微生物学实验_3_土壤中微生物的分离
微生物的分离和纯培养
在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体称为培养物(culture)，而只有一种微生物的培养物称为纯培养物(pure culture)。
由于在通常情况下纯培养物能较好地被研究、利用和重复结果，因此把特定的微生物从自然界混杂存在的状态中分离、纯化出来的纯培养技术是进行微生物学研究的基础。
一、无菌技术微生物通常是肉眼看不到的微小生物，而且无处不在。
因此，在微生物的研究及应用中，不仅需要通过分离纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物，而且还必须随时注意保持微生物纯培养物的“纯洁”，防止其他微生物的混入。
在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术被称为无菌技术(aseptic technique)，它是保证微生物学研究正常进行的关键。
1、微生物培养的常用器具及其灭菌试管、玻璃烧瓶、平皿(culture dish，petri dish)等是最为常用的培养微生物的器具，在使用前必须先行灭菌，使容器中不合任何生物。
培养微生物的营养物质[称为培养基(culture medium)]可以加到器皿中后一起灭菌，也可在单独灭菌后加到无菌的器具中。
最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。
有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。
为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。
而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。
2、接种操作用接种环或接种针分离微生物，或在无菌条件下把微生物由一个培养器皿转接到另一个培养容器进行培养，是微生物学研究中最常用的基本操作。
由于打开器皿就可能引起器皿内部被环境中的其他微生物污染，因此微生物实验的所有操作均应在无菌条件下进行，其要点是在火焰附近进行熟练的无菌操作，或在无菌箱或操作室内无菌的环境下进行操作。
微生物分离鉴定步骤
微生物分离鉴定步骤
微生物的分离和鉴定是微生物学研究中非常重要的步骤，它可
以帮助我们了解微生物的种类和特性。
通常，微生物的分离和鉴定
包括以下步骤：
1. 样品收集，首先需要收集来自环境、生物体表面或其他来源
的微生物样品。
这可能涉及到采集土壤、水样、食品、空气或生物
体组织等样品。
2. 稀释和接种，将样品进行适当的稀释，然后在培养基上进行
接种。
这有助于分离出单一的微生物菌落，以便进行后续的鉴定。
3. 培养，接种后，将培养皿放入恒温培养箱中进行培养。
不同
类型的微生物可能需要不同类型的培养条件，如温度、氧气含量等。
4. 分离，在培养一段时间后，可以观察到菌落的形成。
选择单
一的菌落，进行分离培养，以获得纯培养物。
5. 形态学特征观察，观察微生物的形态学特征，包括细胞形态、大小、颜色等，可以初步了解微生物的特征。
6. 生理生化特性测试，进行一系列生理生化特性测试，如对不同营养物质的利用、酶活性、氧气需求等，以进一步了解微生物的特性。
7. 分子生物学鉴定，利用分子生物学方法，如16S rRNA序列分析，可以对微生物进行更精确的鉴定，包括确定其属种和种的分类位置。
以上是常规的微生物分离和鉴定步骤，通过这些步骤可以全面地了解微生物的特征和分类位置。
值得注意的是，不同的微生物可能需要不同的鉴定方法，有时可能需要结合多种手段进行鉴定，以确保鉴定结果的准确性。
【微生物学期末考试题库】经典题目简答题1
2020届微生物学期末考试经典题目题库整理问答题1、如何从土壤中分离得到一个微生物的纯培养体?答：首先要根据分离对象选择适宜的培养基。
若要分离真菌应选用马丁-孟加拉红选择培养基；若要分离细菌应选用牛肉膏蛋白胨培养基；若要分离放线菌应选用高氏培养基。
土样采回来后，用常规的十倍稀释分离法进行稀释分离，若分离细菌，一般稀至10-8, 若分离放线菌,一般稀至10-6；若分离真菌，一般稀至10-4。
取最后三个稀释度倒平板获得单个菌落。
将平板上出现的单菌落转接斜面培养，同时镜检菌体的纯度，若不纯，应将培养的单菌落斜面再次进行稀释分离。
倒平板获得单菌落，转接斜面培养，同时镜检菌体的纯度。
反复几次直到得到菌体单一的单菌落方可认为是某一微生物的纯培养体.2、革兰氏染色反应的成败关键是什么?为什么革兰氏染色有十分重要的理论与实践意义?答案：因通过革兰氏染色，可把几乎所有的细菌都分成G＋和G－菌两大类细菌，在细胞结构、成分、形态、生理、生化、遗传、免疫、生态和药物敏感性等方面都呈现出明显的差异。
因此，任何细菌只要通过革兰氏染色，即可提供不少重要的生物学特性方面的信息。
革兰氏染色反应的成败关键是:1). 菌龄:12-24小时的纯培养物。
2）革兰氏染色操作时，要严格控制酒精脱色时间，菌液涂布均匀而薄。
3. 培养基的组成。
3、简述防腐的种类及其应用。
答案：防腐的种类很多，主要有①低温，利用4①以下的温度保藏食物、菌种等；①缺氧，采用在密封容器中加入除氧剂来有效地防止食品和粮食等的腐烂；①干燥，采用晒干、烘干或红外线干燥等方法对食物等进行保藏；①通过盐腌和糖渍等高渗来保藏食物。
①高酸度；①加防腐剂。
4、根据温度、氧、pH可将微生物分为哪些类型？答案：按照微生物的最适生长温度可将微生物分为三种类型：①嗜冷菌；①中温菌；①嗜热菌。
按照微生物与pH的关系，可将微生物分为三种类型：①嗜酸菌；①嗜中性菌；①嗜碱菌。
按照微生物与氧的关系，可将微生物分为两大类：①好氧菌；①厌氧菌。
实验二：土壤中微生物分离与纯化
了解并掌握微生物的生理生化特征， 如营养需求、代谢途径、酶活性等。
微生物纯化
在分离的基础上，进一步通过反复划 线培养或平板克隆培养，获得纯培养 的微生物。
熟悉微生物分离与纯化的实验操作流程
土壤样本采集
选择具有代表性的土壤样本， 采集时要避免污染，并记录采
样点的环境信息。
微生物的纯化
对分离得到的菌落进行纯化， 通过反复划线或平板克隆培养 ，获得纯培养的微生物。
菌落形态观察
观察纯化后的菌落形态，记录菌落 特征。
微生物的保存与鉴定
菌种保存
将纯化的菌株进行冷冻干燥或甘油保 藏，以备后续实验使用。
微生物鉴定
采用形态学、生理生化实验或分子生 物学方法对分离得到的菌株进行鉴定 。
04
CATALOGUE
实验结果与分析
微生物分离与纯化的结果观察
微生物分离
通过划线分离法，成功将土壤中的微生物分离到了培养基上，观察到菌落形态 各养基
根据目标微生物的特性， 选择适合的培养基。
培养
将土壤稀释液涂布或滴加 在培养基上，放入恒温培 养箱中培养。
观察与记录
观察微生物的生长情况， 记录菌落形态、颜色、大 小等特征。
微生物的纯化
挑选单菌落
从培养基上挑选单菌落，采用划 线法或稀释涂布法进行纯化。
纯化培养
将纯化的菌株进行多次划线培养或 传代培养，确保获得纯培养物。
01
微生物纯化的原理是利用微生物的单一特性进行分离，使同一种微生物在培养 基上形成单一菌落。
02
常用的微生物纯化方法包括划线分离法、稀释涂布平板法、显微操作法等。这 些方法可以根据不同微生物的特性选择使用，以获得纯培养。
03
微生物学 实验7 土壤中细菌的分离纯化及计数
2、首先选择平均菌落数在30～300之间的，当只 有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以 该平均菌落数乘其稀释倍数即为该样品的细菌总 数（见下表，例1）。 3、若有两个稀释度的平均菌落数均在30～300之 间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值 小于2，应采取两者的平均数；若大于2，则取其 中稀释度(倍数)较小的计算菌落总数（见下表， 例2及例3）。
