酶联免疫吸附试验的原理、操作方法及注意事项
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与 标本 中相 应 抗 体 或 抗原 的量 呈 正 比。此 种 显 色 反
应可 通 过酶 标 仪进 行 定 量测 定 。
量。酶标仪读数 ， 对实验结果进行判定。
３ 液相 阻 断酶 联 免 疫 吸 附方 法 ． ２
将 预先 滴 定好 的 固定 量 病 毒 抗 原 与 被检 血 清 首
先在液相 中反应 ，然后将抗原抗体复合 物转移到包 被 了特异性抗体的 Ｅ ＩＡ板 中，没有完全被血清抗 ＬＳ 体 阻断的病毒抗 原就被 Ｅ ＩＡ板 中的抗体捕 获 ， ＬＳ 于 随后加入的豚 鼠抗血清 中的抗体结合 ，再通过兔抗 豚鼠 Ｉｇ酶结合物和底物溶液显色。 ｇ 按试验孑 呈现的 Ｌ 颜 色与 抗 原 对 照孔 （ 加 血 清 ） 现颜 色 评 定 结 果 。 未 呈
每 次 加样 必 须 更 换 吸头 ，做 到 １ 样 品 １个 吸 个
振动 ３ 秒 ， Ｏ 使底物与终止液充分混合再读数 。
４７酶标仪读数 环节 ．
使 用 前 应 先 预热 仪 器 １～ ０分 钟 ，并 调 整 到 试 ５３
验要求 的波长 ， 使测定结果更稳定。 最 好 先 擦拭 微 孔 板底 部并 压 平 板条 ，避 免 反 应 板底划痕 、 不平 、 印或 液面高度差异造成 干扰 ， 指 致 使读数结果不准确 。因此要保持酶标板干净， 不能用 手触 摸板 底 留下指 印 。
养殖技术顾 问 ２ １． ０ １６
卫 生 防 疫
人酶标记 的抗 Ａ ２ ｂ 抗体 ， 如兔抗豚鼠球蛋 白 Ａ ３ 使 ｂ， 之 与 Ａ ３ 发 生 特 异 性 结 合 ， 结 果 形 成 ｂ Ａ ｌＡ － ｂ 一 ｂ 一 ｂ— ｇ Ａ ２ Ａ ３ 酶复合物 。 洗板后 ， 加入 ５ 微升 Ｏ 度平衡一致。孵育时尽量少开启恒温培养箱门， 以保 证箱内温度 ， 严禁缩短或延长孵育时间。
４５ 洗 涤 反 应 板 环 节 ．
ＥＩ ＬＳ Ａ试验是靠洗 涤来达到分离游离 和结合 的 酶标记物。 酶联免疫 吸附板每次洗涤要充分。 通过洗 涤 以消除残 留在板孔 中没能与固体抗原或抗体结合 的物质 ，以及在反应过程 中非特异吸附于固相载体 上的干扰物质 。如果洗涤不充分 ， 应该除去的杂质没 有洗 掉 ， 这样 就会 影 响试验 结果 。 洗板时需保证微孔板平放 ， 将洗涤液注满各孔 ， 尽量避免漏液 、 溢液现象。
反 应的温度和时间仍是影响显色 的因素 ，要按说 明 要求的温度和时间严格操作。
加入底物后应立即避光显色 。显色剂尽量在临 使用前配制 ， 现配现用。若底物呈现颜色变化则坚决 不 能再 用 。 终止液是 ２ ／ 克 摩尔的硫酸溶液 ，具有腐蚀性 ， 试验时要小心 ， 避免损伤皮肤和衣物。
３１ 间接 酶 联 免 疫 吸 附 方 法 ．
问 接 法 是 检测 抗 体 比较 常用 的方 法 。主要 是 利
用 称 记 的 抗 抗 体 检 测
转移至 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ板上 ， 每孔 ５ 微升 ， ０ 封板 ，７ ３ ℃温育 ｌ 小 时 。 有完 全被 血 清抗 体 阻 断的病 毒 抗原 被 Ｅ ＩＡ 没 ＬＳ
