生物化学实验图文新版
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器材：
• 鸡血清蛋白、PH8.6巴比妥-巴比妥钠缓冲液、染
莫氏反应：糖经无机酸脱水产生糠醛或糠醛衍生 物，后者在浓无机酸作用下，能与1-萘酚生成紫 色的缩合物，可用于鉴定糖的存在。
塞氏反应：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟 基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色，可用于 鉴定酮糖的存在。
杜氏反应：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后 者与间苯三酚作用生成桃红色物质，可用于鉴定 戊糖的存在。
To Inde1x4
实验原理
纸作支持物，特点是-OH多，亲水性强。 溶剂系统分成两相：固定相（水）特点是易与OH结合移动慢。移动相（水饱和的有机溶剂）特 点是移动速度快。 不同的氨基酸在不同的相中溶解度不同，不同的 氨基酸在不同的相中移动速度不同，不同的氨基 酸在相同的相中移动速度也不同。 基于以上三点原因，经过层析后，不同的氨基酸 移动的距离不同，从而得到分离。分离度用Rf值 表示如下：
3
实验室规则（三）
５、注意实验室卫生、整洁。废弃液体 应倒入水槽，放水冲走，实验用过的和棉 花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均 应放入指定容器，不得随意乱扔或丢进水 槽。实验结束后应将实验台整理好。并清 扫、整理实验室。关好水、电、门、窗， 经老师检查同意后，方可离开实验室。
4
实验目录
•糖的颜色反应 •氨基酸的纸层析 •血清蛋白的醋酸薄膜电泳 •脂肪酸酸价和碘价的测定 •DNA的提取与定性实验 •过氧化氢酶和过氧化物酶的作用
记录：
• 将滤纸适当缩小后，将结果画于报告上。
计算Rf值：
• 在计算Rf 值时，用下标表示氨基酸的名称，最好 用每种氨基酸的第一个字标记。例如甘氨酸得Rf 值用Rf甘= 表示。
20
结论： 提示通过主要比较Rf值的差异，讨论在该 条件下各种氨基酸分离度的大小。 思考题与习题 有哪些因素影响氨基酸的Rf值？
21
实验三 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
重点与难点：
电泳的基本原理，醋酸薄膜电泳的操作。
实验安排：2课时，6-8人一个电泳槽，每人独立
实验。
To Inde2x2
实验原理：
带电颗粒在电场的作用下，移动速度计算如下：
Vq
v=
d6πrη
据此公式，在同一电场强度和缓冲液条件下，带电的 各种蛋白质成分，移动的速度决定于各蛋白质的带电 量和自身分子的大小。
11
• 杜氏反应(按下表加入试剂)
注意：观察颜色变化及变化时间。
12
思考题
莫氏反应中莫氏试剂为什么要直接加入溶 液中，不能滴在试管壁上?
加浓硫酸时，试管倾斜，硫酸缓缓加入， 为什么不能振动溶液？
13
实验二 氨基酸的纸层析
重点与难点：氨基酸纸层析的基本原理的 理解是本实验的难点。重点是掌握氨基酸 纸层析的操作方法和运用。 实验安排：4课时，每人独立实验，4人一 个层析缸。
2
实验室规则（二）
３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免 取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好， 放回原处，切忌乱拿乱放，“张冠李戴”。 ４、注意安全，用吸量管吸取试剂时应使 用吸球，严禁用嘴吸取。对于有毒、腐蚀 的试剂更应注意，应避免其直接接触人体 及衣物。乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火 源，以免发生意外。
Rf=原点到层析点中心的距离/ 原点到溶剂前沿 的距离
15
•
试剂与器材：
氨基酸液（5种）、正丁醇、冰醋酸、水、茚三酮、 层析滤纸、层析缸、吹风机、喷瓶、铅笔、直尺、 分液漏斗
各 式 各 样 的 喷 瓶
层析缸
16
实验步骤 实验准备 点样 展层 显色 记录 计算Rf 值 结论
17
实验准备
层析液配制: 正丁醇:冰醋酸:水= 5:3:2 (体积 比)置分液漏斗中静置分层，取上清液约 60ml 倒于层析缸中静置到液面不动为止。
展层：
在层析缸上口处中央，平行的贴上透明胶纸，胶 纸要绷紧。在点了样品的滤纸上端中点处垂直贴 上透明胶，将滤纸上的透明胶贴在缸口的透明胶 上。
注意：滤纸点样端朝下，刚好接触缸底，垂直悬 于缸中。当溶剂前沿展到距滤纸上端约1.0cm时 取出滤纸，用吹风机吹干。
19
显色：
喷瓶将茚三酮溶液均匀的喷在滤纸上。在约105℃的 条件下烘烤至各层析斑点显色为止。
滤纸准备：取层析滤纸，裁成10×15cm的 长方形，在距纸一端1.5cm处用铅笔画一直 线。在线的两端距边沿1cm处各划一点。在 这两点之间均匀的画上四点。在这六点处 标上序号1、2、3、4、5、6。
18
பைடு நூலகம் 点样:
