实验3红细胞比容、血沉、血红蛋白测定

三.血红蛋白含量的测定
目的：了解和掌握比色法
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
原理：在一定量的血液中加入少许盐酸，
酸不仅破坏红细胞膜，且将红细胞内的亚 铁血红素转变成高铁血红素，后者呈较稳 定的棕色。将其用蒸馏水稀释后与血红蛋 白计的标准比色板进行目测比色，即得每 100ml血液所含的血红蛋白的克数。
方法与步骤：
1.滴加0.1mol/L盐酸溶液至测定管刻度“2” 或“10%”处。
2.采血与滴加血液：用吸血管吸血至刻度20 立方毫米处；不能有气泡，反复吹洗几 次。玻棒将血液和盐酸混匀，放置１０分 钟。
3.滴加蒸馏水：逐滴滴加，然后摇匀，观察 颜色，直至比色箱中液体颜色与标准比色 板的颜色相同为止。
注意事项：
1.血液与盐酸作用时间： 2.蒸馏水逐滴滴加: 3.多做几次，取平均值: 4.及时清洗吸血管：先吸取蒸馏水冲洗几
15分钟 30分钟 1小时
4份血液：1 4份脱纤血： 份柠檬酸钠 1份生理盐水 溶液
讨论：影响血沉的因素?
血红蛋白
l 血红蛋白是脊椎动物红细胞主要组成部分，它 的主要功能是运输氧和二氧化碳。
l 血红蛋白中，血红素Fe原子的第六配价键可以 与不同的分子结合：无氧存在时，与水结合， 生成去氧血红蛋白(Hb)；有氧存在时，能够与 氧结合形成氧合血红蛋白(HbO2)。
方法与步骤
1.草酸盐抗凝剂的配制：草酸钾0.8克，草 酸铵1.2克，再加蒸馏水至100毫升。每1 毫升血液可用0.1毫升上述溶液。吸取混 合草酸盐抗凝剂溶液，置于小试管内，并 使该抗凝剂均匀分布于小试管内壁上，60 －80℃烘箱内烘干备用。
2. 采血：将血液缓缓注射于有抗凝剂 的试管中，用拇指堵住管口，倒转试 管两、三次(慢)，使血液与抗凝剂充 分混合。
干 比容： 比容： 比容： 比容：
l讨论影响比容测定的因素?
二.血沉的测定
1.目的：学习测定红细胞沉降率的方法，了 解测定其数值的意义。
2.红细胞沉降率（血沉）是指血沉管内的抗 凝血被静置一段时间（1h）后，红细胞因 重力而下沉的毫米数。它是以血浆层的高 度来计算的，血浆层越高，则血沉越快。 家畜有的疾病可以引起红细胞血沉的显著 加速，故测定红细胞血沉具有临床诊断价 值。
l 血红蛋白与氧的结合不牢固，容易离解。HbO2 的形成和离解受氧的分压和pH等因素的影响， 氧的分压和pH较高时，有利于血红蛋白与氧的 结合，反之，则有利于离解。
血红素
血 红 素 在 蛋 白 中 的 位 置
血红蛋白的功能
l 血红蛋白除了运输氧 和液C的O2p外H起，缓还冲能作够用对。血 因为HbO2在释放出一 分子氧的同时，结合 一个氢质子。这样就 可以消除由于呼吸作 用降产 低生 。的CO2引起pH的
方法与步骤:
1.采血：3.8%的柠檬酸钠作为抗凝剂，抗凝 剂与血液之间的容积比例为1：4。
2.血沉管（清洁干燥）：吸血前要混匀抗凝 血，加入血沉管的血不能带有气泡，血沉 管垂直放置。
3.检查：１５分钟，３０分钟，１小时或２ 小时检查血沉管上部血浆的高度。
实验安排：每一组观察纤维蛋白原对血 沉的影响
次，后吸取酒精冲洗几次。
l 实验要求：
记录血红蛋白含量并讨论该含量的 实际意义。
3.离心：用长颈滴管吸取试管内的抗凝血， 将滴管插入温氏分管的底部，沿管壁将抗 凝血准确加到分血管刻度10厘米处。注意 不要有气泡。将温氏分血管配平后放入离 心机中，3000转/分钟离心30分钟。
4.读数：
实验安排：
每两组：
草酸盐附 柠檬酸钠 1：4体积 脱纤血 着比容管 附着比容 柠檬酸钠 内壁烘干 管内壁烘
实验三 血液生理
l 红细胞比容测定 l 血沉的测定 l 血红蛋白含量的测定
一.红细胞比容的测定
实验目的：学习测定红细胞比容的方法
l 实验原理：将抗凝血放在特制有刻度的玻璃管
(温氏分血管)中，经过离心沉淀，使血细胞与血 浆分离。红细胞下沉，彼此压紧而又不改变每个 血细胞的正常形态。根据玻璃管刻度的读数，测 出红细胞占全血的容积百分比即红细胞比容。此 时管中的血液分为三层：上层为淡黄色的透明液 体即血浆；中层为很薄的一层呈灰白色的白细胞 和血小板；下层为挤压很紧的暗红色的红细胞。