黄酮类化合物的提取分离
黄酮类化合物有哪些提取方法
黄酮类化合物有哪些提取方法
黄酮类化合物是一类具有丰富生物活性的天然产物，常用的提取方法有以下几种：
1. 浸提法：将含有黄酮类化合物的植物材料浸泡在适当的溶剂中，通过浸泡时间和温度来促使黄酮类化合物溶解于溶剂中，最后采用蒸馏或浓缩方法得到提取物。
2. 水蒸气蒸馏法：将含有黄酮类化合物的植物材料放入水蒸气蒸馏器中，通过水蒸气的温度和压力作用使植物材料中的黄酮类化合物挥发出来，再通过冷凝器冷却收集得到提取物。
3. 超声波辅助提取法：将植物材料与提取溶剂放入超声波提取器中，利用超声波作用使黄酮类化合物充分溶解于溶剂中，提高提取效率。
4. 微波辅助提取法：将植物材料与提取溶剂放入微波提取器中，通过微波辐射加热，使黄酮类化合物迅速溶解于溶剂中，提高提取效率。
5. 超临界流体提取法：利用超临界流体（如二氧化碳）具有较高的溶解能力和较低的粘度，在适当的温度和压力下将黄酮类化合物提取出来，再通过减压蒸发或蒸馏得到提取物。
这些方法可以根据不同黄酮类化合物的特性和需求进行选择和优化。
同时，需要
注意提取条件的选择，如溶剂的选择、温度和时间控制等，以达到最佳的提取效果。
黄酮分离实验报告
一、实验目的本实验旨在通过溶剂萃取、柱层析等方法，从植物材料中提取和分离黄酮类化合物，并对其纯度和含量进行测定，以了解黄酮类化合物的提取和分离纯化过程。
二、实验材料与仪器1. 实验材料：- 植物材料：某种富含黄酮类化合物的植物（如银杏叶、橙皮等）- 提取溶剂：乙醇、水、甲醇等- 分离材料：硅胶、氧化铝、大孔树脂等2. 实验仪器：- 热水浴锅- 烘箱- 漏斗- 筛子- 烧杯- 蒸馏装置- 分光光度计- 薄层层析装置三、实验步骤1. 提取：- 将植物材料干燥、粉碎，过筛后备用。
- 称取一定量的植物粉末，加入适量的提取溶剂，置于热水浴锅中加热回流提取。
- 提取结束后，将提取液过滤，收集滤液。
2. 溶剂萃取：- 将滤液分别用不同极性的有机溶剂（如石油醚、氯仿、乙酸乙酯等）进行萃取。
- 将有机溶剂层收集于烧杯中，水层用有机溶剂重复萃取，直至水层颜色不再变化。
3. 薄层层析：- 将分离后的有机溶剂层浓缩干燥，得到粗提物。
- 将粗提物用适当溶剂溶解，点样于薄层层析板上。
- 以不同极性的有机溶剂为展开剂，进行薄层层析。
- 观察并记录各化合物在薄层层析板上的位置。
4. 柱层析：- 将薄层层析中分离出的目标化合物，进行柱层析分离。
- 将柱层析柱装填好固定相，将目标化合物溶解于适当溶剂，进行上样。
- 用不同极性的有机溶剂梯度洗脱，收集各洗脱液。
- 对各洗脱液进行检测，确定目标化合物的位置。
5. 纯度测定：- 将分离出的目标化合物进行纯度测定，如紫外光谱法、红外光谱法等。
- 根据实验结果，确定目标化合物的纯度。
6. 含量测定：- 采用适当的方法测定目标化合物的含量，如分光光度法、高效液相色谱法等。
- 计算目标化合物的含量。
四、实验结果与分析1. 提取：- 实验结果表明，乙醇为较佳的提取溶剂，提取效率较高。
2. 溶剂萃取：- 实验结果表明，不同极性的有机溶剂对黄酮类化合物的萃取效果不同，可利用这一性质进行初步分离。
3. 薄层层析：- 实验结果表明，目标化合物在薄层层析板上的位置较明显，有助于进一步分离。
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究
黄酮类化合物的提取与分离工艺研究黄酮类化合物是一类具有丰富生物活性的植物次生代谢产物，被广泛应用于医药、食品和化妆品等领域。
本文将围绕黄酮类化合物的提取与分离工艺展开探讨。
一、黄酮类化合物的概述黄酮类化合物是一类含有两个苯环的多羟基化合物，具有较强的抗氧化作用和抗炎作用。
它们被广泛存在于许多植物中，如花朵、果实、根茎等部位。
由于其生物活性的独特性，研究人员对黄酮类化合物的提取与分离工艺进行了深入研究。
二、提取工艺的研究1. 溶剂提取法溶剂提取法是目前较为常用的提取黄酮类化合物的方法之一。
该方法利用溶剂对植物样品进行浸提，使黄酮类化合物溶于溶剂中，然后通过浓缩和干燥等步骤得到目标产物。
常用的溶剂有乙酸乙酯、甲醇等。
此方法对设备要求较低，但可能导致有机溶剂残留和产物的破坏。
2. 超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种改进的提取方法，通过超声波的作用，可以增加植物样品与提取溶剂的接触面积和渗透速度，加速黄酮类化合物的溶解和迁移。
