一株糖化酶高产菌株的筛选和鉴定
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
１ １４ 试 剂 ．．
了饲料 中营养 成 分 的分解 和 消化 ， 易于被 动物 吸 收 ， 高 了 饲料 的利 用 率 ， 泛地 应 用 于工 业饲 提 广
料生产 中 。
试 剂均 为 国产 分析 纯或生 化试 剂 。
１２ 实 验方法 ．
几 十年来 科研 工作 者 一 直 致力 于 提 高糖 化
Ｋｅ ｏｒ ｙＷ ｄｓ： ｌ ｃ ａ ｌｓ ｇ ｕ ｏ ｍｙ ａ ｅ；ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ；ｉ ｅ ｔ ｉ ａｉ ｎ；ｍｏ ｌ ｙ ｒ ｎ；Ａｓ ｅ ｇｌｕ ｉｅ ｃｅ ｎｎ ｄ ｎ ｉ ｃ ｔｏ ｆ ｕｄ ｂａ ｐ ｒ ｉ ｓｎｇ ｒ ｌ
糖化酶、 淀粉 酶 、 白酶 被 称 为 三 大工 业 用 蛋 酶 ， 糖化 酶居 首 ， 而 足见 其 重要 的工 业应 用价 值 。 糖 化酶 ， 即葡 萄 糖 淀 粉 酶 （ ｌｃａ ｙａｅ Ｃ ３ Ｇ ｕ ｏｍ ｌ ，Ｅ ． ． ｓ
生产中＿。 ２ ］
大 多数 微生 物都 可 以合成 糖 化酶 ， 主要存 其 在 于黑 曲霉 、 曲霉 、 霉等 丝状 真菌 和酵母 中 ， 米 根 同时也存 在 于人 的 唾液 、 动物 胰腺 及 细菌 中 。已
报 道 的产糖 化酶 的真 菌 有 ２ ３个 属 ３ ５个 种 ， 细菌
２ １３ ， ．． ） 又称 一淀 粉 酶 （ 写 Ｇ 或 Ｇ） 是 一 缩 Ａ ，
ｔ ａ ｆｔ ｅ ｌｔｅ ．Ｔｈ ｒ ｆｒ ｈ ｔｏ ｈ ａｔ ｒ ｅ ｅ ｏ ｅ，Ａｓ ｅ ｇｌｕ ｇ ｒＭ ｉ ｒｅ ｔａ ｔａｎ ｆ ｒｉ ｄ ｓｒ ｅ ｅ ｏ ｍ ｅ ｔｉ ｐ ｒｉｌ ｓｎｉｅ １ ｓａｐｏ ｎ ｉｌｓｒ ｉ ｏ ｎ ｕ ｔｙ ｄ ｖ ｌｐ ｎ ｎ ｔ ｔ ｅ ｆ ｕ ｅ． ｈ ｕｔ ｒ
孟 国庆 ， ： 等 一株 糖 化 酶 高 产 菌 株 的筛 选 和 鉴 定
～ ２ 一 １
龄 。－－：： 。： ｉ－－－ －照ｉ： －÷ 毋盼 ｊ － ｉ ｉ。 ： － 簟 ｉ 站。： － 曩 ÷ ： ｉ 簟 － ｉ ｉ － ｊ。 ： ：
酶 酶活 力方 面的研 究 ， 除进行 常规 的物理化 学诱
１２ １ 菌株筛 选 ． ．
变， 利用 Ｄ Ａ重组 技 术 构建 糖 化 酶 高 产 工程 菌 Ｎ
本 实验 采用 平板 稀 释涂 布法 进 行 菌 株 的筛 选 分离 。取一 定量 的酒 曲置 于盛 有 １Ｏ Ｌ无 菌 ０ｒ ａ
出一株 糖化酶 高产 菌株 ， 并进行 相关 鉴定工 作 。
１ 材 料与 方法 １ １ 材 料 ． １ １ １ 酒 曲样 品 ．．
