呼吸道病毒检测在儿科临床中的应用

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Pollock NR, Duong S, Cheng A, et al. Ruling out novel H1N1 influenza virus infection with direct fluorescent antigen testing. Clin Infect Dis. 2009 Sep 15;49(6):e66-8.
Q:取样是否会给婴幼儿带来伤害?
A:不会,鼻咽拭子取样刷取的是鼻咽部柱状上皮细胞,
无创,无交叉感染;另外采用的拭子为特制,绒毛十分 柔软,绝不会伤害孩子的鼻腔上皮。 Q:可否采用咽拭子? A:咽部主要是鳞状上皮细胞,咽拭子样本的阳性率约为 鼻咽拭子的一半*,为了更好的检测,建议使用鼻咽拭 子。
Evaluation of the Quidel QuickVue Test for Detection Influenza A and B Viruses in the Pediatric Emergency Medicine Setting by Use of Three Specimen Collection Methods,Journal of Clinical Microbiology,July 2006
社区获得性肺炎CAP病原学
病毒病原:通常引起急性呼吸道感染,感染率儿童随年龄增长而
下降,常见包括呼吸道合胞病毒(首位)、副流感病毒、流感病毒、 腺病毒、鼻病毒,其他还包括EB病毒、人偏肺病毒、巨细胞病毒等。
细菌病原:肺炎链球菌(首位)、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球
菌、军团菌属、结核分枝杆菌等
平均病死率 12% ,重症 CAP 病死率达 20%-50% ,美国第三大死因; WHO统计每年2,000,000 五岁以下的儿童死于肺炎,第二大死因,仅 次于心血管疾病;中国第五大死因,5岁以下婴幼儿死亡的首因,每年 的死亡率占总人口死亡率的7%[1-2]
病原学: 常见病原包括病毒、细菌、支原体、衣原体等,幼儿超过
不推荐使用
——血清学检 测(抗体)
抗原检测
培养
流感诊疗指南指出:病毒的抗原和核酸检测可以用于早期诊断[1] ;
抗体检测可以用于回顾性调查,但对病例的早期诊断意义不大[1]
单一血清标本的流感血清学试验数据不可信 [2]。 配对的急性和恢复期血清标本用于测定抗体滴度,适用于回顾
性诊断和科研目的[2] 。
细菌
嗜肺军团菌 腺病毒
病毒
流感病毒A型、B型
EB病毒 新型冠状病毒 人禽流感病毒
病原学检查的主要任务
1. 研究感染性疾病的病原体特征 2. 提供快速、准确的病原学诊断 3. 指导临床合理使用抗生素,提出合理用药建议 4. 对医院感染及疾病的大规模传染进行监控
如何诊断?
常见呼吸道病毒的实验室诊断
美国儿科学会(AAP)及CDC推荐的呼吸道病毒诊断方法 实时荧光定量PCR (RT-PCR) 病毒分离
测试。对64种病毒、18种细胞、19种细菌均没有
交叉反应。
检验的灵敏度也被评估过用以确定检测的最低限
。荧光单抗平均能检测出病毒的最低浓度约为
1.0 PFU。
临床验证1:与PCR相比
The DFA was calculated to have a sensitivity of 93% (95% confidence interval [CI], 8%), specificity of 97% (95% CI, 4%), negative predictive value 96% (95% CI, 5%), and positive predictive value of 95% (95% CI, 7%) relative to PCR.
呼吸道病毒抗原检测 在儿科临床中的应用
孝感市中心医院 李正
主要内容
儿童社区获得性肺炎CAP基础知识
儿童CAP病毒病原学常见诊断方法
七项呼吸道病毒抗原检测的回顾性分析 临床微生物标本的选择和采集 病例分析
社区获得性肺炎(CAP)概述
流行病学:美国感染性疾病中居首位,年发病400万,住院100万,
非典型病原: 肺炎支原体(常见于学龄期),肺炎衣原体(学龄
期和青少年),嗜肺军团菌(重症CAP)
不同年龄儿童CAP病原特征
常见病原 肺炎链球菌 细菌 大肠埃希菌 肺炎克雷伯杆菌 少见病原
非发酵革兰阴性杆菌
百日咳杆菌 流感嗜血杆菌(b型、不 定型) 卡他莫拉菌
金黄色葡萄球菌
>28天-3月龄 非典型微 生物
南平市一七项呼吸道病毒 抗原检测的回顾性分析
正确的取样对实验成功至关重要!!
