2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体(共23张PPT)

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动物细胞融合和单克隆抗体公开课ppt课件

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二:动物细胞融合的成功应用
思 考
——单克隆抗体的制备
• 人们获得抗体的传统方法是?
– 将抗原注入动物体,然后从动物血清中提取抗体
• 这种方法的缺点是什么?
– 效率低,产量有限,纯度低,动物抗体注入人体可能 产生严重的过敏反应。
• 运用已学知识,设想怎样获得单一类型的抗体?
• 能否用单个B淋巴细胞通过克隆形成的细胞群来
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7
Hale Waihona Puke 结:比较植物体细胞杂交和动物细胞融合
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理 融合前处理 诱 导方法
细胞膜的流动性、 植物细胞的全能性
细胞膜的流动性
用纤维素酶、 果胶酶去壁
用胰蛋白酶 使细胞分散
物理、化学方法
物理、化学、 生物方法


获得部分 或完整植株
主要用于制备 单克隆抗体
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2)、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合? 这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传物质, 不仅具有B细胞分泌抗体的能力,而且还有无限增殖的 本领,因而可以获得大量单克隆抗体
3)、为何要进行两次筛选?
第1次筛选得到杂交瘤细胞(多种)。第2次筛选得 到能产生特异性抗体的杂交瘤细胞群。
4)、如何进行第2次筛选? 培养在多孔培养板上,每孔只有一个杂交瘤细胞。
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病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合、形成杂种细胞 5
3、动物细胞融合技术的应用
• 细胞融合技术突破了有性杂交的局限,使
远缘杂交成为可能。
• 利用杂交瘤技术,制备单克隆抗体。
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动物细胞融合与单克隆抗体PPT课件(原文)PPT

动物细胞融合与单克隆抗体PPT课件(原文)PPT
栏目 导引
2.单克隆抗体的制备过程
专题2 细胞工程
骨髓瘤
杂交瘤细胞
能产生所需抗体
栏目 导引
专题2 细胞工程
3.单克隆抗体的优点及应用 (1)优点:__特__异__性__强____、灵敏度高、产量高。 (2)应用 ①作为诊断试剂,具有准确、___高__效_____、简易、快速的优点。 ②用于治疗疾病和__运__载__药__物____。
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)
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(4) 动 物 杂 按ESC键退出全屏播放
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(×)
(5)动物细胞融合和植物体细胞杂交的结果是相同的。( × )
栏目 导引
专题2 细胞工程
动物细胞融合 结合下面动物细胞融合的过程,探究下列问题:
栏目 导引
专题2 细胞工程
比较项目
植物体细胞杂交 (番茄—马铃薯植株)
单克隆抗体制备
过程 第 4 步
杂种植株鉴定
提纯单克隆抗体(特异性 强、灵敏度高)
酶解法除去细胞壁: 注射特定抗原,免疫处理 融合前处理
纤维素酶、果胶酶 正常小鼠
①克服有性远缘杂交 ①制备单克隆抗体;
意义和用途 不亲和的障碍;
②有助于疾病的诊断、治
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按按EESS从CC键键退退_出出_全全细_屏屏_播播_胞放放__培__养__液_____或小鼠的__腹__水____中提取单克隆抗体。
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动物细胞融合与单克隆抗体PPT