该方法提取效果较好，但对设备要求较高，操作难度也较大。
三、分离工艺的研究1. 柱层析法柱层析法是一种常用的分离黄酮类化合物的方法。
该方法利用固定相和流动相之间的相互作用，根据黄酮类化合物的不同物理化学性质进行分离。
常用的固定相有硅胶柱、C18柱等。
该方法分离效果较好，但操作较为繁琐。
2. 薄层层析法薄层层析法是一种简便、快速的分离方法。
该方法将样品溶液涂布在薄层层析板上，通过固定相对黄酮类化合物进行分离，然后用显色剂喷洒在薄层层析板上，可通过色谱带的出现判断黄酮类化合物的位置。
该方法缺点是分离效果较差，但操作简便。
四、工艺优化与产物应用在黄酮类化合物的提取与分离工艺研究中，工艺的优化是十分重要的。
通过对溶剂种类、提取温度、提取时间等参数的不断调整，可以提高黄酮类化合物的提取率和纯度。
此外，对于产物的应用也是研究的重点，黄酮类化合物广泛应用于医药领域的抗炎药物、抗氧化剂和化妆品中的护肤成分等方面。
提取黄酮类的方法
提取黄酮类的方法
黄酮类是一类具有广泛生物活性的天然化合物，常用于药物和保健品的研究和开发。
提取黄酮类化合物的方法通常包括以下几个步骤：
1. 样品预处理：将待提取的植物材料（如花朵、叶片、茎皮等）进行洗涤、破碎或粉碎处理，以增加提取效果。
2. 溶剂选择：根据黄酮类化合物的特性，选择适合提取的溶剂，常用的有乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。
不同的黄酮类化合物可能在不同的溶剂中具有不同的溶解性，因此溶剂的选择需根据具体化合物而定。
3. 固液提取：将预处理后的植物材料与选择的溶剂混合，进行固液提取。
可以采用浸泡法、回流法或超声波法等。
4. 过滤：将提取的混合物进行过滤，去除固体杂质，得到纯净的提取液。
5. 浓缩：将提取液通过蒸发或减压浓缩，浓缩至一定的体积，以增加目标化合物的浓度。
6. 结晶或萃取：根据黄酮类化合物的特性，可以通过结晶或萃取等方法将目标化合物进一步纯化。
7. 干燥：将提取得到的黄酮类化合物进行干燥处理，去除溶剂和水分，得到干燥的黄酮类化合物。
需要注意的是，以上提取方法仅为一般性的步骤，具体的提取方法还需根据目标化合物的性质和样品的特点进行优化和调整。
黄酮类化合物的提取
黄酮类化合物的提取：（1）水提取法：黄酮化合物包括黄酮苷元和黄酮苷类两种其中黄酮苷类有一定的水溶性，尤其在热水中的水溶性增大。
缺点是提取后杂质较多并且提取率低，且容易霉变，一般提取后用乙醇处理方能进行下一步实验。
（2）有机溶剂提取法：对于黄酮苷类和极性较大黄酮苷元，甲醇和乙醇都是较常用的提取剂，一般用60%左右的希醇提取黄酮苷类，95%的提取黄酮苷元，如提取物中含有叶绿素，胡萝卜素等脂溶性色素则应用石油醚萃取这些色素。
（3）碱提取法：黄酮类化合物大多都有酚羟基，易溶于碱性溶液，碱水溶解和再将溶液调成酸性，则黄酮类化合物即可析出。
当提取花果实等含有大量果胶，粘液等水溶性杂志的药用部位时，以用石灰水是上述杂质沉淀。
实例：(1)碱溶酸沉淀法：原理，黄酮类化合物成弱酸性，易溶于碱性溶剂。
底物：银杏叶片器材：微量移液器(1 ml) (上海热电仪器有限公司) ,TGL216C型离心机(上海安亭科学仪器厂) , 2XZ21 型旋片式真空泵(临海市精工真空设备厂) , 752C型紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂) ,MP500B型电子天平(上海第二天平仪器厂) , EK2120G型分析天平(日本A&D 公司) ,3041 型恒温水浴锅(德国KOTTERMANN 公司) ,索氏提取器。
试剂：乙醇、盐酸、NaNO2、Al (NO3 ) 3、NaOH等试剂均为市售分析纯。
芦丁购自中国药品生物制品检定所。
方法：准确称取5. 000 g银杏叶粉,加入蒸馏水,用浓度为8%的NaOH 溶液调节其pH值,在一定的物料配比、温度、pH值、时间条件下煎煮后离心收集上清液,在一定温度下用稀盐酸调到一定pH值后静置24 h,抽滤,沉淀物水洗至中性, 60 ℃恒温下干燥得干浸膏(总黄酮)。
（2）有机溶剂提取法：原理：黄酮类化合物极性较小，易溶于极性较小的有机溶剂如甲醇，乙醇等，但不易溶于极性较大的溶剂如水灯。
材料：山楂叶片试剂：95%乙醇AR；甲醇CP；三氯化铝CP；盐酸CP；丙酮CP；乙醚CP；氨水CP；正丁醇CP；冰乙酸CP；乙酸乙醋CP. 仪器：紫外光可见光自动记录分光光度计，旋转薄膜蒸发器，高速冷冻离心机。
