动物细胞融合ppt课件
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公开课动物细胞融合与单克隆抗体ppt课件
目的获：得产生
相应抗体的B 细胞
（二选）：选 能产生所需专
一抗体的杂 交瘤细胞
体外培养 小鼠腹腔内培养
ppt课件.
√ BB 、B瘤 、瘤瘤
（B、瘤）
（一选）选 择性培养基：
只有杂交 瘤细胞才
能存活
14
2.2单克隆抗体的应用 特异性强
单克隆抗体最主要的优点：灵敏度高
并能大量制备
诊断试剂——最广泛应用
细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接
细胞融合，形成杂交细胞
（细胞膜具有一定的流动性）
ppt课件.
8
1.2动物细胞融合过程
为什么灭活的 病毒能作诱导剂？
灭活丧失感染性 保留融合活性
ppt课件.
9
1.3动物细胞融合技术的意义和应用
意义：
Hale Waihona Puke 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 成为可能
应用： 制备单克隆抗体（最主要的应用）
但是体外
怎样大量
？ 获得单一 抗体
培养的细胞 不能无限增
殖
癌细胞
既能产生特异性抗体，
又pp能t课件大. 量增殖的细胞 12
你的设想
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖
单克隆 动物细胞培养技术 杂交瘤细胞
抗体
动物细胞融合技术
既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞
ppt课件.
13
细胞继承了_双__亲__细__胞__的__遗__传__物__质____ ，因此不仅能分泌 特异__性__抗__体_____ ，还有 大量增殖 本领。
（3）该方案的目的是__制__备__单__克__隆__抗__体___________。
人教版生物选修三专题--动物细胞工程-课件-共张ppt
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
受精作用
正在融合的细胞
动物细胞融合技术的发展简史：
1、20世纪30年代，在肺结核、天花等病理组织中观 察到多核细胞；
2、20世纪70年代，在蛙的红细胞中观察到多核细胞； 3、1962年，发现日本血凝性病毒能引起艾氏腹水瘤
细胞融合成多核细胞； 4、1965年，证实了灭活的病毒在适当条件下可以诱
疫作用。 3、每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体。
不能无限增殖 单克隆抗体
由单个B淋巴细胞经无性繁殖（克隆），形成 基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化 学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。
一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 细
胞
小鼠骨髓瘤细胞－－能够无限增殖 融
合
杂交瘤细胞 技 （动物细胞培养技术大量培养）术
此外，体细胞核移植后的重组细胞直接发育成新个体 属于无性繁殖，产生的后代无更大变异性，而环境是
多变的，易造成该个体适应能力降低，易被淘汰。
P50 思考与探究
2.动物细胞培养要经过脱分化的过程吗？为什么？
动物细胞培养不需经过脱分化过程。因高度分化 的动物细胞发育潜能变窄，失去了发育成完整个 体的能力，所以，动物细胞也就没有类似植物组 织或细胞培养时的脱分化过程了。要想使培养的 动物细胞定向分化，通常采用定向诱导动物干细
绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量 的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。
此外，即便动物的遗传基础完全相同，但动物的一些行为、习 性的形成与所处环境有很大关系，核供体动物生活的环境与克 隆动物所生活的环境不会完全相同，其形成的行为、习性也不 可能和核供体动物完全相同，从这一角度看，克隆动物不会是
新教材高中生物第2章第2节动物细胞工程：动物细胞融合技术与单克鹿体pptx课件新人教版选择性必修3
正在融合的淋巴细胞与骨髓瘤细胞
一、动物细胞工程 2.动物细胞融合
1965年，研究证实了灭活的病毒在适当条件下确实可以诱导动物细胞融合。
一、动物细胞工程
2.动物细胞融合
病毒的灭活 ：灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能 力，但是并不破坏病毒的抗原结构。
仙台病毒
紫外线 灭活
丧失感染活性（不感染细胞） 保留融合活性（诱导细胞融合）
讨论： 1.但如何才能让两个不同的细胞融合? 2.细胞融合技术在生产实践中有哪些应用?
