牛肉膏蛋白胨培养基的配制与灭菌(课堂PPT)

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（三）认识微生物培养所需的仪器设备
▪ 1.培养平板
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▪ 2.试管与棉塞
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▪ 3.接种环，涂布棒
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▪ 4.高温高压蒸汽灭菌锅
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p42 高压蒸汽灭菌
▪ 请回顾灭菌锅的操作方法
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▪ 1）用之前检查水位及水质。若水质不好，需换水 ▪ 2）放置灭菌物品，勿过满；瓶子灭菌，瓶盖拧松 ▪ 3）盖上锅盖，相对的两个螺帽一起拧 ▪ 4）启动加热，同时打开放气阀；检查安全阀是否关上。
▪ 消毒不一定能达到灭菌的要求，而灭菌则可达到
消毒的目的
▪ 无菌
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消毒灭菌方法：
▪ （一）干热灭菌法 ▪ （二）湿热灭菌法 ▪ （三）过滤除菌 ▪ （四）紫外线杀菌 ▪ （五）药物杀菌
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▪ （一）干热灭菌法 ▪ 1.火焰灭菌法
▪ 2.热空气灭菌法 ▪ 140~160℃2~3h
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▪ （二）湿热灭菌法 ▪ 1.高压蒸汽灭菌法 ▪ 121℃ 20~30min
▪1.选择适宜的营养物质 ▪实验室中常用：
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▪2.营养物质的浓度及配比合适 ▪3.控制pH条件
细菌和放线菌：pH7.0~7.5 酵母菌和霉菌：pH4.5~6.0
▪4.控制氧化还原电位 ▪5.原料来源的选择 ▪尽量利用廉价且易获得的原料作为培养基成分
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▪ 6.灭菌处理 ▪ 避免杂菌污染，要对所用器械及工作场所进行消
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▪ 每次使用前，先用75%酒精（或新洁尔灭）擦洗
台面，并提前用紫外线灭菌灯照射15~30min处 理净化工作区内积存的微生物；关闭灭菌灯后应 启动风机使之运转2min后再进行培养操作；工 作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流 流型不受干扰；使用完毕应及时清理工作台面上 的物品并用酒精擦拭台面使之始终保持洁净。
▪ 请大家先写出1L的配方，然后再写出150mL的
配方
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▪ 配制完毕，将配制好的培养基装入锥形瓶内，
瓶口塞上棉塞，用牛皮纸/报纸包扎瓶口，标 注好组别，进行高温高压蒸汽灭菌
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（2）液体培养基
▪ 为固体培养基中不含琼脂
牛肉膏蛋白胨培养液
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g ▪ pH 7.4-7.6，加水至1 000mL ▪ 于121℃高压灭菌15~20min备用 ▪ 用途：普通细菌常用的培养基
调整温度时间121℃ 15min。
▪ 5）待排气阀冒出大量热气并持续约2~5min后排尽冷空
气后，再将其关闭；
▪ 6）灭菌结束，待压力下降至0，可打开放气阀，之后开
盖。注意防止烫伤
▪ 7）固体物品可进行干燥；液体物品冷却后拧紧。尽量
避免二次污染。
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▪ 5.鼓风干燥箱
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▪ 6.超净工作台
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牛肉膏蛋白胨培养基的配 制与灭菌
方月琴
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▪ 一、复习 ▪ 二、实验：配培养基与灭菌 ▪ 三、斜面的划线培养 ▪ 四、倒平板的操作 ▪ 五、平板划线培养
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一、复习
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《微生物培养与检验》主要课程内容
▪ 1.微生物营养需求 ▪ 2.微生物形态 ▪ 3.微生物纯化、分离 ▪ 4.微生物培养、筛选与保存 ▪ 5.微生物检验
牛肉膏 3g
蛋白胨 10g
NaCl 5g
琼脂 15-20g
▪pH 7.4-7.6，加水至1 000mL；若需分装，需先融化，摇
匀后分
▪于121℃高压灭菌15~20min备用
▪用途：普通细菌常用的培养基
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请大家配制：
▪ 请大家查看“营养琼脂”的成分与配制说明，每
组配置牛肉膏蛋白胨固体培养基150mL于锥形 瓶中
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7.微量移液器的使用
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今天的工作：
▪ 1.固体物品的灭菌 ▪ 2.配制培养基并进行灭菌 ▪ 3.学习倒平板 ▪ 4.学习斜面培养基制作 ▪ 5.超净台的准备 ▪ 6.划线接种 ▪ 7.灭菌效果检查
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开始实验
▪ 1.固体物品：
1）平皿（6只/组） 2）试管与棉塞/塑料封口（6只/组）的包扎 3）灭菌蓝色、黄色和白色枪头
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课程内容
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微生物吃什么？
2 微生物长的什么样？
3 如何得到微生物？
4 如何保存微生物？
5 我很爱吃熟食（猪头肉），但是听 说熟食微生物超标，这是怎么检测 的？
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LOGO
规则：
▪ 1.上课不迟到：第1、5节课，提
前10min到教室 2.下课前，自己的实验物品归类， 该清洗的清洗，该收拾的收拾 3.值日生负责擦黑板、扫地、擦 桌；为大家做好服务工作 4.上课时间请不要玩手机
▪ 2.常压蒸汽灭菌法 ▪ 3.常压间歇灭菌法
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▪ （三）过滤除菌 ▪ 薄膜滤菌器0.22μm和0.45μm
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▪ （四）紫外线杀菌 ▪ 240~280nm波段紫外线杀菌力较强 ▪ 多以253.7nm作为紫外线杀菌波长 ▪ 特点：穿透力弱 ▪ 超净工作台：
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Biblioteka Baidu
▪ （五）药物杀菌 ▪ 1.酒精 ▪ 2.新洁尔灭
毒与灭菌
▪ 培养基一般采取高压蒸汽灭菌，一般培养基
0.1MPa，121.3℃ 15~30min
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（二）微生物的消毒灭菌
▪ 灭菌指利用物理和化学的方法杀灭或除去物料及
设备中一切生命物质的过程。
▪ 消毒是指用物理或化学的方法杀死物料、容器、
器具内外的病原微生物，一般只能杀死营养细胞 而不能杀死芽孢。
▪ 适宜的酸碱度、一定的缓冲能力、一定的氧化还
原电位，合适的渗透压
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根据物理状态划分
▪ 培养基分 液体、半固体和固体 3种 ▪ 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌
扩大培养；
▪ 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 ▪ 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细
菌
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培养基的配制原则
将以上物品放入灭菌锅中进行灭菌121℃ 20min
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2.培养基：
▪ 培养基分 液体、半固体和固体 3种 ▪ 液体培养基有各种肉汤培养基，主要用于细菌
扩大培养；
▪ 半固体培养基含0.4%琼脂，主要用于保存细菌 ▪ 固体培养基含15%~20%琼脂，主要用于分离细
菌
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（1）固体培养基配置
牛肉膏蛋白胨培养基
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安全操作与标准操作
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1 微生物吃什么？
▪ （一）微生物培养基的制备 ▪ （二）微生物的消毒灭菌 ▪ （三）认识微生物培养所需的仪器设备
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（一）微生物培养基的制备
▪ 培养基：是人工配制的、适合微生物生长繁殖或
产生代谢产物的营养物质。
▪ 满足微生物生长发育的水分、C，N，生长因子，
P，S，Na，Ca等