黄酮类化合物的提取与分离
（三）炭粉吸附法
主要适于苷类的精制工作。通常，在植 物的甲醇粗提取物中，分次加入活性炭， 搅拌，静置，直至定性检查上清液无黄 酮反应时为止。过滤，收集吸苷炭末， 依次用沸甲醇、沸水、7%酚/水、15%酚/ 醇溶液进行洗脱，各部分洗脱液进行定 性检查（或用PPC鉴定）。
二、分离 较常用的分离方法有： （一）柱层析法
分离黄酮类化合物常用的吸附剂或
载体有硅胶、聚酰胺及纤维素粉等。 此外，也有用氧化铝、氧化镁及硅 藻土等。
1.硅胶柱层析： 此法应用范围最广，主要适于分离 异黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及 高度甲基化（或乙酰化）的黄酮及 黄酮醇类。少数情况下，在加水去 活化后也可用于分离极性较大的化 合物，如多羟基黄酮醇及其苷类等。
2. 聚酰胺柱层析：
对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺
是较为理想的吸附剂。其吸附强度 主要取决于黄酮类化合物分子中羟 基的数目与位置及溶剂与黄酮类化 合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合 能力的大小。
聚酰胺柱层析可用于分离各种类型
的黄酮类化合物，包括苷及苷元、 查耳酮与二氢黄酮等。
黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱时
Hale Waihona Puke 酸 性 :7 ， 4- 二 OH 溶 于 5%NaHCO3 液 ) 7-或4-OH （5%Na2CO3液） 一般OH（0.2%NaOH） 5-OH （4% NaOH液）
（三）根据分子中某些特定官能团进 行分离
在黄酮类成分的混合物中，具有邻
二酚羟基成分与无此结构的成分， 可用铅盐法分离。有邻二酚羟基的 成分可被醋酸铅沉淀，不具有邻二 酚羟基的成分可被碱式醋酸铅沉淀， 达到分离的目的。
与黄酮类成分混存的其它杂质，如
分子中有羧基（如树胶、粘液、果 胶、有机酸、蛋白质、氨基酸等） 或邻二酚羟基（如鞣质等）时，也 可被醋酸铅沉淀达到去杂目的。
黄酮类化合物的提取分离纯化和含量测定方法的研究进展
黄酮类化合物的提取分离纯化和含量测定方法的研究进展一、本文概述黄酮类化合物，作为一类具有广泛生物活性的天然产物，近年来在医药、食品、化妆品等领域引起了广泛关注。
这些化合物因其独特的抗氧化、抗炎、抗癌等生物活性，成为了科学研究的热点。
黄酮类化合物的提取、分离纯化以及含量测定方法的研究，对于深入了解其生物活性、开发新的应用领域以及实现黄酮类化合物的有效利用具有重要意义。
本文旨在全面综述黄酮类化合物提取、分离纯化以及含量测定方法的最新研究进展。
通过对不同提取方法（如溶剂提取、微波辅助提取、超声波提取等）的优缺点进行比较分析，探讨各种方法在提取黄酮类化合物中的应用前景。
本文还将关注分离纯化技术的发展趋势，如色谱技术、薄层色谱、高效液相色谱、超临界流体萃取等，分析这些技术在黄酮类化合物分离纯化中的应用及优缺点。
本文还将对黄酮类化合物含量测定方法的研究进展进行综述，包括光谱法、色谱法、免疫法等，为黄酮类化合物的质量控制和定量分析提供理论支持。
通过对黄酮类化合物提取、分离纯化以及含量测定方法的研究进展进行全面梳理和分析，本文旨在为相关领域的研究人员提供有价值的参考信息，推动黄酮类化合物的研究与应用取得更大进展。
二、黄酮类化合物的提取方法研究进展黄酮类化合物作为一类重要的天然产物，其提取方法的研究一直是黄酮类化合物研究领域的热点之一。
近年来，随着科学技术的进步和提取技术的不断创新，黄酮类化合物的提取方法取得了显著的进展。
传统的黄酮类化合物提取方法主要包括溶剂提取法、超声波辅助提取法、微波辅助提取法等。
这些方法虽然在一定程度上能够实现黄酮类化合物的提取，但存在提取效率低、时间长、溶剂消耗大等问题。
近年来，随着绿色化学和可持续发展的理念日益深入人心，新型的黄酮类化合物提取方法不断涌现。
其中，超临界流体萃取技术以其高效、环保、低能耗等特点，在黄酮类化合物的提取中表现出巨大的潜力。
超临界流体萃取技术利用超临界状态下的流体（如二氧化碳）作为萃取剂，通过调节压力、温度和流体组成等参数，实现对黄酮类化合物的选择性萃取。
黄酮类化合物提取分离.
