血清4型禽腺病毒病诊断技术

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腺病毒的检测与鉴别技术简介

为鸭腺病毒Ｉ（ＤＡＶ１１。据流行病学显示，此病毒最初有可
１形态和分类
（１）腺病毒是直径在７０ — １００ｎｍ的无囊膜廿面体粒子。主要的结构蛋白是六邻粒上的纤丝。所有哺乳动物腺病毒只有一条连在五邻粒上的纤丝，而ＦＡＶ有一独特的形态，每个五邻粒上有两条纤丝。纤丝的顶端是蛋白远端的Ｃ末端部分，带有特异ｖ抗原，它具有相应的血凝活
关病原体的直接检测。和其它病毒一样，对腺病毒诊断所选择的方法亦是ＰＣＲ。因此，本文主要讨论腺病毒的直接检测和媒剂的识别。腺病毒（ＦＡＶ）是一种多血清群病原体，它给禽业生产带来了各种困扰。在很长一段时间内，诊断腺病毒感染绝大部分局限于各种血清学方法，近年来，有报道用限
腺病毒科分为哺乳动物腺病毒和禽腺病毒两个属。有关病毒的形态、基因的长度、基因的组成等与鉴别相关的病毒特征各型腺病毒是不同的。因此，鸡腺病毒、火鸡的出血性肠炎病毒和减蛋病毒等腺病毒的鉴别由于经济价值的原因而具有不同的意义。由于腺病毒抗体的产生，血清学方法成为腺病毒诊断中的重要方法之～。
能经污染的疫苗传入鸡群的。本病已经在欧洲、亚洲和南美洲的许多国家有所报道。
性。六邻粒蛋白是确定无囊膜廿面体病毒属型、群还是
特异亚群的主要壳蛋白。（２）病毒粒子含有２５，－－４３．８ｋｐｂ大小不等的基因片断。根据排序资料和基因组的构成，腺病毒的最终分类还在讨论之中，但有许多报道建议将其分为三个不同的属。基因序列的研究与分子学诊断有直接的关系，因为它为创建核酸探针、寡核苷酸等工具提供了必要的基因信息。（３）腺病毒分为三个不同的群反应了该病毒生物学的多样性。Ｉ群腺病毒包括从鸡、火

安卡拉病诊治与防控

2021年第2期吉林畜牧兽医·禽业专栏·QinYe ZhuanLan安卡拉病诊治与防控王三立河北省廊坊市廊坊职业技术学院，河北廊坊 065001摘要：安卡拉病主要病变是心包积液、心室扩张；肝脏肿大、变脆，有大小不等的出血斑；HE染色病理切片，观察到肝细胞内包涵体可基本确诊。

尽早注射抗体是最有效的治疗方法，同时防止继发感染、利尿强心、保肝护肾、抗应激反应、提高免疫力。

规范肉杂鸡雏生产、改善饲养环境条件、严格落实兽医卫生防疫制度、做好种鸡和商品仔鸡的疫苗免疫等是防控本病的重要措施。

关键词：安卡拉病；诊断；肉仔鸡；防控近年来，以禽腺病毒属（I亚群禽腺病毒）禽腺病毒血清IV(FAV-4)为主要病原引起的安卡拉病[1]成为常发病，多发于肉仔鸡，青年蛋鸡和成年蛋鸡也有发生。

发病日龄越早，死淘率越高，死淘率达30%～60%，造成较大的经济损失。

1 流行特点本病多发生于3～6周龄的肉仔鸡，1周龄左右也见发病，肉杂鸡发病显著高于快大型白羽肉仔鸡，病程长达一周以上，日死亡率达2%～3%，死淘率达20%～30%。

发病日龄越小，死淘率越高；与传染性法氏囊炎、球虫混发较为常见，死淘率增加，死淘率达50～60%。

蛋鸡主要发生在25～80日龄的青年鸡，没有基础免疫的青年鸡一旦出现心包积液死亡率都在30%以上。

300日龄左右的产蛋鸡也有发生，但死亡率低。

2 临床症状本病发病急，死亡快。

发病鸡群前期采食不见明显下降，鸡群精神状态没有明显变化，基本没有呼吸道症状，粪便稀，发黄或发绿。

鸡只突然发病，表现症状后仅几小时即死亡，可见病鸡委顿，蹲伏，羽毛蓬松，冠髯和面部皮肤苍白，排黄绿色稀便。

发病鸡群初期表现为死亡突然增高，3～5 d内出现成批死亡，持续1～2周后逐渐恢复正常。

3 剖检变化剖检病变主要在心脏、肝脏、肾脏和肺脏。

心脏特征：心包蓄积大量黄色液体，严重者心包膨胀如气球状，心室扩张，心肌松软脆弱。

少数出现心包内黄色液体呈胶冻状，剥离心包后，心脏形似荔枝。

禽腺病毒的结构及其血清4型检测方法研究进展

禽腺病毒的结构及其血清4型检测方法研究进展
王凯莉;刘成;楚肖冉;司振书;路建彪;李玉保;曹胜亮
【期刊名称】《动物医学进展》
【年(卷),期】2023(44)1
【摘要】近年来,由血清4型禽腺病毒引起的肝炎-心包积液综合征给养禽业带来严重的经济损失,该病毒的主要结构蛋白有六邻体、纤突和五邻体,可通过琼脂胶聚免疫扩散试验(AGIDT)、聚合酶链反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等进行诊断,其中聚合酶链反应是最常用的分子生物学诊断方法;血清学检测方法中将禽腺病毒重组蛋白作为包被抗原建立的ELISA方法最为常用。

