第十一章 水质细菌学检验
实验11水的细菌学检查
（1）将水样稀释成Байду номын сангаас0-1。 （2）分别吸取10-1的稀释水样1ml和原水样1ml，分 别加入装有10ml乳糖蛋白胨发酵管中。另取10ml
2．细菌总数测定
自来水 （1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两 个平皿。 （2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白 胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养 基充分混匀。 （3）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml，作空白对照。 （4）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进 行菌落计数。
二、实验原理
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌 种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不 可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能 生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落， 计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用 普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
和100ml原水样，分别注入装有 5 ml和50ml三倍
浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。混匀后 置37℃培养24h。 以下步骤同生活饮用水的试验方法。
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样 3、培养基：乳糖蛋白胨液体培养基（内有倒置的杜 氏小管），3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基（内有 倒置的杜氏小管），伊红美蓝琼脂平板培养基。
四、实验步骤
1．水样的采取 同水中细菌总数测定实验。
自来水检查
（1）初发酵试验 在2个含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养 液的烧瓶中，各加入水样10ml；在10支含有3ml三倍浓缩 乳糖蛋白胨发酵管中，各加入水样10ml。混匀后置37℃培 养24h。
本科生实验-水的细菌学检查
2
大肠菌群的测定
大肠菌群是指：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽孢的 杆状细菌，并在乳糖培养基中37℃培养24~48 h能产酸产气。水 中大肠菌群的数目可以说明水源是否被粪便污染，并间接推测 水源受肠道病原菌污染的可能性。标准：1000 ml自来水中大 肠菌群数不超过3个。
一 水中细菌总数的测定 目的要求
器
材
1 培养基：煌绿乳糖胆盐肉汁培养基发酵管（内 有倒置德氏小管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌 水 2 实验用具：灭菌三角烧瓶，灭菌吸管，灭菌试 管
操作步骤
1 采集水样
采用细菌总数测定实验中的池水样品，取其原水样、10–1稀释水 样、10–2 稀释水样。
2. 初发酵试验
吸取上述三种水样各1 ml，分别注入装有10 ml普通浓度煌绿乳 糖胆盐肉汁发酵管中。另取10 ml原水样注入装有5 ml三倍浓缩 煌绿胆盐乳糖肉汁的试管中。混匀后，37℃培养24 h。
3. 平板分离
经24 h培养后，将产酸产气的发酵管分别划线接种于伊红美蓝琼 脂平板上，于37℃培养24 h，将符合下列特征的菌落的一小部分， 进行革兰氏染色，镜检。 a. 深紫黑色、有金属光泽。 b. 紫黑色、不带或略带金属光泽。 c. 淡紫红色、中心颜色较深。
4. 复发酵试验
经镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌者，则挑取该菌落的另一部分，重 新接种于普通浓度的煌绿胆盐乳糖肉汁发酵管中，每管可接种来自 同一初发酵管的同类型菌落1~3个，37℃培养24h，结果若产酸又产 气，即证实有大肠菌群存在。 证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性结果，结合大肠 菌群检数表(接种水样总量为11.11 ml，10、1、0.1、0.01 ml各1份， “+”发酵阳性；“-”发酵阴性 )得到大肠菌群数。
微生物实验-水的细菌学检查
一、实验目的 1．学习水样细菌总数的测定方法。 2．了解大肠菌群的数量与生活饮用水的
重要性。
生活用水的水源常被生活污水或工业废水或人与动 物的粪便所污染，可能含有不同类型的微生物，有 腐生性的和病原性的。
腐生性微生物对人无害，而病原性微生物则能引起 传染病的发生。
必须对生活用水及其水源进行严格的细菌学检查。