➢乙醇或甲醇 ➢高浓度 苷元 ➢60％ 苷类。 ➢提取的次数： 2～4次。 ➢提取方法：加热 回流法或冷浸法。
➢仅用于提取苷类 ➢成本低，无污染， 适合工业化生产 ➢提取出的杂质较 多
➢用极性由小到大 的溶剂依次将同样 极性顺序的黄酮类 分别提取出来
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分离——pH梯度萃取法
原理
利用黄酮苷元中酚OH数目及位置不同, 其酸性强弱不 同的性质来分离。
酸性
7, 4'-OH > 7-或4'-OH > 一般酚OH > 3-OH, 5-OH
溶于5%NaHCO3 溶于5%Na2CO3 溶于不同浓度的NaOH中
方法
总黄酮溶于Et2O，再用5%NaHCO3, 5%Na2CO3, 0.2% NaOH, 4%NaOH依次萃取(碱性由弱强)，达到分离目的。 Page 4
黄酮类化合物 提取分离
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提取——碱溶酸沉法
➢可用碱性水溶液（如碳酸钠、氢氧化钠、氢氧化 钙等水溶液）或碱性稀醇溶液（如50％乙醇）浸出。 ➢用碱性溶剂提取时，所用的碱浓度不宜过高，以 免在强碱下加热时破坏黄酮类化合物结构。 ➢ 当有邻二酚羟基存在时，应加硼酸保护。
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提取——溶剂提取法
例： 查耳酮 > 二氢黄酮
➢当苷元相同时，被吸附的强弱顺序为： 苷元>单糖苷 >二糖苷 >三糖苷
例：在聚酰胺薄层上，吸附力 槲皮素>芸香苷（芦丁）
➢ 与介质的关系：吸附力 水（中）> 甲醇、乙醇（浓度由 低到高）> 碱性溶剂
相反，溶剂在聚酰胺柱上对黄酮类化合物洗脱能力顺序为：水（中） ＜甲醇、乙醇（浓度由低到高）＜碱性溶剂
黄酮类化合物的提取分离方法
一.黄酮类化合物的提取分离方法按所用溶剂不同分类(1)热水提取法(以水作溶剂)---------- 灵芝多糖热水提取(2)有机溶剂萃取法-----------生产茶多酚工业试验、乳酸(3)碱提取酸沉淀法.---------- 橙皮苷、黄芩苷、芦丁等都可用此法提取.2.按提取条件不同分类(1)回流提取法----------从苦楝树皮中提取苦楝素(2)索式提取法----------柑橘属类黄酮(3)微波辅助提取法----------采用微波辅助法从黎蒿中提取黄酮类化合物(4)超声提取法----------提取山楂中黄酮类物质(5)超滤法----------黄岑甙(6)酶提取法----------采用纤维素酶对红景天进行酶解处理,可提高黄酮类物质的浸出率(7)超临界流体提取法----------竹叶黄酮、从干姜片中提取挥发油PH梯度萃取法：石榴果皮褐变产物、葛花总异黄酮高效液相色谱分析法：五味子、葛根高速逆流色谱分离法：甘草、分离蜜环菌发酵液乙醇提取部位柱色谱法（1）硅胶柱色谱：姜黄素（2）聚酰胺柱色谱：紫锥菊（3）葡聚糖凝胶柱色谱：回心草、茵陈蒿（4）大孔吸附树脂分离法：川草乌、三七总皂甙二. 槐米中芸香苷（芦丁）的提取方法有哪些（设计）方法：渗漉法、煎煮法、回流提取法（1）槐米粗粉20g加约120ml的%硼砂水溶液，提碱搅拌下加入石灰乳至pH8-9，取溶1v1.0 可编辑可修改2 并保持该pH 值煮沸20分钟，四层纱布趁热滤过，反复2次提取液 药渣浓盐酸调pH2~3搅拌，静置放冷，滤过。
滤液 沉淀 热水或乙醇重结晶芸香苷结晶碱溶酸沉法提取分离槐米中芸香苷的流程图（2）取30g 槐花米，置于250mL 烧杯中，加入%硼砂沸水200ml ，在搅拌下缓缓加入石灰乳调节pH=8～9，在此pH 下保持微沸20～30min ，趁热用棉花滤过，残渣再加水，同上法再煎一次，趁热抽滤。
合并滤液，在60～70℃下用浓盐酸调至pH=4—5，静置。
黄酮类化合物的提取分离
各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：
水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰 胺，脲素水溶液。
黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：
①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮 具有对 位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般 是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查 耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。
2. 苷类
