革兰氏染色的过程
革兰氏染色关键步骤
革兰氏染色关键步骤介绍革兰氏染色是一种用于区分细菌的常见染色技术。
它是根据细菌细胞壁的结构差异来进行染色的。
革兰氏染色技术由丹麦微生物学家Hans Christian Gram于1884年首次提出，并被广泛应用于临床实验室和微生物学研究中。
本文将详细介绍革兰氏染色关键步骤。
原理在革兰氏染色中，细菌样本首先被染色剂紫晶染色，然后用碘进行固定，接着用酒精洗去过量染料，最后用洋红染色剂进行染色。
根据细菌在上述染色过程中的反应，可以将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏阳性菌会保留紫晶染色剂，因为其细胞壁富含胞外多聚糖和脂肪酸。
革兰氏阴性菌会在酒精洗去紫晶染料后再次染色，因为其细胞壁富含脂蛋白和脂多糖。
步骤革兰氏染色的关键步骤如下：1. 制备细菌样本•革兰氏染色需要使用新鲜青春期的细菌培养物。
•选取少量细菌培养物，放入载玻片上。
•用蒸馏水轻轻润湿玻片。
2. 固定•将润湿的玻片加热或用甲醛进行固定。
•在润湿的玻片上滴加紫晶染色剂，静置1-2分钟。
3. 紫晶染色•将玻片冲洗至水清亮，以去除多余的紫晶染料。
•滴加碘溶液，并静置1分钟。
•用酒精进行冲洗，直到玻片上的染料不再显色。
4. 脱色•使用75%酒精进行脱色。
•加入酒精后，静置片刻，直到脱色完全。
5. 洋红染色•加入洋红染色剂。
•静置片刻，一般15-30秒即可。
•用水冲洗玻片，将多余的染料冲洗掉。
结论革兰氏染色是一种简单且常用的微生物学染色技术，可用于鉴定细菌的革兰氏阴性和革兰氏阳性特性。
通过对细菌细胞壁的染色特性进行观察，革兰氏染色可以帮助科学家在临床实验室和微生物学研究中快速鉴别不同的细菌。
掌握正确的革兰氏染色步骤和技巧对于正确解读染色结果非常重要。
参考文献1.Madigan, M. T., Martinko, J. M., Bender, K. S., Buckley, D. H., &Stahl, D. A. (2014). Brock生物学微生物学(第十四版). 人民卫生出版社.。
革兰氏染色的过程和原理
革兰氏染色的过程和原理
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，通过此方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
该染色方法基于不同细菌细胞壁组成的差异，通过特定的染色步骤使细菌在显微镜下呈现不同的颜色。
革兰氏染色的过程包括以下几个步骤：
1. 取一片细菌培养物，涂抹在玻片上，使其形成薄膜。
2. 将涂片在火焰中烘烤，以使细菌附着在玻片上。
3. 将烘烤后的涂片浸入革兰氏紫染色剂中，静置数分钟。
4. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有紫色溢出。
5. 在涂片上滴加碘酒，静置一段时间。
6. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。
7. 滴加脱色剂（乙醇或乙醚）在涂片上，迅速冲洗。
8. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。
9. 滴加革兰氏染色剂（碱性洋红）在涂片上，静置1-2分钟。
10. 用蒸馏水冲洗涂片，直至洗涤液不再有颜色溢出。
11. 用纸巾或吹风机轻轻吹干涂片。
12. 使用显微镜观察涂片下的细菌。
革兰氏染色的原理是基于细菌细胞壁的差异。
革兰氏阳性菌的细胞壁含有较厚的层状壁，并富含肽聚糖和穿孔蛋白，所以在革兰氏紫染色剂作用下会显现紫色。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，内层有脂多糖包裹，所以在革兰氏紫染色剂作用下不易显现出紫色。
革兰氏染色是一种常用的初步细菌分类方法，通过观察细菌在显微镜下的染色特性，可以初步判断细菌的类型，对于临床诊断和细菌研究都有重要意义。
革兰氏染色的流程与结果判定的方法
革兰氏染色的流程与结果判定的方法下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by the editor. I hope that after you download them, they can help you solve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts, other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，通过此染色方法可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