一、动物细胞工程 2.动物细胞融合
动物细胞融合技术的发展历史
时间
19世纪30年代 1858年 1875年 1876年 1962年 1965年 1974年
1975年
20世纪80年代
成果
观察到肺结核、天花、水痘、麻疹等疾病患者的病理组织中有多核细胞 观察到正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中的多核细胞现象。 第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过程。 在无脊椎动物中发现了细胞合并现象。 日本学者冈田发现仙台病毒具有触发动物细胞融合的效应。 英国科学家证实了灭活的病毒可诱发动物细胞融合 华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学融合法。 Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分 泌稳定单克隆抗体的杂交瘤细胞。 发展出了电融合技术(1985年酵母原生质体电融合)
思考：诱导融合后的细胞一定具有双方的遗传信息吗？为什么？
不一定，诱导A、B两种细胞融合，融合后可能有A、B未 融合细胞及AA、AB、BB等多种细胞，因此细胞融合后需 要进行筛选。
一、动物细胞工程 2.动物细胞融合
(5)意义： ①突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能。 ②成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要 手段。 ③利用细胞融合技术而发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体 开辟了新途径。
人教版教学课件动物细胞融合与单克隆抗体(共20张PPT)
培养液中或小鼠腹腔中培养 从培养液或小鼠腹水中提
如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？
融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的 细胞就是杂交瘤细胞。 但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞， 通常用“有限稀释法”来选择。将杂交瘤细胞稀释， 用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个， 通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分 泌的抗体。那些上清液可与特定抗原结合的培养 孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单 个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一 般需进行3～4次，直至确信每个孔中增殖的细胞为 单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。
产生相应的B淋巴细 效应B淋巴细胞 胞
融合
培养骨髓瘤细胞 骨髓瘤细胞
多种杂交细胞
（只考虑两两融合） 骨髓瘤细胞---骨髓瘤细 培养液中细胞有几 胞 种类型？融合细胞 在具有筛选作用的培养基上培养 几种类型？ B淋巴细胞--- B淋巴细胞
专一抗体检验阳性 B淋巴细胞---骨髓瘤细胞 克隆上述杂交细胞
注射到小鼠体内
设计方案：
一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞能无限增殖
动物细胞融合技术 单克隆 动物细胞培养技术 杂交瘤细胞 抗体 既能产生特异性抗体， 又能大量繁殖的细胞
(1)、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能
迅速大量增殖，又能足够数量的单一抗体。
(2)、过程
1、单克隆抗体的制备过程
注射特定 抗原蛋白
5、动物细胞融合过程
不同DNA的两个细胞
灭活病毒诱导细胞融合
融合后的细胞 进行有丝分裂
6、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 （种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 7、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物 新品种培育等的重要手段
2022-2023学年 苏教版 选择性 必修三 动物细胞融合技术和干细胞技术(77张)课件
或椭圆球
圆球形
小
大
胚胎干细胞和成体干细胞
全能 干细胞、多能干细胞和单能干细胞
毒理特性
定向分化 排斥 药效
(1)细胞融合体现了细胞质膜的流动性。( √ ) (2)通过诱导只能使同物种细胞发生融合，而不能使不同物种的细胞之间发生融 合。( × ) (3)二倍体动物细胞融合后的杂种细胞仍然是二倍体细胞。( × ) (4)浆细胞与骨髓瘤细胞融合后需要进行筛选。( √ ) (5)不同类型的干细胞，它们的分化潜能完全相同。( × ) (6)干细胞技术可应用于疾病治疗、新药研制和开发。( √ )
第2课时 动物细胞融合技术和干细胞技术
课程内容标准
核心素养对接
(1)阐明动物细胞融合是指通过物理、 (1)科学思维——列表比较动物细胞融
化学或生物学等手段，使两个或多个 合与植物体细胞杂交。
动物细胞结合形成一个细胞的过程。 (2)科学思维——构建单克隆抗体制备
(2)概述单克隆抗体的制备过程。 的流程图。