动物细胞融合与单克隆抗体PPT

跟踪训练
(2011年滦县高二检测)能使动物细胞融 )
合的特有的诱导因素是( A.离心
B.灭活的病毒
C.电激
答案:B
D.振动
单克隆抗体的制备 1.关键思路及操作依据 (1)关键思路
①克隆单一的B淋巴细胞,形成细胞群。
②将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合,获得杂交瘤细 胞。 (2)用B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合的原因
)
动物细胞工程 动物细胞培养和融合,单 克隆抗体的制备 胰蛋白酶处理,制作细胞 悬液 物理方法、化学方法、生 物方法 单克隆抗体的制备 动物血清不可缺少
A.1 C.3
B.2 D. 4
【尝试解答】
【解析】
B
选B。植物细胞工程常采用的技术手段
有植物组织培养和植物体细胞杂交。动物细胞工程
常采用的技术手段有动物细胞培养、细胞融合、单 克隆抗体的制备,还有胚胎移植、核移植等。动、
细胞。
远缘 杂交的不亲合性,成为研 4.意义:克服了______ 遗传 、_________ 细胞免疫 、肿瘤和生物_______ 新品种 培 究细胞_____
育的重要手段。
二、单克隆抗体
1.传统抗体的获得
抗原 ,使动 (1)方法:①向动物体内反复注射某种_____ 抗体 ;②从动物_____ 血清 中分离所需抗体。 物产生_____ 产量低 、纯度低、_______ 特异性 差。 (2)特点:_______
动物细胞融合 1.原理:膜的流动性。 2.诱导方法:物理法——离心、振动、电激;化 学法——聚乙二醇;生物方法——灭活的病毒。
3.动物细胞融合的过程
4.优点:动物细胞融合技术突破了有性杂交方法
的局限性,使远缘杂交成为可能。 特别提醒 灭活是指用物理或化学的手段使病毒或细菌失去感 染能力,但是并不破坏这些病原体的抗原结构。

222动物细胞融合和单克隆抗体-PPT精品文档

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融合后的细胞经选择性培养基培养后,能存活的细 胞就是杂交瘤细胞。 但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞, 通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释, 用多孔细胞培养板培养,使每孔细胞不超过一个,通 过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的 抗体(常用酶联免疫吸附试验法),那些上清液可与 特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还 不能保证是来自单个细胞,挑选阳性孔的细胞继续进 行有限稀释,一般需进行3~4次,直至确信每个孔中 增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的 克隆化培养。
杂交细胞 选择性培养基 杂交瘤细胞增殖 未融合细胞死亡
1.单克隆抗体 的制备 5
大侠
将不同种杂交细胞分 开,并克隆专一抗体, 检测阳性细胞
体内培养
体外培养
单克隆抗体
6
大侠
PEG 灭活的仙台 病毒
选择性培养基 杂交瘤细胞增殖 未融合细胞死亡
7
大侠
筛选产生特异抗 体的细胞群
8
大侠
如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养?
§2 -2 动物细胞工程
•2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体
一、动物细胞融合(细胞杂交)
将两个或多个细胞结合形成一个细胞的过程。 融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞,称为杂交细胞。 诱导动物细胞融合的方法:聚乙二醇、灭火 的病毒(仙台病毒)、电激 意义:突破了有性杂交方法的局限,使远缘 杂交称为可能。
14
大侠
9
大侠
体外使用旋转培养管大量培养杂交瘤细胞,从上清中获取单 克隆抗体。但此方法产量低 体内实体瘤法 对数生长期的杂交瘤细胞接种于小鼠背部皮 下,每处注射0.2 ml, 共2~4点。待肿瘤达到一定大小后(一 般10~20天)则可采血,从血清中获得单克隆抗体含量可达 到1-10mg/ml。但采血量有限。 体内腹水的制备 腹腔注射1×106个杂交瘤细胞,接种细胞 7~10天后可产生腹水,密切观察动物的健康状况与腹水征 象,待腹水尽可能多,而小鼠频于死亡之前,处死小鼠,用 滴管将腹水吸入试管中,一般一只小鼠可获1~10ml腹水。 也可用注射器抽取腹水,可反复收集数次。腹水中单克隆抗 体含量可达5-20mg/ml, 这是目前最常用的方法,还可将腹 水中细胞冻存起来,复苏后转种小鼠腹腔则产生腹水快、量 多。 10

动物细胞融合与单克隆抗体讲课 (2)-PPT精选文档

动物细胞融合与单克隆抗体讲课 (2)-PPT精选文档

C
6.“生物导弹”是指 A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单克隆抗体上连接抗癌药物

D )
练一练
A 、 B细胞为动物细胞,请据图回答问题:
A细胞
C 细 胞
D 细 胞
B细胞
(1)若A细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞,那么D细胞 称为 杂交瘤 细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征,一 有丝分裂 方面因具有骨髓瘤细胞的 性质 ,通过 连续分裂 方式产生大量细胞 ,我们称之为 过程;另一方面 单克隆 能分泌大量的抗体 ,我们把该过程分泌的抗体 单克隆抗体 称 .

