痰结核分枝杆菌培养操作
结核杆菌痰培养操作流程
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肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测方法金标准
肺结核实验室检测的金标准是基于培养和鉴定结核分枝杆菌。
以下是具体步骤：
1.痰液样本收集：患者需要提供早晨醒来时的深咳痰液样本，
以获得有效的细菌数量。
2.痰液预处理：痰液样本经过预处理，包括离心和去除杂质。
这一步通常包括液体化和浓缩痰液。
3.痰液培养：将预处理后的痰液接种到培养基上，通常是液体
培养基。
培养基中的结核分枝杆菌将逐渐增殖形成菌落。
4.鉴定：通过常规培养、染色和生化试验等方法，鉴定已培养
的菌落是否为结核分枝杆菌。
5.药敏试验：对已鉴定的结核分枝杆菌进行药敏试验，以确定
哪些药物对其具有抗菌作用，从而为治疗方案的选择提供依据。
此方法被认为是金标准，因为它能够准确检测到结核分枝杆菌，并且可以确定其对药物的敏感性，为结核病的诊断和治疗提供可靠的结果。
但是，该方法需要相对较长的时间（通常需要几周）来进行培养和鉴定，因此在临床实践中可能需要其他更快速的检测方法来尽早确诊结核病。
痰结核菌培养方法
痰结核菌培养方法
痰结核菌培养是一种常见的痰液检测方法，用于检测结核病患者的痰液中是否存在结核菌。
以下是痰结核菌培养的一般步骤：
1. 收集痰液样本：结核病患者在早晨醒来后要深呼吸几次，以增加痰液样本的数量。
使用无菌容器收集新鲜的痰液样本。
2. 样本处理：将收集到的痰液样本进行处理。
先将样本离心，去除上清液。
然后用无菌生理盐水将沉淀部分悬浮均匀。
3. 接种培养基：将处理后的痰液样本接种到含有结核菌培养基的培养皿中，可以使用Lowenstein-Jensen培养基或7H10/7H11固体培养基。
4. 培养条件：将接种的培养皿放置于恒温培养箱中，温度保持在37左右。
结核菌通常需要较长的培养时间，通常为4至6周。
5. 观察结果：定期观察培养皿上是否有结核菌生长。
如果出现白色、凹陷、葡萄糖乳酸盐降解试验阳性等菌落形态特征，有可能是结核菌。
需要进一步进行酸酐试验和分子检测等确认。
需要注意的是，培养结核菌是一项复杂的技术，需要在严格的实验室条件下进行操作。
为了确保检测结果的准确性，还需要进行负对照和对照品的培养，以确保
所获得的结核菌是具有活力的。
此外，在进行痰结核菌培养之前，通常还会进行痰液的酸酐染色和结核菌PCR 等检测方法，以提高诊断结核病的准确性。
最终的诊断还必须通过其他临床表现、X光胸片和病理学等多种检查手段来综合判断。
结核实验室痰培养与分子检测
结核实验室痰培养与分子检测结核实验室痰培养与分子检测是结核病诊断和监测的重要手段。
痰培养，也被称为结核病分枝杆菌分离培养检查法，是结核病病原学诊断的“金标准”。
该方法主要分为液态培养和固态培养两种，我国推荐使用罗氏培养基简单法进行培养。
此外，分子学检查也是结核病诊断的重要方法。
目前，结核病细菌学领域以核酸为基础的分子生物学检测技术进展迅速。
以下是关于这两种方法的详细描述：一、结核实验室痰培养（1）痰培养的原理：分枝杆菌培养是依据分枝杆菌的生长规律，根据营养和代谢需要的条件，人工营造提供出有利于分枝杆菌生长而抑制其他细菌生长的环境，达到分离出分枝杆菌的目的。
常用的固体培养有罗氏、改良罗氏培养基、Middlebrook7H10或7H11；常用的液体液体培养以Middlebrook7H9为基础。
（2）痰培养的过程2.1痰培养前处理前处理的步骤：①取1-2ml痰标本至前处理管；②视标本性状加入1-2倍体积的4％氢氧化钠；③震荡30s至标本完全液化；④室温静置15分钟（整个处理时间不得超过20分钟）前处理方法：①简单法-碱处理法：分枝杆菌因较厚的细胞壁有耐受酸碱的特点，能耐受碱性消化液的处理，消化液直接接种于酸性培养基上，酸性培养基能中和碱性标本处理液，分枝杆菌能在酸性的培养基上生长。
②中和离心法：经含NaOH的N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）消化后，磷酸缓冲液（PH6.8）中和后，接种到中心培养基上。
