仪器操作-微量核酸蛋白定量仪

注意事项
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使 用 方 法Biblioteka Baidu

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蛋白质直接定量
在280nm波长下直接测试蛋白，是一种蛋白质直接定量方法，适合测试较纯净、成分相对单一、浓度较高 的蛋白质样品。
比色法蛋白质定量
• • 蛋白质样品为混合物，采用比色法测定，原理为氨基酸（如酪氨酸，丝氨酸）与外加的显色基团或者染料反 应，产生有色物质。有色物质的浓度与蛋白质反应的氨基酸数目直接相关，从而反应蛋白质浓度。 比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等。
生命科学仪器操作及实验安全
亓树艳
2017年10月16日
英国Biodrop
美国 Denovix
微量核酸蛋白定量仪
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原理
使用范围
使用方法 思考
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原理
• 紫外可见分光光度计
红外：760nm以上 可见：400—760nm 紫外：200—400nm
原理
• 朗伯-比尔定律（Lamber-Beer Law）
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微量样品：仅需0.5ul-5ul 即可完成检测 直接检测：无需比色杯或毛细管等专门附件 检测范围宽：检测范围可达10~4000ng/ul (dsDNA) ，是常规紫外可见光光度计的几十倍 检测速度快：无预热，随时检测，单个样品仅需 5s 内置常规测量方法，测量后直接显示浓度值
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微量核酸蛋白定量仪
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微量核酸蛋白定量仪
原理
使用 范围
使用步骤： 开机--根据样品选定方法--设定方法参数--空白样品测定--待测 样品测定--测定结束后，样品直接滤纸擦去或者移液器吸走--退 出程序--盖上防尘布 注意事项： • 样品0.5ul-5ul左右 • 使用前后均用ddH2O清洗采样点，滤纸擦净
使用 使 方法 用 方 法
A为吸光度 T为透光率 K为摩尔吸收系数，与吸收物质的性质及入射光的 波长有关 C为吸光物质的浓度 L为溶液厚度
A=-lg(I/I0) =lg(1/T) =KCL
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微量核酸蛋白定量仪
原理
使 用 范 围
使 用 方 法
形成一小段液柱，光路直接通 过液柱进行检测，毋需比色皿 。
0.5mm
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内置采样 点，光程 0.5mm
思考
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A260/A280 、A260/A230 可以标志什么？
核酸的最大吸收峰在260nm、蛋白质的最大吸收峰在280nm、碳水化合物 、胍盐的最大吸收峰在230nm。
吸收曲线是比较固定的，A260/A280 比值基本恒定，DNA 的比值在 1.8 左右 ，RNA 的比值在 2.0。
A260/A280 、A260/A230 是核酸纯度的指示值。 DNA 和 RNA 的
纯净的样品 A260/A280 大于1.8（DNA）或者 2.0（RNA）， A260/A230 的比值大于 2.0 。 如果A260/A280比值低于 1.8 或者 2.0，表示存在蛋白质或者酚类 物质的影响。A230 表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、盐（ 胍盐）等。
思考题
• 对于RNA样品，以下代表可能存在什么污染？ 1、A260/280＝1.7，A260 /230＝0.5 2、A260/280=1~1.5，260/230=1~1.5 3、A260/280>=2，A260/230<1
原理
使用 范围
核酸定量
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是该仪器使用频率最高的功能。可定量测定溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA以及RNA含量。核酸 、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键，具有紫外吸收的特性，最大的吸收波长在260nm，吸收波谷在 230nm。 除核酸浓度，仪器同时显示几个非常重要的比值表示样品的纯度，A260/A280和A260/A230。用于评估样 品的纯度。