水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度 较大，在冷水中溶解度较小）； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。
3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。
4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮 类化合物则应避免。
二、粗提物的精制处理
1． 溶剂萃取法去杂
石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物 质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较 大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和 非极性苷元。
２）硅胶层析
①对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用
②对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、乙酰 化黄酮及二氢黄酮、异黄酮，则无须减 活性。
2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝 子筛分离
胶分
主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷 糖少的苷 游离苷元（极性 小大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 ②醇及含水醇 ③含水丙酮，甲醇－氯仿
黄酮类物质的提取
黄酮类物质的提取
黄酮类物质是一类具有广泛生物活性的天然化合物，广泛存在于植物中，如豆类、水果、蔬菜等。
黄酮类物质具有抗氧化、抗炎、抗癌、降血脂、降血压等多种生物活性，因此备受关注。
本文将介绍黄酮类物质的提取方法。
黄酮类物质的提取方法主要有以下几种：
1. 溶剂提取法
溶剂提取法是一种常用的黄酮类物质提取方法。
该方法利用溶剂对植物中的黄酮类物质进行提取，常用的溶剂有乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。
该方法操作简单，提取效率高，但需要大量的溶剂，且提取过程中易受到温度、时间等因素的影响。
2. 超声波提取法
超声波提取法是一种新兴的黄酮类物质提取方法。
该方法利用超声波的机械作用和热效应对植物中的黄酮类物质进行提取。
该方法操作简单，提取效率高，且不需要大量的溶剂，但需要较高的设备成本。
3. 超临界流体提取法
超临界流体提取法是一种高效、环保的黄酮类物质提取方法。
该方法利用超临界流体对植物中的黄酮类物质进行提取，常用的超临界
流体有二氧化碳、乙烷等。
该方法操作简单，提取效率高，且不需要大量的溶剂，但需要较高的设备成本。
4. 微波辅助提取法
微波辅助提取法是一种快速、高效的黄酮类物质提取方法。
该方法利用微波的热效应和机械作用对植物中的黄酮类物质进行提取。
该方法操作简单，提取效率高，但需要较高的设备成本。
黄酮类物质的提取方法有多种，不同的方法适用于不同的植物材料和提取要求。
在实际应用中，应根据具体情况选择合适的提取方法，以提高提取效率和降低成本。
天然产物化学全套---黄酮类化合物的提取与分离
第五章 黄酮类化合物 （Flavonoids）
天然药化教研室 主讲教师：宋少江
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本章内容
第一节 概述 第二节 理化性质及显色反应
第三节 提取与分离 第四节 检识与结构鉴定 第五节 结构研究实例
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第三节 提取与分离
一、提取与粗分
苷元：用氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取。 苷及极性大的苷元：用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、 甲醇、醇-水加热提取。 提取黄酮苷类成分时，应避免发生水解，可按一般 苷的提取方法先破坏酶的活性。
A> B > C > D D>B>C>A
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第三节 提取与分离
（三）根据分子中某些特定官能团进行分离
如：醋酸铅沉淀法（目前已不使用） ➢ 具有邻二酚羟基，可被醋酸铅沉淀 ➢ 不具有邻二酚羟基，可被碱式醋酸铅沉淀
二、分离
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第三节 提取与分离
二、分离