A.PEG
B.灭活的病毒
C.电刺激
D.离心
5. 单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后,要用特定 养基筛选出杂交瘤细胞,在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 ( ) ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A.②④ B.①③⑤ C.①②③④ D.②③

3. 用传统的方法如何获得抗体?
抗体的传统生产方法
抗 原
动 物 体 内
多 种 效 应 B 细 胞
多 种 抗 体
从 血 清 中 分 离 抗 体
该法制备抗体的特点:
产量低、纯度低,且抗 体的特异性差、灵敏度低。
单克隆抗体的制备
• 单克隆抗体:单个细胞克隆产生的化学
质单一特异性强的抗体

设计方案:
利用效应B细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂
人-鼠(想像图)
一、动物细胞融合
1.概念:
动物细胞融合(cell fusion)也成细胞杂 交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细 胞的过程。 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传 物质的单核细胞,称为杂交细胞。

动物细胞融合与单克隆抗体 课件人教版高中生物选修三ppt

动物细胞融合与单克隆抗体  课件人教版高中生物选修三ppt

一 动物细胞融合技术
杂交细胞:具有原来两个 或多个细胞的遗传信息
使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。
细胞膜的流动性
动物细胞融合特有
PEG融合法、电融合法和灭活病毒诱导法等。 (化学法 物理法 生物法 )
灭活的病毒诱导动物细胞融合的原理
1.什么是病毒的灭活?
灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力,但是并不破坏病毒的抗原结构。
三 单克隆抗体的应用
1.单克隆抗体的优点:特异性强,灵敏度高,可以大量制备。 单克隆抗体能准确地识别抗原的细微差异,与特定抗原发生特异性 结合,并且可以大量制备。
2.单克隆抗体的应用 (1)广泛用作诊断试剂
(2)运载药物:如ADC(抗体 - 接头 - 药物)
(3)用于治疗疾病。
2(2020全国卷)为研制抗病毒A的单克隆抗体,某同学以小鼠甲为实验材料设计了 以下实验流程。
2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体
本节聚焦: 1.什么是动物细胞融合技术? 2.单克隆抗体是如何制备的?
在临床上有哪些应用?
知识回顾:植物体细胞杂交的过程
植物细胞融合
植物组织培养
运用植物体细胞杂交技术,可以跨越不同植物之间的生殖隔离的屏障
那么,有没有技术能让不同种动物的体细胞进行杂交,培育出集不同细胞 的优势于一身的动物细胞呢?
单克隆抗体制备的过程:
能产生所需抗体的杂交瘤细胞
注射到小鼠腹腔内 从小鼠腹水中提取
体外培养 从细胞培养液中提取
单克隆抗体
两次筛选的比较
第一次筛选
第二次筛选
原因
诱导融合后得到的细胞中,除 杂交瘤细胞之外,还有未融合 的亲本细胞,也有融合的具有 同种核的细胞

高中生物课件-2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体

高中生物课件-2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体


克 隆
3、融合后培养液中有几种细胞?

体 制
4、第一次筛选的方法和目的

过 程
5、第二次筛选的方法和目的

意 图
6、杂交瘤细胞有什么特点?
7、本过程利用了哪些技术?
2.3单克隆抗体的应用
单克隆抗体最主要的优点:特异性强,灵敏 度高,并能大量制备。
1、诊断试剂——最广泛应用
准确、高效、简易、快速
2、治疗疾病和运载药物
杂交瘤细胞特点: 既能产生专一抗体, 又能大量增殖。
(二选)抗体检 测:选能产生所 需专一抗体的杂 交瘤细胞
小鼠腹腔内培养
获得产生相应 抗体的B细胞
√ BB 、B瘤 、瘤
瘤 (B、瘤) (一选)选择 性培养基:筛 选杂交瘤细胞
体外培养
注射抗原 免疫
经过免疫的 B淋巴细胞
骨髓瘤 细胞
单 克 隆 抗 体 的 制
异性结合的免疫球蛋白。
能产生抗体的细胞是浆细 胞(即效应B细胞)。
抗体的传统生产方法
抗原 反复注射动物
该法制备抗体的缺பைடு நூலகம்:
产量低、纯度低,且 抗体的特异性差、灵 敏度低。
从动物的血清中分离抗体
单克隆抗体
★ 利用B淋巴细胞产生抗体的功能。 ★ 利用骨髓瘤细胞无限增殖的特性。 ★ 利用细胞融合的技术将两种细胞融合 获得具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的 杂交瘤细胞。 ★ 利用动物细胞培养技术大量培养杂交 瘤细胞。
1.3 比较动、植物细胞杂交技术
比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合
融合原理 融合前处理
细胞膜的流动性 细胞的全能性
纤维素酶、果胶酶 去除细胞壁后诱导 原生质体融合

