最新第四篇-动物细胞微囊化培养课件PPT

发热的病因病机
❖ 外感导致发热，其途径多是经皮毛、口鼻而入。 一般来说，六淫之邪，由皮毛肌腠而入，先滞络 脉，由表入里，传至脏腑，发为热病。疫毒之邪， 多有口鼻而入，充斥人体，循卫气营血而分属上、 中、下三焦之脏腑。
发热的病因病机
❖ 外感发热的病机是外邪入侵，人体正气与之相搏， 正邪交争于内，或热、毒充斥于人体，即所谓“阳 盛则热”。邪热疫毒其性猛烈，起病急，传遍快， 故出现热势高等实热之证。发热病变，以阳热为主， 其病机最易化火。火热充斥体内，进而伤津耗液。 热度之邪过盛，邪毒内传，耗伤营血，易于发生神 昏、出血的变证，临床易于发生神昏、出血的变证， 即所谓逆传，来势凶险，预后较差。
养。生长介质为1.4%海藻酸钠溶
液, 半透膜由多聚赖氨酸形成。
生
培养系统可采用搅拌式或气升式
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代 谢
物 大
反应器系统，微囊直径控制在
产 物
分 子
200-400μm为宜。
五、动物细胞微囊化的制备
• 主要是应用海藻酸—聚氨基酸的方法
简单过程：动物细胞与海藻酸溶液混合搅拌，
经过微囊发生器将微球滴入氯化钙(cacl2)溶液 中，形成凝胶，然后再用聚氨基酸处理，使微 球表面成膜，最后用柠檬酸处理去除微球内的 钙离子，以便球内的海藻酸成液态，动物细胞 得以悬浮在其中。动物细胞的微囊化中海藻酸 和聚氨基酸是关键材料。
（微囊发生器）
海藻酸/细胞悬浮液
微珠
聚氨基酸
针头
CaCl2液
柠檬酸
磁力搅拌器
聚赖氨酸/海藻酸微囊化步骤：
1.悬浮细胞胶状液；2.成滴器；3.胶化小珠；4.包被溶液；5. 显微镜下微囊；6.多孔微囊膜；7.完成操作后的微囊。
制备注意事项：
●温和、快速、不损伤细胞，尽量在液 体和生理条件下操作； ●所用试剂和膜材料对细胞无毒害； ●膜的孔径可控制，必须使营养物和代 谢物自由通过； ●膜应有足够机械强度抵抗培养中搅拌。
动物细胞微囊化培养的成功为干扰素、乙肝 表面抗原(HBsAg)、单克隆抗体(MAb)等)的产生 提供了广泛应用前景。
表4－1 微胶囊制备材料
来源 类型
材料
脂质 卵磷脂、神经鞘髓磷脂等
天然 多糖 海藻酸盐、壳聚糖、琼脂、淀粉等
半合成 合成
蛋白质 明胶、白蛋白、纤维蛋白
纤维素类 羧甲基纤维素钠、已基纤维素、醋 衍生物 酸纤维素及其酯等
可降解型
乳酸/乙醇酸共聚物、聚正酯、聚内酯、聚 酐、聚烷基氰基丙烯酸酯、聚氨基酸
非降解型 聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酰胺、聚酰胺、
聚苯乙烯、乙烯醋酸乙酯共聚物、聚氯乙 烯等
制备方法
化学法
界面聚合法、乳化法、辐射化学法
物理化学法 相分离法、溶剂蒸发法、界面沉积法、喷雾干燥法
物理法
静电沉积法、气相沉积法、流化床喷雾包衣法
第四篇-动物细胞微囊化培 养
营养物质 细胞
微胶囊膜
代谢产物
生物大分子
图4－1 微胶囊示意图
二、研究发展历程
1、首次报道生物活性物质的微囊化研究（1957）： 将酶、蛋白质和激素等生物活性物质包封
在选择性透过膜中，形成球状微胶囊, 称之为 “生物微胶囊”。通过微胶囊膜的选择透过作 用, 使囊外大于某一分子量的物质不能扩散进 入, 而生物环境中的营养成分和囊内生物活性 物质或细胞分泌的小分子产物可以自由出入微 胶囊, 从而达到免疫隔离目的。