在 山东 省 内采集 。 １ １２ 培养基 ．． １ １２ １ 筛选 培养基 ．．． 高 氏 １号 培 养 基 ： 溶 性 淀 粉 ２ Ｌ， 可 ０
ａ ｄ ｃｏ ｅ ｔ ｘｕ ｅ ｎ ｌｓ ｅ ｔ ｒ ．Ｔｈ ｅ ｌｗ ｐ ｒ ｏ ｉ ｉ ｓ ｏ ｈ ｍａｌｓａ ｋ ｏ ｈ ｃ ｏ ｙ ｔ ｅ ｙ ｌｏ ｓ ｈｅ ｅ ｃ ｎ ｄ ａ ｉ ｎ ｔ ｅ ｓ ｌ ｔ ｌ ｆｔｅ ａ ｒ ｃ ｓ．Ｔｈ ｄｅ ｔｆｃ － ｅ ｉ ｎｉ ａ ｉ ｔｏ ｆｃ ｌｎ ｒ ｏｏ ｙ ａ ｄ ｃ ｌ ｒ ｈ ｌｇ ｎｄ ｔ ｅ ｐ ｙ ｏ ｅ ｅｉ ｎ ｌ ｓｓｂａ ｅ ｎ １ ｒ ｉ ｎ ｏ ｏ ｏ ｙ ｍｏ ｐｈ ｌ ｇ ｎ ｅｌｍｏ ｏ ｏ ｙ ａ ｈ ｈ ｌｇ ｎ ｔｃ ａ ａｙ ｉ ｓ ｄ ｏ Ｓ ＲＮＡ ｐ ８
一
株糖化酶高产菌株的筛选和鉴定
孟 国庆 赵 林 王 婷 张 鑫 刘新 利
（ 山东 省 微生 物工 程 重点 实验 室 ， 山东 轻工 业学 院 ， 山东 济南
摘
２ ０５ ） ５３３
要： 糖化 酶是 一 种被 广 泛应 用的 重要 的 工业 用酶 ， 实验从 酒 曲 中 筛选 出一 株糖 化 本
９ ． ７ ． ｈ ｔａｎ ｗａ ｄ ｎ ｉ ｅ ｎ ｅ ｏ ｎ ｔｄ Ａｓ ｅ ｇｌ ｓｎ ｇ ｒ Ｍ１ ９ ７ ％ Ｔ ｅ ｓ ｉ ｓ ｉ ｅ ｔ ｄ ａ ｄ ｄ ｎ ｍｉ ａｅ ｐ ｒ ｉ ｕ ｉｅ ．Ａｔ ｈ ａ ｉ ，ｔ ｅ ｒ ｉ ｆ ｌ ｅ ｓ ｍｅｔ ｔ ｍｅ ｈ
Ｓ ｒｅ ｉｇａ ｄ Ｉ ｅ ｔｆ ａｉｎ ｏ ｇ ｕ ｏ ｍｙａｅＰ ｏ ｕ ｉｇ Ｓｒ ｉ ｃ ｅｎｎ ｎ ｄ ｎｉ ｃ ｔｏ ｆａ Ｈｉｈ Ｇｌ ｃ ａ ｌｓ ｒ ｄ ｃｎ ｔａｎ ｉ
Ｍ ｅ ｇ Ｇｕ ｑｉ Ｚｈ ｏ Ｌｉ Ｗ ａ ｇ Ｔｉ Ｚｈ ｎ ｎ Ｌ ｕ Ｘｉ ｌ ｎ ｏ ｎｇ ａ ｎ ｎ ｎｇ ａ ｇ Ｘｉ ｉ ｎ ｉ Ａ ｂｓｒ ｃ ：Ｇｌ ｃ ａ ｌ ｓ ｓａ ｍ ｐ ｒａ ｔｉ ｄ ｓｒａ ｉ ｃ ｔｌ ｚ ｒａ ｒ ａ ｌ ｓ ｄ ｉ ｉ ｉ ｄ ｓ ｔａｔ ｕ ｏ ｍｙ ａ ｅ ｉ ｎ ｉ ｏ ｔｎ ｎ ｕ ｔｉ ｌｂ ｏ ａ ａｙ ｅ ｎｄ ｂ ｏ ｄ ｙ ｕ ｅ ｎ ｂ ｏ ｎ ｕ — ｔｙ Ｉ ｈｓ ｐ ｐｅ ａ ｇｕ ｏ ｍ ｙａ ｅ ｐ ｏ ｕ ｔ ｎ ｓｒ ｉ ｓ ｉｏ ａｅ ｒ ｍ ｕ ｄ ｂ ａ ａ ｌ ｓ Ｔｈ ｒ ． ｎ ｔ ｉ ａ ｒ， ｌ ｃ ａ ｌ ｓ ｒ ｄ ｃ ｉ ｔａｎ ｗａ ｓ ｌ ｔ ｄ ｆｏ ｍｏ ｌ ｙ ｒ ｎ ｓ ｍｐ ｅ ． ｏ ｅ ｍ ｙ ｅｉ ｌｃ ｌｒｉ ｉｅ ａ ｒｔ ｎ ｈ ｎ ｂ ｃ ｍｅ ｅｌ ｗｉｈ ｂ ｏ ｃ ｌａ ｏｏ ｓｗｈ ｔ ｔｆ ｓ ，ａ ｄ ｔ ｅ ｅ ｏ ｓｙ ｌ ｉ ｏ ｓ ｒｗｎ，ｖ ｌ ｅ ｅｖ ｔ— ｌ ｏ ｏ ｉ ｓａ ｅ ｔ ｉ ｋ ｉ ｃ ｌｎ ｅ ｒ ｈ ｃ ｋｅ