用毛细管分别吸取各种样液，分别在各原点点上 一种氨基酸。注意每一管要分次点完。样点直径 小于0.3cm。
5
实验参考书
生物化学实验，陶均辉等编，科学出版社，第三版； 基础生物化学实验，王秀奇等编，高等教育出版社，
第二版； 动物生物化学实验指导，周顺伍主编，中国农业出版
社，第二版。
6
实验一
实验安排 实验原理 实验试剂 实验步骤 思考题
糖的颜色反应
To Index7
实验安排： 2课时，单人单组
实验原理：
8
实验试剂：
Molish（莫氏）试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇 溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存； Sediwanoff（塞氏）试剂：0.5g 间苯二酚溶于1 升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前 配制； 杜氏试剂：称取2g间苯三酚，溶于250mL95% 乙醇中。临用时取此液3mL，缓缓加入15mL浓 盐酸及9mL蒸馏水，临用时配制。
生物化学实验
1
实验室规则(一)
１、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不 得喧哗吵闹、迟到早退，更不得缺席。 ２、爱护仪器，厉行节约。试剂、药品、蒸馏 水等应节约使用，不得浪费。如不慎损坏仪器， 应及时报告老师，说明原因，经老师同意后，方 可换领。并应按规定赔偿或处理。贵重、精密仪 器，应先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格 按操作规程操作，发现故障，应立即报告老师， 不得擅自处理。
9
实验步骤： • 莫氏反应（按下表加试剂）
注意: (1) 莫氏试剂直接加入溶液中，不能滴在试管壁上！
(2) 加浓硫酸时，试管倾斜，硫酸缓缓加入，不要振动溶液！
10
• 塞氏反应(按下表加试剂)
注意：加热时间要长，观察颜色变化及变化的顺序。颜色 变化顺序用1、2、3标记，深浅用+、++、+++等表示。
• 鸡血清蛋白、PH8.6巴比妥-巴比妥钠缓冲液、染
莫氏反应：糖经无机酸脱水产生糠醛或糠醛衍生 物，后者在浓无机酸作用下，能与1-萘酚生成紫 色的缩合物，可用于鉴定糖的存在。
塞氏反应：酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟 基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色，可用于 鉴定酮糖的存在。
杜氏反应：戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后 者与间苯三酚作用生成桃红色物质，可用于鉴定 戊糖的存在。
To Inde1x4
实验原理
纸作支持物，特点是-OH多，亲水性强。 溶剂系统分成两相：固定相（水）特点是易与OH结合移动慢。移动相（水饱和的有机溶剂）特 点是移动速度快。 不同的氨基酸在不同的相中溶解度不同，不同的 氨基酸在不同的相中移动速度不同，不同的氨基 酸在相同的相中移动速度也不同。 基于以上三点原因，经过层析后，不同的氨基酸 移动的距离不同，从而得到分离。分离度用Rf值 表示如下：
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实验室规则（三）
５、注意实验室卫生、整洁。废弃液体 应倒入水槽，放水冲走，实验用过的和棉 花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均 应放入指定容器，不得随意乱扔或丢进水 槽。实验结束后应将实验台整理好。并清 扫、整理实验室。关好水、电、门、窗， 经老师检查同意后，方可离开实验室。
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实验目录
•糖的颜色反应 •氨基酸的纸层析 •血清蛋白的醋酸薄膜电泳 •脂肪酸酸价和碘价的测定 •DNA的提取与定性实验 •过氧化氢酶和过氧化物酶的作用
记录：
• 将滤纸适当缩小后，将结果画于报告上。
计算Rf值：
• 在计算Rf 值时，用下标表示氨基酸的名称，最好 用每种氨基酸的第一个字标记。例如甘氨酸得Rf 值用Rf甘= 表示。
20
结论： 提示通过主要比较Rf值的差异，讨论在该 条件下各种氨基酸分离度的大小。 思考题与习题 有哪些因素影响氨基酸的Rf值？
21
实验三 血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳
重点与难点：
电泳的基本原理，醋酸薄膜电泳的操作。
实验安排：2课时，6-8人一个电泳槽，每人独立
实验。
To Inde2x2
实验原理：
带电颗粒在电场的作用下，移动速度计算如下：
Vq
v=
d6πrη
据此公式，在同一电场强度和缓冲液条件下，带电的 各种蛋白质成分，移动的速度决定于各蛋白质的带电 量和自身分子的大小。
11
• 杜氏反应(按下表加入试剂)
注意：观察颜色变化及变化时间。
12
思考题
莫氏反应中莫氏试剂为什么要直接加入溶 液中，不能滴在试管壁上?
