海藻糖实验初步方案-1
海藻糖的提取与分离实验设计
目录海藻糖的提取与分离实验设计------------------------------------------ 2 前言----------------------------------------------------------- 2 关键词--------------------------------------------------------- 21、海藻糖的理化性质--------------------------------------------- 21.1密度----------------------------------------------------- 21.2熔点----------------------------------------------------- 21.3溶解热--------------------------------------------------- 21.4甜度----------------------------------------------------- 21.5溶解性、晶体析出性--------------------------------------- 21.6高玻璃化转变温度----------------------------------------- 31.7低吸湿性和保水性----------------------------------------- 31.8耐热、耐酸性--------------------------------------------- 31.9着色性--------------------------------------------------- 32、海藻糖的功效作用--------------------------------------------- 32.1保护功能------------------------------------------------- 32.2抑制淀粉老化--------------------------------------------- 42.3防止蛋白质变性------------------------------------------- 42.4抑制鱼腥味的产生----------------------------------------- 42.5抑制脂质氧化变质----------------------------------------- 52.6矫味作用------------------------------------------------- 53、海藻糖提取分离的原理和影响因素的预判------------------------- 53.1提取分离原理--------------------------------------------- 53.2海藻糖标准曲线的绘制原理--------------------------------- 63.3粉末活性炭脱色脱蛋白效果的表征--------------------------- 73.4离子交换树脂脱盐脱色效果的表征--------------------------- 73.5相关影响因素--------------------------------------------- 74、海藻糖提取分离的实验设计------------------------------------ 84.1实验原料与器材------------------------------------------- 84.2海藻糖提取与分离工艺流程--------------------------------- 94.2.1实验流程----------------------------------------------- 94.2.2相关因素对海藻糖提取效率的影响------------------------- 94.2.3相关因素对粉末活性炭脱色脱蛋白效率的影响-------------- 114.2.4相关因素对离子交换柱脱盐脱色效率的影响---------------- 155、总结------------------------------------------------------------ 17 参考文献----------------------------------------------------------- 18海藻糖的提取与分离实验设计化学132牟丽慧1301020414前言海藻糖是由两个葡萄糖分子以α,α,1,1-糖苷键构成的非还原性糖,广泛存在于海藻、酵母、霉菌、食用菌、虾、昆虫及生物体内，具有保湿性、抗寒抗旱性、耐热耐酸性等特殊的生物学功能，对生物大分子和生物体均有非特异性的保护作用。