革兰氏染色的正确步骤
革兰氏染色的正确步骤
革兰氏染色（Gram Staining）是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性（Gram Positive）与革兰氏阴性（Gram Negative）。
这一染色方法由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系，后推广为鉴别细菌种类的重要特性之一，对由细菌感染引起的疾病的临床诊断及治疗有着广泛用途。
步骤
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）蒸馏水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染约1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。
7）番红染色液（稀）染1分钟后，蒸馏水冲洗。
干燥，镜检。
革兰氏染色的染色流程
革兰氏染色的染色流程Gram staining is a commonly used differential staining technique in microbiology to categorize bacteria into two groups based on their cell wall compositions. The process involves staining the bacterial cells with crystal violet, iodine, alcohol, and safranin. 革兰氏染色是微生物学中常用的差异染色技术，根据细菌细胞壁组成将细菌分为两组。
这个过程涉及使用结晶紫、碘酒、酒精和藏红染色细菌细胞。
The first step in the Gram staining process is to use crystal violet dye to color the bacterial cells. This dye binds to the peptidoglycan layer of the cell wall, imparting a purple color to all cells. 革兰氏染色过程的第一步是使用结晶紫染料染色细菌细胞。
这种染料结合到细胞壁的肽聚糖层，使所有细胞呈紫色。
Following the crystal violet staining, iodine is added to form a crystal violet-iodine complex within the cell. This complex serves to stabilize and trap the dye within the cell, ensuring that it does not wash out during subsequent steps of the Gram staining process. 在结晶紫染色后，加入碘形成细胞内的结晶紫-碘复合物。
革兰染色实验报告
革兰染色实验报告革兰染色实验报告一、实验目的：通过革兰染色法，观察并区分细菌的革兰氏阳性和革兰氏阴性的特征，进一步了解革兰氏染色的原理和过程。
二、实验原理：革兰染色是病原微生物鉴定和分类的重要方法之一，可用于判断微生物是革兰氏阳性菌还是革兰氏阴性菌。
原理是革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁组成不同，前者细胞壁中含有厚壁的murein层和一些多糖类物质，后者细胞壁中只含有薄壁的murein层，革兰染色的原理是根据这一差别来进行染色。
染色步骤如下：1.准备菌液：取一株具有不完全结构的细菌菌落，悬浮在蒸馏水中制备菌液。
2.烘干菌液：从菌液中取一滴，滴在清洁的玻片上，用火焰烘烤几秒钟，待菌液干燥。
3.革兰素溶液：制备革兰染色工作溶液，将1%的革兰素溶液稀释到10倍。
4.染色过程：将烘干的菌液滴在玻片上，滴上革兰素溶液，静置1分钟后用蒸馏水洗净，然后在玻片上滴上碱性紫试剂，再用蒸馏水冲洗，最后在玻片上滴上碘试剂，再用蒸馏水冲洗，使背景显色。
将玻片在浓度逐渐增大的乙酸酒精中漂洗，直到玻片漂洗后无色即可，然后用蒸馏水冲洗。
最后，在玻片上滴上红染试剂，染色10秒钟后用蒸馏水冲洗干净，晾干后，镜下观察。
三、实验步骤：1.准备菌液：取一株细菌菌液，用蒸馏水制备悬浮液。
2.烘干菌液：取一滴菌液滴在玻片上，用火焰烘干几秒钟，使菌液干燥。
3.加染料：滴上革兰素溶液，静置1分钟后用蒸馏水冲洗。
4.加试剂：滴上碱性紫试剂，再用蒸馏水冲洗；滴上碘试剂，再用蒸馏水冲洗。
5.漂洗：用浓度逐渐增大的乙酸酒精漂洗，直到玻片漂洗后无色。
