痰结核分枝杆菌培养操作

痰分枝杆菌培养操作

注意：培养操作必须在二级生物安全实验室以上的防护条件下进行，穿戴个人防护装备确保安全！

一、材料与准备

1.实验物品：生物安全柜、漩涡振荡器、计时器、斜面架、培养箱、记号笔、登记本。

2.耗材（每份标本）：前处理管、无菌4%NaOH、无菌吸管（3支）、酸性罗氏培养基（2支）。

3.准备工作：

①将培养基从冷藏环境取出，检查培养基（污染或干裂的弃去不用），合格的培养基室温放置5-10

分钟，待其恢复至室温，拭去外壁的凝结水后在培养基斜面背面标记编号、患者姓名、接种日等；

②取无菌的前处理管，标记患者姓名、实验室编号；

二、标本处理与接种

1.在生物安全柜内，用无菌吸管吸取痰标本1-3ml，加入到前处理管中；

2.视痰标本性状加1-2倍体积的4%NaOH溶液，立即开始计时15分钟；

3.涡旋振荡30-60秒后室温静置，直至15分钟结束（如果标本较多，应当分别处理，保证氢氧化钠

处理时间不超过20分钟！）；

4.检查培养基的凝固水，如果过多，应沿培养基管壁弃去，避免凝固水流经斜面

5.用无菌吸管吸取经过前处理的痰标本，接种0.1ml至培养基斜面，尽可能将标本铺满斜面（可在

斜面上部和中部各滴一滴标本液，拧紧培养基管盖后向各方向倾斜），每份标本接种两支培养基；

三、培养与观察

1. 新接种的培养基放在斜面架上，保证斜面水平向上，在培养箱37℃培养24小时；

2. 24小时之后，将培养基竖直放置，继续培养；

3. 接种后第3天、第7天各观察一次，如果有菌落生长，则进行涂片镜检以鉴别污染菌或速生分枝

杆菌。以后每周观察一次，并记录结果；

4. 至第八周末，仍无菌生长，可报分枝杆菌阴性。

5. 典型的结核分枝杆菌菌落形态为淡黄色、菜花样、粗糙、干燥、不透明。非典型分枝杆菌菌落形

态不一，有的与结核杆菌相似，有的黄色、湿润、光滑。

6.如查不能区分杂菌污染和非结核分枝杆菌，应进行涂片抗酸染染色镜检，如为非抗酸菌，则报告

污染（如果培养实验室仅承担菌株分离任务，则不需在培养实验室涂片确认）。

四、结果报告标准：

1. 菌落生长不足斜面面积1/4，报告实际菌落数

2. 菌落生长占斜面面积1/4，分枝杆菌培养阳性（1+）

3. 菌落生长占斜面面积2/4，分枝杆菌培养阳性（2+）

4. 菌落生长占斜面面积3/4，分枝杆菌培养阳性（3+）

5. 菌落生长布满了整个斜面，分枝杆菌培养阳性（4+）

附图：

培养基外观菌落外观