海藻糖抑制淀粉质β多肽聚集的实验研究的开题报告
海藻糖抑制淀粉质β多肽聚集的实验研究的开题报告
一、研究背景
淀粉样β蛋白多肽聚集是阿尔茨海默症的重要特征之一，在病理学上被称为“珠质样斑块”。
研究发现，淀粉样β蛋白多肽的聚集是由于其自身的互相作用和聚集行为导致的。
因此，寻找阻止淀粉样β蛋白多肽聚集的药物成为阿尔茨海默症药物研究的重要方向之一。
海藻糖作为一种天然的低聚半乳糖，在保健食品、医药和化妆品等领域已有广泛应用。
研究表明，海藻糖可以抑制淀粉样β蛋白多肽聚集，但其具体作用机制仍需探究。
二、研究内容
本研究旨在探究海藻糖抑制淀粉样β蛋白多肽聚集的作用机制。
具体研究内容如下：
1. 制备淀粉样β蛋白多肽样品，采用动态光散射法(DLS)确定其粒径和稳定性。
在样品中添加不同浓度的海藻糖，通过DLS法检测淀粉样β蛋白多肽的聚集情况。
2. 采用透射电镜(TEM)观察淀粉样β蛋白多肽的聚集状态，研究海藻糖对淀粉样β蛋白多肽聚集形态的影响。
3. 应用荧光共振能量转移(FRET)技术，研究海藻糖对淀粉样β蛋白多肽聚集的抑制作用及其与淀粉样β蛋白多肽之间的相互作用。
4. 利用分子模拟技术分析海藻糖与淀粉样β蛋白多肽的结合模式及其相互作用机制。
三、研究意义
本研究有助于了解海藻糖抑制淀粉样β蛋白多肽聚集的作用机制，并为进一步研究开发阿尔茨海默症药物提供参考。
此外，本研究的成果还有助于拓展海藻糖的应用领域，为其在医药、保健食品和化妆品等领域的开发和应用提供科学依据。
海藻糖涂膜脐橙贮藏保鲜效果的研究
海藻糖涂膜脐橙贮藏保鲜效果的研究摘要：本实验研究了在4.0±0.5℃，85%-90%RH贮藏条件下，0.5%、1.0%、1.5%、2.0%浓度的海藻糖涂膜对脐橙采后品质和生理代谢的影响。
研究表明，1.0%、1.5%的海藻糖处理能够有效维持可溶性固形物在较高水平，抑制膜质过氧化及可滴定酸和还原糖含量的下降，延缓过氧化物酶（POD）活性的下降，降低脐橙果实贮藏期间的丙二醛（MDA）含量，并以1.5%的海藻糖处理最为有效。
此保鲜剂在一定程度上能延长脐橙的贮藏期。
关键词：脐橙,海藻糖,保鲜脐橙有很高的食用价值和药用价值，但其在贮运、销售过程中易失水枯萎、腐烂变质。
传统的化学保鲜剂毒性较大，易危害人体健康，故研究和开发高效、天然、无毒的新型保鲜剂非常必要。
提高果蔬品质、发展果蔬保鲜技术既是我国果蔬业可持续发展的前提，也是我国农产品的新的经济增长点。
用海藻糖溶液处理脐橙，能防止软化，保持其良好的组织状态，延长货架寿命[1]，且实验表明其对动物无毒性[2]。
1材料与方法1.1 材料本试验所用脐橙果实八分熟，大小均一，无损伤，新鲜无腐烂。
主要设备：电热恒温水浴锅HWS24型、紫外可见分光光度计UV-2102PCS型、电导仪DDS-11A型、HJ-3恒温磁力搅拌器、冷冻高速离心机、冰柜BD/BC-210A 型。
主要试剂：海藻糖（分析纯）、硫代巴比妥酸（分析纯）、愈创木酚（分析纯）。
1.2 方法1.2.1 清洗：将采回的果实在24h内用0.1%的次氯酸钠浸泡3min进行抑菌处理，拿出晾干。
1.2.2 涂膜：将海藻糖用蒸馏水溶解成浓度依次为0%（对照组）、0.5%、1.0%、1.5%、2.0%的溶液。
将脐橙置于不同浓度的海藻糖溶液中5min，浸泡成膜，取出晾干后用聚乙烯包装袋包裹。
每组处理60个脐橙。
1.2.3 贮藏：将包装好的脐橙放入4.0±0.5℃的冰柜中贮藏90天，每15d测定一次相关指标。
海藻糖鉴别(3)、有关物质、含量的测定方法验证
海藻糖鉴别（3）、有关物质、含量的测定方法验证作者：李宁刘昶李镇宏来源：《科学与财富》2019年第36期摘要：建立一个用高效液相色谱法测定海藻糖鉴别（3）、有关物质和含量测定的方法。