6.染色：滴上红染试剂，染色10秒钟后用蒸馏水冲洗干净，晾干后，放在显微镜下观察。
四、实验结果和分析：在显微镜下观察，发现革兰染色后，革兰氏阳性菌呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏阳性菌的细胞壁厚，染色较蓝色。
而革兰氏阴性菌的细胞壁薄，染色较红色。
这是由于革兰染色方法中经过上述的染色步骤，革兰氏阳性菌能够保留革兰蓝的颜色，而革兰氏阴性菌会被红染剂覆盖掩盖住。
革兰氏染色
2）革兰氏染色法鉴定（普通生物显微镜）革兰氏染色法的过程如下：（初染：草酸结晶紫；脱色：95%乙醇；媒染：革氏碘液；复染：蕃红。
菌太浓可用磷酸盐缓冲液PBS稀释100倍后，进行观察）(a)涂片：用枪头直接吸一滴SRB纯培养菌液于载玻片上，在载玻片右侧标记SRB，轻轻晃动使菌液均匀铺开（液体菌液：直接吸取，固体菌种：先将纯水滴一滴到载玻片上，再挑一块菌落于上面融一下，轻抹）。
(b)固定（菌为死菌）：涂片自然干燥后，将有菌膜的一面朝上，火焰上微火通过3次，使蛋白质凝固，冷却后进行染色（着急的话可用打火机在载玻片下方稍微加热或用吹风机在玻片上面小风吹）。
(c)染色：初染：在载玻片中央，加一滴草酸铵结晶紫染液，轻晃，均匀铺开，覆盖涂面1min后倾去染液，用纯水冲洗，将载玻片一边抬起，另一边用滤纸吸取多余的水分和结晶紫。
媒染：滴一滴革式碘液与载玻片中央，覆盖媒染1分钟后，用纯水冲洗，用滤纸吸干。
脱色：为了衬以白色背景，滴几滴（流滴更好）95%乙醇溶液脱色，摇动载玻片使乙醇分布均匀即用滤纸吸干乙醇，重复2~3次，立即纯水洗，以终止脱色，用滤纸吸干多余纯水；复染：滴加一到两滴蕃红在载玻片中央，轻晃，均匀铺开，染色1min，纯水冲洗，滤纸吸除玻片水分(d)镜检：用常规镜鉴法观察细菌形态，并通过观察涂片颜色来判定细菌为阳性菌或阴性菌。
（紫色或蓝色是阳性菌，菌壁较厚；红色是阴性菌，菌壁较薄。
若蕃红没用纯水冲洗干净，阳性菌在显微镜下呈现绿色。
在显微镜下，紫色或蓝色的大圆点一般为染料，特大的为气泡或水滴，小圆点一般为脏东西，如滤纸或杂质等。
油镜观察需要在盖玻片上滴一滴松柏油，待显微镜用完后，将二甲苯滴到擦镜纸上，擦拭油镜镜头,只有100倍的物镜是油镜，其它倍数的不是油镜不能用松柏油和二甲苯。
观察软件为MIE中文版）。
革兰氏染色法的过程及原理
革兰氏染色法的过程及原理之迟辟智美创作一，过程1 ．涂片将培养的分歧菌分别作涂片（注意涂片切不成过于浓厚），干燥、固定.固按时通过火焰l 一2 次即可，不成过热，以载玻片不烫手为宜.2 ．染色( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗.( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗.( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白布景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不呈现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精.( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗.( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色.以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，经常呈假阳性.( 6 ) 同法在一载玻片上以年夜肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色比较.二，原理革兰氏染色法（Gram stain ）不单能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两年夜类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋暗示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G 一暗示.细菌对革兰氏染色的分歧反应，是由于它们细胞壁的成份和结构分歧而造成的.革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处置时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保管在细胞内而不容易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处置时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色.