10-4 稀释度 细 菌 cfu数/平板 每g土壤的CFU数 10-5 10-6
1
2
3
平均 1
2
3
平均 1
2
3
平均
平均菌落数(个) 相应释倍数 CFU/g 100mL 0.2mL 10 g
2、培养时为什么要将培养皿倒置培养？
其它微生物的分离纯化方法
（一）、稀释混合平板法
①按无菌操作要求，用胶头滴管依次吸取10-6、 10-5 、 10-4稀释液各200 uL，分别加入编号为10-6、 10-5 、 10-4的培养皿中。
正置培养过程中，培养基中水分蒸发后，会在培养皿
计算公式：
平均菌落数(个) 相应释倍数 CFU/g 100mL 0.2mL 10 g
平均菌落数——某一稀释度下三个平皿上的菌落平均数； CFU——菌落形成单位（colony-forming units，CFU）； 0.2mL——每个平皿加入的菌悬液体积； 100mL——10-1菌悬液的体积； 10g——称取的土壤重量。
交叉划线法
连续划线法
4、若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应 按稀释度(倍数)最高的平均菌落数乘以稀释倍数 （见下表，例4）。
5、若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按 稀释度(倍数)最低的平均菌落数乘以稀释倍数 （见下表，例5）。 6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之 间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数 （见下表，例6）。
微生物学实验知识点总结与实践应用
微生物学实验知识点总结与实践应用微生物学实验知识点总结与实践应用微生物实验知识总结与实践应用经过这学期学习和实验操作，我对《微生物实验》有了一些初步的认识，也从中学习到了有用的知识。
《微生物学实验》是要求我们掌握实验知识的基本操作和技能训练，初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的科学前沿接轨。
微生物：包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活关系密切。
涵盖了有益有害的众多种类，广泛涉及健康、食品、医药、工农业、环保等诸多领域。
我将我这学期学到的微生物学知识，结合生活和工业当中的一些应用，归纳如下：在吾尔恩老师的带领下，我们先从最基本的知识学起。
（1）无菌操作技术：高温对微生物具有致死效应，因此微生物在转接过程中，一般再火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，已达到灭菌的目的。
在做实验时要保持严谨的态度，以后的实验中多数操作都必须再火焰旁进行。
（2）培养基的制备：培养基是人工配置的生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。
自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对PH值的要求一般不同。
（3）消毒与灭菌：灭菌是用理化方法杀死一定物质中的微生物的微生物学基本技术。
灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。
微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或环境赋予菌种的抵抗力。
灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。
是指用物理或化学的方法杀灭全部微生物，包括致病和非致病微生物以及芽孢，使之达到无菌保障水平。
经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。
经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。
（4）平板分离与活菌计数：平板分离计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上。
经培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。
根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。
微生物的分离与培养技术原理及其应用-文档资料
微生物的分离与培养技术原理及其应用-文档资料
微生物的分离与培养技术是微生物学实验室中最基本、最重要的实验技术之一。
其主要原理是将混合微生物群落分离为单一的微生物菌落，并在适宜的环境条件下使其生长繁殖形成单一菌种培养物，以便进行鉴定和研究。
1.微生物的分离技术
（1）稀释涂布法：将微生物混合液逐渐稀释，然后取一定量的稀释液涂布在富养基平板上，待菌落形成后，挑取单一菌落进行培养和研究。
（2）过滤法：利用微孔膜或滤纸将混合液过滤，将过滤后留在微孔膜或滤纸上的微生物进行培养和研究。
（1）液体培养：将微生物接种在富足的液体富养基中，置于适当的温度、光照和通气条件下进行培养。
（3）混合培养：将两种或以上的微生物同时接种在同一富养基上进行培养，这一技术可同时培养多种微生物，缩短实验时间。
3.技术应用
微生物的分离与培养技术在微生物学研究、医学诊断、生物工程和食品工业等领域都得到广泛应用。
（1）微生物学研究：分离单一菌种进行研究，为微生物学研究提供基础。
（2）医学诊断：从临床样品中分离出致病微生物进行培养与鉴定，有助于快速准确地诊断、鉴定和治疗病原微生物感染。
（3）生物工程：在微生物培养基中添加营养物质，用微生物进行合成、代谢和分泌等反应。
（4）食品工业：将微生物培养在富有营养的富养基中进行发酵，生产出发酵食品。
环境工程微生物学实验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别穿刺接种大肠杆菌和变形杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h 3、柠檬酸盐利用试验
（1）试管编号；
（2）2只试管分别划线接种大肠杆菌和枯草杆菌； （3）37 ℃ ，培养24h
四、实验结果观察与记录
1、将实验结果填入下表，＋表示阳性，－表示阴性。 2、思考题：微生物生理生化反应的意义何在？
三操作步骤1微生物大小的测量1枯草杆菌标本片的制作2目镜测微尺的标定放置镜台测微尺放置目镜测微尺校正目镜测微尺计算不同放大倍数下目镜测微尺每格代表的长度3枯草杆菌大小的测量四实验报告1将目镜测微尺校正结果填入下表接物镜接物镜倍数目镜测微尺目镜测微尺每格代表的长度2在高倍镜下测量枯草杆菌大小的实验结果填入下表菌体编号长度的目镜测微尺格数宽度的目镜测微尺格数平均值菌体大小平均值m3分析实验结果一实验目的明确显微镜计数的原理
酵母菌的形态构造
线 粒 体 芽体液泡 芽 体 核 液 泡 膜 细 胞 壁 细 胞 膜
根霉（Rhizopus)
青霉（Penicillum):
曲霉(Aspergillus)
四、实验报告
1. 分析实验结果，绘制酵母菌、青霉、黑曲霉的形
态图，并注明各部位名称，。 2. 怎样才能观察到较为完整的霉菌形态，各种霉菌 制片过程中分别有哪些注意事项？
121℃,灭菌20~30min
使用时, 将培养基加热融化, 待温度降至50 ℃左右时在 100mL培养基中加入1%链霉素0.3mL
糖发酵培养基：
蛋白胨2g，葡萄糖10g， K2HPO4 0.2g, NaCl 5g, 琼脂5～6g， pH7.0～7.2 ，蒸馏水1L ， 1%溴百里酚蓝 3ml. 分装试管，每管4～5cm， 112℃,灭菌30min.