(2)诱导融合的具体方法有__病__毒___诱__导__融__合__法__、__聚__乙__二__醇__诱__导__融__合__法__、__电__场__诱_ _导__融__合__法___ 。 在 各 种 方 法 的 促 融 合 作 用 下 ， 细 胞 质 膜 出 现 __粘__连__、__破__裂__和__融__合__，进而发生__细__胞__质__融__合__和__细__胞__核__融__合__，最终形成杂种 细胞。
1.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较
比较项目
植物体细胞杂交
动物细胞融合
细胞质膜的流动性、细胞的全
原理
细胞质膜的流动性
能性
酶解法去掉细胞壁后，诱导原
动物细胞工程教学PPT
传代培养
将原代细胞进行传代培养， 使其在体外持续增殖的过 程。
细胞冻存与复苏
通过冷冻保存细胞，以便 在需要时进行复苏和培养。
动物细胞培养的常见问题与解决方案
01 02
污染问题
动物细胞培养过程中常见的污染源包括细菌、霉菌和支原体等。解决方 案包括定期检查培养环境、严格控制培养基和器具的灭菌过程以及及时 处理污染细胞。
动物细胞工程实验技术
动物细胞融合技术
动物细胞融合技术是指将两个或多个 动物细胞融合成一个细胞的过程，是 动物细胞工程中的重要技术之一。
动物细胞融合技术需要使用特定的融 合剂或电刺激等方法，使细胞膜融合， 形成异核或多核细胞。
该技术可用于制备单克隆抗体、诱导 多功能干细胞、研究细胞分化机制等 方面。
动物染色体工程需要严格遵守 伦理和法律规定，确保实验动 物的福利和安全。
动物基因编辑技术
动物基因编辑技术是指通过特定的基 因编辑工具对动物基因进行精确的修 饰和改造的技术。
动物基因编辑技术可以采用CRISPRCas9等基因编辑系统，对目标基因进 行敲除、敲入或定点突变等操作。
该技术可用于研究基因功能、治疗遗 传性疾病、制备转基因动物等方面。
经济和社会发展
动物细胞工程的发展将带动相关产业的发展，创 造就业机会，促进经济发展和社会进步。
THANKS
感谢观看
动物细胞工程教学
• 动物细胞工程概述 • 动物细胞培养技术 • 动物细胞工程实验技术 • 动物细胞工程的应用案例 • 动物细胞工程的未来展望
01
动物细胞工程概述
定义与特点
定义
动物细胞工程是以动物细胞为研究对象，通过细胞培养、细胞融合、基因转移 等技术手段，实现动物细胞在数量和质量上的改变，以应用于医学、农业、生 物工程等领域的技术。
2.2.2动物细胞融合技术与单克隆抗体课件-高二下学期生物人教版选择性必修3
多孔细胞培养板 阳性孔
一段时间后，检测各孔上清液中细 胞分泌的抗体
上清液可与特定抗原结合的培养孔 为阳性孔
抗体检测板
分泌抗体能跟特定抗原结合的细胞 即为所需杂交瘤细胞
在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的目的和方法是不相同的
（三）单克隆抗体的制备过程（非常重要）
02
将抗体检测为阳
新课程p64杂交瘤细胞在小鼠腹腔 性的杂交瘤细胞
3、灭活病毒诱导细胞融合过程：
动物细胞融合实质及完成的标志：细胞核的融合 融合后形成单核细胞
书本P49右上角问题： 19世纪30年代，科学家曾在患肺结核、天花和麻 疹等疾病的病人的病理组织中观察到多核细胞。 如何解释这一现象？
病人体内的病毒等诱导多个体细胞融合形成了多核细胞。
一、一动.动物物细细胞胞融融合合技技术术
多种已免疫 B淋巴细胞
小鼠的脾脏中获取
方法：电融合法 、PEG融合法、 灭活病毒诱导法
等诱导融合
骨髓瘤细胞
（三）单克隆抗体的制备过程（非常重要）
02
诱导融合后的细胞
B
BB
B1-瘤 B2-瘤 B3-瘤
瘤瘤 瘤
第一次筛选 置于选择培养基上培养
1
2
3
杂交瘤细胞(多种)
第一次筛选：用特定的选择培养基进行筛选，在该培养基上，未融合的亲本 细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。
有没有技术能让不同种动物的体细胞杂交？
实例：1970年，人—鼠细胞荧光标记融合实验
红色荧光 染料标记 的膜蛋白
人细胞
绿色荧光 染料标记 的膜蛋白
鼠细胞
人鼠杂交细胞
细胞 融合
37° 培养40min
实验十一鸡血细胞融合PPT课件
细胞形态比较
比较不同处理组之间的细胞形态差异，分析诱导因素对 细胞形态的影响。
诱导因素对细胞融合的影响
诱导因素分析
分析不同诱导因素对细胞融合的作用，如化 学物质、物理因素等。
诱导因素比较
比较不同诱导因素对细胞融合的影响程度， 确定最佳诱导条件。
05 实验总结与展望
实验总结
实验原理
鸡血细胞融合实验涉及细胞生物学、 遗传学和分子生物学等多个领域，通 过实验，我们深入了解了细胞融合的 过程和机制。
疾病治疗
通过细胞融合技术可以制备具有 特定功能的细胞系，用于治疗某 些遗传性疾病、肿瘤和免疫系统
疾病等。
药物研发
利用细胞融合技术可以制备具有特 定功能的细胞系，用于药物筛选和 药效研究，有助于发现新的药物和 治疗方案。
生物材料
通过细胞融合技术可以制备具有特 定功能的生物材料，如人工皮肤、 骨骼和器官等，用于医学和生物工 程领域。
细胞融合的诱导和检测
诱导细胞融合
将分离出的细胞用细胞融合诱导剂处 理，诱导细胞融合。
检测细胞融合
使用荧光染料或免疫学方法检测细胞 融合的情况，观察融合细胞的形态和 数量。
细胞融合的鉴定和观察
鉴定细胞融合
通过检测细胞膜的连续性和荧光染料的 分布情况，鉴定细胞是否融合成功。
VS
观察融合细胞
在显微镜下观察融合细胞的形态、生长情 况及功能表现，记录相关数据。
实验十一鸡血细胞融 合ppt课件
目录
CONTENTS
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果分析 •胞融合的过程