方法：以磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为填充剂的强阳离子氢型色谱柱 ;以水为流动相 ;检测45℃，柱温80℃，流速0.4ml/min。
结果：海藻糖在1.0027472～15.04419mg/ml浓度范围内线性关系良好，得线性方程y=0.0000022x-0.037297（R2=0.9999），回归系数大于0.999; ;结论：该方法简便、准确，可用于海藻糖鉴别（3）、有关物质和含量的质量控制。
关键词：海藻糖;高效液相色谱法示差检测器;方法学海藻糖是一种对生物体具有神奇的保护作用的二糖，它能够有效地保护蛋白质分子不变性失活，从而维持生命体的生命过程和生物特征。
所以海藻糖在食品、药品和化妆品领域都有广泛的应用。
特别是在医药领域今后几年需求量会有较大的增长。
而海藻糖的鉴别、有关物质和含量的检测是用高效液相RID检测器检测，RID检测器为特殊检测器，应用不是很广泛。
本文拟建立海藻糖鉴别（3）、有关物质和含量测定的方法，旨在为海藻糖的质量安全提供参考。
进一步确立海藻糖的使用安全。
1.實验部分1.1试剂与仪器海藻糖、麦芽三糖、无水葡萄糖对照品来源中国食品药品检定研究院。
纯化水，自制。
海藻糖样品。
安捷伦1260高效液相色谱仪系统（配有示差折光检测器、四元梯度泵、在线脱气装置、自动进样器、柱温箱）。
电子天平：梅特勒托利多电子天平（XS105DU）。
1.2试验方法色谱条件与系统适应性 ;以磺化交联的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物为填充剂的强阳离子氢型色谱柱;以纯水为流动相 ;示差折光检测温度为45℃，柱温80℃，流速0.4ml/min，采集运行30min。
对照品溶液的制备 ;精密称定麦芽三糖、无水葡萄糖、海藻糖对照品，分别为24.41mg、24.26mg、93.06mg，置于同一个10ml量瓶中，加水溶解并稀释制成每lml中各含2.441mg、2.424mg、9.287mg的溶液为对照1，再精密称定海藻糖对照品252.20mg置于25ml量瓶中加水溶解并稀释至刻度制成每1ml含海藻糖10.027mg的溶液为对照2。
海藻糖含量检测试剂盒说明书
海藻糖含量检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0335规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体100 mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2瓶2-8℃保存标准品粉剂×1支2-8℃保存溶液的配制：1、标准品：10 mg 海藻糖。
临用前加1 mL蒸馏水，溶液浓度为10 mg/mL，2-8℃保存两周；2、工作液的配制：临用前取1瓶试剂一加入3.5 mL蒸馏水后，缓慢加入14 mL浓硫酸，不断搅拌，充分溶解，待用。
用不完的试剂2-8℃保存一周。
产品说明：海藻糖存在于大量有机体中，包括细菌、藻类、酵母、植物、昆虫和其他无脊椎动物。
由于海藻糖具有独特的不同于其他碳水化合物的生物学特性，能在干旱、高温、脱水、冷冻、高渗透压及毒性物质等恶劣环境下保护生物体细胞蛋白质、脂肪、糖类、核酸等组分不受损害。
测定方法采用蒽酮比色法。
具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样本的测定等优点。
但是蒽酮比色法也存在一定缺陷，如果样本中含有可溶性糖，则会影响测定。
本试剂盒建议用于除海藻糖外不含其他可溶性糖样本的测定。
Trehalose+ H2SO4Furfural Derivatives（620nm）技术指标：最低检出限：0.0055 mg/mL线性范围：0.00625-0.4 mg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机，可调式移液器、超声破碎仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、浓硫酸和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率200w，超声3秒，间隔10秒，重复30次），室温静置45min，振荡3~5次，冷却后，8000g，常温离心10min，取上清。