土壤细菌的分离与纯化
土壤细菌的分离与纯化土壤细菌是一种普遍存在于土壤中的微生物，它们在土壤生态系统中发挥着重要的角色。
分离和纯化土壤细菌，不仅可以研究其基本特性、生物学功能和代谢途径等，还可以开发其潜在的应用价值，比如生物农药和生物化学制品的生产等。
本文将介绍土壤细菌的分离和纯化过程，以及影响土壤细菌分离的因素和纯化方法。
土壤细菌的分离是指从土壤中分离得到单个细菌菌落的过程。
一般分离方法有以下几种：（一）稀释涂布法该方法是将土壤分别用不同浓度的生理盐水进行稀释，然后将不同浓度的土壤悬液制成平板培养基并涂布在培养基上。
菌落形成后，可再次从菌落上接种单个细菌。
该方法适用于分离数量稀少的细菌。
（二）膜过滤法该方法是将土壤和生理盐水混合后通过孔径为0.22μm的滤膜过滤出微生物体，然后将此滤膜放置于适宜的培养基上进行培养。
该方法适用于分离数量较多的细菌。
（四）毛细管沉淀法该方法是利用毛细管的吸力将土壤中的细菌沉淀到毛细管中，然后将毛细管插入含有适宜培养基的瓷片中，放置在恒温箱中进行分离和培养。
该方法适用于分离数量稀少的细菌。
（五）选择性富集法该方法是通过添加选择性富集剂使特定种类的细菌生长，不同种类的细菌生长受到不同富集剂的影响。
该方法适用于富集数量稀少的特定种类细菌。
（一）单菌落分离法该方法是将分离得到的细菌菌落在新的培养基上进行二次分离和培养，直至获得单一的细菌菌落。
该方法适用于分离数量较多并且形态较为相似的细菌。
（三）挑选法该方法是利用显微镜观察细菌形态和形状，手工用铂丝挑选出单个细菌菌落。
该方法适用于菌落数量较少且形态差异较大的细菌。
该方法是利用滤纸将细菌菌液过筛，分离得到单个细菌颗粒。
该方法适用于分离数量较少的细菌。
土壤细菌的分离受到多种因素的影响，如土壤环境因素、培养基种类和培养方式等。
（一）土壤环境因素土壤的物理化学因素，如土壤温度、pH值、土壤含水量等对土壤细菌的生长有很大影响。
不同种类的土壤中细菌种群差异很大，所以适当选择适宜的土壤样品可以更好的分离得到目标细菌群落。
土壤微生物生态学及其实验技术
土壤微生物生态学及其实验技术引言：土壤微生物是土壤生态系统中不可或缺的组成部分，对维持土壤生物多样性、循环养分、促进植物生长等起着重要作用。
土壤微生物生态学研究土壤微生物的多样性、功能和相互作用，探索其在土壤生态系统中的重要功能和生态过程。
本文将介绍土壤微生物生态学的基本概念和研究方法。
一、土壤微生物生态学的基本概念：1. 土壤微生物：土壤中的微生物包括细菌、真菌、放线菌和原生动物等。
它们广泛分布于土壤中，有不同的生理特性和功能。
2. 多样性：土壤微生物的多样性是指土壤中微生物的种类和数量。
多样性越高，土壤生态系统的稳定性越强。
3. 功能：土壤微生物具有多种功能，包括有机物分解、养分循环、固氮、抗病害等。
二、土壤微生物生态学的研究方法：1. 分离培养法：通过分离培养方法，可以获得纯培养的土壤微生物菌株，进一步研究其生理特性和功能。
2. 生物计量学方法：通过测定土壤微生物的生物量和活性，揭示土壤微生物的数量和功能特点。
3. 分子生物学方法：利用分子生物学技术，如PCR、DGGE等，可以研究土壤微生物的多样性和群落结构。
4. 同位素示踪法：通过同位素标记技术，可以追踪土壤微生物在土壤生态系统中的功能和相互作用。
5. 生态学模型：利用生态学模型，可以模拟和预测土壤微生物的分布和功能。
三、土壤微生物生态学的研究内容：1. 土壤微生物多样性：研究土壤微生物的多样性，探索其影响因素和生态功能。
2. 土壤微生物功能：研究土壤微生物的功能特点，如有机物分解、养分循环、固氮等。
3. 土壤微生物群落结构：研究土壤微生物的群落结构和变化规律，揭示其对环境变化的响应。
4. 土壤微生物与植物互作：研究土壤微生物与植物之间的相互作用，探索其对植物生长和健康的影响。
5. 土壤微生物生态功能评价：评价土壤微生物对土壤生态系统功能的贡献和稳定性。
结论：土壤微生物生态学是研究土壤微生物的多样性、功能和相互作用的学科，具有重要的理论和应用价值。
微生物学实验指导-华南师范大学生命科学学院
温度低于饱和蒸气的温度。灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见（表 2—3）
温度/℃
时间/h
干热
4
130-140
湿热 105.3
3
表 2-2 干热温热穿透力及灭菌效果比较
透过布层的温度/℃
灭菌
20 层
10 层
100 层
86
72
70.5
不完全
101
101
101
完全
表 2—3 灭菌锅留有不同分量空气时，压力与温度的关系
自控高压蒸气灭菌锅（autoclave）的使用可参照厂家说明书。
图 2—2A 卧式灭菌锅
图 2—2B 手提式灭菌锅
1. 安全阀; 2.压力表; 3.放气阀; 4.软管; 5.紧固螺栓; 6.灭菌桶; 7. 筛架; 8.水
（三）器材 牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿(6 套一包)，手提式高压蒸气灭菌锅等。 （四）操作步骤 1．首先将内层锅取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 切勿忘记加水，同时水量不可过少，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。 2．放回内层锅，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭 菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与锅壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧 相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 4．用电炉或煤气加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气 完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加到逐渐上升。当锅内压力升到所需 压力时，控制热源，维持压力至所需时间。本实验用 0.1Mpa，121.5℃，20min 灭菌。 灭菌的主要因素是温度而不是压力。因此锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀， 维持所需压力。 5．灭菌所需时间到后，切断电源或关闭煤气，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的 压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 压力一定要降到“0”时，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降， 使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生 污染，甚至灼伤操作者。 6．将取出的灭菌培养基，需摆斜面的则摆成斜面，然后放入 37℃温箱培养 24h，经检 查若无杂菌生长，即可待用。 （五）实验报告 l．结果