调查和免疫抗体监测 ， 评价疫苗免疫效力。
１ 基 本 原 理
将抗原或抗体结合到某 种固相载体表面 ，并保 持其 免 疫 活 性 。抗 原 或抗 体 再 与某 种 酶 连 接 成酶 标
抗 原或 抗 体 ，这 种 酶标 抗 原 或抗 体 既 保 留其免 疫 活
性， 又保 留酶 的活性 。 在测 定 时 ， 受 检标本 （ 定 的 把 测
合， Ｅ Ｉ 使 ＬＳ Ａ方法成为既特异又敏感的检测方法。
２ 基本类 型及用途
间接 Ｅ ＩＡ主要 用 于 检 测抗 体 ，双抗 体 法 用 于 ＬＳ 检 测 大分 子 抗 原 ， 双夹 心 法 用 于测 定 大 分 子抗 原 ， 液
相阻断 Ｅ ＩＡ用于测定抗 体 ，竞争 Ｅ ＩＡ用于汉 定 ＬＳ ＬＳ ０ 小分子抗原及半抗原 ，抗体捕捉 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ法主要用于 检 测 ＩＭ 抗 体 。 ｇ
配制洗涤液需要新 鲜无 污染的蒸 馏水或去离子 水 ， 配现用 。 现
盛放洗涤液 的容器应定期用清洁剂清洗 ，避免 长 菌或其 他 污染 。 每次洗完后要更换吸水纸轻轻拍干 ，同时避免
手指 接触 板底 。
４６ 显 色和 终 止 环 节 ．
显 色 是 无 色 的底 物 生 成 有 色 产物 的 温 育 反 应 ，
４ 注意事项
４１ 试 验 前 准备 ．
洗 板机在使用前后应使用蒸馏水 冲洗 管道 ， 以 保证洗板机各针孔畅通 ，否则个别板孔堵塞影响试 验 结果 。从 试剂 盒 中取 出本试 验所 用试 剂 ， 置室 温平 衡 Ｏ５ １ 小时。以确保各试剂达到最好活性 ， 而 ． ． ～０ 从 使 Ｅ ＩＡ反应充分。 ＬＳ 不要使用过期的试剂盒 ， 同批 不 次试剂不能混合使用 ， 以免影响试验结果。
故称 为 间接 法 。操作 步 骤 如下 。
将 特 异性 抗 原 与 固相载 体 连 接 ， 成 固相 抗 原 ， 形
洗 涤除 去未 结 合 的抗原 及 杂质 。加 稀 释 的受 检 血清 ， 其 中的 特异 抗 体 与抗 原 结 合 ，形 成 固相 抗 原 抗 体 复
方法 。我 国 目前 广泛 应 用 该 方法 进 行 疫病 流行 病 学
抗体或抗原 ）和酶标抗原或抗体按不 同的步骤与 固 相载体表面 的抗原或抗体反应。用洗 涤的方法使 固 相载体上形成 的抗原抗体复合物 与其他 物质 分开 ， 最后结合在 固相载体上 的酶量与标本 中受检物质 的 量成 一 定 的 比例 。加 入 酶反 应 的底 物后 ， 物可 在 酶 底 作用下使其所含 的供氢体由无色的还原型变成有色 的 氧化 型 ， 现颜 色 反 应 。 因此 ， 出 可通 过 底 物 的颜 色 反应来判定有无相应的免疫反应 ，颜 色反应的深浅
邻苯二胺 （ Ｐ 底物液 ，７ Ｏ Ｄ） ３ ℃温育 １ 分钟 ， ５ 每孔再 加 入 ５ 升 终止 液 。洗 涤后 加入 底 物 显 色 ， 现 颜 Ｏ微 呈
色的深浅与样 品中的抗体含量成反 比。用酶标仪测 定光密度 （ Ｄ） ， Ｏ 值 加终止液后立即读数 。 结果判定 ，只有符合试验认可标准结果才能成 立 。当被检血清稀释孔 Ｏ Ｄ值大于临界值为阳性孔 ， 小于或等于临界值为阴性孑 。阳性孑 所对应 的稀 释 Ｌ Ｌ 度就为该份血清的抗体滴度。