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30～ 300之间，则以最接近300或30的平均菌落数 乘以稀释倍数进行报告。
五、思考题
你所测的池塘水、河水或湖水的污秽程度 如何?通过实验你对保护水源水有何看法？
经检查，水样是否合乎饮用标准？
2.细菌总数的测定 (1)自来水 (2)池塘水、河水或湖水
①水样稀释 ②吸取稀释后水样1ml加入平板 ③向平皿内倾注培养基(15～20 mL) ④37℃温箱，倒置培养24h，进行菌落计数
3.菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 。
（2）选择平均菌落数在30～300之间稀释度 的平板。当只有一个稀释度的平均菌落数 符合此范围时，则以该平均菌落数乘以稀 释倍数，作为该水样的细菌总数进行报告。
我国规定1 ml自来水中的总菌数不得超过100个。
三．实验用品
培养基： 牛肉膏-蛋白胨培养基
四、实验操作
（一）细菌总数的测定 1. 水样采集
自来水 将自来水龙头用火焰烧灼3 min灭菌，再拧开水龙头 流水5 min，以排除管道内积存的死水，随后用已灭 菌的三角瓶接取水样，以供检测。
池水、河水或湖水 将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面10～15 cm深的 水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满 后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于 冰箱，但不能超过24 h。
水细菌学检测
实验目的
1）学习水的细菌学检查方法及原理
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2) 学习水样的采集方法，了解大肠菌群的数量在饮 用水中的平板计数原则及其在饮用水中的重要性。 3）整个实验操作要求学生自己独立完成，培养学生 的实验设计及动手能力。
பைடு நூலகம் 实验原理
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饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总数和 大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升水样在 普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后所生长 的菌落数。一般规定，1毫升自来水的总菌数不 得超过100个。
总大肠菌群mpn100ml或cfu100ml不得检出耐热大肠菌群mpn100ml或cfu100ml不得检出大肠埃希氏菌mpn100ml或cfu100ml不得检出菌落总数cfuml100logowww1pptcom实验原理如果水源被粪便污染则有可能也被肠道病原菌污染而引起伤寒痢疾霍乱等肠道病的流行但肠道病原菌在水中数量较少又易变异与死亡故从水中特别是自来水中分离出病原菌常常有困难
杜氏小管：装满乳糖发酵液后倒置于发酵试管中，不能有气泡。
小试管：装满乳糖发酵液后倒置于三角瓶发酵管中，不能有气泡。
本节需准备的材料
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A
B
C
50mL三倍浓缩的三角瓶发酵管2个；5mL 三倍乳糖蛋白胨发酵管10支；25毫升移液 管1支（包扎、塞棉花）；无菌三角瓶1个 （塞棉塞） 50mL三倍浓缩的三角瓶发酵管2个；5mL 三倍乳糖蛋白胨发酵管10支；25毫升移液 管1支（包扎、塞棉花）；无菌三角瓶1个 （塞棉塞） 50mL三倍浓缩的三角瓶发酵管1个；5mL 三倍乳糖蛋白胨发酵管1支；10mL乳糖发 酵管3支；25毫升移液管1支（包扎、塞棉 花）；无菌三角瓶1个（塞棉塞）；1mL无 菌枪头2支；4.5mL无菌水2支
医学：水的细菌学检查-细菌总数的测定
[请在此处插入参考文献1]
01
03 02
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
培养基
普通肉汤培养基
用于一般细菌的培养，含有适合细菌 生长的营养成分。
选择性培养基
根据需要选择适合特定细菌的选择性 培养基，以筛选和鉴别特定细菌。
实验设备
灭菌锅
恒温培养箱
显微镜
移液器
用于培养基和实验器具 的灭菌，确保无菌状态。
用于细菌的培养，保持 恒定的温度和湿度。
观察细菌形态和染色情 况，进行细菌鉴定。
取适量水样，加入培养基中， 在恒温培养箱中培养24小时， 观察并记录菌落数。
实验日期
XXXX年XX月XX日
实验材料
水样、培养基、无菌吸管、培 养皿
实验结果
菌落数分别为XX、XX、XX、 XX、XX。
结果解读
根据实验结果，可以 得出水样中细菌总数 的数量。
分析细菌总数高的可 能原因，如环境污染、 水质处理不当等。
将细菌总数与国家标 准进行比较，判断水 样的卫生质量。
误差分析
误差来源
取样过程中可能存在的污 染、培养基的质量问题、 操作过程中的失误等。
误差控制
采用无菌操作技术，确保 培养基的质量，提高实验 人员的操作技能和责任心。
误差消除
重复实验，取多次测量的 平均值作为最终结果，以 提高实验的准确性和可靠 性。