2.2接种接种的步骤：①准备好两支培养基；②去除培养基中过多的凝固水；③用无菌吸管取前处理后的标本；④接种0.1-0.15 ml（2-3滴）至罗氏培养基斜面；⑤尽量使菌液均匀铺满斜面；⑥每份标本接种2支培养基。
2.3孵育孵育的步骤：①接种后斜面水平向上，36±1℃孵育24小时；②之后将培养基直立，继续36 ±1 ℃孵育8周（检查瓶盖是否拧紧）；③培养箱温度监测。
2.4结果的观察与报告①接种后第3、7天各观察一次菌落生长情况（污染、快速生长分枝杆菌）；②此后每周观察一次，直至满8周（阴性）；③每次观察记录菌落生长及污染情况；④满8周后未见菌落生长，可报告分枝杆菌生长阴性，培养管高压后丢弃；⑤发现显著污染以至无法观察结果，记录“污染”，培养管高压后丢弃；⑥发现疑似分枝杆菌生长，将菌株送上级实验室进行药敏试验二、分子检测分子诊断诊断具有检测周期短、检测结果准确可靠的特点。
结核杆菌培养操作流程
结核杆菌培养操作流程
朋友！今天来跟您唠唠结核杆菌培养这档子事儿。
想当年我刚开始接触这玩意儿的时候，那叫一个懵啊！不过慢慢也就摸出点门道了。
咱先说说准备工作哈。
您得把那些瓶瓶罐罐的都准备好，像培养皿啦、培养基啦，可别少了。
我跟您说，有一回我就忘了拿培养基，那叫一个尴尬！
然后呢，采集样本。
这可得小心着点儿，别弄得到处都是。
我记得有次小李采集样本的时候，手一抖，差点就搞砸了。
接下来就是接种啦。
这一步可关键了，动作得轻、得准。
我当初学这个的时候，总是掌握不好力度，不是多了就是少了，唉！
培养的时候，温度和时间可得控制好。
我记得好像是 37 度左右，时间嘛，大概得几周。
不过也可能记错喽，您可得再确认确认。
哇，这中间还得时不时观察观察，看看有没有啥变化。
有一次我观察晚了，差点就错过了重要的情况。
嗯...说到这，我突然想起个事儿。
之前听说有个同行，在培养的时候居然把培养箱的温度调错了，结果全白费了，您说多可惜！
对了，还有个小细节得跟您说。
这培养的时候啊，有时候会有点怪怪的味道，您可别被吓到。
如果您在操作过程中发现有啥不对劲的，别慌，赶紧停下来找找原因。
我这又扯远啦。
反正您就按照这些步骤来，多练几次，准能行！
怎么样，朋友，您觉得能搞明白不？。
结核杆菌培养标准操作流程
分支杆菌培养阳性（3+）：菌落占斜面面3/4 分支杆菌培养阳性（4+）菌落布观察分支杆菌生长情况时，发现有非分支 杆菌生长，报告污染，重新送检。污染必须 控制在2%以下，当污染率高于2%时，提示 培养基污染或消化处理不当，应采取相应措 施，查寻和分析原因。
3、痰标本的保存和输送
痰标本容器密封，勿倒置，严防痰液外 溢。不能立即培养的痰标本，须置4℃冰箱 保存，防止痰液干涸或污染。
二、结核分支杆菌培养操作规程
培养基 酸性改良罗氏（分离培养）——目前由州 疾控统一购买按任务数配发并4℃冰箱保存。 1、将培养基从冰箱取出，恢复到室温并在培 养管上编培养序号，写上患者姓名、培养 日期、痰涂片编号等信息。 2、标本前处理：碱处理法 取2mL痰标本于前处理管中加1-2倍痰标本量 的4%NaOH，振荡器上震动30-60s后室温 放置10-15min（不得超过20min）。
一、痰标本的采集
1、痰标本的种类 根据痰标本采集时间，可 将标本分为3类： （1）即时痰：就诊时深呼吸后咳出的痰液； （2）清晨痰：患者晨起立即用清水漱口后咳 出的第2口、第3口痰液； （3）夜间痰：送痰前一日患者晚间咳出的痰 液。
2、正确的咳痰方法：
（1）咳嗽前应缓慢的深吸气，吸气后稍屏气片刻。 （2）躯干略向前倾，两侧手臂屈曲，平放在两侧胸 壁下部，内收并稍加力。 （3） 咳嗽时腹肌用力快速收缩，使腹壁内陷。一次 深吸气可连续咳嗽三声。 （4）停止咳嗽并收缩将剩余的气体尽量呼尽。 （5）在缓慢吸气或平静呼吸片刻，准备再次咳嗽的 动作。 （6）勿将漱口水、唾液、呕吐物、鼻咽分泌物等混 入痰内，以免影响检验结果。如标本不合格，检验 人员应当拒收，并和临床医生对接，重新采样。 （7）标本量一般在3～5毫升。
结核分枝杆菌痰培养方法