思政教育模式下的课程教学改革研究———以微生物学课程为例
思政教育模式下的课程教学改革研究 以微生物学课程为例白雪莲,薛大伟,石陆娥,辛越勇,许明峰,周婷,武丽敏㊀(杭州师范大学生命与环境科学学院,浙江杭州310036)摘要㊀立德树人是高校教育的首要任务,培养德才兼备的社会主义建设者,不仅要求专业过硬,更要求具有爱国㊁敬业㊁诚实㊁守信的道德素养㊂把思想政治工作贯穿教育教学全过程是高校教育工作者努力的方向,全程育人㊁全方位育人是努力的目标,为开创我国高等教育事业发展新局面贡献力量是教师的责任㊂结合微生物学专业课教学工作,从课程设计㊁教学实施㊁课程评价3个方面探索思政教育融入专业课的途径,充分挖掘理论课与实验课的思政元素,为思政教育进课堂提供参考㊂关键词㊀课程思政;微生物学;教学改革中图分类号㊀S -01㊀㊀文献标识码㊀A㊀㊀文章编号㊀0517-6611(2023)07-0271-03doi :10.3969/j.issn.0517-6611.2023.07.064㊀㊀㊀㊀㊀开放科学(资源服务)标识码(OSID):Research on Curriculum Teaching Reform under Ideological and Political Education Mode A Case Study of Microbiology Course BAI Xue-lian ,XUE Da-wei ,SHI Lu e et al㊀(College of Life and Environmental Sciences,Hangzhou Normal University,Hangzhou,Zhe-jiang 310036)Abstract ㊀Moral cultivation is the primary task of college education.To cultivate socialist builders with both moral integrity and ability re-quires not only professional proficiency,but also patriotic,dedicated,honest and trustworthy moral qualities.Putting ideological and political work through the whole process of education and teaching is the direction of our university education workers efforts,the whole process of education,all-round education is our goal,to create a new situation for the development of higher education in our country to contribute to the strength is our responsibility.In combination with the teaching work of the specialty course microbiology,this paper explores the way of integra-ting ideological and political education into the specialty course from three aspects of course design,teaching implementation and course evalu-ation,fully excavates ideological and political elements of theoretical and experimental courses,and provides reference for ideological and po-litical education into the classroom.Key words ㊀Ideological and political curriculum;Microbiology;Teaching reform基金项目㊀2019年杭州师范大学教学改革项目;2021年杭州师范大学课程思政示范课堂 建设项目;浙江省高等教育 十四五 教学改革项目(jg20220495)㊂作者简介㊀白雪莲(1978 ),女,内蒙古赤峰人,讲师,博士,从事微生物学研究㊂收稿日期㊀2022-03-18;修回日期㊀2022-05-06㊀㊀ 一株济世草,一颗报国心 , 共和国勋章 获得者屠呦呦带领团队攻坚克难,研究发现了青蒿素,解决了抗疟治疗失效难题,为中医药科技创新和人类健康事业作出了重要贡献[1],向学生传递了民族自豪感和自信心㊂2020年,教育部高等教育司提出要充分发挥各类课程的育人功能,深入挖掘其思想政治教育内容的要求㊂让思政教育直抵学生心灵,在专业课教学过程中融入思政课程是高校教师的研究课题㊂以往课堂教学也会列举一些科学家为科研工作废寝忘食的例子,一些从失败的实验中寻找成功路径的实例,但是均是零星分散的㊁不系统的甚至是随机的思政元素,讲授时立德树人的目标性也不是非常明确,课程考核结果中很少评价学生是否真正听进去㊁融进思想中㊂习近平总书记提出: 把思想政治工作贯穿教育教学全过程,实现全程育人㊁全方位育人,努力开创我国高等教育事业发展新局面㊂ 这对高校教师思政教育提出了要求,指明了方向㊂新时代的大学生不但要具备扎实的专业知识,还要有高尚的品德,积极奋进的精神[2]㊂思想政治教育工作应贯穿大学教育教学全过程,因此应在教学过程中逐渐积累和整理思政元素,改进教学方法,润教学沃土以思政营养,全面评价学生素养,培养学生将个人理想与国家需要紧密结合,为国家培养爱国㊁敬业㊁实干㊁创新的社会主义建设者[3]㊂鉴于以上指导思想,笔者在修订蕴含思政内容的教学大纲基础上,思考如何上好一门有思想内涵㊁有文化底蕴的微生物学课程,进行了创新和实践㊂1㊀挖掘思政元素,改革课程设计从1676年荷兰科学爱好者安东尼㊃列文虎克首次看到了细菌到今天新冠病毒肆虐全球,微生物学已经发展了300多年,有无数科学家为之奋斗,人们在不断探索这个微观世界的奥秘[4]㊂讲课时,时常贯穿科学家的研究经历和经典实验㊂因此,笔者整合梳理了微生物学课程中的思政元素(表1)㊂㊀㊀微生物学课程涉及化学㊁生物㊁遗传等多学科领域,内容包括微生物的基础知识㊁微生物生长及控制㊁新陈代谢㊁遗传变异和育种以及微生物生态㊁微生物传染与免疫等知识体系(图1),它也是一门实践性非常强的课程,几乎每一章节都涉及多个实验,以往的课程设计很少专门安排思政元素,有时随机讲述一些案例,在思想教育方面缺少对学生的引导㊂通过改革课程设计,在授课时,通过思政融入,调动学生的主观能动性,让他们主动出发探索更深层次的知识理论㊂使其在探索知识的同时,树立正确的世界观㊁价值观和人生观,提升文化自信和民族信仰[5]㊂同时在实验课上鼓励学生理论结合实践,积累实践经验,掌握先进技术㊂培养学生在学习工作中细心谨慎的职业素养㊂教育并不是注满一桶水,而是点燃一把火[6]㊂专业课程是载体,思政教育是灵魂,学生思想认识水平提高了,主动学习的意识就增强了,他们不仅上课认真了,还能主动拓展课外知识,主动探索新科技㊂安徽农业科学,J.Anhui Agric.Sci.2023,51(7):271-273㊀㊀㊀表1㊀微生物学课程中的思政元素Table 1㊀Ideological and political elements in Microbiology序号No.