根据细菌的生长速度和培养基的特性，确定培养时间，一般为18-48小时。
结果观察
观察内容
在培养期间，观察细菌的生长情况， 记录菌落的数量、形态等信息。
结果判定
根据菌落的数量和分布情况，判断水 样中细菌总数的多少，并评估水质的 安全性。
水的细菌学检查
24h和48h产酸产气的初发酵菌落均需在 伊红美蓝琼脂或复红亚硫酸钠培养基上， 进行平板划线，分离出阳性菌落。
3．复发酵试验 阳性菌落经涂片染色鉴别为G-，无芽 孢杆菌者，再经过乳糖蛋白胨液体培养 基进行复发酵试验，经24h培养产酸产气 者，可确认为大肠菌群阳性结果。
三．实验用品
培养基： （一）牛肉膏蛋白胨琼脂培养基 （二） 乳糖蛋白胨液体培养基 3倍浓缩乳糖蛋白胨液体培养基 红美蓝琼脂培养基（制成平板）
（5）若所有稀释度的平均菌落数均小于30， 则按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释 倍数进行报告。 （6）若所有稀释度的平均菌落数均不在 30～300之间，则以最接近300或30的平 均菌落数乘以稀释倍数进行报告。
四、实验操作
（二）多管发酵法测定水中的大肠菌群 1. 水样采集 2. 自来水检查 （1）初（步）发酵试验 （2）平板分离 （3）复发酵试验
2.细菌总数的测定 (1)自来水 (2)池塘水、河水或湖水 ①水样稀释 ②吸取稀释后水样加入平板 ③向平皿内倾注培养基(15～20mL) ④37℃温箱，倒置培养24h，进行菌落计数
水样稀释 取1ml水样加入到9ml无菌水的试管，振 1 荡混匀，得稀释度为10－1； 从10－1管中取水样1ml加到第二支9ml无 菌水的管中，振荡混匀，得10－2……
大肠菌群的测定 若水源被粪便污染，则有可能也被肠 道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容 易死亡与变异，因此数量较少，要从中特 别是自来水中分离出病原菌常较困难与费 时，这样就要找到一个合适的指示菌，此 指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原 菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则 大多数情况也保证没有病原菌。最广泛 应用的指示菌是大肠菌群(coliform group)。 大肠菌群的定义是：一群好氧和兼性厌氧、 革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖 培养基中，经37℃，24～48 h培养能产酸产气。 根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被 粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌 污染的可能性。
自来水水质的微生物学检测实验设计
自来水水质的细菌学检查一、文献综述1.（1）水质细菌学检验的意义生活自来水及其水源水等水体受到生活污水、工农业废水或人和动物粪便的污染后,水中的细菌数可大量增加,其中病原菌也随之增加引发传染危害人类健康因而水中细菌总数和大肠菌数量可反映水体受微生物污染的程度水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。
故水的细菌学检验对了解水体受污染程度在流行病学和提供水质标准中有重要意义和价值它是评价水质污染程度的重要指标之一。
（2）总大肠菌群的检测意义大肠菌群系：指一群在37°C、24小时能发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
测定的意义：大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除--般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等)，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。
它反映了水源是否被粪便污染，同时间接地指出水源是否有肠道致病菌污染的可能性。
大肠菌群数系以每1g (或mL)检样内大肠菌群近似可能数MPN (the most probable number-简称MPN)表示（3）耐热大肠菌群的检测意义作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。
医学：水中的细菌学测定
条件致病菌
条件致病菌
是指在特定条件下能够引起疾病的细菌，如大肠杆菌、绿 脓杆菌、变形杆菌等。
条件致病菌的特性
通常为人体肠道或呼吸道正常菌群，但在特定条件下，如 机体免疫力降低或细菌数量增多时，可以引起疾病。
条件致病菌的测定
在水中条件致病菌的测定中，通常采用同样方法进行增菌、 分离培养、鉴定等，以了解水中是否存在条件致病菌，并 评估其对人群健康的潜在威胁。
体情况制定限量标准。
03
其他常见致病菌数量
根据具体情况制定其他常见致病菌的数量限量标准。
06 水中的细菌学测定在实际 应用中的问题与挑战
测定方法的局限性
培养基选择性
01
培养基的成分和培养条件可能对某些细菌的生长产生限制，导
致某些细菌无法被检测到。
培养时间
02
培养时间较长，需要一定时间才能得到结果，可能影响细菌的
背景