2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-高二下学期生物人教版选择性必修3

2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-高二下学期生物人教版选择性必修3

多孔细胞培养板 阳性孔
一段时间后,检测各孔上清液中细 胞分泌的抗体
上清液可与特定抗原结合的培养孔 为阳性孔
抗体检测板
分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞 即为所需杂交瘤细胞
在单克隆抗体制备过程中,两次筛选的目的和方法是不相同的
(三)单克隆抗体的制备过程(非常重要)
02
将抗体检测为阳
新课程p64杂交瘤细胞在小鼠腹腔 性的杂交瘤细胞
3、灭活病毒诱导细胞融合过程:
动物细胞融合实质及完成的标志:细胞核的融合 融合后形成单核细胞
书本P49右上角问题: 19世纪30年代,科学家曾在患肺结核、天花和麻 疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。 如何解释这一现象?
病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。
一、一动.动物物细细胞胞融融合合技技术术
多种已免疫 B淋巴细胞
小鼠的脾脏中获取
方法:电融合法 、PEG融合法、 灭活病毒诱导法
等诱导融合
骨髓瘤细胞
(三)单克隆抗体的制备过程(非常重要)
02
诱导融合后的细胞
B
BB
B1-瘤 B2-瘤 B3-瘤
瘤瘤 瘤
第一次筛选 置于选择培养基上培养
1
2
3
杂交瘤细胞(多种)
第一次筛选:用特定的选择培养基进行筛选,在该培养基上,未融合的亲本 细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡,只有融合的杂交瘤细胞才能生长。
有没有技术能让不同种动物的体细胞杂交?
实例:1970年,人—鼠细胞荧光标记融合实验
红色荧光 染料标记 的膜蛋白
人细胞
绿色荧光 染料标记 的膜蛋白
鼠细胞
人鼠杂交细胞
细胞 融合
37° 培养40min
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单一抗体的B淋巴细胞。
C
(3)A是从小鼠的脾脏中取得__B_淋__巴__细__胞_ 该
细胞能够产生_抗__体___ 。
足够数量的细胞群
(4).图中B为____细__胞__融__合______过程,常 用___灭__活__的__病__毒______诱导,该细胞继承 体外培养 双亲细胞的遗传特性,既能分__泌专__一__抗__体__, 又能_迅__速__大__量__增__殖。
2、动物细胞融合基本原理 细胞膜的流动性
3、诱导方式 物理法:电激、振动、离心 化学法:聚乙二醇(PEG) 生物法:灭活的病毒 如:仙台病毒
为什么要用灭活的病毒? 仙台病毒 物理/化学 丧失感染活性
方法 保留融合活性
灭活的病毒
灭活的病毒颗粒
黏附于细胞表面



Байду номын сангаас
细胞膜被病毒

颗粒穿通




有丝分裂
在这种培养基上不能存活增殖的细胞是( )C ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身
融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂
交瘤细胞
A.②④
B.①③⑤
C.①②③④
D.②③
3、科学家们用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融 合,得到杂交瘤细胞,经培养可产生大量克隆
抗体,与骨髓瘤细胞融合的是( C )
经过免疫的 B淋巴细胞
融合 多种细胞
骨髓瘤 细胞
随堂测试
置于选择培 养基上培养
B淋巴细胞 培养几天后
死亡
杂交瘤细胞
由于培养基 中缺乏相应 的营养物, 骨髓瘤细胞
死亡
随堂测试
用培养液稀释
多 孔 细 胞 培 养 板
阳性克隆的筛选和 克隆化培养
随堂测试
注射到小鼠体内
体外培养
单克隆抗体
由单个杂交瘤细胞通过克隆,所产生的化学性质 单一、特异性强的抗体。
2.2.2 动物细胞融合与单 克隆抗体
学习目标
1.通过观察图片、阅读文本,能够了解动 物细胞融合的原理、过程和意义。 2.通过师生交流、图像分析,能够理解单 克隆抗体制备的过程和应用。
【问题导学二】植物体细胞杂交技术
植物细胞 A(番茄)
植物细胞 B(马铃薯)


