黄酮类化合物的提取分离
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• 依次用沸甲醇、沸水、 7%酚 /水、 15% 酚 /醇洗 脱，分步收集、检查、合并。 • 大部分苷类可用 7% 酚 / 水洗下，经减压浓缩至 小体积，乙醚除酚，余下水层经减压浓缩得较 纯黄酮苷。
4． 离子交换法
• 用阳离子交换树脂从水提液中吸附黄酮 类化合物，与不被吸附的杂质分离，再 用甲醇将黄酮类化合物洗脱。 • RSO3-H+ ArOH（黄酮） 无法交换， 故实际上树脂仅起到吸附作用。
３．利用酸性强弱，采用pH梯度萃取法
混合物溶于有机溶剂，依次用５％ NaHCO3 、 ５ ％ Na2CO3 、 0.2%NaOH 、 4%NaOH萃取，相应的黄酮类化合物洗脱 顺序： 7,4’ －二羟基 7 或 4’ 羟基 一般 酚羟基５－羟基黄酮
４．根据分子中某些特定官能团进行分离
醋酸铅沉淀法
三、分离
1. 极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离
常用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。 １）聚酰胺层析：主要有聚己内酰胺型 (Perlon)、六次甲基 二胺已二酸盐(Nylon)型、聚乙烯吡咯烷酮(Polyclar)型三种。 其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，吸 附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。
OCH3 OH
OH
O
R=芹菜糖
OH
O
I（具有邻二酚羟基）
II（无邻二酚羟基）
原料（种子） 石油醚浸泡脱脂 脱脂药料 乙醇提取 提取液 减压浓缩后，用醚处理杂质 醚不溶物 溶于热水中，煮沸，逐滴加入中性醋酸铅的热水溶液， 直至不再析出沉淀为止，乘热过滤 棕色沉淀(A) 悬浮乙醇中，通H2S，过滤 滤液 浓缩至小体积， 冰箱放置 黄色结晶 乙醇重结晶 浅黄色蔟状结晶(graveobioside A)(I) 沉淀(PbS) 滤液 加入碱式醋酸铅的热水溶液至沉淀完全，过滤 黄色铅盐沉淀(B) 同铅盐(A)法进行复分解 晶块 溶于少量乙醇中，放置 黄色结晶 乙醇重结晶 浅黄色针晶(graveobioside B) (II)
2． 碱水提酸沉淀法
适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。 注意事项： ①酸碱度不宜过大
②邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易 被氧化，加硼砂保护
③石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂 质
3． 炭粉吸附法
• 适用于苷类的精制工作。
• 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤 得吸附苷的活性炭粉末。
黄酮类化合物的提取分离
一、提取 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，多以 苷的形式存在；
在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在；
根据化合物极性ห้องสมุดไป่ตู้同，溶解性不同，采用不 同溶剂提取。
1. 苷元
多用CHCl3、Et2O、EtOAc等极性较小溶剂提取；
对于多OCH3化的成分，用苯、石油醚提取；
对于极性大的成分，如查耳酮、橙酮、双黄酮、 羟 基 黄 酮 等 ， 用 EtOAc 、 EtOH 、 Me2CO 、 MeOH:H2O(1:1)等溶剂提取。
各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：
水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰 胺，脲素水溶液。
黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：
①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮 具有对 位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般 是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查 耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。
2. 苷类
水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度 较大，在冷水中溶解度较小）； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。
3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。
4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮 类化合物则应避免。
二、粗提物的精制处理
1． 溶剂萃取法去杂
石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物 质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较 大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和 非极性苷元。
硼酸络合法：根据具有邻二酚羟基的黄酮与硼酸 络合，生成物易溶于水的性质与其它类型黄酮 分离。
通常在不与水混溶的有机溶剂如乙醚中，用硼 酸液萃取，水相即为邻二酚羟基类黄酮。
举例：从芹菜［Apium graveolens L.］种子中 分离graveobiodide A及B
OH RO O OH RO O
２）硅胶层析
①对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用
②对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰 化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减 活性。
2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝 子筛分离
胶分