海藻糖提取工艺研究
本 实验通过 葸酮一 硫 酸 法 测 定 海 藻 糖 的 量 。将 提 取
液 按 一定 比例稀 释后 与 蒽 酮硫 酸溶 液 以 １ ： ４的 比例 混
合 反应 ，在 ５ ９ ０ ｎ ｍ处测 吸光值 。所 得 的吸光值 即为稀
释 液 中 相 应 的 含 量 ，通 过 计 算 既 能 得 出 酵 母 中 海 藻 糖
表 １ 海 藻 糖 标 准 液 的 配 制
有 “ 生 命 之 糖 ”称 号 的海 藻 糖 具 有 非 特 异 性 保 护 功 能 。它 不 仅 可 以作 为 生 物 体 内 的 能量 储 备 ，也 可 以保 护 体 内完 整 细 胞 免 受 外 界 恶 劣 条 件 的 侵 害 ，更 值 得 关 注 的
高 活 性 安 琪 酵母 （ 安琪 股 份 有 限公 司 ） 。
１ ． ２ 实 验预 处 理
三 氯 乙 酸 、浓 硫 酸 、 乙 醇 、蒽 酮 、海 藻 糖 标 准 品 （ 上 海 恒 信 化学 试 剂 有 限 公 司 ） 。
１ ． ３ 实 验 仪 器
Ｍ ，温 度 为 ９ ０℃ ，用 量 为 １ ２ ０ ｍＬ，反 应 时 间 为 ７ ０ ｍｉ ｎ，得 率 为 １ ８ ． ９ ％。 关 键 词 ：酵母 ；海 藻糖 ；提 取 工 艺 ；三 氯 乙酸 中图 分 类 号 ：Ｔ Ｓ ２ ４ ４ 文 献 标 识 码 ：Ａ ＤＯＩ ：１ ０ ． １ ９ ５ ４ １ ／ ｊ ． ｅ ｎ ｋ ｉ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ｌ ０ ０ ４ — ４ １ ０ ８ ． ２ ０ １ ７ ． ０ ３ ． ０ ２ ５
取 一 定 量 的 酵 母 粉 平 铺 于 培 养 皿 中 ，０ ． ５ ｍ ｎ ｌ 左 右 的 厚 度 ，放 于 ９ ０℃的烘 箱 中处 理 ６ ～ ８ ｈ ，使 酵 母 的细 胞 壁 破 裂 ， 以提 高 提 取 率 。
蒽酮比色法测定酵母菌中海藻糖含量实验报告
2.1 酵母菌中海藻糖→TCAaq
2.2 海藻糖→葡萄糖→糖醛
2.3 糖醛+蒽酮→蓝绿色复合物→分光光度计测量
3. 试剂与仪器
1） 化学试剂
2g/L 蒽酮试剂：称取 0.10g 蒽酮溶于 50ml80%（体积分数）H2SO4 中，0.1g/L 标准葡萄 糖溶液，5g/L 三氯乙酸水溶液（TCA）。
2） 测量仪器
沸水浴、冰水浴、53WB 分光光度计、离心机
4. 实验步骤
准备试剂与仪器
↓ 称量 30mg 干酵母
↓ 加入 3mlTCAaq
↓ 离心，取上清液稀释 40 倍
↓ 配制蒽酮溶液
↓
1
实验 4 蒽酮比色法测定酵母菌中海藻糖含量
取 5 支编号试管，加如下溶液
↓ 表一、溶液配制组成
编号
1
2
3
4
葡萄糖/ml
0
0.3
4）使用离心机要注意哪几个问题？
两侧必须配平，注意安全。
5）53WB 分光光度计的原理及操作注意事项是什么？ 原理：
分光光度计测量的是分子内电子跃迁产生的带状吸收光谱。根据不同的特征峰可以进行
定性测量，根据朗伯比尔定律可以进行定量测量。
注意事项：
溶液必须为均匀溶液，拿放石英皿要轻拿轻放，注意透光侧的光洁。
四、自评
这次实验在张老师的带领下收获颇多。首先在实验中老师反复强调了安全的重要性，这
让我加强了自己的安全意识。在实验流程的书写、数据处理的规范上老师也让我了解了正确
的做法，这些均对于我以后的科研生活有着很大的帮助，希望能够在以后的实验中越做越好。
五、参考文献
[1]王保国，化工过程综合实验（第 2 版），清华大学出版社，北京，2009 年 10 月。
海藻糖对液态低温保存血小板保护作用的实验研究(一)
海藻糖对液态低温保存血小板保护作用的实验研究(一)作者：崔云，刘璐，黄成垠，尹其华,黄鹰〔摘要〕目的：研究海藻糖对液态低温（4℃）保存血小板的保护作用。
方法：采集兔心脏血，按常规方法制备浓缩血小板（CP），在CP中加入不同浓度的海藻糖，4℃储存，用51Cr铬酸钠进行标记后自体回输入兔体内，于回输后1、24、48、72h抽取兔耳动脉血，测定放射性计数率，计算24、48、72h血小板存活率，同时设常温对照组及单纯4℃储存的低温对照组进行比较。
结果：加入不同浓度海藻糖各储存组的血小板寿命明显长于低温对照组，并且随着海藻糖浓度的增加而延长。