ｓ ｑ ｅ ｃ ｈ ｗｓ ｈ ｔ ｔ ｅ ｔａ ｎ ｓ ａ ｉ ｎ ｏ ｐ ｒ ｉ ｕｓ ｉｅ ｎ ｔ ｅ ｅ ｕｅ ｅ ｉ ｉａ ｉ ｉ ｅ ｕ ｎ ｅ ｓ ｏ ｔ ａ ｈ ｓｒ ｉ ｉ ａ ｖ ｒａ ｔ ｆ Ａｓ ｅ ｇｌ ｎ ｇ ｒ ａ ｄ ｈ ｓ ｑ ｎｃ ｓｍ ｌｒｔ ｓ ｌ ｙ
１ ２ ２ ２ 菌 株 １Ｓ ｒ Ｎ ．．． ８ Ｄ Ａ的 Ｐ Ｒ扩 增 、 列 测 Ｃ 序
Ｐ Ａ培养 基 ： 铃 薯 ２０／ ， 萄糖 （ 蔗 Ｄ 马 ０ ｇＬ 葡 或
糖 ）０ ／ ， ２ ｇ Ｌ 琼脂 １ Ｌ 自然 ｐ ５ ， Ｈ。 １ １ ２ ３ 形 态观 察培养 基 ． ．．
分别 在 Ｐ Ａ培 养基 和查 氏培 养 基上 进行 菌 Ｂ
ＫＮＯ３ ｇ １ ／Ｌ， Ｃ１０． ／Ｌ ， ＨＰＯ４０． ／Ｌ， ｇ Ｏ４ Ｎａ ５ｇ Ｋ２ ５ｇ Ｍ Ｓ
・
再 复筛 出酶 活力 较 高 的菌株 。同 时 以实 验室 现
有 黑 曲霉 菌株 Ａ ｐ ｒｉｕ ｉｅ Ｓ ． ３ ９作对 照 ｓｅｇｌ ｓｎｇｒ ３ ４ ０ ｌ Ａ 实验 ， 以验证筛 选 出较高 的酶 活力及 更低 的耐酸
基上产 透 明 圈较大 的菌 落 分 离 纯化 。将 筛 选 出 的菌株 在 发 酵 培 养 基 中 ， ３ ￣ ５ ｒｍｉ 于 ０Ｃ１０／ ｎ的摇 床 中摇 瓶 震 荡 培 养 ３天 ， 束 后 将 发 酵 液 预 处 结 理 ， 用 Ｎ 滴 定 法 测定 其糖 化 酶 的 酶活 ， 利 ａＳＯ
霉 Ａ ｐ ｒｉｕ ｉ ｒ 。 同 时与 实验 室现有 黑 曲霉 菌株 Ａ ｐ ｒｉｕ ｉｅＡ ３ ４ ０ ｓｅ ｌ ｓ ｇ ｇ ｌ ｎ ｅ Ｍ１ ｓｅｇ ｌｓｎｇｒ Ｓ ． ３ ９进 行 糖 化 ｌ 酶 活力 比较 ， 为其 酶 活 力的 ３ ３ ． ８倍 ， 有进 一步应 用开发 价值 。 关键 词 ： 糖化 酶 ； 筛选 ； 定 ； 曲 ； 曲霉 鉴 酒 黑
酶 高产 菌株 ， 菌 菌丝初 为 白 色， 变为 土黄 色， 该 后 菌落 呈厚绒 状 ， 质地 紧密 。土黄 色球 形分 生 孢子 着 生在 顶 囊的 小梗上 。 经 菌 落 、 胞 形 态观 察 以及 基 于 １ Ｓ ｒ Ｎ 细 ８ Ｄ Ａ序 列 的 系统 发 育 关
系分析 ， 鉴定 该 菌株 为 曲霉属 黑 曲 霉 变种 ， 黑 曲霉 的序 列 相 似 性 为 ９ ．７ ， 名 为 黑 曲 与 ９７％ 命
ｇ ｒ ＡＳ ４ ０ ｒ ｓ ｒ ｅ ｎ ｏ ｒｌｂｏ ａｏ ｙ，ｔ ｎｚ ｍｅ ａ ｔｖｔ ｆｔ ｅ ｆ ｒ ｒｗａ ３ ｉ ｓ ｔ ａ ｅ ３． ３ ９ ｐ ｅ ｅ ｖ ｄ ｉ ｕ ａ ｒ ｔｒ ｈｅ ｅ ｙ ｃ ｉｉｙ ｏ ｈ ｏ ｍｅ ｓ３． ８ ｔ ｍｅ ｈ ｎ