加浓硫酸时，试管倾斜，硫酸缓缓加入， 为什么不能振动溶液？
13
实验二 氨基酸的纸层析
重点与难点：氨基酸纸层析的基本原理的 理解是本实验的难点。重点是掌握氨基酸 纸层析的操作方法和运用。 实验安排：4课时，每人独立实验，4人一 个层析缸。
2
实验室规则（二）
３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免 取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好， 放回原处，切忌乱拿乱放，“张冠李戴”。 ４、注意安全，用吸量管吸取试剂时应使 用吸球，严禁用嘴吸取。对于有毒、腐蚀 的试剂更应注意，应避免其直接接触人体 及衣物。乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火 源，以免发生意外。
Rf=原点到层析点中心的距离/ 原点到溶剂前沿 的距离
15
•
试剂与器材：
氨基酸液（5种）、正丁醇、冰醋酸、水、茚三酮、 层析滤纸、层析缸、吹风机、喷瓶、铅笔、直尺、 分液漏斗
各 式 各 样 的 喷 瓶
层析缸
16
实验步骤 实验准备 点样 展层 显色 记录 计算Rf 值 结论
17
实验准备
层析液配制: 正丁醇:冰醋酸:水= 5:3:2 (体积 比)置分液漏斗中静置分层，取上清液约 60ml 倒于层析缸中静置到液面不动为止。
展层：
在层析缸上口处中央，平行的贴上透明胶纸，胶 纸要绷紧。在点了样品的滤纸上端中点处垂直贴 上透明胶，将滤纸上的透明胶贴在缸口的透明胶 上。
注意：滤纸点样端朝下，刚好接触缸底，垂直悬 于缸中。当溶剂前沿展到距滤纸上端约1.0cm时 取出滤纸，用吹风机吹干。
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显色：
喷瓶将茚三酮溶液均匀的喷在滤纸上。在约105℃的 条件下烘烤至各层析斑点显色为止。
滤纸准备：取层析滤纸，裁成10×15cm的 长方形，在距纸一端1.5cm处用铅笔画一直 线。在线的两端距边沿1cm处各划一点。在 这两点之间均匀的画上四点。在这六点处 标上序号1、2、3、4、5、6。
18
பைடு நூலகம் 点样:
用毛细管分别吸取各种样液，分别在各原点点上 一种氨基酸。注意每一管要分次点完。样点直径 小于0.3cm。
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实验参考书
生物化学实验，陶均辉等编，科学出版社，第三版； 基础生物化学实验，王秀奇等编，高等教育出版社，
第二版； 动物生物化学实验指导，周顺伍主编，中国农业出版
社，第二版。
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实验一
实验安排 实验原理 实验试剂 实验步骤 思考题
糖的颜色反应
To Index7
实验安排： 2课时，单人单组
实验原理：
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实验试剂：
Molish（莫氏）试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇 溶解至100mL，临用前配制，棕色瓶保存； Sediwanoff（塞氏）试剂：0.5g 间苯二酚溶于1 升盐酸（H2O∶HCl=2∶1）(V/V)中，临用前 配制； 杜氏试剂：称取2g间苯三酚，溶于250mL95% 乙醇中。临用时取此液3mL，缓缓加入15mL浓 盐酸及9mL蒸馏水，临用时配制。
生物化学实验
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实验室规则(一)
１、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不 得喧哗吵闹、迟到早退，更不得缺席。 ２、爱护仪器，厉行节约。试剂、药品、蒸馏 水等应节约使用，不得浪费。如不慎损坏仪器， 应及时报告老师，说明原因，经老师同意后，方 可换领。并应按规定赔偿或处理。贵重、精密仪 器，应先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格 按操作规程操作，发现故障，应立即报告老师， 不得擅自处理。
9
实验步骤： • 莫氏反应（按下表加试剂）
注意: (1) 莫氏试剂直接加入溶液中，不能滴在试管壁上！
(2) 加浓硫酸时，试管倾斜，硫酸缓缓加入，不要振动溶液！
10
• 塞氏反应(按下表加试剂)
注意：加热时间要长，观察颜色变化及变化的顺序。颜色 变化顺序用1、2、3标记，深浅用+、++、+++等表示。