药代动力学实验
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
可保持连续脱气，多用于低压梯度
色谱峰定性
鉴别每个色谱峰
通过比较保留值(通常是保留时间)的方法，找到 各色谱峰所对应的组份
大多数情况下用比较保留时间来定性
即所谓：
À 保留时间相同，可能是同样的组份 Á 保留时间不同，肯定不是同样的组份
用保留时间定性
用“标样”的保留值定出被测组份的位置
有机溶剂如甲醇、乙腈，水 应用添加剂，成为离子对、离子抑制方法
常用固定相：
碳十八、碳八、胺基等基团 反相色谱固定相多为键合相
对HPLC柱的了解
色谱柱分类 填料，含碳量，基质，粒径 色谱柱的应用 正相柱，反相柱，预处理柱 色谱柱的规格 岛津 Shimadzu VP-ODS; 150L×2.0; 5μm;
药物代谢动力学实验
赵娣 中国药科大学药代研究中心
2012年10月16日
神农尝百草
传说神农一生下来就是个 “水晶肚”，几乎是全透明的， 五脏六腑全都能看得见，还能 看得见吃进去的东西。那时候， 人们经常因乱吃东西而生病， 甚至丧命。神农为此决心尝遍 百草，能吃的放在身体左边的 袋子里，介绍给别人吃；不好 吃的就放在身体右边袋子里， 作药用。不能吃的就提醒人们 注意。
标准加入法举例
源自文库
废水样品中五氯苯（PCP）的分析
PCP
4 ppm 3 ppm 2 ppm 1 ppm
常用的定量方法
峰面积百分比法
由于检测技术的影响，在液相色谱中不常用
外标法
在液相色谱中用的最多
内标法
准确，但是麻烦 在标准方法中用的最多
外标法定量
配制一系列已知浓度的标样
高效液相色谱系统
色 谱 泵 进 样 器 数 据 处 理 检 测 器
色 谱 柱
高效液相色谱系统
SHIMADZU LCMS-2010EV LC-MS/MS Thermo TSQ Quantum Access
分配色谱的分离机理
分配色谱概述
反相色谱的主要类型，基于分子的极性分离 洗脱次序：一般为反相，即极性高的先被洗脱 常用的流动相：
保护色谱柱
减少死体积 防止填料的氧化
流动相脱气的方法
加热
简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动相组成 的变化
抽真空
同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果
超声波
简单，但效果不理想。
通惰性气体（一般用氦气）
可保持连续脱气，多用于低压梯度
脱气机
药物代谢动力学
定量研究药物（包括外来化学物质）在生物体内吸收、分布、排泄和代谢（简 称体内过程）规律的一门学科。
• HPLC-UV ?
生物样品 常用测
定方法
•GC-MS ?
数据处理分析
•LC-MS/MS ?