思政元素Ideological and political elements章节Chapter实例Example1科学精神的培养,职业生涯规划绪论微生物与人类1928年英国细菌学家弗莱明首先发现了世界上第一种抗生素 青霉素2敢于评判性的学习绪论微生物与人类巴斯德曲颈瓶实验证实了生源论3个人爱好与职业理想相结合教育,培养学生勇于奉献和敬业精神绪论微生物与人类荷兰业余科学爱好者安东尼㊃列文虎克观察到微生物汤飞凡教授分离沙眼病原体,自己做病原体接种志愿者4敬业精神绪论微生物与人类第一章原核生物 立克次氏体奔走于世界各地疫区的诺贝尔奖获得者 科赫美国医生H.T.Ricketts 研究立克次氏体时感染斑疹伤寒去世,年仅39岁5激发爱国情怀及民族自豪感绪论微生物与人类禽流感专家刘秀梵院士㊁国际上第一位小鹅瘟病毒发现者方定一6务实求真精神绪论微生物与人类十年磨一见 周德庆老先生编著的微生物学教程(第四版)7逆向思维在科学研究中的应用第一章原核生物鞭毛的运动 旋转论8树立诚信法制的世界观第二章真核生物 霉菌食品中黄曲霉毒素的限量标准9中华优秀酿酒历史第二章真核生物 酵母菌酿酒酵母的特性10人类命运共同体理念,职业道德教育第三章病毒抗击新冠病毒疫情病毒溯源,钟南山院士抗击SARS㊁新冠病毒优秀事迹11培养学生实践能力第四章微生物的营养微生物培养基的制作12增强学生保护生态意识第五章微生物的新陈代谢光合微生物的CO 2固定13增强学生历史使命感第五章微生物的新陈代谢青霉素的现代化生产14引导学生遵守实验室安全操作规范第六章微生物的生长及其控制厌氧微生物的培养15转基因生物安全性教育第七章微生物的遗传变异和育种经典微生物转化实验16 绿水青山就是金山银山 的环保理论第八章微生物的生态红螺菌和蓝细菌的应用17中国科研工作者攻坚克难的精神第九章传染与免疫新冠疫苗快速研发图1㊀微生物学各章节与思政教育的多维度关系Fig.1㊀Multidimensional relationship between chapters of Micro-biology and ideological and political education2㊀将思政元素融入课程教学2.1㊀优化课程内容㊀微生物学课程内容多,课时少,要在有限的课堂上讲授所有知识点很难㊂ 填鸭式 一言堂 的教学模式早已不适应当代大学生的教学[7]㊂根据课程的知识体系,笔者将微生物学归纳为6大知识体系,15个学习模块,每个模块重点融入3~4个育人元素,优化重要知识点,实现教学内容的系统化㊁多元化和前沿化㊂比如讲解绪论部分的时候,讲解汤飞凡教授分离沙眼病原体㊁方定一教授分离小鹅瘟病毒等实例激发学生的民族自豪感,同时增强学生的历史使命感㊂在讲授病毒一章时播放大型纪录片抗击新冠疫情纪录片‘科学战 疫 “,激发学生爱国精神和学习兴趣,树立正确的专业理想㊂在专业课中融入思政元素,润物细无声地将专业知识与思政教育有机融合,在传授知识的同时提升学生思想道德水平㊂2.2㊀案例教学法㊀以典型的微生物如大肠杆菌㊁金黄色葡萄球菌为模式菌株,讲解其细胞结构,结合革兰氏染色实验引导学生深入学习革兰氏阳性细菌和阴性细菌细胞壁构造和异同点,课程导入时以1884年丹麦医生G.Gram 废寝忘食开展染色实验的经历开篇,讲述开创性工作的艰苦历程,然后详细讲解革兰氏染色在细菌鉴定中的重要意义,染色的关键步骤,以青霉素㊁万古霉素等药物在细胞壁合成中的作用靶点为拓展,引导学生领会常用药物抑菌机理,启发学生通过学习微生物基础知识学会药物设计的思路和科研方法[8]㊂2.3㊀理论联系实际教学法㊀微生物涉及环境㊁医学㊁食品等多个领域,从保护环境的角度,结合学校里的自然环境(一草一木㊁一河一山),引导学生遵守自然发展规律,遵循生态环境保护原则,邀请学校河道长讲解红螺菌等微生物应用于水质净化等环保工作的益处,从而树立学生绿色生态可持续发展的理念㊂此外我国有悠久的酿酒历史,讲授固态厌氧菌的堆积培养时,以传统白酒的生产为例,通过视频等让学生学习大曲酒的生产,进而掌握酵母菌的酒精发酵和己酸菌的己酸发酵,深刻感受中华优秀酿酒文化㊂同时让学生走出校园,走进工厂,参观杭州味全食品有限公司益生菌饮料生产线,充分感受微生物与生产生活的紧密联系,激发了其学习热情㊂2.4㊀分组讨论教学法㊀根据学生的兴趣,将其分成若干学习小组,如微生物新闻组,负责发布最新的微生物学相关研究进展和新闻报道,关注科学发展前沿,树立远大理想,进行职业规划;实验创新组,让乐于实践的学生利用课余时间开展创新性㊁综合性㊁设计性实验,培养其实践创新能力和规范的实验室操作;微生物生活组,专门负责收集㊁分享各种与生272㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀安徽农业科学㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀㊀2023年活密切相关的实例,使其充分感受到 身在菌中 的生活状态;微生物英语组,以英文纪录片㊁英文文献㊁英文视频为载体分享微生物科普知识,拓展国际视野㊂每个小组均不定期开展线上线下讨论,以充实学习内容,让学生真正成为教学的主体,主动学习,尽享学习过程㊂2.5㊀ 细致入微 的实验课㊀微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称,在实验课上学生可以从宏观到微观㊁从群体形态到显微形态近距离感受微生物的存在㊂以 突出先进性㊁提升基础性㊁增加挑战性 为理念,在每一个实验中都设计了规定项目和自选项目,同时在每个实验中也融入了思政元素(表2),不仅让学生体会理论与实践相结合的意义,还享受到自己设计实验㊁攻克科学难题的乐趣和成就感[9]㊂表2㊀微生物学实验课程中的思政元素Table 2㊀Ideological and political elements in Microbiology experimental courses序号No.