结核分枝杆菌痰培养方法结核病是一种大家较为熟知的慢性传染性疾病，由结核分枝杆菌感染引起。
可通过空气传播，且感染剂量很低，人吸入很少的结核分枝杆菌即可引起感染。
该疾病会在任何年龄发病，而免疫力低下的患者更容易感染结核分枝杆菌。
近年来，随着艾滋病发病率的增加，耐药性结核分枝杆菌的出现，吸毒人群的增多以及免疫抑制剂的应用等，我国结核病发病率仍然较高。
结核病已成为威胁人类健康的全球性的严重的公共卫生问题。
如何知道自己得了结核病呢？当人体感染结核杆菌后，因感染的部位不同，会出现不同的临床症状。
例如肺结核患者主要会表现出咳嗽，咳痰，咯血，胸痛，低烧，盗汗，乏力等一些呼吸道疾病症状。
而感染肾脏时，患者会出现尿急，尿痛，血尿等泌尿系统症状。
大部分患者感染结核杆菌后会出现不同程度的低热，盗汗，虚弱等等。
当人体出现以上症状时，即可高度怀疑为结核病。
出现自觉症状后，就医后医生首先会建议患者进行影像学诊断，以此来确定结核分枝杆菌感染的脏器部位，同时也会进行体液培养来进一步确定患者是否感染了结核杆菌，通常会采取患者的痰液来进行检验。
让我们进一步来了解一下吧。
一、什么是结核杆菌？结核杆菌即为结核分枝杆菌。
它是引起结核病的病原体，而结核杆菌是一种较为古老的细菌，早在4500年前的古埃及，人们就已经发现了这种细菌的存在。
古代时大家将肺结核患者称为肺痨患者。
在1882年，该病菌由一名德国的细菌学家郭霍发现后，才被正式命名为结核菌。
结核分枝杆菌是一类专性需氧菌，它生长较为缓慢。
对干燥，冷，酸碱等抵抗力非常的强，在紫外线的照射下，痰液中的结核杆菌需要经过六个小时左右才会被彻底杀死。
目前痰培养是确定结核杆菌感染的主要检查项目，经过痰液培养分离细菌可以发现，结核分枝杆菌革兰染色不易着色，需用特殊染色方法荧光染色或萋—尼抗酸染色。
经抗酸染色后菌体为红色细长直或略弯的杆菌，该细菌没鞭毛，无芽孢，有荚膜，多数有异染颗粒。
荧光染色、抗酸染色如图：从致病性角度分析可见，结核杆菌本身不会产生内外毒素，其致病物质主要是他的荚膜、脂质以及蛋白质。
结核杆菌培养标本处理标准操作程序
结核杆菌培养标本处理标准操作程序1 检验目的结核病的确证诊断。
2 样本类别痰、尿、粪、脑脊液、胸腹水、分泌物等。
3 采样容器无菌容器或运送培养拭子。
4 试剂4％NaOH、罗氏培养基。
5 检验程序5.1 标本采集和处理5.1.1 痰标本：用无菌容器留取清晨痰，用 4％NaOH 等量进行前处理 5 分钟，3000r/min 离心 30 分钟，取沉渣接种罗氏培养基 2 枝，37℃孵育 4 周。
5.1.2 尿标本：留取晨尿(或 24H 尿的沉淀部分 10- 15ml)送检，用 4％NaOH 等量进行前处理 5 分钟，3000r/min 离心 20 分钟，取沉渣接种罗氏培养基 2 枝，37℃孵育 4 周。
5.1.3 粪标本：留取 5-10 克粪便于广口瓶中，加入生理盐水 30-40ml，用玻棒搅拌，静置 10 分钟，吸取混悬液部分，3000r/min 离心 30 分钟，取沉渣接种罗氏培养基 2 枝，37℃孵育 4 周。
5.1.4 脑脊液、胸腹水：将标本 3000r/min 离心 30 分钟，取沉渣接种罗氏培养基 2 枝，37℃孵育 4 周。
5.1.5 分泌物：直接接种罗氏培养基 2 枝，37℃孵育 4 周。
5.2 细菌鉴定5.2.1 染色：取 2 周后罗氏培养基上生长菌落涂片，作抗酸染色5.2.2 鉴定：取菌落进行相应的生化鉴定(手工或仪器)5.3 结果报告5.3.1 阴性结果报告：结核培养未生长。
5.3.2 阳性结果报告：结核菌名。
6 质控程序见室内质控操作程序。
7 注意事项7.1 结核菌培养时，污染标本要进行前处理，防止普通细菌的干扰。
7.2 结核菌接种应在生物安全柜中。
7.3 液体标本应离心，增加阳性率。
8 临床意义结核菌在人群中传播，并使之感染和发病，与患者排菌量有密切关系。
结核病的主要传染源是续发性结核病痰涂片检查阳性的患者，痰涂片检查可作为肺结核诊断的重要依据。
对于生长繁殖的结核菌，抗结核药的杀菌作用得到充分发挥，而处于代谢缓慢生长期的结核菌，药物几乎不起作用，因此，结核菌培养是化学治疗效果的重要指征。