结论：海藻糖可延长4℃液态保存血小板的寿命，对血小板具有保护作用。
〔关键词〕海藻糖；血小板；液态；储存；4℃；51铬Abstract：ObjectiveTostudytheprotectionoftrehaloseforliquidrabbitplateletsstoredat4℃tracedby51Cr.Meth odsCardiacbloodwastakenandmadeintoconcentratedplatelet(CP).CPwerestoredatdifferentconditi ons,suchaslowtemperatureandlowtemperature+differentdoseoftrehalosefor24h.Plateletsweretra nsfusedintorabbits’bodiesafterbeinglabelledwith51Crandplateletlifespanof24,48,72hwascalculate d.ResultsAftertrehalosewasaddedintotheplateletsstoredat4℃,thelifespanwasobviouslylongertha nthatofplateletsstoredatlowtemperature.Andwiththedoseincreasing,thelifespanofplateletswespr olongedobviouslytillthedosewasmorethan50mg・ml-1.ConclusionTrehalose，protectingplatelets,canprolongthelifespanofliquidplateletsstoredatlowtemperature. Keywords：trehalose;platelet;liquid;storage;4℃;51Cr海藻糖对液态低温保存血小板保护作用的实验研究在对大量失血和化疗、放疗等处理造成血小板减少患者的治疗过程中,需要进行血小板输注。
海藻糖实验初步方案-1
海藻糖实验初步工艺一、项目简介海藻糖（Trehalose）是由两分子葡萄糖通过α-1,1糖苷键结合的非还原性双糖，无毒无害，具有非着色性、耐酸、耐热、低吸湿性等特性，具有抗辐射、防止蛋白质变性、稳定组织细胞结构与保鲜效果、抗冷冻保护、稳定物料中超氧化物歧化酶等诸多功能。
当生物细胞处于干燥、高温、高压等恶劣环境，海藻糖对生物和生物大分子有良好的非特异性保护作用，在科学界素有“生命之糖”的美誉。
随着其独特的生物学性质及功能的发现，海藻糖逐渐成为国际上研究热点。
二、海藻糖国内外市场概况海藻糖在食品工业、生命科学、医药、农业、化妆品工业等领域都有着广阔的应用前景。
2000年，美国FDA授予海藻糖GRAS(安全健康食品)，联合国粮农组织和世界卫生组织(FAO/WHO)食品添加剂联合专家委员会确认对海藻糖的每日允许摄入量(ADI)不需特别限制；2001年，欧盟批准海藻糖作为新型食品或食品添加剂进入其市场。
海藻糖由此成为热门的产品，掀起了应用研究的高潮，在国际市场上的需求量连年剧增，至今已在欧洲、北美和亚洲国家被广泛应用于上万种商品中。
估计今后几年，海藻糖国际市场的年需求量将达15万吨以上。
国际的海藻糖年产量约5万吨，经调研，国内的海藻糖年产量约4千吨，市场存在着严重的空缺。
海藻糖的市场前景较好。
三、实验材料1、菌株扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)的海藻糖高产突变株A11:中国海洋大学实验室分离并保存。
2、培养基和试剂及仪器YPD (Yeast Polypepton Dextrose)培养基：1.0%(w/v)酵母膏，2.0%(w/v) 葡萄糖，2.0%(w/v)蛋白胨。
YPS (Yeast polypepton starch)培养基：1.0%(w/v)酵母膏，2.0%(w/v)可溶性淀粉，2.0%(w/v)蛋白胨。
黄豆饼粉水解液培养基：4.0%(w/v)黄豆饼粉水解液，1.0%(w/v)可溶性淀粉。
10%海藻糖的渗透压__概述说明以及解释
10%海藻糖的渗透压概述说明以及解释1. 引言1.1 概述在当前的研究领域中，渗透压被广泛应用于多个学科，包括生物学、化学和食品工业等领域。
海藻糖是一种常见的渗透剂，在这些领域中发挥着重要的作用。