革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色水平，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不够时，阴性菌可被误染为阳性菌.另外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部份菌自行溶解了，都常呈阴性反应.青霉素作用机制干扰细菌细胞壁的合成.青霉素你的结果与细胞壁的成份粘肽结构中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用.溶菌酶与青霉素对细菌细胞壁的作用溶菌酶作用机制：是一种能水解致病菌种黏多糖的碱性酶，只要通过破坏细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡萄糖之间的B-1，4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，招致细胞壁破裂内容物流出而使细菌溶解，溶菌酶还可以和带负电荷的病毒卵白直接结合，与DNA，RNA，脱辅基卵白形成复盐，使病毒失活，因此该酶具有抗菌消炎，抗病毒等作用判断细菌有无鞭毛的方法电镜观察，鞭毛染色，半固体穿刺培养，菌落形态观察描述细菌与古细菌在细胞膜上的主要化学区别在革兰氏阴性菌的表层，有由肽葡聚糖形成的细胞壁，在壁的外面，又有由卵白质、磷脂质、脂多糖形成的膜层，与里面的细胞质膜相对应，特称此层为细菌外膜.外膜比细胞质膜的磷脂质含量低，但脂多糖的含量则比力高.外膜的卵白质与细胞质膜分歧，主要部份为数种卵白质所构成.其主要卵白质的部份与特异的内面的肽葡聚糖以共价键结合.脂多糖存在于外膜的最外层.在外膜中仅知有磷脂酶，在细胞与外界的联系中，已看到有许多功能的卵白质，即有各种噬菌体、维生素B12、年夜肠杆菌素等的受体存在，而其一部份卵白质则与DNA的复制、细胞分裂有关，另外，外膜对水溶性低分子物质容易透过，但对立菌物质则是透过的屏障，它对革兰氏阴性菌间的透过性带来很年夜的不同.对古细菌来说，细胞壁不含肽聚糖，有的以卵白质为主，有的含杂多糖，有的类似于肽聚糖，但都不含胞壁酸、D型氨基酸和二氨基庚二酸.缺乏细胞壁的原核生物，除自然界天然存在的缺壁细胞，比如支原体外，实验室菌种的突变、人为抑制新细胞壁合成、和对现成细胞壁进行酶解都可以获得缺壁细胞.缺壁细胞主要有四类：Ｌ型细菌，原生质体，球状体，以及支原体.Ｌ型细菌；形成；实验室或宿主体内通过自发性突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺陷菌株特点；细胞膨年夜，对渗透敏感，在培养基上可形成油煎蛋状菌落，具有正常的繁殖能力实践意义；没有了细胞壁的机械固定，细胞及其柔韧，呈多样性，成为“滤过型细菌”.原生质体，球状体；形成；用溶菌酶除尽原有的细胞壁，再用青霉素抑制新生细胞壁的合成，最后获得一层仅有细胞膜包裹的圆球状渗透敏感细胞特点；无完整的细胞壁，细胞呈球状，对渗透压极其敏感，革兰氏染色阴性，细胞不能分裂，对相应噬菌体不敏感，无繁殖能力实践意义；比正常有细胞壁的细菌更容易导入外源遗传物质，是研究遗传规律和进行原生质体融合育种的良好资料支原体；形成；在长期进化中形成，适应自然生活条件特点；细胞膜中含有甾醇，故机械强度较年夜实践意义；青霉素等针对细胞壁杀伤的抗生物对其无效，可是抑制卵白质合成的抗生素（四环素，红霉素等）和破坏含甾醇细胞膜结构的抗生素（制霉菌素，两性霉素等）对其有效.。
革兰氏染色法的过程及原理
革兰氏染色法的过程及原理一，过程1 ．涂片将培养的不同菌分别作涂片（注意涂片切不可过于浓厚），干燥、固定。
固定时通过火焰l 一2 次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
2 ．染色( 1 ）初染加草酸铰结晶紫一滴，约一分钟，水洗。
( 2 ）媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约一分钟，水洗。
( 3 ）脱色将载玻片上面的水甩净，并衬以白背景，用95 ％酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止，约20 一30 秒钟，立即用水冲净酒精。
( 4 ）复染用番红液染1 一2 分钟，水洗。
( 5 ）镜检干燥后，置油镜观察．革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。
以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片，作革兰氏染色对比。
