒，故使用时要特别注意，切 勿使药液进入眼内或口中。
3.洗涤
用无水乙醇配出 50% 的 乙 醇 ， 一 取出固定 完毕的根尖先用50% 的乙醇浸泡 5min ，用 蒸馏水浸洗2次，每 次5~10min。
4.解离
先将1%盐酸放在试管中置 60 ℃水浴锅中预热，然后 把洗涤干净的根尖转移至 预热的试管中进行解离 10min （ 以 根 尖 伸 长 区 透 明、分生区呈乳白色时停 止解离为宜），然后加水 浸洗2次每次5min。
• （1）培养洋葱根尖时，水不可放多，待根尖长出后，使根 尖分生区接触到水面即可；水至少一天一换，若有浑浊，立 即更换。 • （2）剪下洋葱根尖时注意时间，正午时分最合适，因为此 时洋葱根尖分生区有丝分裂最为活跃，此时固定，可以观察 到最多的分裂相。 • （3）解离时间要控制好，时间太短，效果不够；时间太长 ，解离过度破坏细胞。 • （4）漂洗不能少，染色时间要足够，否则染色不够深影响 观察，但染色时间过长则细胞质也会部分被染色，影响观察 效果 • （5）压片对于最终效果来说十分关键，需要尽力并用上多 种手段，但是切记只可纵向压，不可横向搓。
七、思考题
1 .绘制你所看到的洋葱根尖处理的细胞 分裂中期染色体图像？ 2.根尖经秋水仙素处理之后为什么会发 生膨大?