2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体(共23张PPT)

思考问题
1、整个制备过程为何要经过几次筛选? 第一次筛选： 用特定的选择培养基筛选出多种 杂交瘤细胞 第二次筛选： 筛选出能产生所需抗体的杂交瘤 细胞。
2、本过程运用了哪些技术手段？原理？ 技术手段：动物细胞融合技术、动物细胞培养 原理：细胞膜的流动性、细胞增殖
三、单克隆抗体的特点和应用
1、特点：特异性强，灵敏度高，产量高。 2、应用：诊断试剂 优点：准确，高效，快速
A.经过免疫的T淋巴细胞 B.未经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的B淋巴细胞 D.未经过免疫的B淋巴细胞
4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产
破伤风杆菌的实验方案 A
(1)该实验方案的目的是： 制备单克隆抗体
骨髓瘤细胞
B
(2)该方案能达到预期效果吗？为什么？
杂交瘤细胞
不能，没有注射抗原，无法获得产生
2、动物细胞融合基本原理 细胞膜的流动性
3、诱导方式 物理法：电激、振动、离心 化学法：聚乙二醇（PEG） 生物法：灭活的病毒 如：仙台病毒
为什么要用灭活的病毒？ 仙台病毒 物理/化学 丧失感染活性
方法 保留融合活性
灭活的病毒
灭活的病毒颗粒
黏附于细胞表面
动
物
细
细胞膜被病毒
胞
颗粒穿通
融
合
过
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程
有丝分裂
（同左）
化学（聚乙二醇） 灭活的病毒
用途
克服远源杂交的障 碍，获得杂种植株
制备单克隆抗体
传统抗体生产方法随：堂测试
抗原 刺激 动物体内
反复注射
已B淋经巴免细疫胞的抗体(抗体不纯)
筛选单一已经免疫的B 淋巴细胞
不能增殖，产生大量抗体
缺点：产量低、纯度低、特异性差
二、单克隆抗体的制备
用抗原免疫小鼠
骨髓瘤细胞的培养
在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ）C ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身
融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂
交瘤细胞
A．②④
B．①③⑤
C．①②③④
D．②③
3、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合，得到杂交瘤细胞，经培养可产生大量克隆
抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ C ）
细胞融合，
形成杂种细胞
动物细胞融合技术的意义和应用
4、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 植物细胞的全能性
细胞融合前的处 去除细胞壁后诱导 使细胞分散后诱导
理方法
原生质体融合
细胞融合
诱导方法
物理（离心、振荡、 物理、化学方法
电刺激）
多孔细胞培养板
随堂测试
细胞融合后培养液中有几种细胞？ B BB B瘤 瘤瘤 瘤 筛选杂种细胞
已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨 基嘌呤阻断。 人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增 殖。 鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖。 将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，在筛选培养 基上筛选获得杂种细胞。
注射到 小鼠腹腔
课堂小结
动物细 胞融合
单克隆 抗体制备
过程： 原理：细胞膜的流动性 意义：突破有性杂交局限，使远 缘杂交成为可能 应用：主要用于制备单克隆抗体 制备过程：
特点：特异性强，灵敏度高，产量大 应用：用作诊断试剂，治疗疾病和 运载药物
【作业布置】
1.复习本节知识,做学案习题。 2.复习专题一、二内容,构建知识 网络。
2.2.2 动物细胞融合与单 克隆抗体
学习目标
1.通过观察图片、阅读文本，能够了解动 物细胞融合的原理、过程和意义。 2.通过师生交流、图像分析，能够理解单 克隆抗体制备的过程和应用。
【问题导学二】植物体细胞杂交技术
植物细胞 A（番茄）
植物细胞 B（马铃薯）
植
物
体 原生质体 A
细
胞 杂
植物细 胞融合
交
过
程
学习目标 1.去除细胞壁
纤维素酶、果胶酶
原生质体 B
2.原生质体融合
物理方法和
化学药剂:聚乙二醇
杂种细胞 杂种细胞再生出细胞壁 脱分化
植物组织培养
愈伤组织 再分化
杂种植株(番茄马铃薯)
一、动物细胞融合技术
1.概念： 动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个
或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
融合后形成的具有两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞，称为杂交细胞。
单一抗体的B淋巴细胞。
C
(3)A是从小鼠的脾脏中取得__B_淋__巴__细__胞_ 该
细胞能够产生_抗__体___ 。
足够数量的细胞群
(4).图中B为____细__胞__融__合______过程，常 用___灭__活__的__病__毒______诱导，该细胞继承 体外培养 双亲细胞的遗传特性，既能分__泌专__一__抗__体__, 又能_迅__速__大__量__增__殖。
经过免疫的 B淋巴细胞
融合 多种细胞
骨髓瘤 细胞
随堂测试
置于选择培 养基上培养
B淋巴细胞 培养几天后
死亡
杂交瘤细胞
由于培养基 中缺乏相应 的营养物， 骨髓瘤细胞
死亡
随堂测试
用培养液稀释
多 孔 细 胞 培 养 板
阳性克隆的筛选和 克隆化培养
随堂测试
注射到小鼠体内
体外培养
单克隆抗体
由单个杂交瘤细胞通过克隆，所产生的化学性质 单一、特异性强的抗体。
用于治疗疾病 用于运载药物
“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物
随堂测试
1、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比
较中，正确的是（ B ）
A．结果是相同的 B．杂种细胞的形成过程基本相同 C．操作过程中酶的作用相同 D．诱导融合的手段相同
2、单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细
胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，