二，原理革兰氏染色法（Gram stain ）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G＋表示：染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G 一表示。
细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌：而脱色，不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。
此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。
青霉素作用机制干扰细菌细胞壁的合成。
青霉素你的结果与细胞壁的成分粘肽结构中德D-丙氨酰-D-丙氨酸近似，可与后者竞争转肽酶，阻碍你粘肽的形成，造成细胞壁的缺损，使细菌失去细胞壁的渗透屏障，对细菌起到杀灭作用。
革兰氏染色的操作流程及操作技术要点
革兰氏染色的操作流程及操作技术要点下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by theeditor.I hope that after you download them,they can help yousolve practical problems. The document can be customized andmodified after downloading,please adjust and use it according toactual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types ofpractical materials,such as educational essays, diaryappreciation,sentence excerpts,ancient poems,classic articles,topic composition,work summary,word parsing,copy excerpts,other materials and so on,want to know different data formats andwriting methods,please pay attention!革兰氏染色法的操作流程与技术要点革兰氏染色法，是细菌学中一种经典的鉴别染色方法，通过这种染色技术，我们可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。
革兰氏染色步骤
革兰氏染色步骤
革兰氏染色法的步骤包含涂片、干燥、固定、初染、水洗、媒染、水洗、脱色、复染、水洗、干燥观察共11步，应注意把握涂片的薄厚、加热温度，脱色时间及各染液质量。
1.涂片：在灭菌后的载玻片中央滴一滴待检样品，用烧红冷却后的接种环将液体铺匀。
2.干燥：载玻片置于酒精灯上加热至水分蒸发。
3.固定：载玻片在酒精灯火焰上快速过2至3次，用2至3秒后待冷却。
4.初染：滴加1至2滴草酸氨结晶紫染液，染色时间约一分钟。
5.水洗：用小水流冲洗载玻片，冲洗至水呈无色。
6.媒染：滴适量革兰氏染液，染色时间约一分钟。
7.水洗：同步骤5。
8.脱色：在载玻片上滴加95％乙醇，至流下乙醇不呈紫色，大约用时半分钟后水洗。
9.复染：滴加1至2滴沙黄染液，染色时间约一分钟。
10.水洗：同步骤5。
11.干燥、观察：待标本片干燥后观察，紫色为革兰氏阳性菌，红色为革兰氏阴性菌。
革兰氏染色过程
革兰氏染色过程包括以下几步：
1.取一块无菌载玻片，用无菌的针头或火钳将待检测的细菌接种
于载玻片上。
2.将载玻片放在烘箱中烘干，使细菌附着于载玻片上。
3.用无菌的针头或火钳将烘干后的载玻片在火焰中消毒一下。
4.用滴管滴上革兰染色液，让其覆盖整个载玻片，静置1分钟。
5.用自来水将载玻片洗净，直到水变清。
6.滴上碘酒，静置1分钟。
7.用自来水将载玻片洗净，直到水变清。
8.滴上脱色剂，静置20-30秒钟。
9.用自来水将载玻片洗净，直到水变清。
10.用无菌纸巾轻轻擦干载玻片上的水分。
11.在显微镜下观察载玻片上的细菌。
革兰氏染色的原理是，细菌细胞壁的结构不同，革兰氏阳性菌的细胞壁含有大量的脂肪酸和乙醇胺，容易吸附革兰染色液，并在碘酒作用下形成紫色复合物，脱色剂不能将其去除；而革兰氏阴性菌的细胞壁薄，含有少量脂肪酸和乙醇胺，不易吸附革兰染色液，碘酒作用下形成的复合物可以被脱色剂去除。
因此，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。
革兰氏染色步骤及原理
革兰氏染色步骤及原理以革兰氏染色步骤及原理为主题，我们来了解一下这种染色方法在细菌学领域中的应用。