思政元素Ideological and political elements实验内容Experiment content自选实验课题举例Examples of self selected experimental subjects1无菌实验室操作规范和高精度仪器的正确使用与保养在科学研究中的重要意义,培养学生严谨的工作作风实验一细菌细胞单染色和油镜的使用细菌其他染色方法㊁真菌的染色或荧光染色观察实验自选2敢于评判性的学习,讨论革兰氏染色如何改进实验二细菌(大肠杆菌和金黄色葡萄球菌)的革兰氏染色未知微生物革兰氏染色鉴定试验3微生物是人类资源的宝库,如何利用微生物资源从身边做起实验三土壤中微生物的分离腐败食品㊁污水㊁空气中微生物的分离方法探讨4耐心和细心是获得实验成功的必备心理素质,需在实践中磨练和检验实验四土壤中微生物的纯化与初步鉴定插片法观察㊁水浸片法观察微生物形态探索实验5基础性工作需要脚踏实地的精神,培养学生求真务实的精神实验五培养基的制作和高压灭菌选择性培养基的配制㊁酸碱培养基的配制㊁淀粉培养基的配制等自选实验6 物竞天择,适者生存 的生物生存法则培养学生团结协作的精神实验六环境因素对大肠杆菌生长的影响不同环境条件(拓展更多的环境因素)对不同微生物(G +㊁G -㊁酵母菌㊁霉菌)生长的影响7引导学生掌握滥用抗生素的危害,领悟新型抗生素的研发需要攻坚克难的精神,需要大胆创新精神实验七抗生素对微生物生长的影响新型抗生素的设计和分子模型构建8增强学生保护生态意识实验八污水中大肠菌群的检测饮用水㊁自来水㊁超纯水中微生物检测实验㊀㊀通过规定实验的基本实验操作技能的示范和实际操作,学生较扎实地掌握了微生物无菌操作方法㊁染色技术㊁显微形态观察方法㊁高压蒸汽灭菌㊁高压灼烧等基本操作要领㊂通过自选实验的拓展式训练,培养了学生综合分析问题㊁解决实际问题的能力,激发了学生大胆创新的积极性,改变了学生原来 试剂盒式 的消极实验状态,点燃了每一位同学参与实验㊁主动开展实验的兴趣和信心㊂3㊀课程思政教育模式下的课程教学评价3.1㊀建立激励评价方法㊀对积极主动参与课堂讨论㊁参加小组活动㊁拓展专业知识㊁提高实验技能的学生给予奖励和积分,并分享经验;积分可以转换为平时成绩㊂对消极应付作业㊁听课不认真㊁课下小组学习不积极的学生进行引导教育,并形成互帮互助团队㊂及时纠正不良的学习习惯,营造良好的学习氛围,形成自律自强的自我约束和管理能力㊂3.2㊀健全全过程评价体系㊀思政融入专业课学习,不能仅通过期末考试去评价一个学生的学习效果,需要从多维度综合性评价[10],有些学生擅长记忆㊁有些学生擅长表达㊁有些学生擅长动手实践,教师应该提供施展才能的平台,让他们发挥所长,既能表现出个人的才能又能发现自身的不足,与同学取长补短,共同进步,在学习中体会共同学习共同进步的乐趣,从而潜移默化地提高他们团结协作的精神㊂专业课的成绩很重要,但是育人的过程更重要,将思政教育与专业教育同向同行,必须把握好综合性过程评价的指挥棒㊂3.3㊀打通协同评价体系㊀打通思政课与专业课协同评价体系,以评价体系为桥梁实现思政课与专业课的有效融合㊂在专业课评价中体现思政教育效果,不是简单地用分数去衡量,应该内化于学生的心灵㊂同时让学生参与思政评分,参与过程评价㊂比如组间互相评分㊁组内同学互评㊁自我评价等都可以作为成绩评定的组成部分㊂4㊀小结微生物学是生物㊁医学㊁食品等多个专业的基础课,与人们健康与生活息息相关,尤其是近年新冠疫情爆发得到有效控制,表明它是一门实用性很强的课程,以这门课为思想政治教育的载体,强化学生的思想政治意识尤为重要㊂该研究结合微生物学专业课教学工作,从课程设计㊁教学实施㊁课程评价3个方面探索思政教育融入专业课的途径,充分挖掘理论课与实验课的思政元素,为思政教育进课堂提供参考,为思政教育模式下的课程教学改革贡献一份力量㊂参考文献[1]付湘云.中职护理药物学基础课程中融入思政教育元素的探索[J ].现代职业教育,2021(25):210-211.[2]卢妮妮,廖文超,李俊刚,等.师范认证背景下 微生物学 课程教学改革初探[J ].绵阳师范学院学报,2022,41(2):78-83.[3]崔妍,李晓霞.医学微生物学课程教学改革探索[J 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土壤中微生物的分离
微生物学实验报告土壤微生物的分离、培养及鉴定学生学号：学生姓名：专业班级：指导教师：土壤微生物的分离、培养及鉴定摘要：本实验是微生物学综合性实验项目包含了微生物学实验使用的微生物分离和纯化、微生物的选择培养基、培养基的制备、高压蒸汽灭菌、微生物类群的主要培养特征和形态特征、制片染色技术等。
[1]土壤是微生物的良好生境，土壤中有多种类群的微生物，它们对自然界物质的转化和循环起着极为重要的作用，对农业生产和环境保护有着不可忽视的影响。
根际微生物与植物的关系特别密切，不同的土壤和植物对根际微生物产生显著影响，而不同的根际微生物由于其生理活性和代谢产物的不同，也将对土壤肥力和植物营养产生积极或消极的作用。
土壤微生物不仅对土壤的肥力和土壤营养元素的转化起着重要作用，而且对于进入土壤中的农药及其他有机污染物的自净、有毒金属及其化合物在土壤环境中的迁移转化等都起着极为重要的作用。
关键词：土壤微生物，分离鉴定，生理生化，1前言土壤中微生物的数量因土壤类型、季节、土层深度与层次等不同而异。
一般地说，在土壤表面，由于日光照射及干燥等因素的影响，微生物不易生存，离地表10 cm～30 cm 的土层中菌数最多，随土层加深，菌数减少。
土壤是微生物生活的大本营，是寻找和发现有重要应用潜力的微生物的主要菌源。
不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌。
一般在较干燥、偏碱性、有机质丰富的土壤中放线菌数量较多。
本实验从土壤中分离细菌、放线菌和霉菌。
为了分离和确保获得某种微生物的单菌落，首先要考虑制备不同稀释度的菌悬液。
各类菌的稀释度因菌源、采集样品的季节、气温条件而异。
其次，应考虑各类微生物的不同特性，避免样品种各类微生物相互干扰。
细菌或放线菌在中性或微碱性环境较多，但细菌比放线菌生长快，分离放线菌时，一般在制备土壤稀释液时添加10％酚或在分离培养基中加相应的抗生素以抑制细菌和霉菌。
培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。
微生物学实验报告
微生物学实验报告（格式标准）(生命科学专业)*****目录索引实验一油镜的使用和细菌的简单染色法 3实验二细菌的革氏染色与芽孢染色 5实验三常用培养基的配制7实验四酵母菌霉菌的形态结构观察及酵母死活细胞的鉴别8实验五、微生物大小的测定与显微计数10实验六环境中微生物的检测和分离纯化11实验七细菌鉴定中常用的生理生化反应12实验八（综合实验）化能异养微生物的分离与纯化13课程名称：微生物学实验班级：化生系生命科学本科实验日期：指导教师：黎勇实验一油镜的使用和细菌的简单染色法〔目的要求〕学习并熟练掌握油镜的使用技术；观察细菌的基本形态；学习观察细菌的运动性的基本方法。
〔基本原理〕1. N·A=n·sinα2. D=λ/2N.A3. 目镜可提高放大倍数，但有效放大率取决于镜口率。
已经分辨的物体不放大看不清，未分辨物放得再大也看不清。
4. 用悬滴法或凹玻片法观察细菌的运动性时，可以通过真运动能定向地由一处快速运动来区别于颗粒的布朗运动。