论文对禽腺病毒基因组和蛋白结构及FAdV-4检测方法进行了综述,以期为该病的快速检测及科学防控提供理论和技术支持。

【总页数】6页(P111-116)
【作者】王凯莉;刘成;楚肖冉;司振书;路建彪;李玉保;曹胜亮
【作者单位】聊城大学农学院
【正文语种】中文
【中图分类】S852.659.1;S852.657
【相关文献】
1.Ⅰ群禽腺病毒血清4型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
2.禽腺病毒血清4型纳米PCR检测方法的建立与初步应用
3.禽腺病毒血清4型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
4.血清4型禽腺病毒POCT荧光微
球免疫层析检测方法的建立5.禽腺病毒血清4型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用
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禽腺病毒4型感染的诊断与防制

禽腺病毒4型感染的诊断与防制作者：张磊张宇李巧杨兴武张鸿鑫陈红英来源：《安徽农学通报》2016年第10期摘要：2015年8月，河南新郑某鸡场30日龄肉鸡突然出现死亡。

病死鸡心包内存在大量积液，肝脏充血、肿大。

PCR检测禽腺病毒4型核酸，呈现阳性，结合发病情况和剖检病变，诊断为禽腺病毒4型感染。

然后对该鸡场采取了综合防制措施，取得了较好的效果。

关键词：心包积液；禽腺病毒4型；诊断；防制中图分类号 S852.65 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2016）10-0116-02Diagnosis and Preventive Treatment of Fowl Adenovirus-4 InfectionZhang Lei1，2 et al.（1College of Animal Science and Veterinary Medicine，Henan Agricultural University，Zhengzhou 450002，China；2Henan Vocational College of Agriculture，Zhengzhou 451450，China）Abstract：In August 2015，some thirty-day-old broilers in Henan Province were affected with a disease characterized by an accumulation of near-amber fluid in the pericardial sac and an enlarged discolored liver with foci of hemorrhage. Fowl adenovirus-4 was positive for PCR detection. Combined with the epidemiology investigation，and autopsy results，infection of fowl adenovirus-4 was diagnosed. Then the situation had been effectively controlled by the integrated prevention measures.Key words：Hydropericardium；Fowl adenovirus-4；Diagnosis；Preventive treatment禽心包积水-包涵体肝炎综合征（Hydropericardium Syndrome-Inclusion Body Hepatitis，HPS-IBH）是主要由禽腺病毒4型（Fowl Adenovirus-4，FAV-4）引起的一种高度传染性和高死亡率的新型家禽疾病。

血清4型禽腺病毒对SPF鸡的致病特性及其排毒规律

52中国兽医杂志2020年(第56卷)第10期Chinese Journal of V eterinaj Medicine血清4型禽腺病毒对SPF鸡的致病特性及其排毒规律殷国政，王凯莉，刘成，路建彪，吴昊，李玉保，司振书(聊城大学农学院，山东聊城252059)摘要:为研究血清4型禽腺病毒(FAdVP)的致病性及传播途径，采用FAdVP分离株(SDLC201601"人工感染SPF鸡,利用病学及PCR方法,检测感染组鸡器官的病理学变化、病毒在器官的分布及排毒情况。

，感染组鸡与未感染同居组鸡分别在感染后3d和4d死亡,且死亡率均为60%&感染组死亡鸡肝脏、心脏、肺脏及肾脏等器官病变;感染组死亡鸡的肝脏、心脏、脾脏、胰、小肠、肾脏等脏器均检测到该病毒阳性;感染组鸡于感染后3d泄殖腔拭子检测病毒阳性,感染后7d头拭子检测病毒阳性。

，该病毒株感染性强，具一定的泛嗜性，致死率高，水平传播能力强，泄排毒是其最的排毒，做好排泄物的消毒控制该病尤为％关键词:血清4型禽腺病毒；心-肝炎征；病学；排毒中图分类号：R511.8文献标志码:A文章编号：0529—6005(2020)10—0052—03Pathogenicity and Excretion of Serotype4Fowl Adenovirus inSpecific Pathogen Free ChickensYIN Guv-zheng，WANG Kyi-Ji，LIN Cheng，LU Jian-biav，WU Hav，LI Yu-bav，SI Zhen-shu(Institude of Ag/culture，Liaocheng University，Liaocheng252059，China) Abstraci:To evvluate the pathogenicity and transmission mechanism of serotype4fowl adenovirus(FAdVP)，the FAdVP strain (SDLC201601)wasused ioineeciSPFchickensaoiieiciay.Hisiopaihoogica,changes，and viousii s uedisioibuiion and eicoeiion weoedeiecied byihemeihodsoehisiopaihoogyand PCR.Deaihsoccu o ed ai3and4daysaeieoineeciion in ineecied gooup and in ihe gooup unineecied buiived iogeiheo，oespeciivey，and ihe mo oia i iy oa ie was60%.The main auiopsy esionsweoeobseoved in iveo，heaoi，,ungand kidneyin ihedead chickens.DNA oeFAdV-4waseound in vaoiousvisceoaoeihedead chickenseoom iheineecied gooup，inc,uding iveo，heaoi，sp een，pancoeas，sma,iniesiineand kidney.DNA oeFAdV-4wasdeiecied in coacaswab oeineecied gooup chicken eoom3daysaeieoineeciion and in ioachea,swab eoom7daysaeieoineeciion.Theoesu isshowed ihaiihevioussioain was highly pathogenic，pantmpicaCy，highly lethaCty rate and strong ho/zontal transmission.The cloacal was the most important way of eicoeiion.Topoeveniihedisease，disineeciion oeeicoeiaispaoiicueaoe impooiani.Key wordt:serotype4fowl adenovirus；HHS；pathological histology；excretionCorresponding authort:LI Yu-bao，E-mail:***************.cn；SI Zhen-shu，E-mail:**************禽腺病毒(Fowl adenovims，FAdV)属于腺病毒科(AdenoviTdav)，禽腺病毒属(Aviadenovirus)%根据限制性酶切和交叉中和试验将其分为5个种(FAdV琼〜FAdVP)和12个血清型(FAdVP〜8a，收稿日期：2019—03—04基金项目：山东省自然科学基金(ZR2016CM40)；聊城大学博士启动基金(318051310)&聊城大学科研基金(318011503)；国家大学生创新创业训练项目(201610447031)；山东省重点研发计划(公益类)项目(2019GNC106082)作者简介:殷国政(1991-)，男，硕士生,从事家禽疫病诊断与防控技术研究工作，E-mail:1029165099@通讯作者:李玉保，E-mail：1i yuboo@；司振书，E-mail: **************8b~FAdV-11)[1]，其中FAdVP可引起鸡心包积液-肝炎综合征(Hydmpe/cardium-hepatitis syndmma，HHS)O1987年巴基斯坦的报道了该病,主要病为心和肝脏性坏死[2]o2015年以来HHS在我国河南、河北、山东、江苏、、广东等地和流行，鸡业带了的经济损失魚。