3
实验安排
1.HPLC原理与标准操作规程(SOP) 2.实验设计与动物实验 3.样品处理与方法开发 4.定性定量与分析测定 5.数据处理与药动学参数计算 6.实验报告
步骤一： 90%甲醇1mL/min流速冲洗30min 步骤二： 10%甲醇1mL/min流速冲洗30min 步骤三： 90%甲醇1mL/min流速冲洗60min
色谱柱的存放
存放前的处理
除去杂质、盐
合适的存放溶剂 避免色谱柱床的干枯 避免机械震动 防止细菌生长 注意存放的温度
0 . 0 0
0 . 0 0
0 . 0 0
0 . 0 0 0 . 5 0 1 . 0 0 1 . 5 0 2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 6 . 5 0 7 . 0 00 . 0 0 0 . 5 0 1 . 0 0 1 . 5 0 2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 6 . 5 0 7 . 0 0 0 . 0 0 0 . 5 0 1 . 0 0 1 . 5 0 2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 6 . 5 0 7 . 0 0
0.40
Ethylparaben
0.35
0.30
0.25
AU
0.20
0.15
Uracil
Propylparaben
0.10
0.05
0.00 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00
Minutes
液相色谱对流动相的要求
除色谱柱对流动相对的要求外，还有∶
与检测器匹配 脱气 避免卤素离子（不锈钢系统） 溶剂的粘度
流动相的脱气
流动相脱气的目的
使色谱泵的输液准确
输液均匀准确，并且脉动减小 保留时间及色谱峰面积的重现性提高
提高检测的性能
防止气泡引起的尖峰 基线稳定，信噪比增加 溶剂的紫外吸收本底降低
外标法定量（二）
实际色谱图
5 , 0 0 0
0 . 3 0
0 . 3 0
0 . 3 0
0 . 2 5
0 . 2 5
0 . 2 5
0 . 2 0
0 . 2 0
0 . 2 0
0 . 1 5
0 . 1 5
0 . 1 5
0 . 1 0
0 . 1 0
0 . 1 0
0 . 0 5
0 . 0 5
0 . 0 5
静注加替沙星在家兔体内的药代动力学研究
HPLC原理与标准操作规程(SOP)
1.HPLC的组成 2.分配色谱的原理 3.色谱柱 4.流动相 5.定性与定量方法 6.样品的预处理 7.反相色谱分析方法的开发
High Performance Liquid Chromatography
HPLC 的组成
Pump 泵 Injector/Autosampler 进样器/自动进样器 Column 色谱柱 Detector 检测器 Data System/Integrator 数据系统/积分仪表
柱号 8082693.
键合相色谱柱
以硅胶为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳八、 胺基等基团联在基质上，作为固定相。
优点∶
固定相稳定，不易流失 应用广泛，可使用多种溶剂 消除硅羟基的不良影响
缺点∶
pH值不能小于3 同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同
反相C18色谱柱的活化
色谱峰定性
鉴别每个色谱峰
通过比较保留值(通常是保留时间)的方法，找到 各色谱峰所对应的组份
大多数情况下用比较保留时间来定性
即所谓：
À 保留时间相同，可能是同样的组份 Á 保留时间不同，肯定不是同样的组份
用保留时间定性
用“标样”的保留值定出被测组份的位置
有机溶剂如甲醇、乙腈，水 应用添加剂，成为离子对、离子抑制方法
常用固定相：
碳十八、碳八、胺基等基团 反相色谱固定相多为键合相
对HPLC柱的了解
色谱柱分类 填料，含碳量，基质，粒径 色谱柱的应用 正相柱，反相柱，预处理柱 色谱柱的规格 岛津 Shimadzu VP-ODS; 150L×2.0; 5μm;
药物代谢动力学实验
赵娣 中国药科大学药代研究中心
2012年10月16日
神农尝百草
传说神农一生下来就是个 “水晶肚”，几乎是全透明的， 五脏六腑全都能看得见，还能 看得见吃进去的东西。那时候， 人们经常因乱吃东西而生病， 甚至丧命。神农为此决心尝遍 百草，能吃的放在身体左边的 袋子里，介绍给别人吃；不好 吃的就放在身体右边袋子里， 作药用。不能吃的就提醒人们 注意。
标准加入法举例
源自文库
废水样品中五氯苯（PCP）的分析
PCP
4 ppm 3 ppm 2 ppm 1 ppm
常用的定量方法
峰面积百分比法
由于检测技术的影响，在液相色谱中不常用
外标法
在液相色谱中用的最多
内标法
准确，但是麻烦 在标准方法中用的最多
外标法定量
配制一系列已知浓度的标样
高效液相色谱系统
色 谱 泵 进 样 器 数 据 处 理 检 测 器
色 谱 柱
高效液相色谱系统
SHIMADZU LCMS-2010EV LC-MS/MS Thermo TSQ Quantum Access
分配色谱的分离机理
分配色谱概述
反相色谱的主要类型，基于分子的极性分离 洗脱次序：一般为反相，即极性高的先被洗脱 常用的流动相：
保护色谱柱
减少死体积 防止填料的氧化
流动相脱气的方法
加热
简单，如同抽真空一起使用，其效果很好。但容易造成流动相组成 的变化
抽真空
同上，一般在溶剂抽滤的同时，也有脱气的效果
超声波
简单，但效果不理想。
通惰性气体（一般用氦气）
可保持连续脱气，多用于低压梯度
脱气机
药物代谢动力学
定量研究药物（包括外来化学物质）在生物体内吸收、分布、排泄和代谢（简 称体内过程）规律的一门学科。
• HPLC-UV ?