板 ，℃过夜 。预先滴定好的固定量病毒抗原与被检 ４ 血清首先在液相 中反应 ，若被检血清 中有特异性 抗 体， 就与病毒抗原进行特异性结合 。用磷酸盐吐温缓 冲 （ Ｂ Ｔ） 涤液洗 Ｅ ＩＡ板 ５次 ， 吸水纸 上甩 ＰＳ 洗 ＬＳ 在 干。将抗原抗体反应板各孔血清病毒混合液按次序
３ 操作方 法
加终 止 液 时 ， 免 吸 头和 孔 内 液体 接 触 ， 液 后 避 加
反复冻溶会使抗体效价下降 ，所 以检测抗体 的 血清标本如需做多次检测 ， 宜少量分装冷冻保存。
４３ 加 样 环 节 － 样品稀释方法应严格按照使用说明书操作。 注意 检查各 孑 液面 高度 是否一 致 ， 免漏 加 、 复加 液 。 Ｌ 避 重 加样前先制作加样表 ， 每板对应 １ 个加样表 ， 确 保 加样 准 确元 误 。
板 中的 Ａ ｌ 体捕 获 ，形成 Ａ ｌＡ 一特 异性结合 ｂ抗 ｂ— ｇ
物 。洗板 后加 入 病 原 的豚 鼠抗 血清 ， 孔 ５ 升 ， 每 ０微 封
作者简介： 李华林 （ ９ ６ ， １６ 一）
主要从事动物疫病防控和实验
板 ，７ ３ ℃温育 ｌ 小时 。洗 板后 ， 孑加 入 ５ 微 升 兔抗 每 Ｌ ０ 豚 鼠 ＩＧ酶 结合 物 ， 板 ．７ 温 育 Ｉ ｌ ， 洗涤 后加 ｇ 封 ３ ，１ ｅＨ。
附于反应孔周围 ， 不能完全清洗干净 ， 使试验结果不 准确。必须贴封片或加盖 ， 按照说 明严格控制操作温 度和时间。孵育时反应板均不宜叠放 ， 以保证各板温
影响实验结果 。 因此 ， Ｅ ＩＡ试验实际操作 中除了 在 ＬＳ 选 择优 良仪器设 备和试 剂外 ，正确 的操 作是保 证
ＥＩ ＬＳ ＡBiblioteka Baidu测结果准确可靠的必要条件。 必须熟知试验
４２样本 的采取与保存 ．
采血时应尽量避免溶血。制备血清标本时要采 取 自然凝固 ｌ２ ～ 小时， ０ ／ ３ ０ 转 分钟 ， ０ 离心 １ 分钟。 ５
血清 样 本宜 在 新鲜 时检 测 ， 结果 比较 准确 。若 ５ 天 内检 测 ， 可使 用 冰 箱 ２ ８ ＇ ℃保 存 ， 过 １星 期 时 间 超 测 定 ， 于零下 ２ ℃低温 冻存 。 应 Ｏ
各个环节的注意事项 ， 严格按要求进行实际操作 ， 加
样 时细 心 认真 以严 谨 的 Ｔ作
果 准确 无误 。
调
瑟 水 Ｈ Ｊ ０Ｉ 利 Ｈ 厦 Ｌ 仃 ，
｝ 标本 ，才能保证检验结
养殖技术顾 问 ２ １ ． ０ １６
管 卫 生 防 疫
酶 联 免 疫 吸 附试 验 的原 理 、 作 方 法 及 注 意 事 项 操
李华林 邢 莉ｚ 张 娟 ３
（ ． 吴 忠 市利 通 区动物 疾病 预 防控 制 中心 ７ １０ ，． 吴 忠 市动物 疾 病预 防控 制 中心 ７ １０ ， １宁夏 ５ １０ ２宁夏 ５１０
具 体操 作 步 骤 如 下 。用 包 被 缓 冲液 稀 释 的病 原
兔抗血清稀释至工作浓度 ， 每孔加 ５ 微升 ， ０ 摇匀后
封板 ，ｑ过 夜 。兔抗 血 清 （ ｂ ） 附在 固相 载 体上 ， ４Ｃ Ａ １吸 形 成 Ａ １ 抗 原 抗体 （ 照血 清 及待 检 血清 ） ｂ 一。 对 反应 。 按 试 验 要 求 稀 释并 加 入 对 照 和 待 检 血 清及 抗 原 ， 封
