最新结核病的研究进展
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与某些非结核分枝杆菌有交叉反应。 敏感度仍不够高，一般在75～95%之间，且与痰菌含量有
关，痰涂阳+为63.9%，++为71.97%，+++为88.2%。 操作影响因素多：需设立多种对照，以保证可靠性，且反
应时间、温度、噬菌体活性含量及特异性、杀毒剂的浓度 及混匀情况等均可影响检测结果。 蛭弧菌感染：蛭弧菌是一种与噬菌体极其相似的寄生微 生物，可在活菌和死菌中增殖，裂解细菌后可产生菌斑， 可造成假阳性，在操作中须避免污染。
病原学诊断：噬菌体生物扩增法
近些年来国内外对此法进行了大量研究，认为有 以下优点： 简便快速，操作简单，不含特殊仪器，检测标本 仅需48小时可得到结果。 灵敏特异，敏感度为200～300条/毫升。 安全可靠，该法将活体菌裂解杀灭，传染性小 价廉
病原学诊断：噬菌体生物扩增法
但此种方法也存在很多问题：
结核病的研究进展
概
况
结核病是仅次于爱滋病的第二大感染性疾病。
由于许多爱滋病死于结核，故在单一感染死因中， 结核病仍居首位。自从在全球范围内开展DOTS 以来，结核病的感染率、病死率及细菌耐药情况 均有降低，但因各国具体实施状况存在很大差异， 所以改善的速度十分缓慢，与预期目标相距甚远。 对于全球结核病防治前景，许多专家并不表示乐 观。
实验室诊断：病原学
⑴抗酸染色和培养：
痰涂片检出率（抗酸染色）约30%～40%，痰中菌量必 须多于5×106/L才能检出；集菌法敏感性可达 60%～ 70%，与标本质量、检测者技术与责任心有关，但无法 区分结核杆菌和非结核杆菌。
国外报道，在痰标本中加入特殊荧光素作标记，可在荧 光显微镜下进行区分。
基础研究：细胞凋亡与结核病
国外研究发现： 线粒体膜结构的完整即线粒体渗透性转换（MPT）
稳定，caspase激活降低和线粒体细胞色素C释放 减少是巨噬细胞发生凋亡的标志，也是有效控制 结核杆菌感染的特征。 线粒体膜完整性受损（MPT降低），caspase激 活增加和线粒体细胞色素C释放增加是细胞坏死
结核病时巨噬细胞适度凋亡是一种免疫保护机制， 可使结核杆菌丧失原有生存环境，导致细菌活力 降低，也可清除炎症部位的感染细胞。
吞噬结核杆菌的巨噬细胞发生凋亡后，细菌被包 埋在凋亡小体内，又被循环单核细胞吞噬，这样 可能会触发更为有效的细胞内杀菌机制。
细胞凋亡还可抑制结核杆菌繁殖，防止结核感染 播散。
基础研究：Th1型/Th2细胞因子失衡
由此可见 ：
Th1型CK主要激活巨噬细胞，增强其杀菌能力， 从而在结核感染中发挥保护性免疫作用。
Th2型CK则抑制Th1型CK和IFN-γ的产生，降低 巨噬细胞杀灭结核菌的能力，从而削弱结核免疫 应答，与结核感染的进展、持续化和慢性化有关。
基础研究：Th1型/Th2细胞因子失衡
结核杆菌快速培养系统目前普遍采用MCIG和BACTEC， 速度明显高于传统方法，平均9天可判定结果，缺点是 放射污染率稍高。近来研制出一种快速变色培养基，敏 感性与培养速度与之相当，且污染率低。
6
实验室诊断：病原学
⑵ 噬菌体生物扩增法： 分枝杆菌噬菌体是一种DNA病毒，只
能感染相应的活分枝杆菌。噬菌体增殖周 期速度快，在几分钟～几十分钟不等，利 用这些特性可用于结核杆菌的快速检测及 药敏测定。
基础研究：Th1型/Th2细胞因子失衡
Condos等发现，涂片阴性非空洞性肺结核患者局 部免疫反应以Th1优势为特征，BALF中IFN-γ分 泌明显增高;而涂片阳性空洞性肺结核患者局部则 以单核细胞和巨噬细胞为主，IFN-γ产生减少, 但 随着抗痨治疗后临床症状改善，IFN-γ分泌细胞 重新聚集到肺部。
Th1型/Th2型CK的动态平衡是机体有效控 制结核感染的根本保证，这种平衡一旦被 打破，将导致结核病的发生和发展。
基础研究：结核杆菌基因组学