临床微生物标本的选择和采集
参考文献:中华医学会儿科分会《儿童社区获得性肺炎管理指南(2013修订)》
临床微生物标本的选择和采集
中国某三甲医院数据:使用抗菌药物治疗的病人中
,病原学标本送检率为49.25%,送检率最高的是儿科 97.00%,最低是五官科6.67%;病原学送检时机不合 理占27.26%;采样操作合格率34.78%;临床医护人 员对微生物标本采集和运送存在不同程度的认知缺陷 ,对病原学检查结果满意度为68.18%。
沙眼衣原体
呼吸道合胞病毒

巨细胞病毒 流感病毒A型、B型 腺病毒 人类偏肺病毒
病毒
副流感病毒I型、II型、 III型
不同年龄儿童CAP病原特征
常见病原 肺炎链球菌 细菌 流感嗜血杆菌(b型、不定型) 卡他莫拉菌 金黄色葡萄球菌 >3 月 龄--5 岁 非典型 微生物 肺炎支原体 呼吸道合胞病毒 病毒 少见病原
• 2017-01-02(我院)血常规WBC5.33×10^9/L ,RBC4.72×10^12/L ,N 48.7%,L40.4%, HB119g/L,Plt232×10^9/L。 2017-01-04(我院)血常规WBC5.28×10^9/L ,RBC4.56×10^12/L ,N 41.3%,L51.5%, HB117g/L,Plt245×10^9/L,CRP7.1mg/L • 血气分析 乳酸:1.16(mmol/L),氧饱和度:91.0(%),二氧化碳分压: 32.00(mmHg),pH:7.35,氧分压:65.00(mmHg)。
运送要求
72小之内检测应在4°C运送 否则应在-70°C冷冻直至检测 咽拭子及鼻咽抽吸物需要病毒保存液 室温或置于湿冰上2小时内 拭子置于病毒保存液中 室温或湿冰上2小时内 除尿液外其他标本应置于病毒保存液冷 冻 或快速运送到实验室避免标本干燥 无菌并带螺旋盖容器,快速运送到实验 室 或者冷冻运送注意避免反复多次融冻 EDTA抗凝管取血 室温下2小时内 促凝管取血,室温2小时内 或者4°C保存运送,或者冷冻
病例分析
病例分析1
• 女,1岁10月
• 咳嗽1周,发热4天 • 查体:T40.6℃,HR124次/分,RR 32次/分 W:13.55Kg ,SpO293% • 神志清,反应可,两侧颊部皮肤可见散在红色皮疹,压之褪色。皮 肤弹性好,口唇红润。咽红,未见发绀或吸凹,双肺呼吸音粗,未 及干湿罗音, 颜面、口唇紫绀,右肺呼吸音略低;心音有力。
一步法染色,快速、灵敏,整个操作2小时内完成
阳性:呈现果绿色
阴性:无绿色,只呈现背景色
呼吸道病毒抗原检测原理
甲型流感病毒
乙型流感病毒
呼吸道合胞病毒
腺病毒
副流感病毒1型
副流感病毒2型
副流感病毒3型
灵敏度&特异性
检验的特异性: 用D3 Ultra DFA 呼吸道病毒筛
查和鉴定试剂对多种细胞和微生物进行交叉反应
50%CAP由病毒引起,儿童有45%的病毒与细菌的混合感染,而成人
中为15%[3-4]。
[1] Williams, B. G., E. Gouws, et al. Lancet Infectious Diseases. 2002 [2]中国医师协会急诊分会《2015年中国急诊社区获得性肺炎临床实践指南》 [3] Ruuskanen, O; Lahti, E, Jennings, et al. Lancet. 2011 [4]中华医学会儿科分会《儿童社区获得性肺炎管理指南(2013修订)》
肺炎克雷伯杆菌
大肠埃希菌 结核分歧杆菌
嗜肺军团菌
肺炎衣原体 鼻病毒
腺病毒
副流感病毒I 、II 、III型 流感病毒A型、B型
人类偏肺病毒
肠道病毒 人禽流感病毒、新型冠状病毒 EB病毒、麻疹病毒
不同年龄儿童CAP病原特征
常见病原 肺炎链球菌 少见病原 化脓性链球菌 金黄色葡萄球菌 结核分歧杆菌 流感嗜血杆菌(b型、不定型) >5 岁 --15岁 非典型微 生物 肺炎支原体 肺炎衣原体
流感
麻疹 流行性腮 腺炎 风疹
鼻咽拭子或冲洗液、痰、尿
轮状病毒 胃肠炎 EBV/CMV 各种病毒
大便
全血、外周血淋巴细胞、血浆、 CSF 血清
正确拭子采样手法:无创!安全!
合格标本:单孔样本中的柱状上皮细胞数达20个以上 采样部位:鼻咽部 耗 材:鼻咽拭子(专利——进口呢绒植绒拭子)
有关取样Q&A
[1] 中国卫生部颁布的《流行性感冒诊断与治疗指南(2011年版)》 [2] Harper SA, Bradley JS, Englund JA, et al. Clin Infect Dis. 2009 Apr 15;48(8):1003-32.