〔器材用具〕显微镜、载玻片、凹玻片、盖玻片、接种环、香柏油、二甲苯、凡士林、吸水纸、擦镜纸；细菌、放线菌等固定装片；培养18小时左右的B.subtilis. S.arueus 菌斜面培养物；无菌水、生理盐水。
〔方法步骤〕：（一）油镜的使用镜检装片在中倍（或高倍镜）下找到目的物，并使位于视野正中聚光镜上升到最高位置，虹彩光圈开到最大，镜头转开成八字形在玻片的镜检部位（光斑处）滴一滴香柏油油镜转入正下方侧视小心上升载物台（缩短镜头与装片距离，镜头浸入油中，至油圈不扩大为止镜头几与装片接触）粗调器徐徐下降载物台（密切注视视野，当捕捉到物像时，立即用细调器校正）仔细观察并绘图取出装片，清洗油镜：擦镜纸拭去镜头上的香柏油擦镜纸沾少许二甲苯擦去残留（用手指辅助，迅速拭擦一、二次）用清洁擦镜纸仔细擦干二甲苯（2-3次）。
（二）细菌的简单染色法：涂片干燥火焰固定染色水洗干燥油镜观察（三）细菌运动性的观察取洁净盖玻片，四周涂上凡士林滴加一小滴菌悬液凹玻片的凹窝向下盖于盖玻片上翻转观察〔结果分析〕1、画一圆圈表示视野，选取所观察的微生物绘图，注意特殊结构、形状和排列。
土壤微生物的分离稀释需要试管规格
土壤微生物的分离稀释需要试管规格土壤微生物是土壤生态系统中不可或缺的组成部分，它们对于土壤的养分循环、有机物质分解和排水等功能起着重要的作用。
为了研究土壤微生物的多样性和功能，科研人员通常需要进行土壤微生物的分离和培养。
而土壤微生物的分离稀释是土壤微生物学研究中的一项重要实验步骤。
土壤微生物的分离稀释是利用一系列稀释液对土壤样品进行稀释，目的是将微生物分离开来，以获取单菌落。
这样可以使得微生物在培养基上形成单个的菌落，便于进一步的鉴定和研究。
在进行土壤微生物的分离稀释实验时，需要准备一系列试管，以满足不同浓度的稀释需求。
我们需要准备一批试管，规格可以有多种选择，比如10毫升、15毫升或者20毫升。
试管的规格大小决定了我们可以放入的土壤样品量，同时也影响了稀释液的体积。
试管需要事先经过高温高压灭菌处理，以确保实验的无菌性。
在进行分离稀释时，需要根据实验设计的需要，将试管分成不同组别，每组放入不同浓度的稀释液。
接下来，我们需要准备稀释液。
常用的稀释液有PBS缓冲液、盐水溶液等。
稀释液的浓度可以根据需要进行调整，通常是进行10倍、100倍或1000倍的稀释。
将稀释液加入试管中后，需要使用标准的移液器或移液枪将土壤样品逐级稀释到不同浓度，以保证每个试管中微生物的数量不同。
稀释完土壤样品后，需要进行均匀混匀，使得稀释液和土壤样品充分混合。
可以通过轻轻摇晃试管或使用振荡器进行混匀。
混匀后，可以将试管放入培养箱或恒温摇床中进行培养。
培养的时间和温度可以根据研究的需要进行调整。
在培养的过程中，可以观察试管中是否出现单个的菌落。
如果有菌落的出现，可以进行进一步的分离和鉴定。
如果没有菌落的出现，可能需要调整稀释液的浓度或者培养条件，以获得理想的结果。
总结起来，土壤微生物的分离稀释是一项重要的实验步骤，它可以帮助研究人员获取单个的微生物菌落，以便进一步研究其多样性和功能。
在进行分离稀释实验时，需要准备合适规格的试管，并使用稀释液对土壤样品进行逐级稀释。
土壤分离微生物实验报告
土壤分离微生物实验报告土壤分离微生物实验报告一、引言土壤是地球上最为丰富的自然资源之一，其中存在着丰富的微生物群落。
这些微生物在土壤生态系统中发挥着重要的作用，包括有机质分解、养分循环、植物生长促进等。
本实验旨在通过分离土壤中的微生物，了解土壤微生物的多样性和功能。
二、实验方法1. 样品采集在实验开始前，我们选择了三个不同的土壤样品，分别来自农田、森林和草地。
使用无菌勺子将土壤样品采集到无菌离心管中，并尽量避免与外界环境接触。
2. 稀释与涂布将采集到的土壤样品分别加入无菌的盐水中进行稀释，制备出一系列不同浓度的土壤悬浮液。
然后，将这些悬浮液均匀涂布在含有富营养培养基的琼脂平板上。
3. 培养与分离将涂布好的琼脂平板置于恒温培养箱中，在适宜的温度下培养一段时间。
待菌落形成后，使用无菌勺子将单个菌落分离到含有富营养培养基的琼脂管中，形成单菌株。
4. 鉴定与保存对于分离得到的单菌株，我们进行了形态学观察、生理生化特性测试以及16S rRNA基因测序等鉴定工作。
同时，我们将这些单菌株保存在低温条件下，以备后续的实验研究。
三、实验结果通过上述实验方法，我们成功分离出了大量的土壤微生物。
经过鉴定和分类，我们发现这些微生物主要包括细菌、放线菌和真菌等不同类群。
其中，细菌是数量最多的一类，占据了总菌落数的70%以上。
进一步的研究表明，这些细菌在形态、生理和生化特性上存在较大的差异。
有些细菌形成了光滑的菌落，而另一些则呈现出粗糙的表面。
此外，它们对不同的碳源和氮源的利用能力也有所差异，表明这些微生物在土壤中具有不同的功能和代谢特性。
四、讨论与分析土壤微生物的多样性和功能对土壤生态系统的稳定性和健康发展起着至关重要的作用。
通过本实验的分离与鉴定工作，我们初步了解了土壤微生物的多样性，并发现了它们的形态、生理和生化特性的差异。
这为进一步研究土壤微生物的生态功能提供了基础。
然而，本实验仅仅是初步的分离与鉴定工作，还需要进一步的研究来揭示土壤微生物的生态功能。
微生物学实验
微生物学实验实验一实验室环境和人体表面微生物的检查实验二油镜的使用和细菌的简单染色实验三细菌的革兰氏染色和芽孢染色实验四微生物大小的测定和酵母菌死活细胞的鉴定实验五培养基的配制与消毒灭菌实验六土壤微生物的分离纯化与鉴定实验七食品微生物检验 (一)细菌总数测定实验八食品微生物检验（二）大肠菌群数测定实验九大肠杆菌生长曲线的测定实验十IMViC与硫化氢试验实验一、实验室环境和人体表微生物的检查1.一、目的：1.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量与类型；2.观察不同类型微生物的菌落形态特征；3.体会无菌操作的重要性。
2.二、原理：1.微生物无孔不入，无处不在。
2.微生物→营养琼脂平板→菌落或菌苔。
（37 ℃倒置培养24 h）3.描述：菌落的大小、表面光滑或粗糙、干燥或湿润、隆起或扁平、边缘整齐或锯齿状、菌落透明或不透明、颜色以及质地均匀与否、疏松或紧密等，以便检查环境中细菌的类?秃褪 俊?4.细胞、放线菌、酵母菌和霉菌四大类型都可能存在，本实验重点观察细菌。
3.三、器材：1.培养基：营养琼脂平板（牛肉膏蛋白胨培养基）2.器具：无菌水、灭菌棉签、接种环（针）、酒精灯等。
4.四、步骤：1.标记。
组号/姓名、日期、样品来源。
2.接种。
3.倒置培养，37℃ 24 h4.观察结果。
5.五、结果6.样品来源菌落数菌落类型特征描写本实验室（流动空气30 min）1 大小形态干湿扁/隆透明度颜色边缘23接种室（不流动空气30min）洗手前洗手后头发屑指甲垢实验台门把1.六、思考题：1.人多的实验室与少人走动的实验室比较，平板上的菌落数和菌落类型有区别吗？试解释。
2.通过本实验，在防止培养物的污染和防止细菌的扩散方面，你有何体会？3.4.实验二油镜的使用和细菌的简单染色一、实验目的1、学习和掌握油镜的原理和使用技术。