结核杆菌的全基因组测序工作已完成，共含441 万个碱基对，约4000个基因，3924个开放阅读框 架。其中大部分用于编码脂类代谢酶；10%编码 两类不相关的酸性蛋白，可能与产生抗原变异和 逃逸免疫有关。约40%有功能，44%可能有功能， 16%称为孤儿蛋白。
基础研究：结核杆菌蛋白质组学
Tuny等比对耐异烟肼菌株和敏感株的蛋白质组学 差异，检测出了与异烟肼抗药性有关的蛋白。
现在国际上已建立结核杆菌蛋白质组学跨国合作 研究体系，计划在5年内阐明结核杆菌相关蛋白的 结构和功能，这将大大促进结核发病机制、抗痨 治疗新靶点及新型疫苗的研究。
基础研究：细胞凋亡与结核病
突变有关。
基础研究：结核杆菌蛋白质组学
Jumy等对有毒结核菌株与无毒BCG进行比 较蛋白质组学研究，发现有两种蛋白质仅 在有毒菌株中高度表达，菌种内变异非常 小，有可能成为结核病早期诊断的分子标 志。
基础研究：结核杆菌蛋白质组学
Bahk等采用比较蛋白质组学研究方法发现有两种 蛋白质RRV369和RRV3874在结核杆菌中含量较 高。然后采用联合酶联免疫吸附试验，对肺结核 患者和健康人血清各100份进行检测，结果显示 RRV369和RRV3874诊断肺结核的敏感性分别为 74%和60%，特异性为97%和96%，有望成为肺 结核早期诊断的分子标志物。
Baidu Nhomakorabea
结核杆菌基因组学：耐药基因研究
在结核菌耐药基因研究中，近来发现 ： 约90%～95%的耐利福平菌株有rpoB基因突变； 约47%～58%耐药异烟肼菌株有katG基因突变，
其余则inhA基因或ahpC基因突变； 耐乙胺丁醇菌株与embA、embB基因突变有关； 约72%耐吡嗪酰胺菌株与编码PZA酶的pncA基因
的表现，并造成无法控制的结核杆菌生长与繁殖。
基础研究：细胞凋亡与结核病
Hirsch等研究发现： 活动性结核病患者CD4+和非CD4+T细胞自发凋
亡以及结核杆菌诱导的凋亡发生率显著高于健康 者，T细胞凋亡发生率与T细胞反应呈负相关，即 凋亡率越高则IFN-γ、IL-2水平越低。
经有效抗痨治疗后，自发的与结核杆菌诱导的凋 亡发生率均下降50%，IFN-γ、IL-2水平升高3～ 8倍， 这表明T细胞过度凋亡削弱了机体的抗结核 免疫机制，与结核病发生和发展有关。
关，痰涂阳+为63.9%，++为71.97%，+++为88.2%。 操作影响因素多：需设立多种对照，以保证可靠性，且反
应时间、温度、噬菌体活性含量及特异性、杀毒剂的浓度 及混匀情况等均可影响检测结果。 蛭弧菌感染：蛭弧菌是一种与噬菌体极其相似的寄生微 生物，可在活菌和死菌中增殖，裂解细菌后可产生菌斑， 可造成假阳性，在操作中须避免污染。
病原学诊断：噬菌体生物扩增法
近些年来国内外对此法进行了大量研究，认为有 以下优点： 简便快速，操作简单，不含特殊仪器，检测标本 仅需48小时可得到结果。 灵敏特异，敏感度为200～300条/毫升。 安全可靠，该法将活体菌裂解杀灭，传染性小 价廉
病原学诊断：噬菌体生物扩增法
但此种方法也存在很多问题：
结核病的研究进展
概
况
结核病是仅次于爱滋病的第二大感染性疾病。
由于许多爱滋病死于结核，故在单一感染死因中， 结核病仍居首位。自从在全球范围内开展DOTS 以来，结核病的感染率、病死率及细菌耐药情况 均有降低，但因各国具体实施状况存在很大差异， 所以改善的速度十分缓慢，与预期目标相距甚远。 对于全球结核病防治前景，许多专家并不表示乐 观。
实验室诊断：病原学
⑴抗酸染色和培养：
痰涂片检出率（抗酸染色）约30%～40%，痰中菌量必 须多于5×106/L才能检出；集菌法敏感性可达 60%～ 70%，与标本质量、检测者技术与责任心有关，但无法 区分结核杆菌和非结核杆菌。
国外报道，在痰标本中加入特殊荧光素作标记，可在荧 光显微镜下进行区分。
基础研究：细胞凋亡与结核病
国外研究发现： 线粒体膜结构的完整即线粒体渗透性转换（MPT）
稳定，caspase激活降低和线粒体细胞色素C释放 减少是巨噬细胞发生凋亡的标志，也是有效控制 结核杆菌感染的特征。 线粒体膜完整性受损（MPT降低），caspase激 活增加和线粒体细胞色素C释放增加是细胞坏死