合物。经洗涤后 ， 固相载体上只留下特异性抗体。其 他免疫球蛋 白及血清中的杂质由于不 能与 固相抗原
结 合 ， 洗 涤 过程 中被 洗 去 。加 酶 标 抗 抗体 ， 固相 在 与
复合物 中的抗体结合 ， 从而使该抗体 间接地标记酶 。
洗 涤后 圊 相 载 体 上 的酶 量 就 代 表 特 异 性 抗 体 的量 。 最 后 加 底 物显 色 ，颜 色深 度 代 表 标 本 中受 检 抗 体 的
３宁夏 吴 忠市利 通 区动 物 卫 生监督 所 ７ １ ０ ） ． ５ １０
酶 联 免 疫 吸 附 （ ＬＳ 试 验 具 有 灵 敏性 、 异 Ｅ ＩＡ） 特 性 高 ， 重 复 性 好 ， 测 速 度 快 的特 点 ， 其适 合 于 且 检 尤
大批 量 血 清 样 品 的检 测 ，是 国际 认 可 的标 准化 诊 断
Ｅ ＩＡ反应终 止 后需 要在 １ ＬＳ Ｏ分钟 内读 数 ，否则
头 ，以免发生交叉 污染。每次加样应加在板孔的底
部 ， 免加在孔壁上部 ， 注意不可溅 出 ， 可产生 避 并 不 气泡 ， 以免加 样 不 准确 ， 响 试验结 果 。 影
最好将试剂根据所需用 量倒人加液槽 中，防止
试剂污染 ， 严禁将加液槽剩余的试剂倒 回试剂瓶 中。 ４４ 温 育 环 节 ． 温育时间若人为延长 ，会导致非特异性结合 紧
抗 体 滴 度 以能 阻断 ５％病 毒 抗 原 的 血清 稀 释 度来 表 ０
示。
由于 酶 的催 化频 率 很 高 ，故 可极 大地 放 大 反 应 效果 ， 而 使 测定 方 法达 到很 高 的敏 感度 。这 就将 酶 从 化 学 反 应 的 敏 感 性 和 抗 原 抗 体 反 应 的 特 异 性 相 结
应可 通 过酶 标 仪进 行 定 量测 定 。
量。酶标仪读数 ， 对实验结果进行判定。
３ 液相 阻 断酶 联 免 疫 吸 附方 法 ． ２
将 预先 滴 定好 的 固定 量 病 毒 抗 原 与 被检 血 清 首
先在液相 中反应 ，然后将抗原抗体复合 物转移到包 被 了特异性抗体的 Ｅ ＩＡ板 中，没有完全被血清抗 ＬＳ 体 阻断的病毒抗 原就被 Ｅ ＩＡ板 中的抗体捕 获 ， ＬＳ 于 随后加入的豚 鼠抗血清 中的抗体结合 ，再通过兔抗 豚鼠 Ｉｇ酶结合物和底物溶液显色。 ｇ 按试验孑 呈现的 Ｌ 颜 色与 抗 原 对 照孔 （ 加 血 清 ） 现颜 色 评 定 结 果 。 未 呈
每 次 加样 必 须 更 换 吸头 ，做 到 １ 样 品 １个 吸 个
振动 ３ 秒 ， Ｏ 使底物与终止液充分混合再读数 。
４７酶标仪读数 环节 ．
使 用 前 应 先 预热 仪 器 １～ ０分 钟 ，并 调 整 到 试 ５３
验要求 的波长 ， 使测定结果更稳定。 最 好 先 擦拭 微 孔 板底 部并 压 平 板条 ，避 免 反 应 板底划痕 、 不平 、 印或 液面高度差异造成 干扰 ， 指 致 使读数结果不准确 。因此要保持酶标板干净， 不能用 手触 摸板 底 留下指 印 。
养殖技术顾 问 ２ １． ０ １６
卫 生 防 疫
人酶标记 的抗 Ａ ２ ｂ 抗体 ， 如兔抗豚鼠球蛋 白 Ａ ３ 使 ｂ， 之 与 Ａ ３ 发 生 特 异 性 结 合 ， 结 果 形 成 ｂ Ａ ｌＡ － ｂ 一 ｂ 一 ｂ— ｇ Ａ ２ Ａ ３ 酶复合物 。 洗板后 ， 加入 ５ 微升 Ｏ 度平衡一致。孵育时尽量少开启恒温培养箱门， 以保 证箱内温度 ， 严禁缩短或延长孵育时间。