发热的病因病机
❖ 外感六淫 风、寒、暑、湿、燥、火，异常的六气，均可导 致发热，尤以火热、外湿、暑邪为主要病邪，又 风、寒燥入里皆可化火。六淫可以单独致病，也 可以两种以上的邪气兼夹致病，如风寒、风热、 湿热、风湿热等。
发热的病因病机
❖ 感受疫毒 疫毒亦是外来的致病因素之一，属于一种传染性 较强的致病邪气、疫的特点具有一定的季节性和 传染性，疫疠之毒，其性猛烈，一旦感受疫毒， 则起病急骤，传变迅速，卫表症状短暂，较快出 现高热。
1、在临床医学中的应用研究
• 采用一定材料、方法制成的微胶囊本身并不具备 治疗疾病的作用, 但能保证囊内包埋的细胞存活 且正常代谢、应答式分泌有效物质, 如胰岛素、 多巴胺和甲状腺激素等, 从而治疗疾病 。
• 微胶囊膜的选择透过作用可以保证细胞分泌的有 效物质扩散进入生物体内发挥生理功能, 而将免 疫球蛋白等抗体阻隔在囊外, 避免了异种移植中 最棘手的免疫排斥问题。
2、在生化药物控制释放中的应用研究
微胶囊膜能最大程度地保持囊内生化物质（生长激
素、胰岛素、肝素、干扰素、促甲状腺素、人类免疫缺
损疫苗）活性, 不同程度地提高了药物的生物利 用度。通过调节制备条件可以控制微胶囊膜的厚度和
孔尺寸，从而实现囊内生化药物的控释或缓释 。
临床应用的主要技术问题：
如何更好地保持囊内蛋白质的生物活性； 作为控制释放载体的微胶囊材料的生物相容性； 开发条件温和且易于规模化生产的微胶囊制备技术。
作业：
• 试述动物细胞培养的常用方法。 • 最常用的微囊化培养的方法是什么?
其原理及操作过程? • 为什么要进行微载体培养?动物细胞
微载体培养的主要优点? • 优良的微载体应该具备什么特性?试
述主要的微载体种类?
发热的针灸治疗
广州中医药大学第一附属医院针灸科
发热的概念
❖ 发热是内科疾病中常见症状之一，是机体 对病邪的一种全身性反应，是机体正气与 病邪相争，阴阳失调的必然现象。发热可 以由多种因素引起，根据祖国传统医学理 论，不外乎外感发热和内伤发热两大类。 这里主要是讲述外感引起的发热。
不同放大倍数的海藻酸钙微胶囊的SEM 照片 不同放大倍数的壳聚糖/海藻酸钠微胶囊的SEM 照片
三、性质：
曾是酶固定化技术中的一种（半透膜将酶包 裹在球状的微囊里，酶及大分子不能从微囊里透 出，而小分子物质可自由通过膜）。
动物细胞微囊化后，与游离细胞相比，降低 了培养时对细胞的剪切力，同时也能提供很高的 细胞密度，使得产物浓度增加，纯度提高。
六、微囊化培养的优、缺点:
①可防止细胞在培养过程中受到物理损伤; ②活性蛋白不能从囊中自由出入半透膜, 从而提
高细胞密度和产物含量, 并方便分离纯化处理。
①微囊制作复杂, 成功率不高; ②微囊内死亡的细胞会污染正常产物; ③收集产物必须破壁, 不能实现生产连续化。
七、微胶囊在生物医学领域应用研究
图2 制备方法使用率比较 1－－乳化法，2－－静电法，3－－聚合法，4－－沉积法，
5－－相分离法，6－－喷雾干燥法，7－－溶剂蒸发法
四、 微囊化培养技术要点:
在无菌条件下将拟培养的细 营
胞、生物活性物质及生长介质共
养 物
同包裹在薄的半透膜中形成微囊, 质
微 胶 囊 膜
再将微囊放入培养系统内进行培 细 胞