黄酮类化合物在Sephadex LH-20(甲醇)上的Ve/V0
黄酮类化合物 芹菜素
木樨草素 槲皮素 杨梅素
山奈酚-3-半乳鼠李糖-7-鼠李糖苷 槲皮素-3-芸香糖苷 槲皮素-3-鼠李糖苷
取代图式 5,7,4'-三羟基 5,7,3',4'-四羟基 3,5,7,3',4'-五羟基 3,5,7,3',4',5'-六羟基
第三节 提取与分离
二、分离
（一）柱色谱法
1、硅胶柱色谱 主要用于分离弱极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。 吸附规律：极性大的物质易于被吸附 一般洗脱顺序：苷元＞单糖苷＞双糖苷＞多糖苷
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第三节 提取与分离
二、分离
黄酮类的提取方法
黄酮类的提取方法
提取黄酮类化合物的常用方法包括以下几种：
1. 溶剂提取法：将原料粉碎后与有机溶剂（如乙醇、丙酮、乙酸乙酯等）进行浸提，常用超声波辅助提取或连续提取，然后通过浓缩溶剂，得到黄酮类化合物的溶液。
2. 蒸馏提取法：将黄酮类含有的原料与溶剂共同蒸馏提取，在蒸馏过程中得到黄酮类化合物的提取物。
3. 水煎提取法：将原料切碎后加入适量的水，进行煎煮一段时间，然后通过过滤或离心等手段分离出液体，得到黄酮类化合物的提取物。
4. 萃取法：使用有机溶剂（如正己烷、二甲苯等）作为萃取剂，将原料与溶剂混合后搅拌或超声波辅助提取，然后通过分液漏斗或离心等分离工艺，得到黄酮类化合物的溶液。
5. 萃取树脂法：使用具有亲水或疏水性的萃取树脂固相萃取黄酮类化合物，将原料与树脂混合后搅拌或震荡一段时间，然后用适当溶剂洗脱黄酮类化合物。
需要注意的是，不同类型的黄酮类化合物在提取过程中可能需要采用不同的提取方法，因此具体的提取方法还需要根据目标黄酮类化合物的性质和特点来选择。
提取黄酮类的方法
提取黄酮类的方法黄酮类化合物是一类具有广泛生物学活性的天然产物，被广泛应用于食品、药品、化妆品和农业等领域。
提取黄酮类化合物的方法有多种，常用的方法包括溶剂提取、超声波提取、微波辅助提取、超临界流体提取和酶解等方法。
溶剂提取是最常用的黄酮类化合物提取方法之一。
该方法通过选择合适的溶剂，将黄酮类物质从植物材料中溶解出来。
常用的溶剂包括乙醇、甲醇、丙酮和醚类溶剂等。
溶剂提取方法操作简单，适用性广，但是存在溶剂浪费和环境污染等问题。
超声波提取是一种利用超声波的机械震荡作用来加速物质的传质传递的方法。
该方法通过超声波的作用，使植物细胞壁破裂，增加物质与溶剂接触面积，提高提取效率。
超声波提取方法提取速度快，提取效率高，但是超声波设备价格较贵，操作要求高。
微波辅助提取是利用微波辐射加热的原理，加速提取过程中的物质传质。
该方法通过微波辐射的热效应和非热效应，使植物细胞壁破裂，并促进黄酮类化合物向溶剂中扩散。
微波辅助提取方法操作简单，提取速度快，但是设备价格较高。
超临界流体提取是利用超临界流体的溶解力和质量传递性能，将黄酮类化合物溶解在超临界流体中，并通过减压蒸发将黄酮类化合物从超临界流体中获得。
超临界流体提取方法提取效率高，对环境友好，但是设备成本较高。
酶解是一种利用酶的作用，在特定的条件下将黄酮类化合物从植物材料中释放出来的方法。
该方法选择合适的酶和适宜的反应条件，使酶能够降解植物细胞壁，释放出黄酮类化合物。
酶解方法操作简单，选择酶和反应条件较为重要，但是提取效率较低。
除了以上的常规提取方法，还有一些新的提取方法在黄酮类化合物提取中得到了应用，比如离子液体提取、超滤提取和固相萃取等方法。
这些方法的特点在于提取效率高、选择性好和操作简便等。
总之，提取黄酮类化合物的方法有多种，不同的方法在提取效率、成本、环境友好性和操作难度等方面存在一定的差异。
选择合适的提取方法需要根据具体的需求和实际情况来确定，以提高提取效率和经济效益。
6.6-黄酮类化合物 -分离技术.
用途：分离各种类型的黄酮类成分，包括苷及苷元、
查耳酮、二氢黄酮等 。
双重色谱
相似相溶
水溶性相差较大
氢键吸附
水溶性相差不大
聚酰胺分离黄酮苷与黄酮苷元的规律性
①苷元相同时，洗脱先后顺序一般为：三糖苷 ＞双糖苷＞单糖苷＞苷元。 ②母核上羟基越多，洗脱速度相应减慢。 ③母核上羟基数目相同时，其位置的不同也影 响洗脱顺序。一般洗脱先后顺序为：邻位＞对 位或间位。 ④不同类型黄酮类成分，先后洗脱顺序一般为： 异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇。 ⑤分子中芳香核、共轭双键多者较难被洗脱， 如查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。
5%NaHCO3
乙醚液 乙醚液 乙醚液 乙醚液 （脂杂）
5%Na2CO3
碱液(7,4’-二OH黄酮)
0.2%NaOH
碱液(7或4’-OH黄酮)
4%NaOH
碱液(一般酚OH黄酮)