痰标本分枝杆菌培养操作程序
痰标本分枝杆菌培养操作程序（简单法）一、操作步骤1、将酸性罗氏培养基从冷藏环境取出，检查培养基有无污染或者干裂，如果有则弃去不用。
2、将培养基室温下放置，待其恢复至室温。
3、擦去培养基外壁吗、凝结的水，在培养基斜面的背面标记实验序号、患者姓名、日期。
4、取洁净的前处理管，标记患者姓名。
5、取痰标本1-2ML视标本性状，加入1-2倍体积的4%NaOH（消化液）。
6、涡旋振30-60s,将前处理管置于试管架上，室温放置15min。
如果标本较多，应分批处理，保证NaOH处理时间不超过20min。
7、检查培养基的凝固水，如果凝固水过多，则应沿培养管壁弃去凝固水，避免凝固水流经斜面。
8、用无菌吸管吸取经前处理的痰标本，接种于0.1ml（1-2滴）至培养基斜面，尽可能将前处理液铺满斜面。
每份标本接种两支培养基。
必要时再接种一支丙酮酸钠培养基。
9、拧上螺旋盖（尽量松一点），培养基斜面向上，保持斜面水平37℃放置24h。
10、24h后，将培养基竖直放置，拧紧盖子，继续培养。
11、接种后第三天，第七天各观察一次，如有菌落生长，则进行涂片镜检以鉴别污染或速生分枝杆菌。
以后每周观察一次。
12、至第八周末，仍无菌生长，可报分枝杆菌培养阴性。
13、典型的结核分枝杆菌菌落形态为淡黄色、菜花样、粗糙、干燥、不透明。
非结核分枝杆菌菌落形态不一，有的与结核分枝杆菌相似，有的呈黄色、湿润、光滑。
14、如果不能区分杂菌污染和非结核分枝杆菌，应进行涂片抗酸染色镜检，如果镜检结果为非抗酸菌，则报告污染。
15、斜面无菌落生长，分枝杆菌培养阴性菌落生长不足斜面面积1/4，报实际菌落数菌落生长占斜面面积1/4，分枝杆菌培养阳性1+菌落生长占斜面面积1/2, 分枝杆菌培养阳性2+菌落生长占斜面面积3/4, 分枝杆菌培养阳性3+菌落生长布满整个斜面，分枝杆菌培养阳性4+注：所有操作应在生物安全柜中进行。
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
1.痰液涂片染色：这是最常用的方法之一、将痰液制备成涂片，进行
酸性染色，如抗酸杆菌染色和耐酸染色。
结核分枝杆菌是抗酸杆菌，其细
胞壁富含脂质，可以抵抗酸性染料的脱色作用。
这种方法可以快速检测出
结核分枝杆菌的存在。
2.结核分枝杆菌的培养：这是鉴定结核分枝杆菌的“金标准”。
痰样
品通常会涂在含有富含营养物质的培养基上，并在适当的温度和湿度条件
下孵育。
结核分枝杆菌需要一个相对较长的孵育时间（通常需要数周）才
能生长和生成可见的菌落。
分枝杆菌的培养是确诊结核病的关键步骤，同
时还可以进行对特定抗结核药物的药敏试验。
3.伊红染色：这种方法旨在鉴定酸酒杆菌属分枝杆菌和其他酸杆菌的
超微结构。
伊红染色可使细胞壁和细胞内储存的色素显现为红色或粉红色。
该方法可以帮助确定分枝杆菌的类属。
4.PCR检测：聚合酶链反应（PCR）能够通过扩增目标基因片段来检
测和诊断结核分枝杆菌。
这种方法具有高度特异性和灵敏度，并可以通过
荧光标记的探针来定量检测。
5.蛋白质组学：蛋白质组学技术通过检测和分析结核分枝杆菌内部蛋
白质的组成和变化，可以为诊断和治疗提供信息。
质谱法是一种常用的蛋
白质组学技术，可以通过检测菌落样品中的特定蛋白质来鉴定结核分枝杆菌。
总的来说，微生物学诊断方法在结核分枝杆菌检测和鉴定中起着至关
重要的作用。
这些方法可以帮助医生确定结核病的诊断和治疗方案，并对
结核分枝杆菌的流行病学研究和控制提供重要的科学依据。
分枝杆菌罗氏培养操作
分枝杆菌罗氏培养操作材料仪器:Ⅱ级生物安全柜、37℃培养箱、涡旋震荡器、低速离心机、接种环加热灭菌器、一次性吸管、0.1ml接种环、容积为30ml的螺旋盖前处理管试剂：前处理液:4%NaOH溶液：取4克氢氧化钠加入80ml 蒸馏水中，完全溶解后补充蒸馏水至终体积100ml。
操作步骤6.1 标本前处理：在生物安全柜中进行操作。
6.1.1 碱处理----碱处理时间不能超过20min。
痰：一次性吸管取标本2ml，置于前处理管中，加入2～4ml 的4%NaOH溶液，室温15min，其间在震荡器上振荡，促标本匀化。