禽腺病毒病的诊断与防控

禽腺病毒病的诊断与防控禽腺病毒病（Avian adenovirus disease）是由禽腺病毒引起的一种禽类传染病。

本文将介绍禽腺病毒病的诊断方法以及预防控制措施。

禽腺病毒病的诊断方法主要包括临床症状观察、病理学观察、病毒学检测和免疫学检测等。

通过临床症状观察可以初步判断禽类是否感染了禽腺病毒。

禽腺病毒感染的禽类常常出现呼吸道症状，比如喷嚏、鼻泡、喉结炎等，还可引起肠道症状，如拉稀、腹泻等。

进行病理学观察可以进一步确认禽腺病毒感染。

病理学观察主要是通过解剖禽类尸体，观察禽类器官的病变情况。

禽腺病毒感染会导致禽类肠道的病变，如出血、溃疡等，还可引起呼吸道和消化道的病变。

对禽类进行病毒学检测是确诊禽腺病毒病的重要手段。

病毒学检测主要采用反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，通过检测禽类体内的病毒基因来确定是否感染了禽腺病毒。

通过免疫学检测可以了解禽类是否对禽腺病毒有免疫力。

免疫学检测主要包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和中和试验等。

这些检测方法可以检测禽类血清中的抗体水平，判断禽类对禽腺病毒的免疫状况。

针对禽腺病毒病的防控，首先要严格管理禽类的饲养环境，保持环境卫生和饲养设施的清洁。

禽腺病毒容易在脏污环境中存活和传播，因此保持饲养环境的卫生对预防禽腺病毒病至关重要。

加强禽类免疫力的提高也是防控禽腺病毒病的重要措施。

通过给禽类接种相关疫苗可以增加禽类对禽腺病毒的抵抗力，减少禽类感染禽腺病毒的风险。

禽类的健康监测也是防控禽腺病毒病的重要手段。

定期对禽类进行临床观察和病原学检测，及时发现禽腺病毒感染的禽类，并采取相应的措施进行隔离和治疗。

禽腺病毒病的诊断主要通过临床症状观察、病理学观察、病毒学检测和免疫学检测等方法进行。

而预防控制禽腺病毒病的关键措施包括加强禽类饲养环境的管理、提高禽类的免疫力以及进行健康监测等。

Ⅰ群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法的建立

Ⅰ群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法的建立张启龙;孙丹;韦海涛;宋彦军;周德刚;冯小宇;王林【摘要】利用纯化的Ⅰ 群禽腺病毒4型重组Hexon蛋白,通过各反应条件筛选,建立了Ⅰ 群禽腺病毒4型IgG抗体间接ELISA检测方法.结果显示,抗原最佳包被浓度为1μg/mL;最佳封闭液为1％牛血清白蛋白;待检血清最佳作用浓度是400倍稀释,37℃孵育60 min;酶标抗体的最佳作用条件为稀释度1:8000,37℃孵育60 min;最佳显色时间为10 min.用所建方法对160只临床鸡只进行检测,同时与拭子PCR检测对比,一致性较好,表明该方法可有效用于临床检测.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2019(053)008【总页数】7页(P1-7)【关键词】Ⅰ群禽腺病毒4型;Hexon蛋白;间接ELISA;检测【作者】张启龙;孙丹;韦海涛;宋彦军;周德刚;冯小宇;王林【作者单位】北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629;北京市兽药监察所,北京102629;北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629;北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629;北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629;北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629;北京市动物疫病预防控制中心,北京 102629【正文语种】中文【中图分类】S852.65肝炎-心包积液综合征(Hepatitis and hydropericardium syndrome，HHS)是由禽腺病毒4型(Fowl adenovirus serotype 4, FAdV-4)新基因型引起的以禽心包积液、肝脏黄染、肿大和出血为特征的传染病[1]。