碱液(或5-OH黄酮)
（3）柱色谱法
柱填充剂：聚酰胺、硅胶、氧化铝、氧化 镁、硅藻土、纤维素等。
① 聚酰胺柱色谱
原理：氢键吸附
黄酮类化合物分离技术
林 玲
黄酮类成分常用的提取、分离技术 醇提取法 热水提取法 碱溶酸沉法 溶剂萃取法 pH梯度萃取法 柱色谱法
2. 黄酮类化合物的分离
极性 差异
酚羟基
酸性 强弱
溶剂法 硅胶柱色谱
聚酰胺色谱
pH梯度
黄酮类化合物的分 离主要根据其极性 差异、酸性强弱、 相对分子质量大小 和有无特殊结构等， 采用适宜的分离方 法。
硅胶柱色谱
分离原理：极性吸附
适用范围：分离黄酮、二氢黄酮、二氢黄酮醇及高
度甲基化（或乙酰化）的黄酮及黄酮醇类
吸附规律：极性大吸附强
黄酮类化合物有哪些提取方法
黄酮类化合物有哪些提取方法黄酮类化合物是一类具有广泛生物活性的天然产物，广泛存在于植物中。
它们具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌、抗病毒等多种药理活性，被广泛应用于药物和保健品的开发中。
提取黄酮类化合物是研究和应用的重要环节，目前常用的提取方法包括溶剂提取、超声波提取、微波提取、超临界流体萃取等。
1.溶剂提取：溶剂提取是最常用的黄酮类化合物提取方法之一。
它基于黄酮类化合物在有机溶剂中的溶解度较高的特点，通过搅拌、浸泡等方式将黄酮类化合物从植物材料中溶解出来。
常用的溶剂包括乙酸乙酯、氯仿、乙醇等。
这种方法操作简单、成本低，适用于大规模提取。
2.超声波提取：超声波提取是利用超声波的机械振动效应，加速黄酮类化合物从植物材料中的释放和扩散。
超声波能够破坏细胞壁，促进溶剂进入细胞内，从而增加黄酮类化合物的提取速度和产量。
此外，超声波还能提高溶剂的渗透性和黄酮类化合物的传质速度。
超声波提取通常在溶剂的常温下进行，操作简便、快速，但超声波的强度和时间需要进一步优化以获得较好的提取效果。
3.微波提取：微波提取是利用微波辐射的热效应和非热效应加速黄酮类化合物从植物材料中的提取。
微波辐射能够在较短时间内提高溶剂温度，从而增加黄酮类化合物的溶解度和迁移速率。
此外，微波辐射还能破坏细胞壁，促进溶剂渗透到细胞内部，提高黄酮类化合物的提取效果。
微波提取具有提取效率高、操作简便、时间短等优点，但对操作人员的安全要求较高。
4.超临界流体萃取：超临界流体萃取是利用液体在临近或超过其临界点时呈现的高密度、低粘度和高扩散性能的特点，加速黄酮类化合物从植物材料中的提取。
超临界流体通常指超临界二氧化碳（CO2）。
在一定的温度和压力下，CO2可以同时具有气态和液态的特征，具有较高的溶解能力和迁移速度。
超临界流体萃取具有操作简便、环保等优点，但设备成本较高，技术要求较为复杂。
除了上述方法，还有凝胶渗透色谱、离子交换色谱等提取方法也能用于黄酮类化合物的提取。
黄酮类化合物的提取
黄酮类化合物的提取1. 引言黄酮类化合物是一类具有重要生物活性的天然产物，广泛存在于植物中。
它们具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗菌等多种药理活性，对人体健康具有积极影响。
因此，黄酮类化合物的提取和研究对于开发新药、保健品以及食品添加剂等具有重要意义。
本文将介绍黄酮类化合物的提取方法，包括传统的溶剂提取法和现代的超声波辅助提取法。
同时还将讨论一些常见的黄酮类化合物提取实验中需要注意的问题，并介绍一些常用的分析方法。
2. 黄酮类化合物的溶剂提取法溶剂提取法是一种常用且有效的黄酮类化合物提取方法。
其基本原理是利用溶剂与植物材料中的黄酮类化合物发生相互作用，从而使黄酮类化合物从植物材料中转移到溶剂中。
2.1 实验步骤1.准备植物材料：选择含有丰富黄酮类化合物的植物材料，如柑橘皮、茶叶等。
2.粉碎植物材料：将植物材料研磨成粉末，增加溶剂与植物材料的接触面积。
3.溶剂选择：选择适当的溶剂，常用的溶剂有乙醇、甲醇、乙酸乙酯等。
溶剂的选择应考虑黄酮类化合物在该溶剂中的溶解度以及对环境和人体的安全性。
4.提取过程：将粉碎后的植物材料与选择好的溶剂混合，进行提取。
可以采用冷浸提取、热浸提取或回流提取等方法。
5.过滤和浓缩：将提取液通过滤纸过滤去除固体残渣，并利用旋转蒸发仪等设备将溶剂蒸发浓缩，得到黄酮类化合物的浓缩液。
2.2 实验注意事项1.操作环境要求：在通风良好的实验室中进行操作，避免溶剂蒸气对人体造成伤害。
2.溶剂选择：根据需要提取的黄酮类化合物种类选择合适的溶剂，并注意其安全性。
3.植物材料的处理：植物材料应干燥并研磨成细粉末，以增加提取效果。
4.提取时间和温度：提取时间和温度会影响黄酮类化合物的提取效率，需根据实验需要进行优化。
5.过滤和浓缩：过滤时要注意使用适当的滤纸，以防止黄酮类化合物丢失。
浓缩时要控制温度和压力，避免黄酮类化合物的分解。
3. 黄酮类化合物的超声波辅助提取法超声波辅助提取法是一种高效、快速且环境友好的黄酮类化合物提取方法。