2、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。
二、实验原理1．油镜使用原理：光镜的几种物镜中以油镜的放大倍数最大，尤其适用于微生物学研究。
医学微生物实验3：细菌的分离与纯化
实验3 微生物的纯种分离培养微生物广泛地分布在自然界的土样、水体、空气、动植物体表及人体、动物体的排泄物中。
它们以单个的菌体、无性孢子和芽孢的形式存在。
由于单一的自然界环境并不能完全满足微生物对水、空气、营养物质、温度、pH的综合要求，它们往往以“散居”的状态出现，而不能形成人们肉眼可直接观察到菌落。
不同的自然环境中，微生物的种类和数量差异很大。
肥沃的土壤，富养化的水体，是许多微生物麇集、孳生的场所，在这里存活着能分解淀粉、蛋白质、脂肪、纤维素、木质素、果胶、农药、含磷有机物（卵磷脂、肌醇、核酸等）、石油以及溶解铜矿的细菌、放线菌、真菌等多种类的微生物，如何根据微生物的生理要求，按照人类的需求，将它们从自然界中分离出来，获得纯种，发挥微生物的特长为人类的生产和生活服务，是微生物研究中最基础的实验技术。
一、实验目的：1．学会将混杂的各种微生物分离成纯种，统计分析样品中微生物的种类和数量的方法。
2．学会从菌落及培养特征区分细菌、酵母菌、放线菌和霉菌。
3．学会好氧微生物平板及斜面培养的方法。
二、实验原理：在自然界中，微生物的种类很多，数量很大，为了获得单个菌体，首先必须把要分离的材料进行适当的释放，按其生长所需要的条件，使其在平板上，由一个菌体繁殖成单个菌落，这样，就能从中挑选出所需要的纯种，由于细菌、放线菌和霉菌所要求的营养条件不同，利用不同的培养基制成平板进行分离，然后从菌落形态上的差异，可以把细菌、放线菌和霉菌三大类群区分并可计算出其数量，分别接种到试管斜面上，然后，在平板上反复进行分离培养，最后可获得纯种。
三、实验材料和用具：1．材料（1）土壤样品（2）培养基：①牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨培养基（%）牛肉膏0.3-0.5g蛋白胨 1.0gNaCl 0.5g琼脂2.0g蒸馏水100mLpH 7.2-7.4，0.1Mpa 压力，灭菌20-30分钟。
配制液体培养基时不加琼脂；半固体培养基加0.3-0.5%琼脂。
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微生物学实验-3
实验五
土壤中微生物的分离
实验目的
1．了解微生物分离和纯化的基本原理。 2．掌握常用的微生物分离纯化的方法。
实验原理
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种 或某一株微生物的过程称为微生物的分离 纯化，常用的方法有两种：
1．平板分离法（涂布法、混菌法） 2．划线分离法
实验器材
1. 微生物样品：土壤 2. 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，高氏1号培养
基，PDA培养基。 3. 溶液或试剂：盛9ml无菌水的试管，盛99ml无菌
水并带有玻璃珠的三角烧瓶，95%酒精。 4. 仪器或其他用具：天平，玻璃涂布棒，移夜枪，
无菌枪头，接种环，无菌培养皿，记号笔等。
实验方法
1．稀释涂布平板法
3. 划线时动作要轻巧，避免划破平板。 4. 注意整个操作过程是在火焰周围的无菌操作区
域内进行，操作完成后将接种工具火焰灭菌后 再放回原处。
思考题
1. 涂布好的平板在培养时为何要倒置?
知识回顾 Knowledge Review
①倒平板
将固体培养基加热溶化，待冷却至55~60℃时， 在酒精灯火焰旁，将培养基迅速倒入已灭菌的培 养皿中约15~20ml，平放于桌面上，待冷却凝固 后即为无菌平板。
倒平板操作示意图
②制备样品稀释液（以土壤为例）
准确称取土壤样品1g，放人盛有99ml无菌水并 放有小玻璃珠的三角瓶中，振摇约20min，使 微生物细胞分散，即成10-2的土壤样品稀释液； 用无菌吸管吸取10-2稀释液1mL，移入装有 9mL无菌水的试管中，吹吸几次，让菌液混合 均匀，即成10-3稀释液；再换一支无菌吸管吸 取10-3稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试 管中，也吹吸几次，即成10-4稀释液，以此类 推，连续稀释，制成10-5、10-6、10-7、10-8、 10-9等一系列稀释菌液。
涂布平板操作法示意图
涂
混
布
菌
法
法
培养基 约55℃
④培养
将平板倒置于28℃温箱中恒温培养，细菌培养1～ 2 d ，放线菌培养5～7 d ，霉菌3～5 d。
⑤挑菌落
将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种 到上述培养基的斜面上，置于28℃温箱培养，待 菌苔长出后，检查其特征是否一致，若发现有杂 菌，需再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养
2.平板划线分离法
①倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，标明培养基名 称、样品编号和实验日期。
②划线：点燃酒精灯，在火焰旁左手拿无菌平板，右 手拿接种环以无菌操作沾取少许待分离的样品， 在无菌平板表面进行平行划线、连续化线、交叉 划线、扇形划线、方格划线或其他形式的划线， 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少， 并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能 一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
使用：10-2、10-3、10-4
从土壤中分离微生物操作过程
注意：
按下加样按 钮时要轻轻 按下，注意 区别加样档 和排空档； 放开时要缓 缓放松。
加样按钮 卸枪头按钮 加样量显示窗
枪头
③涂布
在无菌平板的底部贴好标签，然后用无菌吸管 分别由10-2 、10-3和10-4 土壤样品稀释液中各吸 取一定量的稀释液（0.1ml~0.2ml）对号放入已 写好标签的无菌平板中，用无菌玻璃涂布棒在 培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5～ 10min，使菌液吸附进培养基。
③培养，挑单菌落。
平板划线操作法示意图
平板划线分离法(streak plate method)
Байду номын сангаас 1
3
4
平板划线菌落分离效果图
注意事项
1. 在稀释混合平板法中，注入培养基不能太热， 否则会烫死微生物；在混匀时，动作要轻巧， 应多次前后、 左右、顺或逆时针方向旋动。
2. 作涂布、划线用的平板，琼脂含量可适当高些， 倒平板时培养基不宜太烫，否则易在平板表面 形成冷凝水，导致菌落扩散或蔓延。