HHS首次于1987年在巴基斯坦的安卡拉地区发生，又名安卡拉病，随后在亚洲、欧洲和南美洲等地区流行[2-4]。

2013年以来该病在我国河南、山东、江苏、河北、陕西等地大面积流行，给家禽养殖业造成了巨大经济损失[5-7]。

禽腺病毒病的诊断与防控

禽腺病毒病的诊断与防控禽腺病毒病（IBD）是一种由禽腺病毒引起的急性、亚急性或慢性传染病，主要发生在家禽中，如鸡、鸭、鹅等。

禽腺病毒病对家禽养殖业造成了很大的危害，因此对其进行及时的诊断与防控是十分重要的。

一、禽腺病毒病的病原学特点禽腺病毒（IBDV）是一种属于双链RNA病毒的禽疫病毒。

它主要通过粪口途径传播，感染后会在淋巴系统内复制，并引起免疫抑制和淋巴器官的明显病变。

感染禽腺病毒的鸡群出现不同程度的免疫抑制，导致次生感染的发生率增加，严重时可能导致鸡群大规模死亡。

二、禽腺病毒病的临床症状禽腺病毒病的临床症状多种多样，主要表现为急性型和慢性型两种。

1. 急性型：主要表现为鸡群突然死亡，发病率可高达20-30%，患病鸡在发病后呈现明显的疲惫、食欲不振、腹泻、呼吸困难等症状，死亡率较高。

2. 慢性型：表现为生长缓慢、体重减轻、肝脾肿大、腹泻等症状，严重时可导致早衰、贫血、免疫抑制等并发症。

三、禽腺病毒病的诊断方法1. 临床症状：通过观察鸡群的临床症状，包括死亡率、生长情况、腹泻情况、肝脾肿大等来初步判断是否有禽腺病毒病的可能。

2. 病原学检测：采集患病鸡的粪便、肠道组织等样本，通过PCR、ELISA等分子生物学方法来检测禽腺病毒的存在。

3. 病理学检测：对死亡或临床表现异常的鸡进行尸检，并对病变组织进行病理学检测，观察组织病变的情况来辅助诊断。

四、禽腺病毒病的防控措施1. 加强饲养管理：做好饲养环境的清洁卫生工作，保持饲养场所的通风和干燥，避免交叉感染。

2. 合理饲料营养：合理配制饲料，保证饲料的全价营养，提高鸡群的免疫力。

3. 疫苗预防：目前已有有效的禽腺病疫苗可供使用，可根据鸡龄和养殖环境合理选用疫苗进行预防接种。

4. 限制活动范围：对于患病鸡舍采取限制活动范围，避免交叉感染。

5. 多种预防：对于鸡群进行多种预防措施，包括预防感染、提高免疫力等。

禽腺病毒病的诊断与防控工作是十分重要的，只有通过及时的诊断和有效的防控措施，才能有效避免该疾病的危害，确保禽类养殖业的稳定发展。

蛋鸡腺病毒病的诊断及防控措施

收稿日期：2021-06-07作者简介：张春飞（1971-），男，湖北浠水人，副高级兽医师，主要从事畜牧兽医技术推广工作，（电话）189********。

腺病毒属腺病毒科腺病毒属，最早于1956年被正式命名，目前已经成为家禽常见传染病之一。

禽腺病毒属的血清型不同于其他属腺病毒，其不仅感染禽类，而且会引起禽类各种疾病。

根据禽腺病毒群特异性抗原的不同可将禽腺病毒分为3个类群：Ⅰ群禽腺病毒包括传统的禽腺病毒，其中从鸡群中分离的Ⅰ群禽腺病毒共有12个血清型，是鸡、鸭、鹅等禽类常见的传染性病原；Ⅱ群禽腺病毒与Ⅰ群禽腺病毒无抗原相关性，主要代表毒株有火鸡出血性肠炎病毒、大理石脾病毒及鸡大脾病毒等；Ⅲ群禽腺病毒主要是从具有产蛋下降综合征症状家禽体内分离得到的一群腺病毒，目前只有一个代表株成员，即蛋鸡产蛋下降综合征病毒［1］。

1流行现状及临床表现多数禽腺病毒可在健康家禽体内存在并复制，不表现临床症状或症状非常轻微。

但近几年来，蛋鸡腺病毒呈突变趋势，黄冈市及周边蛋鸡场时有该病发生，表现为产蛋率突然下降，急性感染且死亡率很高，临床解剖可见典型的心包积水和包涵体症状，临床上分离的病死鸡病原大多为血清4型腺病毒［2］。