随着工业化和城市化的快速发展，水 污染问题日益严重，水中的细菌学测 定对于保障人类健康和生态平衡具有 重要意义。
重要性
健康保障
政策制定
通过水中的细菌学测定，可以及时发 现并控制水体中的有害细菌，防止水 源性疾病的传播，保障公众健康。
基于水中的细菌学测定结果，政府可 以制定和调整相关政策，加强水质监 管，提高水质标准。
细菌种类的鉴别挑战
形态学相似
有些细菌在形态上相似，可能难以区分，导致鉴定不准确。
基因测序技术
基因测序技术是更准确的方法，但需要较高的技术和设备支持，且 成本较高。
抗原性差异
不同细菌的抗原性存在差异，但抗原性检测需要特定的试剂和设备， 且结果可能存在主观性。
THANKS FOR WATCHING
〖医学〗水的细菌学检查---细菌总数的测定
弄不明白，治疗受到制约，在小小SARS、 禽流感 面前竟 束手无 策，在 糖尿病 、癌症 、心脑 血管疾 病、尿 毒症等 相当多 疾病面 前更是 不得不 求助或 借助中 医治疗 。一个 是疗效 不确实 ，一个 是有些 甚至相 当多疾 病无法 治疗， 这就是 中西医 学结合 的缘由 。然而 ，由于 二者是 两套理 论、两 股道上 跑的车 （肺血 液血小 板红血 球白血 球）， 风马牛 不相及 ，从理 论上讲 就没有 结合的 可能， 只是形 式上的 融合罢 了。（ 肺炎青 霉素肝 炎）
在西方，盖伦的一生生活在罗马帝国时 安东尼 父子的 执政期 。彼时 ，（高 血压心 脏病糖 尿病） 罗马帝 国的繁 荣，为 盖伦的 医学成 就、以 及西方 医学的 昌盛， 提供了 可靠的 政治、 经济、 科技和 文化保 证。盖 伦继承 希波克 拉底的 学术思 想，著 述200余 部著作 ，（肺 血液血 小板红 血球 白血球 ）现存 的83部 著作中 ，内容 涉及解 剖、生 理、病 理、卫 生、药 物、《 希波克 拉底文 集》研 究、哲 学、语 言学、 逻辑学 、数学 、历史 、法律 等。倡 导实证 医学， 他的科 学方法 论（传 染病丙 肝乙肝 甲肝） 具有重 视实验 、疾病 局部定 位思想 、重视 形式逻 辑、强 调演绎 法等特 点，对 后世西 医学的 （肺血 液血小 板红血 球白血 球）发 展影响 深远。 （肺炎青霉素肝炎）
中医即中国传统医药学，是 现今医学分为传统医学、基于“生 物-医 学模式 ”近代 发展起 来的西 医，20世纪西 医又发 展到“ 社会-心 理-生 物医学 ” （高血压心脏病糖尿病）或综合医学模 式，后 基因组 时代系 统生物 学的兴 起，（ 传染病 丙肝乙 肝甲肝 ）形成 了系统 医学在 全球的 迅速发 展，成 为继传 统医学 、西医 学之后 中、西 医学汇 通的未 来医学 。当代 中国医 学类专 业比较 优秀的 学校有 北京大 学、（ 肿瘤癌 症胃癌 肠癌肺 癌）
水质的细菌学检查
水质的细菌学检查一、目的要求(一)学习水质的细菌学检查法(二)了解水质状况同细菌数量的关系及大肠菌群的数量在饮水中的重要性。
二、基本原理检测水中的细菌数量是评价水质状况的重要指标之一。
饮水是否合乎卫生标准，需要进行水中细菌数量及大肠菌群数量的测定。
大肠菌群是肠道最普遍存在和数量最多的一群细菌，由于大肠菌群是一群能发酵乳糖的革兰氏阴性、无芽孢杆菌，它们在乳糖培养基中经37℃培养24小时即能产酸、产气，所以常将其作为粪便污染的标志。
饮用水一般规定：1毫升自来水中总菌数不得超过100个；1000毫升自来水肠菌群数不得超过3个。
三、实验材料培养基及器皿、牛肉膏蛋白胨培养基、乳糖蛋白胨发酵管（倒置小管）、三倍乳糖蛋白胨发酵管（倒置小管）、伊红美蓝琼脂培养基、无菌空瓶、无菌水、无菌培养皿、移液管、试管。
四、实验客(一)采取水样1、自来水：从学校各生活区取样。
先将自来水龙头用火焰灭菌,再开放水龙头使水流1—2分钟后，用无菌空瓶接取水样。
2、池水、湖水或河水：用无菌空瓶取距水面 10—15厘米深层水样。
水样采取后应立即检验，不得超过4小时。
(二）水中细菌总数测定l、自来水：稀释水样：原水样和10-1 水样，用无菌移液管分别吸取l毫升原水样和10-1水样，分别注入二个无菌培养皿中。
每皿各加13--15毫升已融化并冷却到4 5-- 50℃的牛肉膏蛋白胨培养基，轻轻旋转，使培养基与水样充分混匀，待凝固后，将平板倒置于37℃恒温箱，培养24小时进行菌落计数。
制作培养基方法、消毒灭菌、接种、计数皆参照参微生物学实验指导，具体如下：培养基制作：实验五、培养基的制备培养基配方：附录二、常用培养基之一培养基灭菌：实验六、灭菌与消毒水样接种：实验七、土壤微生物的分离与测数细菌总数测定：实验七、土壤微生物的分离与测数2、池水、湖水或河水等。
稀释水样：稀释倍数视水样污浊程度而定，使水样培养后每个平板中的菌落数在30--300之间的的稀释度最为合适。
水环境卫生细菌学检测—生活饮用水生物指标监测
主要内容
生活饮用水卫生标准： 细菌总数 大肠菌群
一、细菌总数
①定义：将定量的水样接种于营养琼脂培养基中，37℃下经24h培养后， 所生长的菌落数，然后根据接种的水样量即可算出每毫升水中所含的 菌数。单位：cfu/mL。 ②意义：水体有机物污染的指标 ③测定方法：稀释平板计数法（一般采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基） ④测定步骤：采样→稀释水样→培养→菌落计数
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二、大肠菌群－滤膜法