主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷 糖少的苷 游离苷元（极性 小大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 ②醇及含水醇 ③含水丙酮，甲醇－氯仿
4． 离子交换法
• 用阳离子交换树脂从水提液中吸附黄酮 类化合物，与不被吸附的杂质分离，再 用甲醇将黄酮类化合物洗脱。 • RSO3-H+ ArOH（黄酮） 无法交换， 故实际上树脂仅起到吸附作用。
３．利用酸性强弱，采用pH梯度萃取法
混合物溶于有机溶剂，依次用５％ NaHCO3 、 ５ ％ Na2CO3 、 0.2%NaOH 、 4%NaOH萃取，相应的黄酮类化合物洗脱 顺序： 7,4’ －二羟基 7 或 4’ 羟基 一般 酚羟基５－羟基黄酮
４．根据分子中某些特定官能团进行分离
醋酸铅沉淀法
三、分离
1. 极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离
常用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。 １）聚酰胺层析：主要有聚己内酰胺型 (Perlon)、六次甲基 二胺已二酸盐(Nylon)型、聚乙烯吡咯烷酮(Polyclar)型三种。 其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，吸 附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。
OCH3 OH
OH
O
R=芹菜糖
OH
O
I（具有邻二酚羟基）
II（无邻二酚羟基）
原料（种子） 石油醚浸泡脱脂 脱脂药料 乙醇提取 提取液 减压浓缩后，用醚处理杂质 醚不溶物 溶于热水中，煮沸，逐滴加入中性醋酸铅的热水溶液， 直至不再析出沉淀为止，乘热过滤 棕色沉淀(A) 悬浮乙醇中，通H2S，过滤 滤液 浓缩至小体积， 冰箱放置 黄色结晶 乙醇重结晶 浅黄色蔟状结晶(graveobioside A)(I) 沉淀(PbS) 滤液 加入碱式醋酸铅的热水溶液至沉淀完全，过滤 黄色铅盐沉淀(B) 同铅盐(A)法进行复分解 晶块 溶于少量乙醇中，放置 黄色结晶 乙醇重结晶 浅黄色针晶(graveobioside B) (II)
2． 碱水提酸沉淀法
适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。 注意事项： ①酸碱度不宜过大
②邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易 被氧化，加硼砂保护
③石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂 质
3． 炭粉吸附法
• 适用于苷类的精制工作。
• 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤 得吸附苷的活性炭粉末。
黄酮类化合物的提取分离
一、提取 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，多以 苷的形式存在；
在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在；
根据化合物极性ห้องสมุดไป่ตู้同，溶解性不同，采用不 同溶剂提取。
1. 苷元
多用CHCl3、Et2O、EtOAc等极性较小溶剂提取；
对于多OCH3化的成分，用苯、石油醚提取；
对于极性大的成分，如查耳酮、橙酮、双黄酮、 羟 基 黄 酮 等 ， 用 EtOAc 、 EtOH 、 Me2CO 、 MeOH:H2O(1:1)等溶剂提取。
各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：
水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰 胺，脲素水溶液。
黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：
①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮 具有对 位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般 是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查 耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。
2. 苷类
水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度 较大，在冷水中溶解度较小）； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。
3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。
4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮 类化合物则应避免。
二、粗提物的精制处理
1． 溶剂萃取法去杂
石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物 质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较 大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和 非极性苷元。
硼酸络合法：根据具有邻二酚羟基的黄酮与硼酸 络合，生成物易溶于水的性质与其它类型黄酮 分离。
通常在不与水混溶的有机溶剂如乙醚中，用硼 酸液萃取，水相即为邻二酚羟基类黄酮。
举例：从芹菜［Apium graveolens L.］种子中 分离graveobiodide A及B
OH RO O OH RO O
２）硅胶层析
①对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用
②对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰 化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减 活性。
2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝 子筛分离
胶分
主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷 糖少的苷 游离苷元（极性 小大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 ②醇及含水醇 ③含水丙酮，甲醇－氯仿