鸡血细胞融合是指将两个或多个鸡血细胞通过特定手段融合成一个细胞的过程。 这个过程涉及到细胞膜的改变和细胞内物质的交换，是研究细胞结构和功能的重 要手段。
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2.动物细胞融合时需要进行去壁处理吗？为什么？
无需，因为动物细胞无细胞壁 可用胰蛋白酶将细胞分散
3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？
离心、振动、电激等物理方法；聚乙二醇等化学方法
4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？
能 还可以利用灭活的病毒进行诱导
5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形
有丝分裂
杂交细胞AB
注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在 一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞。
ppt课件.
11
5、意义：
突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 （种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。
6、应用：
成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新 品种培育等的重要手段。 特别是利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。
多种杂交细胞
筛选 选择性培养基
杂交瘤细胞
筛选 抗体阳性检测
克隆化培养(动物细胞培养技术)
足够数量的、能产生特定抗体的杂交瘤细胞群
体外培养 培养液 注射到小鼠腹腔 小鼠腹水
单克pp隆t课件抗. 体
20
制备单克隆抗体过程中两次筛选
• 第一次筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓 瘤细胞以及BB融合、瘤瘤融合的细胞通过 选择培养基淘汰，筛选出杂交瘤细胞。
ppt课件.
9
用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程
灭活的病毒颗粒黏附于 细胞表面
病毒颗粒 细胞核
细胞核
细胞膜被病毒颗粒穿通
细胞膜连接
细胞融合，形成单核杂交细胞
原理：细胞膜具有一定的p流pt课动件. 性
有丝分裂
10
3、原理： 细胞膜的流动性 4、过程：
动物细胞A 动物细胞B
诱导，融合（膜融合、质融合、核融合）
ppt课件.
8
2、诱导方法
物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞 膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚， 细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布， 细胞膜打开，细胞发生融合。
举例： 仙台病毒 紫外线
丧失感染性
保留融合活性 （诱导细胞融合）
成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体
吗？
不能，只能形成杂种细胞 ppt课件.
7
一、动物细胞融合技术
1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也称为细胞杂交，
是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的 单核细胞，称为杂交细胞。
结果：“2个或多个动物细胞”→“1个杂交单核细胞””
4
ppt课件.
动物细胞的全能性会 随着动物细胞分化程 度的提高而逐渐受到 抑制，分化潜能逐渐 变弱
5
动物 细胞 工程 常用 技术
动物细胞培养技术 动物细胞核移植技术 动物细胞融合技术 制备单克隆抗体技术
ppt课件.
6
思考题
1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？
酶解法，如纤维素酶或果胶酶
ppt课件.
14
2、下列关于动物细胞融合，叙述正确的是 D
A．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细 胞遗传信息的双核或多核细胞称为杂交细胞
B．原理是细胞的全能性 C．打破生殖障碍，使远缘杂交成为现实 D．常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、离心等
3、动物细胞融合的目的中最重要的是 B
A.克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新品种 D.生产杂种细胞
形成杂种植株
形成杂种细胞， 生产细胞产品
培育新品种
制备单克隆抗体、病 毒疫苗、干扰素等
意义 突破有性杂交方法的ppt课局件.限，使远缘杂交成为可1能3
1、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确
的是 D
A．诱导融合的方法完全相同
B．所用的技术手段完全相同
C．所采用的原理完全相同
D．都能形成杂种细胞
抗原
刺激
B淋巴细胞
增殖分化效应B 细胞
分泌 抗体
反复注射抗原
（浆细胞）产量低、纯度低
不能无限增殖
抗体特异性差
克隆单一的效应B细胞
ppt课件.