优点：操作简单、快速 缺点：适用于杂质较少的水样，如井水和自来水 步骤：①配制伊红美蓝琼脂培养基 ②滤膜及滤膜过滤
水的细菌学检查 ppt课件
一、实验目的
1．学习水样细菌总数的测定方法。 2．掌握水中大肠菌群的测定方法。 3．了解大肠菌群的数量与生活饮用水的
重要性。
二、实验原理
（一）细菌总数的测定 水中的细菌总数可反映出水体被有机
• 多管发酵法使用历史较久，又称水的标 准分析方法，为我国大多数卫生单位与 水厂所采用；
• 滤膜法是一种快速的替代方法，而且结 果重复性好，又能测定大体积的水样， 目前国内已有很多大城市的水厂采用此 法。
• 粪大肠菌群
• 粪大肠菌群（fecal coliform）是能在 44.5℃（44～45 ℃）发酵乳糖的大肠菌 群（thermotolerant coliform），以埃希氏 菌属为主。
（1）个别其他类型的细菌在上述条件下也 可能产气，需进行下述试验（即平板分 离和复发酵试验）才能进一步确证。
（2）培养24h后产酸，但未见产气者，不 能立即判断为阴性结果，由于菌量少， 也可能延迟至48h后才产气，应视为可疑 结果，也需进行下述试验（即平板分离 和复发酵试验）进一步确证，48h后仍不 产气，可判断为阴性结果。
• 我国饮用水的卫生学指标规定：在lmL自 来水中细菌总数不得超过100个。
二、实验原理
（二）水中大肠菌群的测定（多管发酵法） 多管发酵法包括：初发酵试验、平板分
离和复发酵试验三部分。
1．初发酵试验
初发酵试验的液体培养基含有乳糖、蛋 白胨和溴甲酚紫。
乳糖起选择性碳源的作用，大肠菌群 可发酵乳糖产酸（有机酸），产气 （CO2+H2）。
四、实验操作
水质的细菌学检测
水质的细菌学检测一、实验目的学习水中细菌总数及大肠菌群数测定的原理，并掌握其操作方法。
二、实验原理1、细菌总数的测定：水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。
由于重金属及其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。
本实验采用标准平皿法对水样中细菌做计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度。
由此法所得的菌落数实际上要低于水样中实际活菌的数目。
一般规定，1ml饮用水中总菌数不得超过100个。
2、大肠菌群数测定：采用多管发酵法，以最近似数的方法来记载。
此一数字是根据概率公式来计算，有大于实际数字的倾向，在增加每种稀释度的试管重复数后，可减小偏差。
三、实验器材培养基：营养琼脂培养基材料：无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿、盛有90ml及9ml灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管、杜氏小管、革兰氏染液四、实验步骤（一）细菌总数的测定1、样品稀释液的制备采集水样，吸取10ml水样，注入盛有90ml无菌水或生理盐水与三角瓶中，混匀成10-1稀释液，按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3，每个稀释度分别注入两个培养皿中，每皿1ml。
2、平板接种培养采用混合平板培养法计数，每一稀释度设置2个重复，然后在6个培养皿中分别倒入已融化并冷却至45~50℃的细菌培养基，轻轻转动平板，使菌液与培养基混合均匀，冷凝后倒置，适温培养，至长出菌落即可计数。
3、结果报告与计算计算结果时，每个稀释度使用两个平板，取其平均值，达到规定培养时间，应立即计数，应将平板放置于0~4℃，但不得超过24h，不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比。
（二）大肠菌群检验1、乳糖发酵试验样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管，并留一管作为空白对照，36±1℃培养24±2h，观察是否产气。
2、报告根据观察到的产气管数，即大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml （g）大肠菌群的MPN值。
实验十一水中细菌总数的测定
根据菌落计数结果，计算每毫升水样中的细菌总数。计算公式 为：细菌总数（cfu/mL）=（平均菌落数×稀释倍数）/接种体 积。同时，计算标准差和变异系数，评估结果的可靠性。
04 实验结果与数据分析
菌落形态描述及数量统计
菌落形态
在培养皿中观察到不同形态的菌落， 包括圆形、不规则形状等。菌落表面 光滑或粗糙，颜色也有所不同，从白 色到黄色不等。
结果分析与讨论
结果分析
根据实验结果，可以对水样中的细菌总数进行评估。如果细菌总数超过了相应的卫生标准，则说明水 样受到了污染，需要采取相应的措施进行处理。
结果讨论
在实验过程中，可能会受到一些因素的影响，如温度、pH值、营养物质等。这些因素可能会导致实验 结果的偏差。因此，在讨论实验结果时，需要考虑这些因素的影响，并对实验结果进行合理的解释和 讨论。同时，也可以提出改进实验方法的建议，以提高实验的准确性和可靠性。
时一般采用平板计数法，选择菌落数在30-300之间的平板进行计数，
以确保结果的准确性。
03 实验步骤与操作