４５ 洗 涤 反 应 板 环 节 ．
ＥＩ ＬＳ Ａ试验是靠洗 涤来达到分离游离 和结合 的 酶标记物。 酶联免疫 吸附板每次洗涤要充分。 通过洗 涤 以消除残 留在板孔 中没能与固体抗原或抗体结合 的物质 ，以及在反应过程 中非特异吸附于固相载体 上的干扰物质 。如果洗涤不充分 ， 应该除去的杂质没 有洗 掉 ， 这样 就会 影 响试验 结果 。 洗板时需保证微孔板平放 ， 将洗涤液注满各孔 ， 尽量避免漏液 、 溢液现象。
反 应的温度和时间仍是影响显色 的因素 ，要按说 明 要求的温度和时间严格操作。
加入底物后应立即避光显色 。显色剂尽量在临 使用前配制 ， 现配现用。若底物呈现颜色变化则坚决 不 能再 用 。 终止液是 ２ ／ 克 摩尔的硫酸溶液 ，具有腐蚀性 ， 试验时要小心 ， 避免损伤皮肤和衣物。
３１ 间接 酶 联 免 疫 吸 附 方 法 ．
问 接 法 是 检测 抗 体 比较 常用 的方 法 。主要 是 利
用 称 记 的 抗 抗 体 检 测
转移至 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ板上 ， 每孔 ５ 微升 ， ０ 封板 ，７ ３ ℃温育 ｌ 小 时 。 有完 全被 血 清抗 体 阻 断的病 毒 抗原 被 Ｅ ＩＡ 没 ＬＳ
调查和免疫抗体监测 ， 评价疫苗免疫效力。
１ 基 本 原 理
将抗原或抗体结合到某 种固相载体表面 ，并保 持其 免 疫 活 性 。抗 原 或抗 体 再 与某 种 酶 连 接 成酶 标
抗 原或 抗 体 ，这 种 酶标 抗 原 或抗 体 既 保 留其免 疫 活
性， 又保 留酶 的活性 。 在测 定 时 ， 受 检标本 （ 定 的 把 测
合， Ｅ Ｉ 使 ＬＳ Ａ方法成为既特异又敏感的检测方法。
２ 基本类 型及用途
间接 Ｅ ＩＡ主要 用 于 检 测抗 体 ，双抗 体 法 用 于 ＬＳ 检 测 大分 子 抗 原 ， 双夹 心 法 用 于测 定 大 分 子抗 原 ， 液
相阻断 Ｅ ＩＡ用于测定抗 体 ，竞争 Ｅ ＩＡ用于汉 定 ＬＳ ＬＳ ０ 小分子抗原及半抗原 ，抗体捕捉 Ｅ Ｉ ＬＳ Ａ法主要用于 检 测 ＩＭ 抗 体 。 ｇ
配制洗涤液需要新 鲜无 污染的蒸 馏水或去离子 水 ， 配现用 。 现
盛放洗涤液 的容器应定期用清洁剂清洗 ，避免 长 菌或其 他 污染 。 每次洗完后要更换吸水纸轻轻拍干 ，同时避免
手指 接触 板底 。
４６ 显 色和 终 止 环 节 ．
显 色 是 无 色 的底 物 生 成 有 色 产物 的 温 育 反 应 ，
４ 注意事项
４１ 试 验 前 准备 ．
洗 板机在使用前后应使用蒸馏水 冲洗 管道 ， 以 保证洗板机各针孔畅通 ，否则个别板孔堵塞影响试 验 结果 。从 试剂 盒 中取 出本试 验所 用试 剂 ， 置室 温平 衡 Ｏ５ １ 小时。以确保各试剂达到最好活性 ， 而 ． ． ～０ 从 使 Ｅ ＩＡ反应充分。 ＬＳ 不要使用过期的试剂盒 ， 同批 不 次试剂不能混合使用 ， 以免影响试验结果。
故称 为 间接 法 。操作 步 骤 如下 。
将 特 异性 抗 原 与 固相载 体 连 接 ， 成 固相 抗 原 ， 形