ｇ ｕ ｏ ｍｙ ａ ｅ ａ ｔ ｉｙ ｏ ｐｅｇ ｌｕ ｉｅ ｗａ ｎ ｅ ｔｇ ｔ ｄ ａ ｄ ｃ ｍｐ ｒ ｄ ｗｉ ｐ ｒｉｌ ｓ ｎ — ｌ ｃ ａ ｌｓ ｃ ｉ ｔ ｆＡｓ ｒ ｉｌ ｓ ｎ ｇ ｒＭ １ ｖ ｓ ｉ ｖ ｓｉ ａｅ ｎ ｏ ａ ｅ ｔ Ａｓ ｅ ｇｌｕ ｉ ｈ
范 围 的菌 株 。 １ ２ ２ 菌 株鉴定 ．．
７ ２ ． ｇ Ｌ Ｆ Ｓ ４ ． １／ 琼 脂 １ Ｌ， Ｈ Ｏ ０ ５ ／ ， ｅ Ｏ ０ ０ ｇ Ｌ， ５
ｐ Ｈ７． ～７． ２ ４。
１２ ２ １ 菌株 表型特 征 ．．．
１ １ ２ ２ 分 离培 养基 ．．．
采用 Ｐ Ａ、 氏 培 养 基 平 板 培 养 对 筛 选 出 Ｄ 查 的菌株 Ｍ１进行 菌落 形态 观察 ， 利用 普 通光 学 再 显微 镜进 行菌 丝及孢 子形 态观察 。
种 酸性 糖 苷水解 酶 ， 也是 一 种外 切型 糖 苷酶 。它
可 以从 淀粉 或 淀 粉类 似 物分 子 的非 还 原 端 顺 序
切 开 一１ ４一糖 苷键 ， 成葡 萄 糖 ， 我 国产 ， 生 是 量 最 大 的 酶制 剂 产 品 ， 广 泛地 应用 于酒 精 、 被 白 酒、 料、 饲 氨基 酸 、 有机 酸 、 粉糖 、 生 素等 工业 淀 抗
２ １ 年 第 ８期 （ 第 １０期 ） ０１ 总 １
中重要 的酶制 剂 ， 能将淀 粉酶 系 中 Ｏ 一 粉 酶分 Ｌ淀 解 的 中、 分子 物 质进 一 步水 解 成 葡萄 糖 ， 低 促进
仪， 深圳 赛泰 克生 物技术 有 限公 司 产品 ； 灭菌 锅 ，
上海 申安 医疗 器 械厂产 品 。
生 理盐 水 的三角 瓶 中 ， 磁力 搅 拌器 上 打匀 ， 于 将
外， 在筛 选不 同Hale Waihona Puke Baidu 源的糖 化酶 高产 菌株方 面也做
出不懈 的努力 ］ 。本 文 从 酒 曲 样 品 中筛 选分 离
打匀后 的样 品梯度 稀释 ， 涂布 于筛选 培养基 平板 上 。于 ３ ￣ 培 养箱 培 养 ２天 后 ， 取 筛 选 培 养 ０（ ２ 挑
有 ３个属 ３个 种 Ｊ 。不 同来 源 的淀 粉 糖 化 酶其
结 构和 功能 有一 定 的差 异 ， 生 淀粉 的水解 作用 对 也 不 同 ， 中真 菌产 生 的淀粉 糖化 酶对 生 淀粉具 其 有 较好 的分 解 作 用 Ｊ 。糖 化 酶 作 为 饲 料 添 加剂
一
２ 一 ２
中 国饲 料 添 加 剂