样品稀释与接种
样品稀释
取1mL水样，加入9mL无菌水中，充分混匀，得到10^-1稀释液。以此类推， 制备10^-2、10^-3等稀释液。
接种
分别取不同稀释度的水样1mL，倾注于无菌平皿中，每个稀释度做两个平行样。 同时，以无菌水作空白对照。
计数误差
在细菌计数过程中，可能因计数不准确或视野选择不当导 致误差。为减小误差，应采用合适的计数方法，如平板计 数法，并选择具有代表性的视野进行计数。
提高实验准确性的建议
严格控制实验条件
在实验过程中，应严格控制温度、湿 度、光照等实验条件，确保实验结果 的准确性和可重复性。
实验二水质的细菌学检测(教案).docx
实验二水质的细菌学检测1水中细菌总数的检测H的和原理水屮细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。
山于重金属及某些其它有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。
本试验采用标准平皿法対水样中细菌作计数,这是一•种测定水中好氧的和兼性厌氧的界养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在, 此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样屮所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样屮真正存在的活细菌的数目。
细期总数是指1毫升水样在营养琼脂培养基中，37C、24小吋培养后所生长的菌落数。
一•般规定，1毫升口来水中总菌数不得超过100个。
材料和器皿（1）培养基①营养琼脂培养基②2216E培养基：蛋白腺5.0克酵母膏1.0克FeP04 0. 01 克琼脂1&0克陈海水1000毫升pH 7. 6〜7. 8（2）无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养I1IL,盛有90ml及9mL灭菌蒸懈水的锥形瓶和试管。
方法和步骤（1）采集水样。
（2）吸取10ml水样（河水、污水、游泳池水或港湾水等），注入盛有90ml无菌水或无菌海水的三角瓶屮，混匀成10-1稀禅液，在吸水样前，水样应彻底搅动均匀。
（3）按10倍稀释法将水样稀释成10-2. 10-3. 10-4o（4）根据水样的洁净程度，污染严重者选KX 10-2. 10-3. 10-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿lmlo稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30?/F0NT>300个之间。
（5）注入彻底融化，然后冷却到45°C的营养琼脂培养基（用于河水样）或2216E培养基（用于海水、港湾水样）约1亦1,立即旋摇培养血，充分混匀，水平放置至固化。
第十一章 水质细菌学检验
• （1）生理生态
• 种类：痢疾杆菌(痢疾志贺氏菌) 、副痢疾杆菌
大小 痢疾杆菌 副痢疾杆菌 0．4~0．6× 1．0~3．0um 0．5× 1．0~1．5um 革兰氏 染色 阴性 阴性 芽孢、荚 膜、鞭毛 无 无 症状 重症 较轻，通常又称肠炎
（二）致病机理
• 内毒素 • 损害了人体肠道细胞，引 起肠道痉挛、腹泻等症状。
二 大肠菌群（Coliform Bacteria Group）和 饮用水
The preferred fecal indicator: • Can be tested for easily • Is of human or other animal origin • Survives as long as, or longer than, pathogens • Is present at densities correlated with fecal contamination • Can be used as a surrogate for many different pathogens • Is appropriate for fresh and saline aqueous environments Fecal indicator bacteria: bacteria used to measure the sanitary quality of water
受纳污水的种类及数量
环境影响因子
例如，受到医院污水、垃圾污染 的，病原菌数量将会很大，受到 农业土壤污染的藻类数量将会猛 增。由于细菌不喜欢阳光、好附 着在固体上，因而水底和岸边的 细菌数量高于水面和河、湖中央 的细菌。
• 提问：地下水饮用时的卫生 程度与什么有关？ • 深度及地表水污染程度
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（二）致病机理
•肠外道毒素细菌传染病主要由病人带菌的
由口进入人体
释放出外毒素
粪霍便乱弧污菌染水体小肠而中大传量繁播殖。 破坏肠细胞膜
肠细胞大量脱水、电解质失衡
腹泻或休克、死亡
• 霍乱18世纪传入，流行百次，1952年绝迹。
• 这三种致病菌是水中最为常见的致病菌，都属于肠道传染病
菌，其它病原菌如变形杆菌、肠炎耶尔氏菌、沙雷氏菌引起的
问题
• Why don't we test for the pathogens themselves?