鸡产蛋下降综合征是由Ⅲ群禽腺病毒引起的一种以产蛋母鸡产蛋率下降为典型特征的传染病。

随着疫苗的推广应用，该病的发病率有所下降。

病鸡一般无明显的病理变化，一般表现为卵巢发育不良和输卵管萎缩，少数病鸡出现子宫黏膜水肿，子宫腔内有灰白色的渗出物，卵泡变性或出血等现象。

Ⅲ群禽腺病毒的自然宿主有鸭、鹅和多种鸟类，但这些宿主感染后都不表现临床症状。

蛋鸡感染后会引起产蛋下降综合征，一般多发于24~26周龄。

雏鸡也可以感染，但不表现临床症状，生长发育也不受影响，血清抗体为阴性，直到开产前其血清抗体才转为阳性，进入产蛋期后产蛋率下降达20%~30%，甚至可达50%。

同时畸形蛋的数量增加，鸡蛋品质下降，种蛋的孵化率下降，减蛋的持续时间为4~10周，随后可逐渐恢复。

禽腺病毒病的诊断与防控

禽腺病毒病的诊断与防控禽腺病毒病是由禽腺病毒感染引起的一种严重传染病，主要感染家禽，包括鸡、鸭、鹅等。

禽腺病毒病具有高度传染性和致死性，对养殖业造成了严重的经济损失。

为了有效诊断和防控禽腺病毒病，以下将介绍其诊断和防控的方法。

1.临床症状观察：禽腺病毒病主要存在呼吸道、消化道、神经系统等感染症状。

养殖者可以通过观察禽类的临床症状，如呼吸急促、鼻腔和眼部分泌物增多、腹泻、四肢无力、瘫痪等，来初步判断是否患有禽腺病毒病。

2.病理学观察：禽腺病毒感染后，会引起病鸟的器官损伤，病理学观察可以通过对病鸟死后进行解剖和组织学检查来确认禽腺病毒病的诊断。

常见病理学变化包括腺体肿大、水肿、坏死等。

3.实验室检测：禽腺病毒病的确诊需要进行实验室检测，常见的方法包括病毒分离和鉴定、血清学检测和分子生物学技术检测。

病毒分离和鉴定是通过将病鸟的支气管、肠道或是器官组织接种到白细胞小鼠、禽胚或鸟胚细胞，观察是否能分离出禽腺病毒。

血清学检测是通过血清学方法来检测病鸟的血液，如凝集试验、血清特异性中和试验等，来判断病鸟是否感染了禽腺病毒。

分子生物学技术检测是通过PCR、RT-PCR等方法，检测病鸟体内的禽腺病毒的核酸。

1.加强养殖环境管理：维持良好的养殖环境对禽腺病毒病的防控至关重要。

养殖场应该保持清洁卫生，加强消毒工作，定期清理禽舍，做好禽舍的通风、排湿、防寒等工作。

2.做好禽类的防疫接种：禽腺病毒病的防控中，疫苗接种是最重要的措施之一。

养殖者应按照规定的时间和剂量，对禽类进行禽腺病毒病疫苗的接种，提高禽类的免疫力。

3.禽类的隔离和检疫：禽类的隔离和检疫是预防禽腺病毒病传播的重要手段，对引进的禽类要进行隔离观察和做好相关检疫工作，以防止病毒的传播。

4.常规监测和报告：养殖者应定期对禽类进行常规监测，检测禽类是否患有禽腺病毒病。

一旦发现感染，应及时报告当地畜牧部门，以便及时采取措施防止疫情扩大。

总结：禽腺病毒病的诊断和防控是保障禽类养殖健康发展的关键。

DB13_T2593-2017禽腺病毒4型PCR检测方法

ICS11.220B 43 DB13 河北省地方标准DB13/T 2593—2017 禽腺病毒4型PCR检测方法2017-11-22发布2017-12-22实施前言本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。

本标准由河北农业大学提出。

本标准起草单位：河北农业大学。

本标准主要起草人：袁万哲、王建昌、孙继国、刘聚祥、李丽敏、陈立功、李睿文、张磊、白云、陈赛娟、李杰峰。

禽腺病毒4型PCR检测方法1 范围本标准规定了禽腺病毒4型PCR检测方法的技术要求。

本标准适用于检测家禽咽喉拭子、肛拭子，发病禽组织和这些采集样品培养物中的禽腺病毒4型。

2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。

2.1DNA脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid）2.2EB溴化乙锭（ethidium bromide）2.3PCR聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）2.4dNTP脱氧核苷酸三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate）3 试剂或材料包括各种市售病毒核酸提取试剂盒，1.0%琼脂糖凝胶，50×TAE缓冲液，溴化乙锭（EB，10 ug/μL）或核酸染料，焦碳酸二乙酯（DEPC）处理的灭菌的双蒸水，DNA分子量标准（100 bp），2×Taq MasterMix 或商品化的一步法PCR反应试剂。

警示:电泳中用到的EB在操作中应戴手套和口罩。

试验中被EB污染的物品要进行无害化处理；DEPC 在操作中应在通风条件下进行，使用时戴手套和口罩，不小心沾到皮肤应立即冲洗。

3.1 病毒核酸提取试剂盒。

3.2 1.0 %琼脂糖凝胶，配制方法见附录A中A.1。

3.3 50×TAE缓冲液，配制方法见附录A中A.2。

3.4 溴化乙锭（EB，10 ug/μL）或核酸染料，配制方法见附录A中A.3。

3.5 焦碳酸二乙酯（DEPC）处理的灭菌的双蒸水，配制方法见附录A中A.4。

禽Ⅰ群腺病毒血清4型感染的诊断与防治

图1 病死鸡心包积液、肝色浅质脆、肿大充血二、病理剖检病变IBH 特征性病理剖检变化表现在肝脏和骨髓。

肝脏肿大，边缘钝圆，表面有不同程度的出血点或条索状出血斑，质脆，褪色，呈淡黄色，胆囊充盈，内有大量胆汁淤积。

偶尔可见肝脏有大小不一的坏死灶，并伴随血细胞浸润，使肝脏触之有凹凸不平的感觉。

骨髓呈灰白色或黄色胶冻样病变、体积变小，法氏囊萎缩，内膜有出血点或出血斑，且切面无光泽。

胸腺点状出血、萎缩、且颜色变深。

脾脏体积变化不大，偶见个别病例脾脏肿大、出血。

肾脏呈灰白色、肿大，表面有癖斑和疲点。

肺充血、水肿，除此之外，可见大腿部肌肉、胸肌以及皮下组织图2 病死鸡的心、肝、法氏囊、肾、脾、肺病理切片四、实验室诊断1.引物的设计合成。

根据 GenBank 中已发表的Ⅰ群禽腺病毒 Hexon 基因核酸序列设计完成两对引物，预计扩增片段为500 bp。

上游引物为P1: 5'CGAGGTCTATACCAACACG-AGCA-3';下游引物为P2: 5'-CGGCGCAGG TTAA-TGAAGTTATC-3'。

引物由吉林库美生物工程技术有限公司合成。

2.病毒分离与鉴定。

取疑似鸡包涵体肝炎病鸡的肝脏剪碎，按 1∶5（W/V）比例加入灭菌PBS进行匀浆处理，将匀浆液反复冻融 3次，4 000 r/min离心30 min，取上清液备用。

