残留溶剂测定的要求和测定方法

企标控制溶剂 DMF
实际检出 乙醇
A B C D
无
乙醇
DMF 甲醇、氯仿、甲 苯
乙醇、甲苯 无
30040701 30040702 30040703
E
041101 041102 041103
甲醇、乙醇、环 乙醇、乙醚 己烷、DMF、 DMSO
盐酸头孢他美酯残留溶剂的控制
厂家 A B C D E F G 申报生产工艺中涉及的溶剂 甲苯、二氯甲烷 甲苯、二氯甲烷 乙醇、丙酮 乙酸乙酯 实际检出的残留溶剂 异丙醇 异丙醇、石油醚 异丙醇 异丙醇
色谱条件 柱 温 先 在 30℃ 维 持 7min, 再 以
8℃/min 的速度升至 120℃, 维持 15min ；以
氮 气 为 载 气 ， 流 速 为 2.0ml/min, 分 流 比
1:1 ；顶空瓶温度为 70℃, 顶空时间 30 －
60min ；进样口温度为 200℃；采用FID 检测 器，温度为250℃。
• 第二法（顶空进样法） 精密量取标准溶液和供试品溶液各3～ 5ml，分别置于容积为8ml的顶空取样瓶中, 瓶外径17mm，长60mm，带螺扣具孔盖。 瓶口带隔膜垫，与顶部空气接触的隔膜垫 上应有聚四氟乙烯膜使与橡胶垫隔开，各 瓶在60℃的水浴中加热40～80分钟，用在 同一水浴中的空试管中加热的注射器抽取 顶空气适量(通常为1ml)，进样，重复进样3 次，按第一法中所述方法测定、计算与处 理。
药品中残留溶剂分析 的技术要求和测定方法
王 玉 江苏省药品检验所
技术要求
• ICH(人用药品注册技术要求国际协调会)已经通过
了控制药品中残留溶剂的指导原则，将药品生产
中常用的69种有机溶剂按照对人体和环境的危害
程度分为四类，并规定了每种溶剂的限值。
• 《欧洲药典》第5版、《日本药局方》第14版、
《美国药典》第28版和《中国药典》2005版均已
峰面 3.01
RRT 1.926
知识库数据 2.028 2.03
可能的残留溶剂 三氯乙烯 二氧六环
12
13 14 15 16 17
9.789
10.532 10.992 11.824 13.398 14.311
23.36
10.01 5.74 63.53 3.02 3.67
2.159
2.322 2.424 2.607 2.954 3.156
标准溶液和供试品液的制备 CHP05版之三
•
精密称取各药品项下规定的有机溶剂和 内标物质适量，分别加入无有机物的水溶 解并配制成浓度为10.0μg/ml的标准及内标 贮备液。精密量取上述标准及内标贮备液 各0.1～1ml，加无有机物的水稀释至 10.0ml，混匀，即得。用外标法测定时只 量取标准贮备液稀释。 精密称取供试品0.1～1g,加无有机物的 水或合适的无有机物的水溶液使溶解，并 稀释至10.0ml，混匀，即得。
初筛结果：７个企业的盐酸头孢他美酯中均
可能含有异丙醇。
（2）证明：以初筛结果作为检测对象（本例
为异丙醇），参考知识库选择等温色谱系 统和色谱条件（本例选择SPB－1色谱柱， 在40℃条件下测定）；将供试品中测得的 色谱峰的保留时间与相应对照品（本例为 异丙醇）的保留时间比较；并通过标准加 入法进一步证明初筛结果的正确性。
初步判定：将两个色谱柱系统下得到的RRT
与知识库中诸有机溶剂的RRT参考值进行
比较，选择出数值相近（相对误差小于5
％）者；而在两个色谱柱系统中均出现的
有机溶剂即可初步判定为药品中可能存在
的残留溶剂。
SPB-1柱程序升温实验结果
峰号 1 2 3 4 5 tR(min) 1.776 2.053 2.179 2.452 2.701 峰面积 4.87 28.31 177.88 12.32 159.19 RRT 0.392 0.453 0.480 0.541 0.596 数据库中数据 无相应数据 0.453 无相应数据 0.539 0.595 乙醇 丙酮 甲醇 可能的残留溶剂
GC条件与系统适用性试验 CHP05版之二