• 在饮用水卫生检测中为什么不直接测定 病原菌？
0．5×
阴性
1．0~1．5um
无
重症
无
较轻，通常又称肠炎
（二）致病机理
• 内毒素 • 损害了人体肠道细胞，引
起肠道痉挛、腹泻等症状。
• “极易耐药，预防为主”
三 霍乱弧菌
• 病症：霍乱（ “最可怕的瘟 疫”）
• 甲级传染病（法定隔离） • 重—呕吐、“米汤样”大便、
腹疼和昏迷等，严重的常 常在症状出现后12h内死 亡，死亡率极高。 • 轻—只造成腹泻。 Vibrio cholerae bacteria infect between 100,000 and 300,000 people each year.
• 提问：地下水饮用时的卫生 程度与什么有关？
• 深度及地表水污染程度
• 由于土壤层层过滤，一般细菌很 少
• 目前大多数城市集中供水水源为江河湖泊，难免 受到各种污染包括病原污染，病原菌的监测与控 制责任重大。
• 提问：海水中 有能引起人体 疾病的细菌 （病原菌） 吗？为什么？
• 没有；海水中含
分离技术上较为复杂，需较多的人力和较长的时间。
• 间接病原菌测定：测定水中是否有肠 道正常细菌的存在——若检出，则表明水被
粪便所污染，则有肠道病原菌的可能。
第三节 细菌总数和大肠菌群与生活 饮用水标准
微生物指标 限 值
总大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL） 不得检出 耐热（粪）大肠菌群（MPN/100mL或CFU/100mL） 不得 检出 大肠埃希氏菌（MPN/100mL或CFU/100mL） 不得检出 菌落总数（CFU/mL） 100
伤寒杆菌
小肠淋巴结上繁殖
进入血液和各种脏器
细菌死亡时，内毒素进入血液循环 破化白血球，使白血球释放
出热原性物质进入大脑
热原性物质破化大脑的体温调节机制
持续发热、脏器炎症、腹泻
昔日治疗伤寒特效药氯霉素，如今几乎对伤寒无效 ，预防为主
• 37 ℃能耐20天，加热到60℃能耐10min，对1
％的二石、炭酸痢，疾可抵杆抗菌半小时。
11.3.1 水中细菌总数的检测
（2）计算方法 ①首先选择平均菌落数在30～300者进行计算。当只有一 个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即可用它作为平均 值乘其稀释倍数。 ②若有两个稀释度的平均菌落数都在30—300之间，则应 按两者的比值来决定。若其比例小于2，应报告两者的平 均数；若大于2，则报告其中较小的数字。 ③如果所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释 度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
方法和步骤 （4）根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、 10-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀 释液分别注入两个培养皿，每皿 1ml。稀释度的选择是本 试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于 30—300个之间。
11.3.1 水中细菌总数的检测
一 水中细菌总数的检测
目的和原理
水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相 关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。由于 重金属及某些其它有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用， 因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污 染。
一 水中细菌总数的检测
采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水 中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在 水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存 在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一 个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数 实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。
• 传播方式：食物和饮用水 • ——细菌性痢疾(与阿米巴痢疾不同)（乙类传染病），症 状为急性腹泻，通常大便中有血及粘液，某些病例中有发 烧。