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米尔斯坦和科勒 1、设计方案：
一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体
小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖
杂交细胞
继承了双亲细胞的遗传物质：
既能无限增殖，又能产生特异性抗体
植物细胞B
融合的 杂种
原生质
人 工
体AB
再 生
诱 筛选 出
细胞 AB
脱 分 化
愈 伤 组 织
导
细
胞
壁
物理法：离心、振动ppt、课件电. 激等 化学法：聚乙二醇等试剂
杂 再种 分植 化株
3
如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小 奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？
动物细胞也能融合吗？
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• 第二次筛选是将产生特定抗体的杂交瘤细 胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛 选出来。因为从体内取免疫过的B淋巴细胞 时可以取出很多种，因此形成的杂交瘤细 胞也有很多种，所以需筛选出产生特定抗 体的杂交瘤细胞。
ppt课件.
12
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目 原理
植物体细胞杂交
动物细胞融合
细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性 细胞的全能性
细胞融合前 去除细胞壁后诱导 使细胞分散后
的处理 原生质体融合
诱导细胞融合
诱导方法 结果 用途
物理（离心、振动、 物理、化学方法 电刺激）化学（PEG） 灭活的病毒
选修3 现代生物科技专题 2.2 细胞工程
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
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1
通过长期的实验，科学家们 采用植物体细胞杂交技术获得了 “番茄—马铃薯”植株。
“番茄—马铃薯”（理想图）
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2
植物体细胞杂交技术
过程
植物细胞A 纤果维胶方素酶法酶等？、
去壁
原生质体A
原生质体B
去壁
2、制备过程：
ppt课件.
18
抗原注入小鼠体内
分离
经过免疫的B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
细胞融合
杂交瘤细胞
细胞培养
选择培养细胞
注入小鼠
培养基
体内培养
体外培养
从腹水提取
单克隆抗体
从培养液提取
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19
抗原（羊的红细胞）注射到小鼠体内
获取经过免疫的B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞
灭活的病毒、 PEG
融合
(动物细胞融合技术)
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15
二、制备单克隆抗体技术
1.什么是抗体？ 2.主要分布在哪里？ 3.由什么细胞产生
提问
？
抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原 发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。
ppt课件.
164. 传统抗体Fra bibliotek生产方法及缺陷？
每一个浆细胞只能分泌一种抗体
无需，因为动物细胞无细胞壁 可用胰蛋白酶将细胞分散
3.植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？
离心、振动、电激等物理方法；聚乙二醇等化学方法
4.动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？
能 还可以利用灭活的病毒进行诱导
5.植物体细胞杂交应先进行原生质体的融合再进行组织培养形
有丝分裂
杂交细胞AB
注意：动物细胞的融合也需要把多个两种细胞放在 一起，让它们随机融合后，再从中筛选杂交细胞。
ppt课件.
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5、意义：
突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交 （种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。
6、应用：
成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新 品种培育等的重要手段。 特别是利用杂交瘤技术制备单克隆抗体。
多种杂交细胞
筛选 选择性培养基
杂交瘤细胞
筛选 抗体阳性检测
克隆化培养(动物细胞培养技术)
足够数量的、能产生特定抗体的杂交瘤细胞群
体外培养 培养液 注射到小鼠腹腔 小鼠腹水
单克pp隆t课件抗. 体
20
制备单克隆抗体过程中两次筛选
• 第一次筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓 瘤细胞以及BB融合、瘤瘤融合的细胞通过 选择培养基淘汰，筛选出杂交瘤细胞。
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用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程
灭活的病毒颗粒黏附于 细胞表面
病毒颗粒 细胞核
细胞核
细胞膜被病毒颗粒穿通
细胞膜连接
细胞融合，形成单核杂交细胞
原理：细胞膜具有一定的p流pt课动件. 性
有丝分裂
10
3、原理： 细胞膜的流动性 4、过程：
动物细胞A 动物细胞B
诱导，融合（膜融合、质融合、核融合）
ppt课件.
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2、诱导方法
物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒
病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞 膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚， 细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布， 细胞膜打开，细胞发生融合。
举例： 仙台病毒 紫外线
丧失感染性
保留融合活性 （诱导细胞融合）
成完整的杂种个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体
吗？
不能，只能形成杂种细胞 ppt课件.