6.2 接种：采用碱处理的标本，应接种酸性罗氏培养基。
取前处理后的标本0.1ml，无菌操作，用接种环接种于罗氏培养基斜面上，每份痰标本接种两支培养基，接种毕，放37℃培养箱内培养。
6.3 培养过程观察接种后第3天、第7天观察，此后，每周观察一次菌落生长情况，直至满8周。
6.4 结果与报告接种后应按时观察细菌生长情况，阳性生长经涂片抗酸染色验证后，及时记录初生长日期，并发培养阳性报告（如菌量少，继续放置培养箱孵育生长）。
培养至8周未见细菌生长，报告培养阴性。
6.4.1 培养结果按下列标准报告：培养8周未见菌落生长，报告培养阴性(一)。
菌落生长不及斜面面积1/4时，报告实际菌落数菌落占斜面面积 1/4 报告培养阳性(1+)菌落占斜面面积1/2 报告培养阳性（2+)菌落占斜面面积3/4 报告培养阳性(3+)菌落布满培养基斜面报告培养阳性(4+)6.4.2 培养基污染情况报告如发现培养基污染，则报告污染菌生长，污染率高于5％时，提示培养基制备中灭菌处理不佳或消化液处理不良，应认真检查操作程序。
污染菌程度按下列标准报告：污染菌生长占培养基斜面1/4以下者，报告(C1＋)。
污染菌生长占培养基斜面1/2以下者，报告(C2＋)。
污染菌生长占培养基斜面3/4以下者，报告(C3＋)。
污染菌生长占培养基全斜面者，报告(C4＋)。
结核xpert操作方法
结核xpert操作方法结核xpert是一种用于检测结核病的快速和准确的诊断工具。
它采用了分子生物学技术，可以检测结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的DNA。
结核xpert可用于疑似结核病患者的诊断和治疗监测，对于结核病的控制和预防具有重要意义。
以下是结核xpert操作的一般步骤：1.样本收集：从痰液中收集样本，以确保能够检测到结核分枝杆菌的存在。
痰液样本应该是早晨在患者清洁口腔后的第一次咳嗽产生的，这样可以最大程度地提高结核分枝杆菌的检出率。
2. 样本处理：将收集到的样本加入到结核xpert试剂盒中，并进行必要的处理步骤，如离心和稀释。
这些处理步骤旨在提高结核分枝杆菌的浓度和纯度，从而提高检测的灵敏度和准确性。
3. DNA提取：使用结核xpert试剂盒中提供的化学试剂对样本进行DNA提取。
结核分枝杆菌的DNA是进行后续PCR扩增反应的关键物质。
4. PCR扩增反应：将提取的DNA加入到结核xpert试剂盒中的扩增反应体系中，并进行PCR扩增反应。
PCR反应是一种用于扩增目标DNA的技术，通过特定的引物和酶使得目标序列按照模板DNA进行复制，从而大量增加了目标DNA的数量。
5. 结果分析：结核xpert设备会自动分析PCR扩增反应产生的结果，并给出结核分枝杆菌的检测结果。
结果以阳性、阴性或无效进行分类。
阳性表示样本中存在结核分枝杆菌的DNA，阴性表示样本中不存在结核分枝杆菌的DNA，无效表示检测过程中出现了问题，无法得出准确的结果。
1. 快速：结核xpert可以在2小时内提供结核分枝杆菌的检测结果，远远快于传统的痰涂片检测方法，节省了患者等待时间和诊断周期。
2. 准确：结核xpert的敏感性和特异性都很高，可以准确识别结核分枝杆菌的存在，大大降低了误诊和漏诊的风险。
3. 简便：结核xpert的操作相对简单，只需对样本进行处理和处理，并将试剂盒放入设备中进行PCR扩增反应，设备会自动分析结果，无需其他复杂的实验步骤。
痰液标本细菌学检验(一)
痰液标本细菌学检验（一）关键词：细胞库菌株培养中心 atcc 北京标准物质网一、检验程序痰及呼吸道标本的细菌学检验程序见图34—1。
二、检验方法(一)显微镜检查1．一般细菌涂片检查挑取标本中脓性或带血部分涂片进行革兰染色镜检，描述观察到的细菌的染色性、形态及排列等特征，可发出初步报告。
2．结核分枝杆菌涂片检查挑取标本干酪样或脓性部分做抗酸染色和金胺“O”荧光染色，前者用油镜，后者用荧光显微镜检查。
具体操作详见第十五章分枝杆菌属检验。
3．放线菌及诺卡菌涂片检查将痰液用生理盐水反复洗涤数次，挑取黄色颗粒(硫黄颗粒)或不透明着色斑点，置玻片上并覆以盖玻片，轻压后置高倍镜下观察。