• 以直径为0.25～0.18mm的二乙烯苯－乙基乙 烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱温为80～ 170℃；并符合下列要求： (1) 用待测物的色谱峰计算的理论板数应大于 1000； (2) 以内标法测定时，内标物与待测物的两个 色谱峰的分离度应大于1.5； (3) 以内标法测定时，每个标准溶液进样5次， 所得待测物与内标物峰面积之比的 相对标准偏差 不大于5％；若以外标法测定,所得待测物峰面积 的相对标准偏差不大于10％。
二氯甲烷、乙醇、丙酮、乙酸乙酯
二氯甲烷 异丙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲 醇
异丙醇、石油醚
异丙醇、石油醚 异丙醇
残留溶剂测定一般程序
确定药品涉及的残留溶剂 种类 建立残留溶剂检测方法
残留溶剂检测方法的验证
一、确定药品中涉及的残留溶剂种 类
1. 利用“药品残留溶剂测定知识库”确定样 品中实际存在的残留溶剂
顶空毛细管气相色谱法
• 建立了测定药品中残留溶剂的知识库；
• 实现了计算机辅助计算，优化残留溶剂测
定的色谱条件；
• 对药品中残留溶剂测定中的影响因素进行
了考察。
•
(1) 内标物的选择 二氧六环与吡啶可以互为内标，苯与甲苯可以互为内 标，氯仿的内标物为1，2-二氯乙烷。 (2) 温度选择 测定二氧六环、吡啶、苯、甲苯时柱温为170℃,测定 氯仿、二氯甲烷时柱温为140℃,测定环氧乙烷时柱温为 80℃。进样口及检测器温度应高出柱温30℃。 (3) 测定方法 从方法的精密度考虑，二氧六环、吡啶宜用第一法； 苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷可以用第一法或第二法;环氧 乙烷直接用第二法;其中在用第二法测定苯、甲苯时，在 水浴中加热时间为30分钟，测定环氧乙烷时在水浴中加热 时间为5分钟。 如果用第一法时，样品本身会给色谱系统带来干扰或 严重污染，则宜采用第二法。 (4) 供试品取用量决定于其溶解度，如供试品在水中 难溶，可以改用酸、碱溶液溶解。标准贮备液的取用量取 决于供试品取用量及残留有机溶剂的限度。
极性色谱柱（HP-FFAP)系统
色 谱 条 件 ： 柱 温 先 在 60℃ 维 持 6min ； 再 以 8℃/min 的速度升温速率升至 100℃，维持 20 min；以氮气为载气，流速为2.0ml/min, 分流比 1:1 ；顶空瓶温度为 70℃, 顶空时间 30－60min ；进样口温度为200℃；采用FID 检测器，温度为250℃。
中国药典2010版的要求
• 修订残留有机溶剂的检测方法 • 参照ICH已协调的规范进一步修订和完善， 并简化方法 • 进一步推进在品种中的应用。
原有方法简介
• • • • GC法-填充柱法 样品制备方法 溶液法 顶空法
有机溶剂残留量测定法 CHP05版之一
•
检查药物在生产过程中引入的有 害有机溶剂残留量，包括苯、氯仿、 1,4-二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲 苯及环氧乙烷。如有其他需要检查的 有害有机溶剂，则应在各品种项下另 作规定。
2.163
2.164 2.32 无相应数据 2.617 2.953 3.152
正庚烷
乙酸丙酯 吡啶
甲苯 乙酸丁酯 氯苯
18
丁酮
16.538
1.97
9.34
3.647
3.653
异丙基苯
HP-FFAP柱程序升温实验结果
峰号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 16 17 19 丁酮 tR(min) 1.243 1.296 1.353 1.401 1.472 1.535 1.606 1.692 1.846 1.926 2.077 2.142 2.25 3.304 6.208 8.155 12.071 1.97 峰面积 14.7 515.1 1.6 2.9 13.2 10 174.4 62.8 1 59 1.3 18.3 2 23.9 3.2 3.6 2.7 RRT 0.631 0.658 0.687 0.711 0.747 0.779 0.815 0.859 0.937 0.978 1.054 1.087 1.142 1.677 3.151 4.140 6.127 数据库中数据 0.63 0.657 无相应数据 0.711 0.747 无相应数据 0.816 无相应数据 0.935 0.976 1.052 1.088 1.146 无相应数据 无相应数据 无相应数据 无相应数据 可能的残留溶剂 正己烷 异辛烷or异丙醚 二甲氧基甲烷 甲基环己烷 丙酮 四氯化碳 甲醇 异丙醇 氯仿or乙醇 苯