上清液中加双抗（青霉素、链霉素）各3 000 U/ml，置4℃过夜，以8 000 r/min离心10 min，取制备的上清液以卵黄囊途径接种5日龄SPF 鸡胚，0.2 ml/胚，于 37℃孵育，每日观察2次，收获 24～144 h内死亡的鸡胚尿囊液，收集死胚尿囊液，进行HA试验及PCR鉴定。

3.病毒DNA的提取及PCR扩增。

病毒液采用TaKaRa MiniBEST Viral RNA DNA Extraction Kit Ver.5.0 提取试剂盒，按说明书进行病毒DNA的提取。

血清4型禽腺病毒研究进展

血清4型禽腺病毒研究进展朱庆贺;张鹏宇;王观悦;王爽;陈曦;杨旭东;史同瑞【摘要】近年来,血清4型禽腺病毒( FAdV-4)在我国爆发,造成家禽行业严重的经济损失.病毒感染引起死亡率高,临床剖检可见明显的心包积液综合征的症状.病毒极具传染性,可垂直及水平传播,通过受感染肝脏组织匀浆可以分离和检测病毒.目前实验室诊断主要通过琼脂扩散试验、酶联免疫吸附试验、限制酶分析、聚合酶链式反应、实时荧光定量PCR、高分辨率的融化曲线分析等进行检测.疾病预防主要通过灭活疫苗的接种,而减毒活疫苗和亚单位疫苗也相继被开发.对FAdV-4的流行病学、发病特征、病毒诊断方法以及预防策略等方面进行了综述,以期为FAdV-4的深入研究奠定基础.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2018(052)011【总页数】6页(P80-85)【关键词】4型禽腺病毒;流行;诊断;疫苗【作者】朱庆贺;张鹏宇;王观悦;王爽;陈曦;杨旭东;史同瑞【作者单位】黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江八一农垦大学,黑龙江大庆163000;黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000;黑龙江省兽医科学研究所,黑龙江齐齐哈尔161000【正文语种】中文【中图分类】S852.654型禽腺病毒（Fowl avianadenovirus serotype 4，FAdV-4）主要是以心包积水为主要临床症状的鸡急性传染病，临床中又称为“鸡心包积水综合征（Hydropericardium syndrome，HPS）”。

该病发病急，传播速度快，主要引起4～8周龄肉鸡感染，死亡率可达40%～90%。

该病最早于巴基斯坦的安卡拉被报道，由此又成为“安卡拉病”。

近年来，我国河南、山东、安徽、辽宁、吉林、江西和湖北等省份出现大面积爆发，给我国养鸡业造成了严重的经济损失。

一起来航鸡感染禽4_型腺病毒的诊断

4532023一起来航鸡感染禽4型腺病毒的诊断何晖福建省农业农村厅福州350003摘要2021年9月，福建省某鸡场存栏的2000羽来航鸡出现大批量死亡，患鸡于35日龄发病，发病率约50%，病死率达70%，结合流行病学特点、病死鸡的剖检病变和病原学检测确定该鸡群感染禽4型腺病毒（FADV-4）。

关键词来航鸡禽4型腺病毒诊断文献标识码：B文章编号：1003-4331（2023）03-0101-02禽腺病毒（FADV）是一种能够感染鸡、鸭、鹅等家禽以及火鸡、雉鸡、野鸭、麻雀等野生禽类较为常见的传染病病原之一，病毒粒子无囊膜，直径大小为60~90nm，属于腺病毒科禽腺病毒属[1]。

根据抗原性的不同，禽腺病毒可分为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ共3个群[2]，不同群在致病性、抗原性、血凝特性、血清学特性方面差异较大。

目前我国鸡群流行的Ⅰ群FADV主要是禽4型腺病毒[1]，该病毒主要侵害肉用仔鸡[3]，是引起心包积液-肝炎综合征（HPS-IBH）的主要病原[4]。

2021年9月初，福建省某养殖场饲养的35日龄来航鸡出现突然死亡，患鸡翅膀下垂，羽毛蓬松，呼吸困难，剖检可见发病鸡主要表现为心包积液、肝脏肿大出血并伴有坏死点或出血点等。

无菌采集病死鸡的心脏、肝脏等脏器进行病原学检测，最终确定该场鸡群为禽4型腺病毒感染，现将该病的诊治总结报道如下。

1发病情况与临床症状2021年9月初，福建省某来航鸡养殖场的雏鸡饲养至35日龄时开始发病，患鸡主要表现为翅膀下垂，羽毛蓬松，呼吸困难，排黄绿色稀粪，发病3d后开始出现大量死亡，发病率近50%、病死率高达70%。

部分患鸡临死前表现角弓反张等神经症状。

2剖检病变剖检病死鸡，可见心肌肿大，有明显的淡黄色且澄清的心包积液；肝脏充血肿大，表面有坏死点或出血点；肺脏瘀血水肿；肾脏肿大，有尿酸盐沉积；气囊壁浑浊，气管内有黏性分泌物。

3病原检测无菌采集病死鸡的心脏、肝脏、肺脏、肾脏等组织，剪碎、加PBS研磨并反复冻融后，离心取上清，按照核酸提取试剂盒说明书提取核酸。

igg4诊断标准

igg4诊断标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：IgG4相关疾病（IgG4-related disease, IgG4-RD）是一组系统性炎症性疾病，其最显著的特征是各种器官组织中高水平的IgG4浆细胞浸润和炎症反应。

这类疾病最初被描述为胆道炎（sclerosing cholangitis）和胰腺炎（autoimmune pancreatitis），后来又发现可以涉及多个器官系统，如纵隔、肾脏、甲状腺、乳腺、眼科、耳鼻喉科等。