定 和系统 发育分 析 取培 养好 的菌 体 ， 于 无 菌生 理 盐 水 中 ， 置 采 用酚 一氯仿 抽提 法提 取基 因组 Ｄ Ａ。再 采 用 真 Ｎ 菌通 用引 物进 行 １ Ｓｒ Ｎ ８ Ｄ Ａ序 列 扩增 ， ａ ａａ胶 Ｔ ｋｒ
了饲料 中营养 成 分 的分解 和 消化 ， 易于被 动物 吸 收 ， 高 了 饲料 的利 用 率 ， 泛地 应 用 于工 业饲 提 广
料生产 中 。
试 剂均 为 国产 分析 纯或生 化试 剂 。
１２ 实 验方法 ．
几 十年来 科研 工作 者 一 直 致力 于 提 高糖 化
Ｋｅ ｏｒ ｙＷ ｄｓ： ｌ ｃ ａ ｌｓ ｇ ｕ ｏ ｍｙ ａ ｅ；ｓ ｒ ｅ ｉ ｇ；ｉ ｅ ｔ ｉ ａｉ ｎ；ｍｏ ｌ ｙ ｒ ｎ；Ａｓ ｅ ｇｌｕ ｉｅ ｃｅ ｎｎ ｄ ｎ ｉ ｃ ｔｏ ｆ ｕｄ ｂａ ｐ ｒ ｉ ｓｎｇ ｒ ｌ
糖化酶、 淀粉 酶 、 白酶 被 称 为 三 大工 业 用 蛋 酶 ， 糖化 酶居 首 ， 而 足见 其 重要 的工 业应 用价 值 。 糖 化酶 ， 即葡 萄 糖 淀 粉 酶 （ ｌｃａ ｙａｅ Ｃ ３ Ｇ ｕ ｏｍ ｌ ，Ｅ ． ． ｓ
生产中＿。 ２ ］
大 多数 微生 物都 可 以合成 糖 化酶 ， 主要存 其 在 于黑 曲霉 、 曲霉 、 霉等 丝状 真菌 和酵母 中 ， 米 根 同时也存 在 于人 的 唾液 、 动物 胰腺 及 细菌 中 。已
报 道 的产糖 化酶 的真 菌 有 ２ ３个 属 ３ ５个 种 ， 细菌
２ １３ ， ．． ） 又称 一淀 粉 酶 （ 写 Ｇ 或 Ｇ） 是 一 缩 Ａ ，
ｔ ａ ｆｔ ｅ ｌｔｅ ．Ｔｈ ｒ ｆｒ ｈ ｔｏ ｈ ａｔ ｒ ｅ ｅ ｏ ｅ，Ａｓ ｅ ｇｌｕ ｇ ｒＭ ｉ ｒｅ ｔａ ｔａｎ ｆ ｒｉ ｄ ｓｒ ｅ ｅ ｏ ｍ ｅ ｔｉ ｐ ｒｉｌ ｓｎｉｅ １ ｓａｐｏ ｎ ｉｌｓｒ ｉ ｏ ｎ ｕ ｔｙ ｄ ｖ ｌｐ ｎ ｎ ｔ ｔ ｅ ｆ ｕ ｅ． ｈ ｕｔ ｒ
孟 国庆 ， ： 等 一株 糖 化 酶 高 产 菌 株 的筛 选 和 鉴 定
～ ２ 一 １
龄 。－－：： 。： ｉ－－－ －照ｉ： －÷ 毋盼 ｊ － ｉ ｉ。 ： － 簟 ｉ 站。： － 曩 ÷ ： ｉ 簟 － ｉ ｉ － ｊ。 ： ：
酶 酶活 力方 面的研 究 ， 除进行 常规 的物理化 学诱
１２ １ 菌株筛 选 ． ．
变， 利用 Ｄ Ａ重组 技 术 构建 糖 化 酶 高 产 工程 菌 Ｎ
本 实验 采用 平板 稀 释涂 布法 进 行 菌 株 的筛 选 分离 。取一 定量 的酒 曲置 于盛 有 １Ｏ Ｌ无 菌 ０ｒ ａ
出一株 糖化酶 高产 菌株 ， 并进行 相关 鉴定工 作 。
１ 材 料与 方法 １ １ 材 料 ． １ １ １ 酒 曲样 品 ．．
在 山东 省 内采集 。 １ １２ 培养基 ．． １ １２ １ 筛选 培养基 ．．． 高 氏 １号 培 养 基 ： 溶 性 淀 粉 ２ Ｌ， 可 ０