洗 涤除 去未 结 合 的抗原 及 杂质 。加 稀 释 的受 检 血清 ， 其 中的 特异 抗 体 与抗 原 结 合 ，形 成 固相 抗 原 抗 体 复
方法 。我 国 目前 广泛 应 用 该 方法 进 行 疫病 流行 病 学
抗体或抗原 ）和酶标抗原或抗体按不 同的步骤与 固 相载体表面 的抗原或抗体反应。用洗 涤的方法使 固 相载体上形成 的抗原抗体复合物 与其他 物质 分开 ， 最后结合在 固相载体上 的酶量与标本 中受检物质 的 量成 一 定 的 比例 。加 入 酶反 应 的底 物后 ， 物可 在 酶 底 作用下使其所含 的供氢体由无色的还原型变成有色 的 氧化 型 ， 现颜 色 反 应 。 因此 ， 出 可通 过 底 物 的颜 色 反应来判定有无相应的免疫反应 ，颜 色反应的深浅
邻苯二胺 （ Ｐ 底物液 ，７ Ｏ Ｄ） ３ ℃温育 １ 分钟 ， ５ 每孔再 加 入 ５ 升 终止 液 。洗 涤后 加入 底 物 显 色 ， 现 颜 Ｏ微 呈
色的深浅与样 品中的抗体含量成反 比。用酶标仪测 定光密度 （ Ｄ） ， Ｏ 值 加终止液后立即读数 。 结果判定 ，只有符合试验认可标准结果才能成 立 。当被检血清稀释孔 Ｏ Ｄ值大于临界值为阳性孔 ， 小于或等于临界值为阴性孑 。阳性孑 所对应 的稀 释 Ｌ Ｌ 度就为该份血清的抗体滴度。
板 ，℃过夜 。预先滴定好的固定量病毒抗原与被检 ４ 血清首先在液相 中反应 ，若被检血清 中有特异性 抗 体， 就与病毒抗原进行特异性结合 。用磷酸盐吐温缓 冲 （ Ｂ Ｔ） 涤液洗 Ｅ ＩＡ板 ５次 ， 吸水纸 上甩 ＰＳ 洗 ＬＳ 在 干。将抗原抗体反应板各孔血清病毒混合液按次序
３ 操作方 法
加终 止 液 时 ， 免 吸 头和 孔 内 液体 接 触 ， 液 后 避 加
反复冻溶会使抗体效价下降 ，所 以检测抗体 的 血清标本如需做多次检测 ， 宜少量分装冷冻保存。
４３ 加 样 环 节 － 样品稀释方法应严格按照使用说明书操作。 注意 检查各 孑 液面 高度 是否一 致 ， 免漏 加 、 复加 液 。 Ｌ 避 重 加样前先制作加样表 ， 每板对应 １ 个加样表 ， 确 保 加样 准 确元 误 。
板 中的 Ａ ｌ 体捕 获 ，形成 Ａ ｌＡ 一特 异性结合 ｂ抗 ｂ— ｇ
物 。洗板 后加 入 病 原 的豚 鼠抗 血清 ， 孔 ５ 升 ， 每 ０微 封
作者简介： 李华林 （ ９ ６ ， １６ 一）
主要从事动物疫病防控和实验
板 ，７ ３ ℃温育 ｌ 小时 。洗 板后 ， 孑加 入 ５ 微 升 兔抗 每 Ｌ ０ 豚 鼠 ＩＧ酶 结合 物 ， 板 ．７ 温 育 Ｉ ｌ ， 洗涤 后加 ｇ 封 ３ ，１ ｅＨ。
附于反应孔周围 ， 不能完全清洗干净 ， 使试验结果不 准确。必须贴封片或加盖 ， 按照说 明严格控制操作温 度和时间。孵育时反应板均不宜叠放 ， 以保证各板温
影响实验结果 。 因此 ， Ｅ ＩＡ试验实际操作 中除了 在 ＬＳ 选 择优 良仪器设 备和试 剂外 ，正确 的操 作是保 证
ＥＩ ＬＳ ＡBiblioteka Baidu测结果准确可靠的必要条件。 必须熟知试验
４２样本 的采取与保存 ．
采血时应尽量避免溶血。制备血清标本时要采 取 自然凝固 ｌ２ ～ 小时， ０ ／ ３ ０ 转 分钟 ， ０ 离心 １ 分钟。 ５