本文将对海藻糖的渗透压进行概述，并探讨其在不同领域中的影响。
1.2 研究背景渗透压是指溶液中溶质分子或离子引起的水分子流动性差异。
在生物体内，细胞具有自己特定的渗透压水平，维持细胞正常功能运行所必需。
而海藻糖作为一种常见的保护剂和营养源，在各种环境条件下被广泛存在于许多生物体中，参与调节其细胞渗透压。
1.3 目的与意义本文旨在全面了解海藻糖在调节渗透压方面具有的作用以及其重要性。
我们将深入探讨海藻糖对细胞渗透压的影响机制，以期为生物学和食品工业中的应用提供理论基础，并展望未来的研究方向和发展趋势。
通过对海藻糖渗透压的深入研究，我们可以更好地理解细胞内外环境调节的机制，从而为相关领域的发展做出贡献。
2. 海藻糖的渗透压2.1 海藻糖概述海藻糖，也被称为甘露醇，属于多羟基醇类物质。
它是一种具有甜味且可溶于水的天然糖分子，在自然界中广泛存在于海藻、蜜源植物等生物体中。
海藻糖由于其特殊的化学性质和广泛的应用价值，在食品工业、医药领域和科学研究中备受关注。
2.2 渗透压的概念和作用渗透压是指溶液在半透膜上引起液体渗透現象时所产生的压力。
简单来说，就是通过浓度差使溶液发生跨膜运输，并维持溶液内外部分子平衡状态的能力。
渗透压在自然界和生物体内起着重要作用。
在自然界中，比如植物细胞和动物细胞，渗透压可以调节细胞内外水分平衡，并影响细胞形态和功能的稳定性。
在生物体内，各种生理液体（如血浆、细胞液）的渗透压调节对于机体代谢和正常功能的维持至关重要。
2.3 海藻糖对渗透压的影响海藻糖作为一种具有低渗透性的物质，可以在生物体内进行有效的渗透调节。
在高浓度环境下，当其他分子无法通过半透膜时，海藻糖可以通过增加溶液中具有渗透作用的颗粒数目来提高溶液的渗透压。
海藻糖
海藻糖水解酶蛋白的重组表达09生物2 车纯北京电子科技职业学院前言：我们利用酶转化淀粉法，利用低聚麦芽糖基海藻糖生成酶把麦芽低聚糖合成为麦芽低聚糖海藻糖，在利用低聚麦芽糖基海藻糖水解酶把麦芽低聚糖海藻糖水解成海藻糖和麦芽低聚糖。
我们先设计扩增海藻糖水解酶基因的引物，通过培养玫瑰微球菌从中提取基因组，再用琼脂糖凝胶电泳检测基因组，选出我用琼脂糖凝胶电泳检测我们所扩增好的们所要用的基因片段，放入编好程序的PCR仪中，进行PCR 扩增，最后再目的基因。
关键词：海藻糖、酶转化淀粉法、琼脂糖凝胶电泳、PCR技术绪论：海藻糖，英文名Trehalose ，是一种安全、可靠的天然糖类，分子式C 12H 22O 11，英文化学名称（α-D-glucosido-α-D-glucosidemycose ）。
海藻糖是一种安全的天然糖类,日常生活中食用的蘑菇类、海藻类、豆类、 虾类、啤酒及酵母中都有含量较高的海藻糖。
由于海藻糖对生物体具有神奇的保护作用，是因为海藻糖在高温、高寒、高渗透压及干燥失水等恶劣环境条件下在细胞表面能形成独特的保护膜，有效地保护蛋白质分子不变性失活，抗逆保鲜等独特的生物学特性，从而维持生命体的生命过程和生物特征。
另外，在加热过程中不易与氨基酸和蛋白质发生美拉德反应。
在 pH 值为 3.5～10.0 范围的溶液中，保持 1000℃、24h ，分解率仅为 1％。
海藻糖几乎不能被一般的酶所分解，只能被特异性的海藻糖酶分解。
这独特的功能特性，使得海藻糖除了可以作为蛋白质药物、酶稳定剂、疫苗、器官移植的保护液和其他生物制品的优良活性保护剂以外，还作为食品添加剂，甜味剂，本品的甜度相当于蔗糖45%；将本品添加到含水蛋白食品中，在冰点以上冷冻干燥，可使食品不变质；因本品为非还原性糖，与氨基酸及蛋白质共同加热时，不会发生褐变反应；本品耐酸、耐热性好，加到食品中不变色、不分解、易消化、易吸收，与蔗糖相比，产生龋齿性小；可防止淀粉老化，化妆品方面，用于护肤品，保持皮肤的高水分；用于唇膏基料；也可用于化妆水、面乳、香精等]1[。
一种制备海藻糖的方法
一种制备海藻糖的方法
海藻糖是一种从海藻中提取的天然甜味剂。
以下是制备海藻糖的一种常见方法：
材料:
- 红藻类海藻（如鳨尾藻、柳枝藻等）
- 纯净水
- 碱性溶液（如氢氧化钠）
- 酸性溶液（如盐酸）
- 活性炭或其它吸附剂
步骤:
1. 将海藻洗净并切碎成小块，然后浸泡在纯净水中，浸泡的时间可以根据需要调整，通常为数小时至一整夜。
这个过程有助于将海藻中的杂质去除。
2. 将藻体与纯净水混合物过滤，以去除残留的固体颗粒。