生物样品 常用测
定方法
•GC-MS ?
数据处理分析
•LC-MS/MS ?
3
实验安排
1.HPLC原理与标准操作规程(SOP) 2.实验设计与动物实验 3.样品处理与方法开发 4.定性定量与分析测定 5.数据处理与药动学参数计算 6.实验报告
步骤一： 90%甲醇1mL/min流速冲洗30min 步骤二： 10%甲醇1mL/min流速冲洗30min 步骤三： 90%甲醇1mL/min流速冲洗60min
色谱柱的存放
存放前的处理
除去杂质、盐
合适的存放溶剂 避免色谱柱床的干枯 避免机械震动 防止细菌生长 注意存放的温度
0 . 0 0
0 . 0 0
0 . 0 0
0 . 0 0 0 . 5 0 1 . 0 0 1 . 5 0 2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 6 . 5 0 7 . 0 00 . 0 0 0 . 5 0 1 . 0 0 1 . 5 0 2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 6 . 5 0 7 . 0 0 0 . 0 0 0 . 5 0 1 . 0 0 1 . 5 0 2 . 0 0 2 . 5 0 3 . 0 0 3 . 5 0 4 . 0 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 5 0 6 . 0 0 6 . 5 0 7 . 0 0
0.40
Ethylparaben
0.35
0.30
0.25
AU
0.20
0.15
Uracil
Propylparaben
0.10
0.05
0.00 0.00 0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00 5.50 6.00 6.50 7.00
Minutes
液相色谱对流动相的要求
除色谱柱对流动相对的要求外，还有∶
与检测器匹配 脱气 避免卤素离子（不锈钢系统） 溶剂的粘度
流动相的脱气
流动相脱气的目的
使色谱泵的输液准确
输液均匀准确，并且脉动减小 保留时间及色谱峰面积的重现性提高
提高检测的性能
防止气泡引起的尖峰 基线稳定，信噪比增加 溶剂的紫外吸收本底降低
外标法定量（二）
实际色谱图
5 , 0 0 0
0 . 3 0
0 . 3 0
0 . 3 0
0 . 2 5
0 . 2 5
0 . 2 5
0 . 2 0
0 . 2 0
0 . 2 0
0 . 1 5
0 . 1 5
0 . 1 5
0 . 1 0
0 . 1 0
0 . 1 0
0 . 0 5
0 . 0 5
0 . 0 5
静注加替沙星在家兔体内的药代动力学研究
HPLC原理与标准操作规程(SOP)
1.HPLC的组成 2.分配色谱的原理 3.色谱柱 4.流动相 5.定性与定量方法 6.样品的预处理 7.反相色谱分析方法的开发
High Performance Liquid Chromatography
HPLC 的组成
Pump 泵 Injector/Autosampler 进样器/自动进样器 Column 色谱柱 Detector 检测器 Data System/Integrator 数据系统/积分仪表
柱号 8082693.
键合相色谱柱
以硅胶为基质，通过化学键合方式把碳十八、碳八、 胺基等基团联在基质上，作为固定相。
优点∶
固定相稳定，不易流失 应用广泛，可使用多种溶剂 消除硅羟基的不良影响
缺点∶
pH值不能小于3 同样填料，各种牌号色谱柱不尽相同
反相C18色谱柱的活化