体 原生质体 A

胞 杂
植物细 胞融合
细胞融合,
形成杂种细胞
动物细胞融合技术的意义和应用
4、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
原理
细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 植物细胞的全能性
细胞融合前的处 去除细胞壁后诱导 使细胞分散后诱导
理方法
原生质体融合
细胞融合
诱导方法
物理(离心、振荡、 物理、化学方法
电刺激)
多孔细胞培养板
随堂测试



学习目标 1.去除细胞壁
纤维素酶、果胶酶
原生质体 B
2.原生质体融合
物理方法和
化学药剂:聚乙二醇
杂种细胞 杂种细胞再生出细胞壁 脱分化
植物组织培养
愈伤组织 再分化
杂种植株(番茄马铃薯)
一、动物细胞融合技术
1.概念: 动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个
或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
融合后形成的具有两个或多个细胞遗传 信息的单核细胞,称为杂交细胞。
(同左)
化学(聚乙二醇) 灭活的病毒
用途
克服远源杂交的障 碍,获得杂种植株
制备单克隆抗体
传统抗体生产方法随:堂测试
抗原 刺激 动物体内
反复注射
已B淋经巴免细疫胞的抗体(抗体不纯)
筛选单一已经免疫的B 淋巴细胞
不能增殖,产生大量抗体
缺点:产量低、纯度低、特异性差
二、单克隆抗体的制备
用抗原免疫小鼠
骨髓瘤细胞的培养
A.经过免疫的T淋巴细胞 B.未经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的B淋巴细胞 D.未经过免疫的B淋巴细胞
4.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法,设计的生产
破伤风杆菌的实验方案 A
(1)该实验方案的目的是: 制备单克隆抗体
骨髓瘤细胞
B
(2)该方案能达到预期效果吗?为什么?
杂交瘤细胞
不能,没有注射抗原,无法获得产生
思考问题
1、整个制备过程为何要经过几次筛选? 第一次筛选: 用特定的选择培养基筛选出多种 杂交瘤细胞 第二次筛选: 筛选出能产生所需抗体的杂交瘤 细胞。
2、本过程运用了哪些技术手段?原理? 技术手段:动物细胞融合技术、动物细胞培养 原理:细胞膜的流动性、细胞增殖
三、单克隆抗体的特点和应用
1、特点:特异性强,灵敏度高,产量高。 2、应用:诊断试剂 优点:准确,高效,快速
细胞融合后培养液中有几种细胞? B BB B瘤 瘤瘤 瘤 筛选杂种细胞
已知细胞合成DNA有D和S两条途径,其中D途径能被氨 基嘌呤阻断。 人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径,但一般不分裂增 殖。 鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径,但能不断分裂增殖。 将这两种细胞在试管中混合,加PEG促融,在筛选培养 基上筛选获得杂种细胞。
注射到 小鼠腹腔
课堂小结
动物细 胞融合
单克隆 抗体制备
过程: 原理:细胞膜的流动性 意义:突破有性杂交局限,使远 缘杂交成为可能 应用:主要用于制备单克隆抗体 制备过程:
特点:特异性强,灵敏度高,产量大 应用:用作诊断试剂,治疗疾病和 运载药物
【作业布置】
1.复习本节知识,做学案习题。 2.复习专题一、二内容,构建知识 网络。
用于治疗疾病 用于运载药物
“生物导弹”=单克隆抗体+药物
随堂测试
1、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比
较中,正确的是( B )
A.结果是相同的 B.杂种细胞的形成过程基本相同 C.操作过程中酶的作用相同 D.诱导融合的手段相同
2、单克隆抗体制备过程中,骨髓瘤细胞和B淋巴细
胞诱导融合后,要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞,
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