中护微生物实验3细菌分布检查与消毒灭菌实验

一、细菌的分布检查
1.空气中细菌的检查 材料:琼脂平板 方法:将制作好的琼脂平板敞开放置在空气中 5min -10min,后盖上皿盖，然后分别做好标 记，37度温箱内培养18-24小时后观察结果。 意义：检测环境达标与否
2.咽喉部细菌的检查
(1)咽喉拭子法：
材料：血平皿、咽拭子 方法：
1. 用干净棉签咽部取材； 2. 将取得样本以分区划线形式接种在血平皿上； 3. 37℃ 温箱内孵育24小时后观察结果。
第5格作为空白对照。 盖上皿盖，置37度温箱培养24小时观察结果。
皮肤消毒实验
材料：琼脂平板、2.5%碘酒、75%酒精棉球 方法：
消
消
毒
毒
前
后
37℃温箱内培养24小时 意义：比较皮肤消毒前后细菌分布情况
2.热力灭菌实验（示教）
取4支肉汤培养基标以1、2、3、4号 1、2号接种大肠埃希菌（无芽孢菌） 3号接种枯草芽胞杆菌（芽胞菌） 4号管不接种细菌作对照。 将其中1、3号同时放入100度水浴内煮沸5分钟。 然后将4支管同时置37度温箱培养24小时观察结果。
中护微生物实验3细菌分布检查与消 毒灭菌实验
实验目的
1.学会不同部位细菌的检查方法。 2.掌握常用的消毒灭菌方法及其仪器的使用。 3.了解药敏实验的结果及意义。
实验内容与方法
一、细菌的分布检查 1.空气中细菌检查 2.咽喉部细菌的检查 二、消毒灭菌的实验 1.皮肤消毒实验 2.热力灭菌实验 3.紫外线杀菌实验 4.常用消毒灭菌器及除菌滤器介绍 三、药物敏感实验
3. 37℃ 温箱内孵育24小时后观察结果。 意义：为临床针对性合理用药提供依据
药敏试验
抑菌圈
Hale Waihona Puke Baidu2)咳碟法
• 取血平板一个，将盖打开，置于距口腔10厘 米处，用力咳嗽数次，然后盖好，置37度温 箱培养18-24小时观察结果。
二、消毒灭菌的实验
1.皮肤消毒试验（操作） 每两名学生用一个琼脂平板，先在平板底部用蜡笔画
分5格，标明序号。 两人用未消毒手指分别在1、2格内涂布。 然后用2%碘酒消毒手指后再分别涂抹3、4格，余下
三、药物敏感实验（纸片法）
测量抑菌环的大小，初步判定并比较细菌对不 同药物的敏感情况，判断药物的敏感度，一般 以敏感、中度敏感、耐药三个等级报告结果。
药敏实验
材料：琼脂平板、细菌培养物、药敏纸片 方法：1. 挑取少量细菌培养物密集划线；
2. 夹取青霉素及庆大霉素药敏片各一片， 置于琼脂平板表面（注意间隔）；
3.紫外线杀菌实验
材料：琼脂平板、细菌培养物、灭菌长方形纸片 方法： 取普通琼脂平板一个，密集画线接种大肠埃希菌。 用无菌镊子把灭菌长方形纸片贴于平板表面中央。 打开平皿盖的2/3，置于紫外灯下距离约20-30厘米
处照射30分钟， 除去纸片，盖好平皿盖，置37度温箱培养24小时观察
结果。 原理：损伤DNA，阻止DNA的复制
在涂布细菌的培养基表面，各纸片距离大致相等。纸片放置后不要再挪 动，因挪动将影响实验结果。 4.把平板倒放在 37℃温箱内培养 18～24 小时后取出观察结果，测定 抑菌环的大小。
三、药物敏感实验（纸片法）
• 抑菌环的形成：琼脂平板内含有大量的水分，纸片上 的药物具有水溶性。因此可逐渐扩散到周围的培养基 中，其浓度将随与纸片距离的增加而逐渐降低，从而 形成了以纸片为中心，药物浓度逐渐减小的浓度剃度。 当药物浓度降低到某一程度时，细菌足以抵抗其抑菌 杀菌作用；在此范围以外，细菌将正常生长，而在此 范围以内则无细菌生长。以此界线为边缘所形成的抑 菌杀菌的区域称为抑菌环。
4.常用消毒灭菌器及除菌滤器介绍
高压蒸汽灭菌器 干烤箱（干热灭菌器） 滤器
三、药物敏感实验（纸片法）
方法：
1. 取琼脂平板一个用记号笔在平板底部标记贴抗生素纸片的位置。 2. 点燃酒精灯。用棉签蘸取菌液，在琼脂平板上密集而均匀地涂布。 3. 待培养基稍干后，无菌操作用镊子分别取抗生素纸片按标记位置贴