3. 取过滤后的水中加入碱性溶液（如氢氧化钠），以改变溶液的pH值。
碱性溶液的加入有助于溶解和释放藻体中的多糖类物质。
4. 通过搅拌和加热将溶液中的多糖物质完全溶解。
5. 将溶液过滤去除残留的固体颗粒。
6. 取过滤后的液体加入酸性溶液（如盐酸），以改变溶液的pH值。
酸性溶液的加入有助于使多糖物质凝聚和析出。
7. 过滤和洗涤析出的多糖物质，以去除多余的盐酸和杂质。
8. 将析出的多糖物质进行干燥，可以使用低温真空干燥法或喷雾干燥法等方法。
9. 将干燥的多糖物质进行研磨和精炼，以获得纯净的海藻糖。
这是一种常用的制备海藻糖的方法，但具体的步骤和条件可能会因制备人员和实验条件的不同而有所变化。
确保操作过程中的卫生和安全，并根据自己的需要和实际情况进行调整。
活性污泥海藻糖含量的测定方法与设计方案
本技术涉及一种活性污泥海藻糖含量的测定方法，属于环境工程学科中的污水生物处理技术领域。
为了实现海藻糖在污水生物处理技术领域内的应用，本技术以蒽酮比色法为基础，对活性污泥微生物细胞内的海藻糖进行三氯乙酸-超声联合提取，海藻糖遇浓硫酸脱水生成糠醛及其衍生物，该衍生物与蒽酮发生反应，反应后溶液呈蓝绿色，在610nm处比色测定活性污泥中海藻糖的含量。
本技术的积极效果是该法安全可靠、简单易行，成本较低，测定精度高，可实现活性污泥中海藻糖的准确快速测定。
技术要求1.本技术的使用特征是：活性污泥海藻糖含量的测定过程中，取0.8mL的活性污泥混合液置于离心机中离心，用蒸馏水冲洗、搅拌离心所得活性污泥再离心，去掉上清液后加入三氯乙酸溶液，通过超声处理后离心，取其上清液加入蒽酮试剂，冷却后置于沸水浴中6min，再冷却，用1cm比色皿在610nm波长下测定吸光度，最后根据吸光度和污泥称重结果计算活性污泥细胞内海藻糖含量。
技术说明书一种活性污泥海藻糖含量的测定方法技术领域本技术属于环境工程学科中的污水生物处理技术领域，具体涉及一种活性污泥海藻糖含量的测定方法。
背景技术海藻糖(Trehalose)是一种非还原性二糖，由2个葡萄糖分子以α，α，1，1-糖苷键连接而成，分子式为C12H22O11·2H2O，相对分子量为378.33，白色结晶，化学性质极其稳定，无毒无害，不会焦糖化。
研究表明，海藻糖对生物体具有神奇的保护作用，是生物体应对外界环境刺激的一种重要代谢产物。
生物体在恶劣环境下表现出的抗逆耐受力与它们体内存在的海藻糖含量密切相关，生物体可以通过调节合成体内海藻糖来抵御外界伤害。
目前，生物体海藻糖分析测定技术已广泛应用于食品、医药、化妆品等产业领域，但在环境工程领域内至今没有得到应用。
由于在实际运行的污水生物处理系统中活性污泥时刻承受着因负荷变化、环境温度变化、pH值变化等带来的冲击，这种冲击也会反映在污水生物处理工艺中活性污泥的海藻糖含量水平上，因此通过分析测定活性污泥微生物细胞内海藻糖含量，可以准确地表征出活性污泥受到外界环境刺激的程度，并可寻找利用外援海藻糖强化活性污泥应激能力的技术方法。
10%海藻糖折射率测量
10%海藻糖折射率测量
海藻糖的折射率是指光线从真空中射入海藻糖后发生折射的程度。
通常使用折射仪或折射计来测量海藻糖的折射率。
对于10%海藻糖溶液的折射率测量，可以按照以下步骤进行：
1. 准备好10%海藻糖溶液。
可以根据需要将适量的海藻糖溶解在水中，直至溶液中海藻糖的浓度为10%。
2. 将折射仪或折射计校准至大气压下的折射率。
这可以通过将仪器放置在大气中进行校准，或按照仪器的使用手册进行校准步骤。
3. 将10%海藻糖溶液倒入折射仪或折射计的测量池中，确保池中的溶液充满，并避免气泡的存在。
4. 观察仪器上显示的折射率数值。
根据仪器的不同，可能需要调节一些参数或按下相应的按钮来获取准确的折射率数值。
5. 记录下测得的10%海藻糖溶液的折射率数值。
这样就完成了10%海藻糖溶液的折射率测量。
根据实验需要，可以重复上述步骤多次，并求得平均值以提高测量准确性。
海藻糖 色谱分离
海藻糖色谱分离海藻糖（trehalose）是一种具有重要生理功能的二糖，它可以通过色谱技术进行分离和分析。
常用的色谱分离方法包括高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）。
下面分别介绍这两种方法的操作步骤：1. 高效液相色谱（HPLC）分离海藻糖：a. 准备HPLC分析仪器和色谱柱（常用的是C18反相柱）。