为了规范IgG4相关疾病的诊断和治疗，国际上专家们共同制定了一系列的IgG4诊断标准。

这些标准主要从临床表现、实验室检查、影像学和病理学等方面入手，帮助医生明确疾病的诊断，指导治疗和预后评估。

一、临床表现IgG4相关疾病的临床表现多种多样，常见的表现包括：1. 器官肿大或包块，比如甲状腺肿大、胰腺肿大等；2. 慢性胰腺炎表现，如上腹疼痛、黄疸等；3. 腺体淋巴瘤样病变，如淋巴结增大、颈部肿块等；4. 腹部疼痛、呕吐、消瘦等；5. 纵隔、眼科、耳鼻喉科、肺部等器官症状。

二、实验室检查常规实验室检查对IgG4诊断也有一定的帮助，主要包括：1. 血清IgG4水平升高，一般认为血清IgG4水平＞135mg/dL具有一定的诊断意义；2. 提高的全IgG、IgE水平，提示免疫反应异常；3. 血清炎性指标如C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）升高等。

三、影像学检查影像学检查在IgG4相关疾病的诊断中扮演着重要的角色，主要包括：1. 影像学可见的器官肿大、包块等表现；2. 腹部CT、MRI显示的器官炎症、纤维化等；3. 影像学辅助诊断肺部、纵隔等器官的病变。

四、病理学检查1. 器官活检，可见典型的IgG4浆细胞浸润；2. 免疫组化染色，可显示IgG4阳性淋巴细胞、浆细胞等；3. 纤维化程度评价，炎症进展情况评估。

第二篇示例：IgG4相关疾病是一组以IgG4浓度升高为特征的自身免疫性疾病，主要表现为组织炎症和纤维化。

4株禽腺病毒的鉴定和分析

4株禽腺病毒的鉴定和分析作者：胡晓苗潘孝成张丹俊赵瑞宏戴银潘孝成侯宏艳沈学怀尹磊来源：《农业灾害研究》2019年第06期摘要 [目的]对六安、郭河、宣城、肥西某养殖户送检的疑似腺病毒的病料进行分离鉴定，为进一步鉴别、预防和控制疾病提供科学的理论依据。

[方法]首先采集病例中鸡的肝脏，提取病毒DNA，根据Genbank已登录腺病毒的hexon基因设计引物，通过PCR检测病料中腺病毒，对扩增的序列进行连接转化和阳性克隆子筛选，并对扩增到的序列进行测序鉴定，最后将获得的基因序列构建进化树分析确定安徽省部分地区禽腺病毒血清型。

[结果]临床中疑似腺病毒感染的主要症状为心包积液和肝脏肿大，用设计的引物均检测出大小为599 bp的目的基因條带，序列比对结果发现，此次检测的腺病毒均为4型腺病毒。

[结论]试验建立了快速检测禽腺病毒的方法，为安徽省地区禽腺病毒防控提供了理论依据。

关键词禽腺病毒;hexon;测序;血清型鉴定中图分类号：S852.65 文献标识码：A 文章编号：2095-3305（2019）06-018-03DOI： 10.19383/ki.nyzhyj.2019.06.008Identification and Analysis of Four Avian Adenovirus StrainsHU Xiao-miaoet al（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Anhui Academy of Agricultural Sciences， Hefei， Anhui 230031）Abstract [Objective] The suspected adenovirus samples from a farmer in Lu’an， Guohe，Xuancheng and Feixi were isolated and identified， which provided a scientific theoretical basis for further identification， prevention and control of diseases. [Method] Firstly， the chicken liver was collected， the virus DNA was extracted， and the primers were designed according to the hexon gene of the adenovirus that GenBank had registered. The adenovirus was detected by PCR， the amplified sequence was transformed and the positive clone was screened， and the amplified sequence was sequenced and identified. Finally， the obtained gene sequence was constructed and analyzed by evolutionary tree to determine the fowl adenovirus serotype in Anhui Province.[Result] In clinical practice， the main symptoms of adenovirus infection were pericardial effusion and liver enlargement. The designed primers were used to detect the target gene band with a size of 599 bp. Sequence comparison results showed that all the tested adenoviruses were type 4adenoviruses.[Conclusion] The method of rapid detection of avian adenovirus was established，which provided a theoretical basis for the prevention and control of avian adenovirus in Anhui Province.Key words Avian adenovirus;hexon;Sequencing;Serotype identificationIdentification and Analysis of Four Avian Adenovirus StrainsHU Xiao-miaoet al（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Medicine， Anhui Academy of Agricultural Sciences， Hefei， Anhui 230031）Abstract [Objective] The suspected adenovirus samples from a farmer in Lu’an， Guohe，Xuancheng and Feixi were isolated and identified， which provided a scientific theoretical basis for further identification， prevention and control of diseases. [Method] Firstly， the chicken liver was collected， the virus DNA was extracted， and the primers were designed according to the hexon gene of the adenovirus that GenBank had registered. The adenovirus was detected by PCR， the amplified sequence was transformed and the positive clone was screened， and the amplified sequence was sequenced and identified. Finally， the obtained gene sequence was constructed and analyzed by evolutionary tree to determine the fowl adenovirus serotype in Anhui Province.[Result] In clinical practice， the main symptoms of adenovirus infection were pericardial effusion and liver enlargement. The designed primers were used to detect the target gene band with a size of 599 bp. Sequence comparison results showed that all the tested adenoviruses were type 4adenoviruses.[Conclusion] The method of rapid detection of avian adenovirus was established，which provided a theoretical basis for the prevention and control of avian adenovirus in Anhui Province.Key words Avian adenovirus;hexon;Sequencing;Serotype identification禽腺病毒（Fowl adenovirus，FAV）属于腺病毒科禽腺病毒属，主要寄生于禽类的眼、上呼吸道、肝、肾、生殖道和消化道内，但以隐性或不显性感染为主，一旦机体受到应激反应或其他疾病感染时，病毒就会很快发生反应而产生致病性，同時也可以作为原发性病原引起其他疾病的继发感染。