如见中央为交织的菌丝，其末端粗杆呈放线状排列时揭去盖玻片，待干后做革兰染色及抗酸染色镜检。
4．下呼吸道其他标本检查支气管肺泡灌洗液等直接取自下呼吸道的标本，不易受上呼吸道杂菌的污染，涂片检菌的意义较大。
可取离心沉淀物进行革兰染色与抗酸染色检查。
(二)培养和鉴定1．痰培养标本的前处理于痰标本中加入一定量无菌生理盐水，剧烈振荡5～10秒后，将沉淀于管底的脓痰小片取出，置于另一试管中，同法再处理2次，可洗去痰中的正常菌群。
然后向洗涤过的痰液中加入等量pH 7. 6的1％胰酶溶液，放置35℃环境90分钟，使痰液均质化后备用。
2．培养基与培养环境(1)血琼脂平板：适用于分离多种细菌，需氧环境，可分离β-溶血性链球环境培养，分离肺炎链球菌和β-溶血性链球菌。
根菌，葡萄球菌；置于5％CO2据血琼脂平板生长的菌落特征及镜检形态，得出初步结果，再按各类细菌特性做进一步鉴定。
环境培养，常用于分离嗜血杆菌和脑膜(2)巧克力色琼脂平板：置于5％CO2炎奈瑟菌等有特殊营养需求的细菌。
(3)中国蓝琼脂平板／麦康凯平板：需氧环境培养，常用于分离肠杆菌科细菌。
(4)TTC-沙保弱培养基：需氧环境培养，用于分离白假丝酵母菌及其他酵母菌、诺卡菌、放线菌以及烟曲霉菌等。
结核杆菌培养操作流程
结核杆菌培养操作流程稿子一嘿，亲爱的朋友们！今天来跟大家聊聊结核杆菌培养的操作流程哟！咱先准备好那些要用的东西，像无菌的培养皿啦、培养基啦，还有各种小工具，都得干干净净的。
然后呢，从病人那里采集到合适的标本，比如说痰液或者其他的样本。
采集的时候可得小心仔细，别弄混了或者弄脏了。
接着把标本好好处理一下，让结核杆菌能更容易被培养出来。
这就好像给它们准备一个舒适的小窝。
处理好之后，就把标本轻轻地接种到培养基上。
这一步就像是给小细菌们搬新家，得温柔点。
之后就是耐心等待啦，隔一段时间就去看看它们有没有长大。
可别着急，就像照顾小宝宝一样，得给它们时间。
要是发现有可疑的菌落长出来，还得进一步做鉴定，确定是不是真的结核杆菌。
整个过程都要特别细心，不能有一点点马虎，不然小细菌们可不听话，就培养不好啦！怎么样，是不是觉得还挺有趣的？稿子二嗨呀，小伙伴们！今天咱们来讲讲结核杆菌培养是怎么操作的。
一开始呀，先把场地收拾干净，保证没有乱七八糟的细菌来捣乱。
然后把需要的东西都摆好，像那些瓶瓶罐罐的，一个都不能少。
采集完的标本得处理得妥妥当当，就像给它们梳妆打扮一样，让结核杆菌能露出来。
弄好了就赶紧把它们放到培养基里，动作要轻，别把它们吓跑喽。
放好之后，把培养皿放进培养箱，这个培养箱就像是它们的幼儿园，环境得调好。
在等待的过程中，心里得一直惦记着，时不时去瞅瞅它们长得怎么样了。
要是发现有小点点冒出来，还得认真分辨一下，是不是我们要找的结核杆菌。
整个流程都要认真再认真，仔细再仔细，这样才能成功培养出结核杆菌哟！大家记住了吗？。
痰抗酸染色法实验报告
痰抗酸染色法实验报告
痰抗酸染色法实验报告
引言：
结核病是由结核分枝杆菌引起的一种慢性传染病，在全球范围内都有一定的感染率。
痰液中的结核分枝杆菌是结核病的主要致病因素，因此及早检测结核菌的存在对于疾病的预防与治疗都具有重要意义。
本实验通过痰抗酸染色法，对痰液样本中的结核分枝杆菌进行检测。
实验器材与试剂：
1. 应用气浮式石英炉
2. 血涂片镜片
3. 尼氏染色液
4. 碘酒
5. 脱色液
6. 新精巫微机控制带状电热器
7. 灭菌显微盖片
8. 生化气体培养蓄压针
实验步骤：
1. 首先，将痰液样本加热至80°C，保持30分钟，以杀灭其中的非结核分枝杆菌。
2. 用无菌无毒玻璃棒将痰液涂抹于血涂片上。
3. 放置血涂片于加热石英炉中，以100°C加热5分钟，以使细菌附着于玻璃片上。
4. 将玻璃片放入尼氏染色液中浸泡10分钟。
5. 将玻璃片除去超出染色液的部分后，放入碘酒中浸泡1-2分钟。
6. 用脱色液冲洗玻璃片2-3次。
7. 吹干玻璃片表面的液体，然后在显微镜下观察。
实验结果及分析：
通过显微镜观察，在痰液样本中，我观察到许多红色染色的结核分枝杆菌。
根据这些结构的形态特点以及对病原学、生理学的综合判断，可以确定这些结构确实是结核分枝杆菌。
结论：