血清 样 本宜 在 新鲜 时检 测 ， 结果 比较 准确 。若 ５ 天 内检 测 ， 可使 用 冰 箱 ２ ８ ＇ ℃保 存 ， 过 １星 期 时 间 超 测 定 ， 于零下 ２ ℃低温 冻存 。 应 Ｏ
各个环节的注意事项 ， 严格按要求进行实际操作 ， 加
样 时细 心 认真 以严 谨 的 Ｔ作
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瑟 水 Ｈ Ｊ ０Ｉ 利 Ｈ 厦 Ｌ 仃 ，
｝ 标本 ，才能保证检验结
养殖技术顾 问 ２ １ ． ０ １６
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酶 联 免 疫 吸 附试 验 的原 理 、 作 方 法 及 注 意 事 项 操
李华林 邢 莉ｚ 张 娟 ３
（ ． 吴 忠 市利 通 区动物 疾病 预 防控 制 中心 ７ １０ ，． 吴 忠 市动物 疾 病预 防控 制 中心 ７ １０ ， １宁夏 ５ １０ ２宁夏 ５１０
具 体操 作 步 骤 如 下 。用 包 被 缓 冲液 稀 释 的病 原
兔抗血清稀释至工作浓度 ， 每孔加 ５ 微升 ， ０ 摇匀后
封板 ，ｑ过 夜 。兔抗 血 清 （ ｂ ） 附在 固相 载 体上 ， ４Ｃ Ａ １吸 形 成 Ａ １ 抗 原 抗体 （ 照血 清 及待 检 血清 ） ｂ 一。 对 反应 。 按 试 验 要 求 稀 释并 加 入 对 照 和 待 检 血 清及 抗 原 ， 封
合物。经洗涤后 ， 固相载体上只留下特异性抗体。其 他免疫球蛋 白及血清中的杂质由于不 能与 固相抗原
结 合 ， 洗 涤 过程 中被 洗 去 。加 酶 标 抗 抗体 ， 固相 在 与
复合物 中的抗体结合 ， 从而使该抗体 间接地标记酶 。
洗 涤后 圊 相 载 体 上 的酶 量 就 代 表 特 异 性 抗 体 的量 。 最 后 加 底 物显 色 ，颜 色深 度 代 表 标 本 中受 检 抗 体 的
３宁夏 吴 忠市利 通 区动 物 卫 生监督 所 ７ １ ０ ） ． ５ １０
酶 联 免 疫 吸 附 （ ＬＳ 试 验 具 有 灵 敏性 、 异 Ｅ ＩＡ） 特 性 高 ， 重 复 性 好 ， 测 速 度 快 的特 点 ， 其适 合 于 且 检 尤
大批 量 血 清 样 品 的检 测 ，是 国际 认 可 的标 准化 诊 断
Ｅ ＩＡ反应终 止 后需 要在 １ ＬＳ Ｏ分钟 内读 数 ，否则
头 ，以免发生交叉 污染。每次加样应加在板孔的底
部 ， 免加在孔壁上部 ， 注意不可溅 出 ， 可产生 避 并 不 气泡 ， 以免加 样 不 准确 ， 响 试验结 果 。 影
最好将试剂根据所需用 量倒人加液槽 中，防止
试剂污染 ， 严禁将加液槽剩余的试剂倒 回试剂瓶 中。 ４４ 温 育 环 节 ． 温育时间若人为延长 ，会导致非特异性结合 紧
抗 体 滴 度 以能 阻断 ５％病 毒 抗 原 的 血清 稀 释 度来 表 ０
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由于 酶 的催 化频 率 很 高 ，故 可极 大地 放 大 反 应 效果 ， 而 使 测定 方 法达 到很 高 的敏 感度 。这 就将 酶 从 化 学 反 应 的 敏 感 性 和 抗 原 抗 体 反 应 的 特 异 性 相 结