ａ ｄ ｃｏ ｅ ｔ ｘｕ ｅ ｎ ｌｓ ｅ ｔ ｒ ．Ｔｈ ｅ ｌｗ ｐ ｒ ｏ ｉ ｉ ｓ ｏ ｈ ｍａｌｓａ ｋ ｏ ｈ ｃ ｏ ｙ ｔ ｅ ｙ ｌｏ ｓ ｈｅ ｅ ｃ ｎ ｄ ａ ｉ ｎ ｔ ｅ ｓ ｌ ｔ ｌ ｆｔｅ ａ ｒ ｃ ｓ．Ｔｈ ｄｅ ｔｆｃ － ｅ ｉ ｎｉ ａ ｉ ｔｏ ｆｃ ｌｎ ｒ ｏｏ ｙ ａ ｄ ｃ ｌ ｒ ｈ ｌｇ ｎｄ ｔ ｅ ｐ ｙ ｏ ｅ ｅｉ ｎ ｌ ｓｓｂａ ｅ ｎ １ ｒ ｉ ｎ ｏ ｏ ｏ ｙ ｍｏ ｐｈ ｌ ｇ ｎ ｅｌｍｏ ｏ ｏ ｙ ａ ｈ ｈ ｌｇ ｎ ｔｃ ａ ａｙ ｉ ｓ ｄ ｏ Ｓ ＲＮＡ ｐ ８
一
株糖化酶高产菌株的筛选和鉴定
孟 国庆 赵 林 王 婷 张 鑫 刘新 利
（ 山东 省 微生 物工 程 重点 实验 室 ， 山东 轻工 业学 院 ， 山东 济南
摘
２ ０５ ） ５３３
要： 糖化 酶是 一 种被 广 泛应 用的 重要 的 工业 用酶 ， 实验从 酒 曲 中 筛选 出一 株糖 化 本
９ ． ７ ． ｈ ｔａｎ ｗａ ｄ ｎ ｉ ｅ ｎ ｅ ｏ ｎ ｔｄ Ａｓ ｅ ｇｌ ｓｎ ｇ ｒ Ｍ１ ９ ７ ％ Ｔ ｅ ｓ ｉ ｓ ｉ ｅ ｔ ｄ ａ ｄ ｄ ｎ ｍｉ ａｅ ｐ ｒ ｉ ｕ ｉｅ ．Ａｔ ｈ ａ ｉ ，ｔ ｅ ｒ ｉ ｆ ｌ ｅ ｓ ｍｅｔ ｔ ｍｅ ｈ
Ｓ ｒｅ ｉｇａ ｄ Ｉ ｅ ｔｆ ａｉｎ ｏ ｇ ｕ ｏ ｍｙａｅＰ ｏ ｕ ｉｇ Ｓｒ ｉ ｃ ｅｎｎ ｎ ｄ ｎｉ ｃ ｔｏ ｆａ Ｈｉｈ Ｇｌ ｃ ａ ｌｓ ｒ ｄ ｃｎ ｔａｎ ｉ
Ｍ ｅ ｇ Ｇｕ ｑｉ Ｚｈ ｏ Ｌｉ Ｗ ａ ｇ Ｔｉ Ｚｈ ｎ ｎ Ｌ ｕ Ｘｉ ｌ ｎ ｏ ｎｇ ａ ｎ ｎ ｎｇ ａ ｇ Ｘｉ ｉ ｎ ｉ Ａ ｂｓｒ ｃ ：Ｇｌ ｃ ａ ｌ ｓ ｓａ ｍ ｐ ｒａ ｔｉ ｄ ｓｒａ ｉ ｃ ｔｌ ｚ ｒａ ｒ ａ ｌ ｓ ｄ ｉ ｉ ｉ ｄ ｓ ｔａｔ ｕ ｏ ｍｙ ａ ｅ ｉ ｎ ｉ ｏ ｔｎ ｎ ｕ ｔｉ ｌｂ ｏ ａ ａｙ ｅ ｎｄ ｂ ｏ ｄ ｙ ｕ ｅ ｎ ｂ ｏ ｎ ｕ — ｔｙ Ｉ ｈｓ ｐ ｐｅ ａ ｇｕ ｏ ｍ ｙａ ｅ ｐ ｏ ｕ ｔ ｎ ｓｒ ｉ ｓ ｉｏ ａｅ ｒ ｍ ｕ ｄ ｂ ａ ａ ｌ ｓ Ｔｈ ｒ ． ｎ ｔ ｉ ａ ｒ， ｌ ｃ ａ ｌ ｓ ｒ ｄ ｃ ｉ ｔａｎ ｗａ ｓ ｌ ｔ ｄ ｆｏ ｍｏ ｌ ｙ ｒ ｎ ｓ ｍｐ ｅ ． ｏ ｅ ｍ ｙ ｅｉ ｌｃ ｌｒｉ ｉｅ ａ ｒｔ ｎ ｈ ｎ ｂ ｃ ｍｅ ｅｌ ｗｉｈ ｂ ｏ ｃ ｌａ ｏｏ ｓｗｈ ｔ ｔｆ ｓ ，ａ ｄ ｔ ｅ ｅ ｏ ｓｙ ｌ ｉ ｏ ｓ ｒｗｎ，ｖ ｌ ｅ ｅｖ ｔ— ｌ ｏ ｏ ｉ ｓａ ｅ ｔ ｉ ｋ ｉ ｃ ｌｎ ｅ ｒ ｈ ｃ ｋｅ