本实验通过痰抗酸染色法，成功检测到痰液样本中的结核分枝杆菌。
该实验方法简单、方便且准确，可用于临床检测及结核病的诊断。
痰培养操作流程sop
痰培养操作流程sop痰培养是一种常见的临床实验室检查方法，用于检测痰样本中的细菌、真菌和病毒等微生物。
正确的痰培养操作流程对于准确诊断和治疗疾病至关重要。
下面是一份关于痰培养操作流程的标准操作规程（SOP）：1. 收集痰样本：首先，需要向患者解释痰培养的目的和过程，并告知患者如何正确收集痰样本。
患者应该在清晨醒来后进行痰样本的收集，以确保样本的新鲜度和准确性。
2. 标本处理：将患者收集的痰样本转移到干净、干燥的容器中，并密封好。
在标本处理过程中，操作人员应该佩戴手套和口罩，以避免交叉感染。
3. 样本传送：将标本送往实验室进行痰培养前，需要填写标本送检单，并确保标本的标识清晰准确。
在传送过程中，要注意避免样本的温度变化和震动。
4. 样本处理：实验室接收到痰样本后，首先需要进行样本的离心处理，以分离细菌和其他微生物。
然后将样本接种到不同的培养基上，以促进微生物的生长。
5. 培养条件：根据不同的微生物种类，需要在不同的培养条件下进行培养。
通常情况下，细菌需要在37摄氏度的培养箱中培养，而真菌和病毒则需要在不同的培养基上进行培养。
6. 结果解读：培养后的样本会形成不同形状和颜色的菌落，实验室技术人员需要根据菌落的形态和生长特性来鉴定微生物的种类。
最终，会生成一份痰培养报告，告知医生检测结果。
7. 结果分析：医生根据痰培养报告来判断患者是否感染了细菌、真菌或病毒，并根据检测结果来制定相应的治疗方案。
痰培养结果对于选择抗生素和其他治疗药物具有重要的指导意义。
总的来说，痰培养操作流程需要严格按照标准操作规程来进行，以确保检测结果的准确性和可靠性。
只有通过正确的操作流程和专业的实验室技术人员，才能为临床医生提供准确的诊断信息，帮助患者及时得到有效的治疗。
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法
结核分枝杆菌的微生物学诊断方法1.痰培养痰培养是最常用的结核分枝杆菌的诊断方法之一、患者的痰样本收集后，通过培养方法将痰中的结核分枝杆菌进行寻找和增殖。
常用的培养基有Löwenstein-Jensen（LJ）培养基和Middlebrook 7H10/7H11培养基等。
这些培养基具有选择性和富营养的特点，能够促进结核分枝杆菌的生长。
2.结核菌分离结核菌分离方法是从痰培养中分离出结核分枝杆菌的过程。
分离的目的是为了获得单纯的结核分枝杆菌株，以便进一步的实验室诊断和药敏试验。
结核菌分离主要采用传统的液体培养和固体培养方法。
液体培养常用的方法有BACTEC（双箱培养仪）等。
固体培养则是在含有大量鸡蛋黄LJ培养基上进行，结核菌形成典型的小、平、光滑、圆形的菌落。
3.结核菌鉴定结核菌鉴定是确认分离的菌株是否为结核分枝杆菌的过程。
传统的结核分枝杆菌鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化试验和生物学特性等。
形态学鉴定主要通过显微镜观察菌落、细胞形态以及胞内结构等特征来进行鉴定。
生理生化试验可以通过菌株的生长特性、酶活性以及对物质的利用能力等进行鉴定。
最常用的生物学特性鉴定方法是结核菌分枝杆菌凯鲁氏吸收试验。
4.快速诊断试验随着生物技术的发展，出现了多种快速诊断试验，能够更加快速、准确地鉴定结核分枝杆菌。
其中最重要的是核酸放大技术，包括聚合酶链反应（PCR），逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），核酸杂交等。
这些技术通过放大结核菌DNA或RNA的特异性片段，可以快速、敏感地检测结核分枝杆菌，并对其进行分离和鉴定。
此外，结核分枝杆菌耐药性的快速检测也是常用的试验，如基于核酸放大的耐药基因检测和分子生物学方法。
总结起来，结核分枝杆菌的微生物学诊断方法主要包括痰培养、结核菌分离及鉴定，以及快速诊断试验。
这些方法在结核病的诊断和治疗中起着重要的作用，可以准确、快速地检测出结核分枝杆菌，并对其药敏性进行评估，以便合理选择治疗方案。