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它能够将细菌根据其细胞壁结构分为两类：革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
革兰氏染色方法的原理是利用染色剂对细胞壁的不同亲和性进行染色，从而使不同类型的细菌呈现不同的颜色。
革兰氏染色的步骤主要包括以下几个部分：预处理、染色、酒精洗涤和对比染色。
细菌样品需要进行预处理，通常是在载玻片上形成一层单胞膜的薄膜，然后用火吹烤杀死细菌，固定细菌在载玻片上。
接着，将载玻片放入碘酒中进行染色，碘酒会将染色剂紫晶染上细胞壁。
然后，用酒精进行洗涤，将不结合紫晶的染色剂洗掉，此时革兰阴性的细菌会失去染色，而革兰阳性的细菌则会保留紫晶染色。
最后，用对比染色剂如苏木素染色，革兰阳性的细菌呈紫色，而革兰阴性的细菌则呈红色。
革兰氏染色的原理是基于细菌细胞壁的组成不同，革兰阳性细菌细胞壁主要由多糖和蛋白质构成，同时还有一层厚厚的革兰阳性膜；而革兰阴性细菌则具有外膜和内膜，外膜由脂多糖构成，内膜则由磷脂构成。
由于细胞壁的差异，革兰阳性细菌在染色过程中会保留紫晶染色，而革兰阴性细菌则会在酒精洗涤过程中失去染色。
革兰氏染色在细菌学领域中有着广泛的应用，它不仅可以用于区分革兰阳性和革兰阴性细菌，还可以用于观察细菌形态和大小。
此外，在临床医学中，革兰氏染色也是一种重要的检测方法，它可以帮助医生快速确定病原体的类型，从而指导治疗。
革兰氏染色是一种简单而有效的细菌染色方法，它通过对细胞壁的不同染色反应，帮助我们区分不同类型的细菌。
同时，它还具有快速、直观、经济等优点，成为细菌学研究和临床诊断中不可或缺的工具。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
根据细菌细胞壁的组分和结构不同，通过革 兰氏染色法可将所有的细菌区分为两大类G+和 G-
细胞壁 厚度与强度 肽聚糖数量、含量
脂类含量 磷壁酸（垣酸） 脂多糖、磷脂、脂蛋白
革兰氏阳性菌 (G+)
革兰氏阴性菌 (G-)
色液
革兰氏染色的过程——制片
A. 加小滴水
B. 涂成薄层
涂片制备过程
C. 固定菌体
❖ 制片 ❖ 初染 ❖ 媒染 ❖ 脱色 ❖ 复染 ❖ 镜检
主要操作步骤
细水冲洗
结晶紫初染1-2min
碘液媒染1min
细水冲洗
细水冲洗 蕃红复染 2-3min
95%酒精脱色 20s-30s
• 染色示范
革兰氏染色的基本原理
实验报告
1．ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ图说明染色结果。
实验报告
2．思考题：
你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？ 其中最关键的环节是什么？
你的染色结果是否正确？如果不正确，请说明原因。 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，
用老龄细菌染色出现什么问题？
成G-，一般做革兰氏染色用18小时左右的细菌培养物，不要超 过24小时，以免影响染色性。
•革兰氏染色.mp4
注意事项
革兰氏染色注意载玻片要洁净，滴无菌水和取菌不宜过多， 涂片要均匀，不宜过厚；热固定温度不宜过高，否则会改变甚 至破坏细胞形态；水洗时不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻 片的一端流下，水流不宜过急，过大，以免涂片薄层脱落。 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关 键环节，脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性 菌被误染为阴性菌。
厚、致密、坚韧
薄、疏松
多层、含量高、占细胞 干重40—90%
少、占细胞干重1-4%
单层、含量低、占细胞 干重5—10%
多、占细胞干重11-22%
+
-
-
+
磷壁酸 肽聚糖 脂蛋白
外膜
•革兰氏染色原理.mp4
革兰氏染色成败关键：
酒精脱色，脱色不够将G-转变为G+，脱色过度将G+变成G-； 涂片要均匀、薄； 菌龄影响染色，菌龄老、陈旧的细菌培养物，往往G+转变
细菌的革兰氏染色
目的要求
1. 学习并掌握革兰氏染色法。 2. 了解革兰氏染色原理。 3. 巩固显微镜的使用方法及无菌操作技术。
实验材料
❖ 菌种 ➢ 参考菌：金黄色葡萄球菌(G+), 大肠杆菌 (G-) ❖ 仪器 显微镜 ❖ 材料 载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、染色缸等 ❖ 染料 草酸铵结晶紫染色液、卢戈氏碘液、95%乙醇、0.5%番红染