ｓ ｑ ｅ ｃ ｈ ｗｓ ｈ ｔ ｔ ｅ ｔａ ｎ ｓ ａ ｉ ｎ ｏ ｐ ｒ ｉ ｕｓ ｉｅ ｎ ｔ ｅ ｅ ｕｅ ｅ ｉ ｉａ ｉ ｉ ｅ ｕ ｎ ｅ ｓ ｏ ｔ ａ ｈ ｓｒ ｉ ｉ ａ ｖ ｒａ ｔ ｆ Ａｓ ｅ ｇｌ ｎ ｇ ｒ ａ ｄ ｈ ｓ ｑ ｎｃ ｓｍ ｌｒｔ ｓ ｌ ｙ
１ ２ ２ ２ 菌 株 １Ｓ ｒ Ｎ ．．． ８ Ｄ Ａ的 Ｐ Ｒ扩 增 、 列 测 Ｃ 序
Ｐ Ａ培养 基 ： 铃 薯 ２０／ ， 萄糖 （ 蔗 Ｄ 马 ０ ｇＬ 葡 或
糖 ）０ ／ ， ２ ｇ Ｌ 琼脂 １ Ｌ 自然 ｐ ５ ， Ｈ。 １ １ ２ ３ 形 态观 察培养 基 ． ．．
分别 在 Ｐ Ａ培 养基 和查 氏培 养 基上 进行 菌 Ｂ
ＫＮＯ３ ｇ １ ／Ｌ， Ｃ１０． ／Ｌ ， ＨＰＯ４０． ／Ｌ， ｇ Ｏ４ Ｎａ ５ｇ Ｋ２ ５ｇ Ｍ Ｓ
・
再 复筛 出酶 活力 较 高 的菌株 。同 时 以实 验室 现
有 黑 曲霉 菌株 Ａ ｐ ｒｉｕ ｉｅ Ｓ ． ３ ９作对 照 ｓｅｇｌ ｓｎｇｒ ３ ４ ０ ｌ Ａ 实验 ， 以验证筛 选 出较高 的酶 活力及 更低 的耐酸
基上产 透 明 圈较大 的菌 落 分 离 纯化 。将 筛 选 出 的菌株 在 发 酵 培 养 基 中 ， ３ ￣ ５ ｒｍｉ 于 ０Ｃ１０／ ｎ的摇 床 中摇 瓶 震 荡 培 养 ３天 ， 束 后 将 发 酵 液 预 处 结 理 ， 用 Ｎ 滴 定 法 测定 其糖 化 酶 的 酶活 ， 利 ａＳＯ
霉 Ａ ｐ ｒｉｕ ｉ ｒ 。 同 时与 实验 室现有 黑 曲霉 菌株 Ａ ｐ ｒｉｕ ｉｅＡ ３ ４ ０ ｓｅ ｌ ｓ ｇ ｇ ｌ ｎ ｅ Ｍ１ ｓｅｇ ｌｓｎｇｒ Ｓ ． ３ ９进 行 糖 化 ｌ 酶 活力 比较 ， 为其 酶 活 力的 ３ ３ ． ８倍 ， 有进 一步应 用开发 价值 。 关键 词 ： 糖化 酶 ； 筛选 ； 定 ； 曲 ； 曲霉 鉴 酒 黑
酶 高产 菌株 ， 菌 菌丝初 为 白 色， 变为 土黄 色， 该 后 菌落 呈厚绒 状 ， 质地 紧密 。土黄 色球 形分 生 孢子 着 生在 顶 囊的 小梗上 。 经 菌 落 、 胞 形 态观 察 以及 基 于 １ Ｓ ｒ Ｎ 细 ８ Ｄ Ａ序 列 的 系统 发 育 关
系分析 ， 鉴定 该 菌株 为 曲霉属 黑 曲 霉 变种 ， 黑 曲霉 的序 列 相 似 性 为 ９ ．７ ， 名 为 黑 曲 与 ９７％ 命
ｇ ｒ ＡＳ ４ ０ ｒ ｓ ｒ ｅ ｎ ｏ ｒｌｂｏ ａｏ ｙ，ｔ ｎｚ ｍｅ ａ ｔｖｔ ｆｔ ｅ ｆ ｒ ｒｗａ ３ ｉ ｓ ｔ ａ ｅ ３． ３ ９ ｐ ｅ ｅ ｖ ｄ ｉ ｕ ａ ｒ ｔｒ ｈｅ ｅ ｙ ｃ ｉｉｙ ｏ ｈ ｏ ｍｅ ｓ３． ８ ｔ ｍｅ ｈ ｎ