黄酮类化合物的提取流程
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4． 离子交换法
• 用阳离子交换树脂从水提液中吸附黄酮 类化合物，与不被吸附的杂质分离，再 用甲醇将黄酮类化合物洗脱。 • RSO3-H+ ArOH（黄酮） 无法交换， 故实际上树脂仅起到吸附作用。
硼酸络合法：根据具有邻二酚羟基的黄酮与硼酸 络合，生成物易溶于水的性质与其它类型黄酮 分离。
通常在不与水混溶的有机溶剂如乙醚中，用硼 酸液萃取，水相即为邻二酚羟基类黄酮。
举例：从芹菜［Apium graveolens L.］种子中 分离graveobiodide A及B
OH RO O OH RO O
三、分离
1. 极性大小不同，利用吸附或分配原理进行分离
常用吸附剂有聚酰胺、硅胶、纤维素粉。 １）聚酰胺层析：主要有聚己内酰胺型 (Perlon)、六次甲基 二胺已二酸盐(Nylon)型、聚乙烯吡咯烷酮(Polyclar)型三种。 其原理是酰胺羰基与黄酮酚羟基形成氢键缔合而吸附，吸 附能力与酚羟基多少、位置及氢键缔合力大小有关。
黄酮类化合物的提取分离
一、提取 黄酮类化合物在花、叶、果等组织中，多以 苷的形式存在；
在木部坚硬组织中，多以游离苷元形式存在；
根据化合物极性不同，溶解性不同，采用不 同溶剂提取。
1. 苷元
多用CHCl3、Et2O、EtOAc等极性较小溶剂提取；
对于多OCH3化的成分，用苯、石油醚提取；
对于极性大的成分，如查耳酮、橙酮、双黄酮、 羟 基 黄 酮 等 ， 用 EtOAc 、 EtOH 、 Me2CO 、 MeOH:H2O(1:1)等溶剂提取。
2． 碱水提酸沉淀法
适用于含酚羟基的化合物，如槐米中芦丁的提取。 注意事项： ①酸碱度不宜过大
②邻二酚羟基的保护：碱性条件下，邻二酚羟基易 被氧化，加硼砂保护
③石灰乳的加入可除去果胶、粘液等水溶性酸性杂 质
3． 炭粉吸附法
• 适用于苷类的精制工作。
• 植物的甲醇提取液加活性炭至吸附完全，过滤 得吸附苷的活性炭粉末。
３．利用酸性强弱，采用pH梯度萃取法
混合物溶于有机溶剂，依次用５％ NaHCO3 、 ５ ％ Na2CO3 、 0.2%NaOH 、 4%NaOH萃取，相应的黄酮类化合物洗脱 顺序： 7,4’ －二羟基 7 或 4’ 羟基 一般 酚羟基５－羟基黄酮
４．根据分子中某些特定官能团进行分离
醋酸铅沉淀法
OCH3 OH
OH
O
R=芹菜糖
OH
O
I（具有邻二酚羟基）
II（无邻二酚羟基）
原料（种子） 石油醚浸泡脱脂 脱脂药料 乙醇提取 提取液 减压浓缩后，用醚处理杂质 醚不溶物 溶于热水中，煮沸，逐滴加入中性醋酸铅的热水溶液， 直至不再析出沉淀为止，乘热过滤 棕色沉淀(A) 悬浮乙醇中，通H2S，过滤 滤液 浓缩至小体积， 冰箱放置 黄色结晶 乙醇重结晶 浅黄色蔟状结晶(graveobioside A)(I) 沉淀(PbS) 滤液 加入碱式醋酸铅的热水溶液至沉淀完全，过滤 黄色铅盐沉淀(B) 同铅盐(A)法进行复分解 晶块 溶于少量乙醇中，放置 黄色结晶 乙醇重结晶 浅黄色针晶(graveobioside B) (II)
２）硅胶层析
①对酚羟基多的黄酮类，如多羟基黄酮及 其苷类，硅胶减活性使用
②对酚羟基少的黄酮类，如甲基化、。
2. 利用分子大小不同，用葡聚糖凝 子筛分离
胶分
主要用两种型号的凝胶 Sephadex-G和Sephadex-LH20 分离游离黄酮主要是吸附作用，极性小大洗脱。 分离黄酮苷类，主要是分子筛作用，分子大小洗脱。 总的洗脱顺序：糖多的苷 糖少的苷 游离苷元（极性 小大） 常用洗脱剂：①碱性水溶液，含盐水溶液 ②醇及含水醇 ③含水丙酮，甲醇－氯仿
各种溶剂在聚酰胺柱上洗脱能力由弱至强依次为：
水，甲醇，丙酮，氢氧化钠水溶液，甲酰胺，二甲基甲酰 胺，脲素水溶液。
黄酮类化合物从聚酰胺柱洗脱时有下列规律：
①苷元相同，洗脱先后顺序一般为： 三糖苷双糖苷单糖苷苷元 ②母核上增加羟基，洗脱速度相应减慢 羟基位置的影响：具有邻位羟基黄酮 具有对 位（或间位）羟基黄酮 ③不同类型的黄酮类化合物，先后流出顺序一般 是： 异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇 ④分子中芳香核、共轭双键多者吸附力强，故查 耳酮往往较相应的二氢黄酮难于洗脱。
2. 苷类
水或热水提取，（多糖苷在热水中溶解度 较大，在冷水中溶解度较小）； 也可用EtOH、MeOH、EtOAc提取。
3. 含羟基的苷或苷元，可用碱水提取。
4. 提取花青素类可加入少量酸，但一般黄酮 类化合物则应避免。
二、粗提物的精制处理
1． 溶剂萃取法去杂
石油醚：除去叶绿素、胡罗卜素等脂溶性色素 水溶醇沉：除去蛋白质、多糖、大分子水溶性物 质 逆流分配：水-乙酸乙酯，正丁醇-石油醚 在萃取除杂的同时，可使不同极性或极性相差较 大者分离，如极性不同的苷和苷元，极性苷元和 非极性苷元。