结核病时巨噬细胞适度凋亡是一种免疫保护机制， 可使结核杆菌丧失原有生存环境，导致细菌活力 降低，也可清除炎症部位的感染细胞。
吞噬结核杆菌的巨噬细胞发生凋亡后，细菌被包 埋在凋亡小体内，又被循环单核细胞吞噬，这样 可能会触发更为有效的细胞内杀菌机制。
细胞凋亡还可抑制结核杆菌繁殖，防止结核感染 播散。
基础研究：Th1型/Th2细胞因子失衡
由此可见 ：
Th1型CK主要激活巨噬细胞，增强其杀菌能力， 从而在结核感染中发挥保护性免疫作用。
Th2型CK则抑制Th1型CK和IFN-γ的产生，降低 巨噬细胞杀灭结核菌的能力，从而削弱结核免疫 应答，与结核感染的进展、持续化和慢性化有关。
基础研究：Th1型/Th2细胞因子失衡
结核杆菌快速培养系统目前普遍采用MCIG和BACTEC， 速度明显高于传统方法，平均9天可判定结果，缺点是 放射污染率稍高。近来研制出一种快速变色培养基，敏 感性与培养速度与之相当，且污染率低。
6
实验室诊断：病原学
⑵ 噬菌体生物扩增法： 分枝杆菌噬菌体是一种DNA病毒，只
能感染相应的活分枝杆菌。噬菌体增殖周 期速度快，在几分钟～几十分钟不等，利 用这些特性可用于结核杆菌的快速检测及 药敏测定。
基础研究：Th1型/Th2细胞因子失衡
Condos等发现，涂片阴性非空洞性肺结核患者局 部免疫反应以Th1优势为特征，BALF中IFN-γ分 泌明显增高;而涂片阳性空洞性肺结核患者局部则 以单核细胞和巨噬细胞为主，IFN-γ产生减少, 但 随着抗痨治疗后临床症状改善，IFN-γ分泌细胞 重新聚集到肺部。
Th1型/Th2型CK的动态平衡是机体有效控 制结核感染的根本保证，这种平衡一旦被 打破，将导致结核病的发生和发展。
基础研究：结核杆菌基因组学
结核杆菌的全基因组测序工作已完成，共含441 万个碱基对，约4000个基因，3924个开放阅读框 架。其中大部分用于编码脂类代谢酶；10%编码 两类不相关的酸性蛋白，可能与产生抗原变异和 逃逸免疫有关。约40%有功能，44%可能有功能， 16%称为孤儿蛋白。
基础研究：结核杆菌蛋白质组学
Tuny等比对耐异烟肼菌株和敏感株的蛋白质组学 差异，检测出了与异烟肼抗药性有关的蛋白。
现在国际上已建立结核杆菌蛋白质组学跨国合作 研究体系，计划在5年内阐明结核杆菌相关蛋白的 结构和功能，这将大大促进结核发病机制、抗痨 治疗新靶点及新型疫苗的研究。
基础研究：细胞凋亡与结核病
突变有关。
基础研究：结核杆菌蛋白质组学
Jumy等对有毒结核菌株与无毒BCG进行比 较蛋白质组学研究，发现有两种蛋白质仅 在有毒菌株中高度表达，菌种内变异非常 小，有可能成为结核病早期诊断的分子标 志。
基础研究：结核杆菌蛋白质组学
Bahk等采用比较蛋白质组学研究方法发现有两种 蛋白质RRV369和RRV3874在结核杆菌中含量较 高。然后采用联合酶联免疫吸附试验，对肺结核 患者和健康人血清各100份进行检测，结果显示 RRV369和RRV3874诊断肺结核的敏感性分别为 74%和60%，特异性为97%和96%，有望成为肺 结核早期诊断的分子标志物。
Baidu Nhomakorabea
结核杆菌基因组学：耐药基因研究
在结核菌耐药基因研究中，近来发现 ： 约90%～95%的耐利福平菌株有rpoB基因突变； 约47%～58%耐药异烟肼菌株有katG基因突变，
其余则inhA基因或ahpC基因突变； 耐乙胺丁醇菌株与embA、embB基因突变有关； 约72%耐吡嗪酰胺菌株与编码PZA酶的pncA基因
的表现，并造成无法控制的结核杆菌生长与繁殖。
基础研究：细胞凋亡与结核病
Hirsch等研究发现： 活动性结核病患者CD4+和非CD4+T细胞自发凋
亡以及结核杆菌诱导的凋亡发生率显著高于健康 者，T细胞凋亡发生率与T细胞反应呈负相关，即 凋亡率越高则IFN-γ、IL-2水平越低。
经有效抗痨治疗后，自发的与结核杆菌诱导的凋 亡发生率均下降50%，IFN-γ、IL-2水平升高3～ 8倍， 这表明T细胞过度凋亡削弱了机体的抗结核 免疫机制，与结核病发生和发展有关。