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一、动物细胞融合技术
1.概念： 动物细胞融合（cell fusion）也称为细胞杂交，
是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。
融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的 单核细胞，称为杂交细胞。
结果：“2个或多个动物细胞”→“1个杂交单核细胞””
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ppt课件.
动物细胞的全能性会 随着动物细胞分化程 度的提高而逐渐受到 抑制，分化潜能逐渐 变弱
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动物 细胞 工程 常用 技术
动物细胞培养技术 动物细胞核移植技术 动物细胞融合技术 制备单克隆抗体技术
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思考题
1.植物体细胞杂交时首先应用什么方法去掉细胞壁？
酶解法，如纤维素酶或果胶酶
ppt课件.
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2、下列关于动物细胞融合，叙述正确的是 D
A．动物细胞融合后形成的具有原来两个或多个动物细 胞遗传信息的双核或多核细胞称为杂交细胞
B．原理是细胞的全能性 C．打破生殖障碍，使远缘杂交成为现实 D．常用的诱导因素有聚乙二醇、灭活的病毒、离心等
3、动物细胞融合的目的中最重要的是 B
A.克服远缘杂交不亲和 B.制备单克隆抗体 C.培育新品种 D.生产杂种细胞
形成杂种植株
形成杂种细胞， 生产细胞产品
培育新品种
制备单克隆抗体、病 毒疫苗、干扰素等
意义 突破有性杂交方法的ppt课局件.限，使远缘杂交成为可1能3
1、在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确
的是 D
A．诱导融合的方法完全相同
B．所用的技术手段完全相同
C．所采用的原理完全相同
D．都能形成杂种细胞
抗原
刺激
B淋巴细胞
增殖分化效应B 细胞
分泌 抗体
反复注射抗原
（浆细胞）产量低、纯度低
不能无限增殖
抗体特异性差
克隆单一的效应B细胞
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米尔斯坦和科勒 1、设计方案：
一个B淋巴细胞——只分泌一种特异性抗体
小鼠骨髓瘤细胞——能无限增殖
杂交细胞
继承了双亲细胞的遗传物质：
既能无限增殖，又能产生特异性抗体
植物细胞B
融合的 杂种
原生质
人 工
体AB
再 生
诱 筛选 出
细胞 AB
脱 分 化
愈 伤 组 织
导
细
胞
壁
物理法：离心、振动ppt、课件电. 激等 化学法：聚乙二醇等试剂
杂 再种 分植 化株
3
如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小 奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？
动物细胞也能融合吗？
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• 第二次筛选是将产生特定抗体的杂交瘤细 胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛 选出来。因为从体内取免疫过的B淋巴细胞 时可以取出很多种，因此形成的杂交瘤细 胞也有很多种，所以需筛选出产生特定抗 体的杂交瘤细胞。
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植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较
比较项目 原理
植物体细胞杂交
动物细胞融合
细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性 细胞的全能性
细胞融合前 去除细胞壁后诱导 使细胞分散后
的处理 原生质体融合
诱导细胞融合
诱导方法 结果 用途
物理（离心、振动、 物理、化学方法 电刺激）化学（PEG） 灭活的病毒
选修3 现代生物科技专题 2.2 细胞工程
2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体
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1
通过长期的实验，科学家们 采用植物体细胞杂交技术获得了 “番茄—马铃薯”植株。
“番茄—马铃薯”（理想图）
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2
植物体细胞杂交技术
过程
植物细胞A 纤果维胶方素酶法酶等？、
去壁
原生质体A
原生质体B
去壁
2、制备过程：
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抗原注入小鼠体内
分离
经过免疫的B淋巴细胞
骨髓瘤细胞
细胞融合
杂交瘤细胞
细胞培养
选择培养细胞
注入小鼠
培养基
体内培养
体外培养
从腹水提取
单克隆抗体
从培养液提取
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抗原（羊的红细胞）注射到小鼠体内
获取经过免疫的B淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞
灭活的病毒、 PEG
融合
(动物细胞融合技术)
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二、制备单克隆抗体技术
1.什么是抗体？ 2.主要分布在哪里？ 3.由什么细胞产生
提问
？
抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原 发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
主要分布在血清中，也分布于组织液及外分泌液中。
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164. 传统抗体Fra bibliotek生产方法及缺陷？
每一个浆细胞只能分泌一种抗体