一株禽腺病毒4_型病毒分离与鉴定

1.2
试剂和试剂盒
DL-2 000 DNA Marker、Premix Taq 和 pMD18-T
病毒 1~7 型（FAV1~7）、禽腺病毒 8a 型（FAV8a）、禽
载体，购自宝生物工程（大连）有限公司；Simply P
等 12 个不同血清型[ 2 ]，其中 FAV4、FAV11、FAV8a
限公司；质粒小量提取试剂盒、琼脂糖凝胶 DNA
离，成功分离到一株 FAV4 病毒，扩增所分离病毒 hexon 基因部分序列，测序结果与 GenBank 上的 FAV4 hexon 基因
（登录号：EF554403）相似性为 100%。分离病毒盲传 3 代，测定的 ELD50 为 104.5/0.2 mL，以 0.2 mL·只-1 的剂量胸部
肌肉注射 30 日龄 SPF 鸡 5 只，4 d 内鸡只全部死亡，病变与临床剖检病死鸡相似。取病死鸡肝脏制备组织灭活疫
positive, and a strain of FAV4 virus was successfully isolated using the treatment solution. The partial sequence of
the isolated virus hexon gene was amplified, and the sequencing results showed 100% similarity with the FAV4
长情况。
2.3
[7]
征既能水平传播又能垂直传播，鸡感染后可长期
带毒，并不定期排毒，是危害养禽业健康发展的
[8]
重要疾病之一，该病无明显的季节性，全年均可
发病。
2022 年 8 月份，滨州市滨城区周边某肉鸡场暴

禽腺病毒病的诊断与防控

禽腺病毒病的诊断与防控禽腺病毒病（Avian adenovirus）是一种由禽腺病毒引起的疾病。

该病在鸡、鸭、鹅等禽类中广泛传播，对养禽业造成了严重的危害。

禽腺病毒病毒是一种DNA病毒，主要感染禽类的消化系统、呼吸系统和泌尿生殖系统，导致禽类发生消化道炎症、呼吸道症状和泌尿生殖系统症状等，严重时还会对禽类的生长和生产性能产生严重影响。

本文将重点介绍禽腺病毒病的诊断与防控措施，希望能对禽类养殖场的业主和从业人员有所帮助。

一、禽腺病毒病的诊断方法1. 临床症状禽腺病毒病在鸡、鸭、鹅等禽类中表现出的临床症状有所不同，但主要包括消化道症状、呼吸道症状和泌尿生殖系统症状等。

典型的症状包括：鸡出现腹泻、呕吐、粪便异常、饮食减少；呼吸急促、喘鸣；泌尿系统异常，如蛋壳膜增厚、水肿；生长缓慢，产蛋率下降等。

根据禽类出现的症状可以初步判断是否感染了禽腺病毒病毒。

2. 病理学检查对死亡禽类进行病理学检查，能够观察到病变部位的变化。

禽腺病毒病的病理学改变主要表现为消化道、呼吸道、泌尿生殖系统组织的病变，如肠道出血、黏膜水肿、肺部出血、肝脏肿大、卵巢肿胀等。

3. 实验室检测通过实验室检测可以确认禽腺病毒病的感染。

目前常用的实验室检测方法包括PCR检测、ELISA检测等。

PCR检测是通过扩增病毒基因片段来检测样本中是否存在禽腺病毒病毒，具有高灵敏度和特异性；ELISA检测则是通过检测血清中的抗体水平来确认禽腺病毒病的感染情况。

4. 病毒分离和鉴定将疑似感染禽类的组织样本进行病毒分离和鉴定，通过病毒形态和生物学特性来确认病毒的种类和亚型，有助于制定更精准的防控措施。

二、禽腺病毒病的防控措施1. 加强养殖管理在禽类养殖过程中，要加强对禽类的管理，保持鸡舍、饮水器、饲料槽等环境的清洁卫生，保持充足的通风和光照，定期清理禽舍，保持合理的密度，避免过度拥挤。

2. 实施消毒措施定期对禽舍、设备等进行彻底的消毒工作，杀灭可能存在的病毒，减少疾病的传播风险。

鸡安卡拉病毒病的诊断与防控

鸡安卡拉病毒病的诊断与防控
张真真;李厚伟;周欣;陈圆圆;王蕾;李双双;丁丽萍;张先锋
【期刊名称】《北方牧业》
【年(卷),期】2022()17
【摘要】安卡拉病是由血清4型禽腺病毒(FAdV-4)引起的以心包积液和肝炎多灶性坏死为主要特征的一种高度传染性疾病,该病还有许多其他名字,例如心包积液-肝炎综合征、包涵体肝炎-心包积液综合征、心包积液综合征等。

该病自2015年以来,在我国河南、江苏、安徽、山西和山东等多个省份养鸡场暴发,给我国养禽业造成较大的经济损失。

因此,在养殖过程中,需要对该病病原特征、流行性特点进行深入的了解。

【总页数】2页(P28-28)
【作者】张真真;李厚伟;周欣;陈圆圆;王蕾;李双双;丁丽萍;张先锋
【作者单位】河南普华基因科技有限公司;商丘美兰生物工程有限公司
【正文语种】中文
【中图分类】S85
【相关文献】
1.鸡安卡拉病毒病诊断及防治
2.鸡安卡拉病毒病的临床诊断及综合防控的体会
3.鸡安卡拉病毒病的诊断及防治
4.鸡安卡拉病毒病的诊断及防控
5.鸡安卡拉病的科学防控
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