结核分枝杆菌培养步骤
结核分枝杆菌培养步骤
结核分枝杆菌是导致肺结核的细菌，在诊断和治疗肺结核时起着至关
重要的作用。
其培养是结核病的基础检查方法之一。
以下是结核分枝
杆菌培养的详细步骤：
1.样本的采集和处理：结核分枝杆菌可从患者的唾液、痰液、胸腔积液等体液中分离得到。
采集样本的时间、采集方式和处理方式都可能影
响分枝杆菌的分离效果。
因此，应严格按照相关规定采集和处理样本。
2.选择适当的培养基：结核分枝杆菌在不同种类的培养基上生长情况不同。
因此，选择适宜的培养基非常重要。
常用的结核分枝杆菌培养基
包括罗氏培养基、勃氏液体培养基、勃氏固体培养基等。
3.制备培养基：制备培养基应严格按照国家标准或相关指南，在无菌条件下进行。
制备好的培养基应该及时使用，过期了就不能使用了。
4.接种：用杆菌种搅拌器将样品混匀，然后将其接种到已经制好的培养基中。
接种时需避免产生气泡，并且将接种匀密均匀。
5.培养条件：结核分枝杆菌的培养需要一定的条件，如适宜的温度、湿度和酸碱度等。
常温下结核分枝杆菌生长缓慢，所以需要在温度为37℃
的恒温箱中进行培养。
保持培养条件的稳定性和质量是培养成功的关键。
6.处理结果：培养结果一般需要5-12周，要根据培养结果来判断是否检测到结核分枝杆菌。
如果可以检测到结核分支杆菌，可以进行药敏试验，了解分枝杆菌的敏感性和耐药性。
以上就是结核分枝杆菌的培养步骤。
需要注意的是，结核分枝杆菌在培养过程中的生长情况可能受到多种因素的影响，因此严格遵循培养步骤并保证培养条件的合适和稳定，才能提高分离率和检测准确性。
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痰分枝杆菌培养操作
注意：培养操作必须在二级生物安全实验室以上的防护条件下进行，穿戴个人防护装备确保安全！
一、材料与准备
1.实验物品：生物安全柜、漩涡振荡器、计时器、斜面架、培养箱、记号笔、登记本。
2.耗材（每份标本）：前处理管、无菌4%NaOH、无菌吸管（3支）、酸性罗氏培养基（2支）。
3.准备工作：
①将培养基从冷藏环境取出，检查培养基（污染或干裂的弃去不用），合格的培养基室温放置5-10
分钟，待其恢复至室温，拭去外壁的凝结水后在培养基斜面背面标记编号、患者姓名、接种日等；
②取无菌的前处理管，标记患者姓名、实验室编号；
二、标本处理与接种
1.在生物安全柜内，用无菌吸管吸取痰标本1-3ml，加入到前处理管中；
2.视痰标本性状加1-2倍体积的4%NaOH溶液，立即开始计时15分钟；
3.涡旋振荡30-60秒后室温静置，直至15分钟结束（如果标本较多，应当分别处理，保证氢氧化钠
处理时间不超过20分钟！）；
4.检查培养基的凝固水，如果过多，应沿培养基管壁弃去，避免凝固水流经斜面
5.用无菌吸管吸取经过前处理的痰标本，接种0.1ml至培养基斜面，尽可能将标本铺满斜面（可在
斜面上部和中部各滴一滴标本液，拧紧培养基管盖后向各方向倾斜），每份标本接种两支培养基；
三、培养与观察
1. 新接种的培养基放在斜面架上，保证斜面水平向上，在培养箱37℃培养24小时；
2. 24小时之后，将培养基竖直放置，继续培养；
3. 接种后第3天、第7天各观察一次，如果有菌落生长，则进行涂片镜检以鉴别污染菌或速生分枝
杆菌。
以后每周观察一次，并记录结果；
4. 至第八周末，仍无菌生长，可报分枝杆菌阴性。
5. 典型的结核分枝杆菌菌落形态为淡黄色、菜花样、粗糙、干燥、不透明。
非典型分枝杆菌菌落形
态不一，有的与结核杆菌相似，有的黄色、湿润、光滑。
6.如查不能区分杂菌污染和非结核分枝杆菌，应进行涂片抗酸染染色镜检，如为非抗酸菌，则报告
污染（如果培养实验室仅承担菌株分离任务，则不需在培养实验室涂片确认）。
四、结果报告标准：
1. 菌落生长不足斜面面积1/4，报告实际菌落数
2. 菌落生长占斜面面积1/4，分枝杆菌培养阳性（1+）
3. 菌落生长占斜面面积2/4，分枝杆菌培养阳性（2+）
4. 菌落生长占斜面面积3/4，分枝杆菌培养阳性（3+）
5. 菌落生长布满了整个斜面，分枝杆菌培养阳性（4+）
附图：
培养基外观菌落外观。