我国指南推荐的病毒抗原检测方法
参考文献:中华医学会儿科分会《儿童社区获得性肺炎管理指南(2013修订)》
过早
送检率低
取材
结果
经验用药
有缺陷
阳性率低
吴晓英,宋敏,郭满书等.临床病原学送检现况调查及管理对策[J].中华医院感染学杂志,2012,22(20):4586-4588.
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
疾病
标本类型
鼻腔冲洗、鼻/咽拭子、鼻咽抽吸 物、洗鼻液、气道抽吸物、支气管 肺泡灌洗液 鼻咽抽吸物、咽拭子、尿、血 腮腺分泌物拭子,CSF
抗原检测与血清学检测的本质区别
抗原检出时间最早!
抗原检测优势
1、早期诊断
病毒治疗针对性强:不同的病毒用药不同
病毒治疗有时效性: 越早用药效果越佳 避免抗生素的不合理使用(细菌耐药性问题)
2、抗原检测可极大程度避免漏诊及误诊
病毒名称 流感病毒 副流感病毒 呼吸道合胞病毒 腺病毒 IgM检出日期 0-7天 8-14天 61-112天 平均6.7天 5-6天 0-7天 检出率 10% 78% 71%
PIV2(9.6 d)、IFV(9.5 d)、RSV(5.3 d)和PIV3(15.0 d)、ADV(9.2 d)、RSV(7.4 d)。
呼吸道病毒抗原检测的回顾性分析
2017年我院儿童呼吸道病毒感染流行病趋势
DFA用于对不同呼吸道感染的早期诊断
南平市一七项呼吸道病毒 抗原检测的回顾性分析
在这篇报道中,作者的结论是:通过采集高质量的标本(单孔样本中的柱
状上皮细胞数达60个以上),从而使检测的灵敏度和特异性均接近PCR,
因此DFA试剂能非常有效地对甲型流感病毒进行排查检测。
临床验证2:与血清学检测相比
DFA、ELISA和IFA检测结果的阳性率分别为67.6% 、57.5% 和39.6% 。 ELISA和IFA与DFA检测结果符合率分别为21.7% 和31.4% 。 ELISA和IFA与DFA检出病毒相符的患儿采血时发病天数平均值从高到低依次分别为ADV(12.0 d)、
漏诊
IgM持续时间 2-20周
2-11周 2-10周 2个月
误诊
50%
CAP常见呼吸道病毒抗原检测
七项呼吸道病毒抗原检测试剂 (D3 Ultra DFA)
实验原理:直接免疫荧光法DFA
检测项目:甲、乙型流感病毒,呼吸道合胞病毒,腺病毒和副流
感病毒1、2和3型 样本类型:鼻咽拭子、鼻腔灌洗液等
胸部X线检测
• 2017-01-10 肺部CT:右侧胸腔积液伴右肺下叶部分肺不 张,右肺下叶炎症,双侧支气管炎症改变
实验室检查
• 2017-01-04,血细胞分析(五分类)(样本:血液):白细胞数3.82X10^9/L ↓,中性粒细 胞#1.83X10^9/L↓,中性粒细胞%.48.20%↓,淋巴细胞%.44.20%↑,红细胞. 4.14X10^12/L,血红蛋白.106.0g/L↓,血小板总数 212X10^9/L;异常白细胞形态检 查(样本:血液):淋巴细胞%.44.2.00%,单核细胞%.7.80%,中性粒细胞%.48.2.00% ; C-反应蛋白 6.5mg/L;降钙素原检测(化学发光法)0.509ng/ml↑; • 2017-01-04,小儿生化常规(样本:血液):间接胆红素 4.10umol/L↓,尿素 4.20mmol/L,血糖 6.42mmol/L↑,白蛋白 35.40g/L,总蛋白 54.10g/L↓,总胆红素 5.60umol/L,直接胆红素1.5umol/L,肌酐28.80umol/L↓,天冬氨酸氨基转移酶 63.6U/L↑,丙氨酸氨基转移酶19.5U/L,肌酸激酶113.0U/L,乳酸脱氢酶524.00U/L↑ • 2017-01-04,免疫球蛋白组套(样本:血液):免疫球蛋白A 1.15g/L,免疫球蛋白E 35.85IU/mL,免疫球蛋白G 3.71g/L↓,免疫球蛋白M 0.78g/L; • 2017-01-04,电解质(样本:血液):钾 3.39mmol/L↓,钠 134.00mmol/L↓,氯 99.00mmol/L; • 2017-01-04,红细胞沉降率测定(ESR)(样本:血液):血沉(魏氏法)33.0MM/H↑; 2017-01-04,2017-01-05,血清铁蛋白测定(样本:血液):铁蛋白 186.00ug/L; • 2017-01-04,呼吸道七联:抗原直接免疫荧光法(DIF):腺病毒(+) • 2017-01-05,肺炎支原体血清学试验(样本:血液):肺炎支原体抗体检测 阴性;
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