• （1）生理生态
• 种类：痢疾杆菌(痢疾志贺氏菌) 、副痢疾杆菌
大小
革兰氏 芽孢、荚
症状
染色 膜、鞭毛
痢疾杆菌 副痢疾杆菌
0．4~0．6× 阴性
1．0~3．0um
方法和步骤
（5）注入彻底融化，然后冷却到45℃的营养琼脂培养基 （用于河水样）或2216E培养基（用于海水、港湾水样） 约15ml，立即旋摇培养血，充分混匀，水平放置至固化 。 （6）接种河水的培养皿，倒置于37℃培养24小时。接种 海水样，港湾水样的培养皿，应倒置后于18—20℃下培 养到长出明显菌落（5天左右）止。
• 大小： • 0．5~0．8×1~3．5um • 特征：周生鞭毛，革兰氏
阴性反应，无芽孢和荚膜
在地面普通水中可生存1～3周，井水中可生存约１ 周，在粪坑及污水中可生存1～2个月。
（二）致病机理
• 通过内毒素致病
• (内毒素是其细胞壁的成分，化学成分为脂多糖，当细菌死 亡分裂时会释放到环境中。)
必须由口进入人体
症状较轻通常为肠炎
• 防治饮用水传染病的关键是严防水 源被粪便污染。
• 如何知道饮用水是否受到粪便污 染呢？
• 检测肠道病原菌数量
第三节 细菌总数和大肠菌群与生活 饮用水标准
••通通常常检不测直大接肠检测菌—群—（作为肠道正常菌的代表）的存
• 水中存在病原菌的可能性很小，其他各种细菌的种类却很
在多及，数要量排。除一切细菌而单独直接检出某种病原菌来，在培养
盐量很高（一般 3.2~4%）
第二节 水中的病原细菌
• 水中的细菌只有很少的一部分是病原菌 （或称致病菌）
• 其中只有更少的病原菌能经食道进入肠 道引起疾病，为什么？
• 口中溶菌酶；正常胃酸pH3.2。
• 此类水中病原菌若经水传播， 在消化道 滋生导致疾病—肠道传染病
（一）生理生态
• 种类：伤寒沙门氏菌、副 伤寒沙门氏菌和乙型副伤 寒沙门氏菌。
一 水中细菌总数的检测
细菌总数是指1毫升水样在营养琼脂培养基中， 37℃、24小时培养后所生长的菌落数。
一般规定，1毫升自来水中总菌数不得超过 100 个。
一 水中细菌总数的检测
材料和器皿 （1）培养基
①营养琼脂培养基 ②2216E培养基：蛋白胨 5.0克; 酵母膏 1.0克; FePO4 0.01 克; 琼脂 18.0克; 陈海水 1000毫升; pH 7.6～7.8。 （2）无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿，盛有90ml 及 9mL灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。
• 提问：雨雪中 的细菌数量种 类与什么有 关？
直接与空气的洁 净程度
间接由地面的洁 净程度
Байду номын сангаас
• 提问：河流、 湖泊中的细菌 数量种类与什 么有关？
受纳污水的种类及数量
环境影响因子
例如，受到医院污水、垃圾污染 的，病原菌数量将会很大，受到 农业土壤污染的藻类数量将会猛 增。由于细菌不喜欢阳光、好附 着在固体上，因而水底和岸边的 细菌数量高于水面和河、湖中央 的细菌。
11.3.1 水中细菌总数的检测
（2）计算方法 ④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均 菌落数乘以稀释倍数报告之。 ⑤如果全部稀释度的平均菌落数均不在30—300之间，则以最接近 300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落计数的报告，菌落在100以内时，按实有数报告；大于100时 ，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方 法计算，为了缩短数字后面的零数也可用10的指数来表示。
11.3.1 水中细菌总数的检测
结果与分析 取同一稀释度的平板培养物，依菌落计算原则进行计
算。 （1）菌落计算原则
平皿菌落的计算，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查 ，防止遗漏，也可借助于菌落计数器计数。对长得相当接 近，但不相触的菌落，应予以—一计数。对链状菌落，应 当作为一个菌落来计算。平皿中若有较大片状菌落时则不 宜采用，若片状菌落少于平皿的一半时，而另一半中菌落 分布又均匀，则可将其菌落数的2倍作为全皿的数目。算
11.3.1 水中细菌总数的检测
方法和步骤 （1）采集水样。 （2）吸取10 ml水样（河水、污水、游泳池水或港 湾水等），注入盛有90ml无菌水或无菌海水的三 角瓶中，混匀成10-1稀释液，在吸水样前，水样应 彻底搅动均匀。 （3）按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、10-4
11.3.1 水中细菌总数的检测