多糖的分离纯化

1.2.2 离子交换层析鹿茸多糖初级分离纯化采用DEAE－52 离子交换柱。

称取鹿茸多糖80mg，溶于10mL 蒸馏水中，4000r /min 离心10min，取上清液样，依次用蒸馏水，0.3、0.5、0.7、1mol /L NaCl 溶液梯度洗脱，流速控制为0.5mL /min，分管收集，每管5mL，苯酚硫酸法跟踪检测多糖含量，绘制洗脱曲线，合并同一吸收峰的洗脱液，蒸馏水透析24h，减压浓缩，冷冻干燥，即得DEAE－52 纯化多糖。

1.2.3 凝胶排阻层析鹿茸多糖进一步分离纯化采用Sepharose CL－6B 凝胶排阻层析柱。

将经DEAE－52 分离后的多糖溶于蒸馏水，浓度为10mg /mL，以2mL /次上样，蒸馏水洗脱，流速控制为30mL /h，每管5mL，苯酚硫酸法跟踪检测，绘制洗脱曲线，收集、合并相同洗脱组分，透析，冷冻干燥即得SepharoseCL－6B纯化多糖。

1.2.4 鹿茸多糖紫外扫描将Sepharose CL－6B 纯化后精制多糖配
成一定浓度溶液，190～400nm 下进行紫外光谱扫描，以蒸馏水作空白。

2.2.4粗多糖的分离纯化
2.2.4.1粗多糖的离子柱层析
取水提粗多糖样品和碱提水溶性多糖样品溶于蒸馏水中,配制成20mg/mL的溶液,4000印m离心10min,取上清液用DEAE一SepharoseFastFlow离子柱层析(2.6-40cm)进行初步分离,上样量为25mL"首先以蒸馏水洗脱,再用0.1,0.2,0.4,0.6,2mol几的NaCI进行梯度洗脱,自动部分收集仪分步收集流分,洗脱液每10mL收集一管,苯酚硫酸法检测,根据糖显色反应结果合并相同流分"
2.2.4.2多糖的凝胶柱层析
采用AK认explorer层析系统,Sephaeryl S100一1000凝胶柱层析对样品进行纯化"洗脱条件:凝胶柱Sephacryl S100-1000(2.6X100cm);洗脱液:蒸馏水;流速:1mL/min;样品浓度:10m留mL,上样体积5mL;洗脱液以5mL/管收集,示差折光检测器和苯酚硫酸法检测,以吸光度对洗脱体积作图。