ｇ ｕ ｏ ｍｙ ａ ｅ ａ ｔ ｉｙ ｏ ｐｅｇ ｌｕ ｉｅ ｗａ ｎ ｅ ｔｇ ｔ ｄ ａ ｄ ｃ ｍｐ ｒ ｄ ｗｉ ｐ ｒｉｌ ｓ ｎ — ｌ ｃ ａ ｌｓ ｃ ｉ ｔ ｆＡｓ ｒ ｉｌ ｓ ｎ ｇ ｒＭ １ ｖ ｓ ｉ ｖ ｓｉ ａｅ ｎ ｏ ａ ｅ ｔ Ａｓ ｅ ｇｌｕ ｉ ｈ
范 围 的菌 株 。 １ ２ ２ 菌 株鉴定 ．．
７ ２ ． ｇ Ｌ Ｆ Ｓ ４ ． １／ 琼 脂 １ Ｌ， Ｈ Ｏ ０ ５ ／ ， ｅ Ｏ ０ ０ ｇ Ｌ， ５
ｐ Ｈ７． ～７． ２ ４。
１２ ２ １ 菌株 表型特 征 ．．．
１ １ ２ ２ 分 离培 养基 ．．．
采用 Ｐ Ａ、 氏 培 养 基 平 板 培 养 对 筛 选 出 Ｄ 查 的菌株 Ｍ１进行 菌落 形态 观察 ， 利用 普 通光 学 再 显微 镜进 行菌 丝及孢 子形 态观察 。
种 酸性 糖 苷水解 酶 ， 也是 一 种外 切型 糖 苷酶 。它
可 以从 淀粉 或 淀 粉类 似 物分 子 的非 还 原 端 顺 序
切 开 一１ ４一糖 苷键 ， 成葡 萄 糖 ， 我 国产 ， 生 是 量 最 大 的 酶制 剂 产 品 ， 广 泛地 应用 于酒 精 、 被 白 酒、 料、 饲 氨基 酸 、 有机 酸 、 粉糖 、 生 素等 工业 淀 抗
２ １ 年 第 ８期 （ 第 １０期 ） ０１ 总 １
中重要 的酶制 剂 ， 能将淀 粉酶 系 中 Ｏ 一 粉 酶分 Ｌ淀 解 的 中、 分子 物 质进 一 步水 解 成 葡萄 糖 ， 低 促进
仪， 深圳 赛泰 克生 物技术 有 限公 司 产品 ； 灭菌 锅 ，
上海 申安 医疗 器 械厂产 品 。
生 理盐 水 的三角 瓶 中 ， 磁力 搅 拌器 上 打匀 ， 于 将
外， 在筛 选不 同Hale Waihona Puke Baidu 源的糖 化酶 高产 菌株方 面也做
出不懈 的努力 ］ 。本 文 从 酒 曲 样 品 中筛 选分 离
打匀后 的样 品梯度 稀释 ， 涂布 于筛选 培养基 平板 上 。于 ３ ￣ 培 养箱 培 养 ２天 后 ， 取 筛 选 培 养 ０（ ２ 挑
有 ３个属 ３个 种 Ｊ 。不 同来 源 的淀 粉 糖 化 酶其
结 构和 功能 有一 定 的差 异 ， 生 淀粉 的水解 作用 对 也 不 同 ， 中真 菌产 生 的淀粉 糖化 酶对 生 淀粉具 其 有 较好 的分 解 作 用 Ｊ 。糖 化 酶 作 为 饲 料 添 加剂
一
２ 一 ２
中 国饲 料 添 加 剂
定 和系统 发育分 析 取培 养好 的菌 体 ， 于 无 菌生 理 盐 水 中 ， 置 采 用酚 一氯仿 抽提 法提 取基 因组 Ｄ Ａ。再 采 用 真 Ｎ 菌通 用引 物进 行 １ Ｓｒ Ｎ ８ Ｄ Ａ序 列 扩增 ， ａ ａａ胶 Ｔ ｋｒ