药品质量标准残留溶剂检查方法
• 建立药品质量标准残留溶剂检查方法不同
于对样品中的残留溶剂进行检测。后者只
要检测出样品中实际存在的残留溶剂即可，
但前者应适用于对所用企业、不同时期的
同品种产品的测定。
统一残留溶剂检测方法的难点
• 残留溶剂在具体的样品中具有不确定性：
不同的生产企业可以采用不同的生产工艺 生产相同药品，导致相同药品所含有的残 留溶剂种类可能不同。
2. 在等温色谱系统中进一步判断产品中可能
使用过的其它溶剂及其它可能存在的干扰
3. 结合企业提供的工艺信息确定药品质量标
准中应控制的残留溶剂
1. 利用“药品残留溶剂测定知识库”确定样 品中实际存在的残留溶剂 （1）初筛：供试品溶液浓度为0.1g.ml-1；分 别使用非极性的SPB－1和极性的HP－ FFAP毛细管柱，按照知识库中各自的程序 升温条件，用顶空气相色谱法分别测定药 品中挥发性组分的保留时间，以丁酮为参 比溶剂，计算各挥发性组分色谱峰相对于 丁酮色谱峰的相对保留时间（RRT）。
接受了ICH关于残留溶剂的指导原则。
• Why do we need to determine Organic solvent residue? • ICH的要求和各国药典要求 • 安全性 • 临床数据 • 药理、毒理实验
2005年版规定
• 除各品种正文中另有规定外，限度如下： 有机溶剂 限度，％ • 0.01 • 0.005 • 二氧六环 0.01 • 二氯甲烷 0.01 • 吡啶 0.01 • 甲苯 0.01 • 环氧乙烷 0.001
目前技术的不足之处
• 不同的样品，样品处理方式不同，不同样 品基质效应的不同； • 不同样品含有的溶剂不同，测定对象不同； • 顶空与非顶空方法的差异；
加替沙星残留溶剂的控制
厂家 批号
050101 050102 050103 0512601 0512401 0512201 050303
申报工艺中涉及的溶剂 乙醇、甲醇、DMSO、甲 苯、乙酸乙酯、四氯 化碳、DMF 乙醇、甲苯、乙腈、四 氯化碳、DMF 乙醇、乙酸、DMSO、DMF 乙醇、甲醇、DMSO、甲 苯、乙酸乙酯、二氯 甲烷、DMF、乙酸、 氯仿 无
6
7 8
5.275
5.76 6.308
54.82
5.96 10.36
1.163
1.270 1.391
1.169
1.283 1.324 1.413
异丙醚
四氢呋喃 异丁醇 1,2-二氯乙烷
9
10
7.438
8.341
3.91
3.9
1.640
1.839
1.658
无相应数据
苯
峰号 11
tR(min) 8.733
供试品溶液的制备
取约 0.2g 供试品，制成每 1ml 约含 10mg
的溶液；对水溶性药品，采用水为溶剂； 当药品不溶于水，但可溶解于一定浓度的 酸或碱液中时，可采用酸或碱液作为溶剂； 对于非水溶性药物，可采用 N,N- 二甲基甲 酰胺（DMF）等为溶剂。
毛细管柱顶空进样色谱系统程序升温法 非极性色谱柱（SPB-1）系统
测定法 CHP05版之四
• 第一法（溶液直接进样法） 取标准溶液和供试品溶液，分别连续 进样3次，每次2μl，测得相应的峰面积,以 内标法测定时，计算待测物峰面积与内标 物峰面积之比，供试品溶液所得的峰面积 比的平均值不得大于由标准溶液所得的峰 面积比的平均值。以外标法测定时，供试 品溶液所得的待测物峰的平均面积不得大 于由标准溶液所得的待测物峰的平均面积。
（3）确证：通常通过标准加入法已经可以确
定初步判定的残留溶剂种类的正确与否， 但对一些微量残留的一类溶剂或产品生产 工艺中未提及的溶剂，为慎重起见，可采 用气相－质谱联用或气相－红外光谱联用 技术对所检测到的残留溶剂做进一步的确 证。
检测到的溶剂和异丙醇的红外光谱图比 较
1.检测到的溶剂 (solvent being examined) 2.异丙醇 (isopropanol)