b. 准备样品溶液：将待分离的海藻糖溶于适当的溶剂中，并过滤以去除杂质。
c. 设置HPLC系统的流动相和流速。
流动相可以是水、甲醇、醋酸等不同的组合，具体根据需要来设定。
流速一般在0.5-1.5 mL/min之间。
d. 注入样品溶液到色谱柱中，并开始分离。
分离时可利用梯度洗脱方法，即逐渐改变流动相的组成，以实现对不同物质的分离。
e. 通过检测器（如紫外检测器）检测目标化合物的吸收峰，根据峰的形状和峰面积来定量和鉴定海藻糖。
2. 气相色谱（GC）分离海藻糖：a. 准备GC分析仪器和色谱柱（常用的是毛细管柱）。
b. 准备样品溶液：将待分离的海藻糖溶于适当的溶剂中，并通过蒸发浓缩的方式进行样品前处理。
c. 设置GC系统的流动相和流速。
流动相可以是惰性气体（如氮气、氦气等），流速一般在1-3 mL/min之间。
d. 将样品溶液注入气相色谱仪中，并开始分离。
分离时可利用升温程序，逐渐提高炉温以实现对不同物质的分离。
e. 通过检测器（如质谱检测器）检测目标化合物的质谱图，根据峰的形状和峰面积来定量和鉴定海藻糖。
需要注意的是，无论是HPLC还是GC分离海藻糖，都需要合适的标准品进行定量和鉴定。
同时，在样品前处理和柱温、流动相等实验条件的选择上，也需要进行优化和验证，以获得准确和可靠的结果。
适量添加海藻糖 有效改善面包品质
食品实验FOOD EXPERIMENT适量添加海藻糖有效改善面包品质■文丄王颖吏勇一途州工程学院食品与生拗工■程学院•jzg〒包营养丰富、食用方便，但保质期较短，为田J了解决这一问题，企业大多采用冷冻面团的方法。
不过，冷冻面团在冷冻、贮存及解冻过程中由于各种因素的影响会导致品质不高，在众多影响因素中，酵母和面粉的特性对冷冻面团生产面包的质量影响程度最大。
海藻糖是由2分子的葡萄糖结合而成的非还原性二糖，具有独特的抗冷冻和抗脱水的生物学功能，在动物、植物和微生物中广泛存在。
本文利用海藻糖的生物保护特性，研究其在面团速冻、冻藏和解冻过程中的作用，以期获得良好品质的冷冻面团。
一、材料与设备1.材料与试剂。
即发活性干酵母：法国燕子牌；海藻糖（食用纯）：江苏维之润生物科技有限公司；麦芽糊精（食用纯）：山东嘉裕化工有限公司；亚甲基蓝（分析纯）：北京化工厂；葡萄糖（分析纯）：天津市福晨化学试剂厂；氯化钾（分析纯）：上海东懿化学试剂公司；碳酸氢钠（分析纯）：北京世纪拓鑫精细化工有限公司；无水氯化钙（分析纯）：鹏彩化工有限公司；氯化钠（分析纯）：天津福晨化学试剂厂；面粉（食用纯）：五得利公司；奶粉（食用纯）：飞鹤奶粉；黄油（食用纯）：安家黄油。
2.仪器与设备。
XMTD-204数显恒温水浴锅，国华电器有限公司；HJM胶体磨，上海东华高压均质机厂；FA1004B电子天平，上海精密仪器仪表有限公司；雾化面包发酵箱，广东德焙机械科技有限公司；D8023格兰仕微波炉，格兰仕有限公司；ZC-KH电烤箱，上海志程机械设备有限公司；SD2BOD豆浆搅拌机，西贝尔有限公司；MDRP-5高速离心喷雾二流体两用干燥机，锡山市阳光干燥设备厂；生物显微镜，南京江南永新光学有限公司；XK24-1060007电热恒温培养箱，上海跃进医疗器械厂。
二、方法1.海藻糖对酵母抗冻能力影响的实验方法。
取2g即发活性干酵母，加水30ml、海藻糖lg在40°C下活化20min,加入面粉100g、绵白糖3g、起酥油4g、奶粉7.5g、食盐1.5g和水30ml,搅匀后取10g面团，搓成条后放入试管内压实。
《第2章第2节 动物细胞工程—动物细胞培养》分层作业1
《第2章第2节动物细胞工程—动物细胞培养》分层作业1一、单选题1．如图是动物细胞培养过程中可能出现的接触抑制现象，对此下列有关叙述错误的是（）A．正常动物细胞培养过程中均会出现接触抑制现象B．癌细胞无接触抑制因而培养时可形成多层细胞C．出现接触抑制时细胞将停止分裂活动D．出现接触抑制后需利用胰蛋白酶消化后才可进行传代培养2．下列有关动物细胞培养及细胞工程的叙述，正确的是（）A．动物组织培养过程中不会出现细胞的分化B．动物成熟体细胞的细胞核仍然具有脱分化和使其后代细胞再分化实现全能性的能力C．培养骨髓瘤细胞时要定期使细胞从培养瓶壁上脱离，以解除接触抑制D．细胞传代培养过程中，一定要用到胰蛋白酶处理3．某研究小组为测定药物对体外培养细胞毒性的大小，准备对某种动物的肝肿瘤细胞（甲）和正常肝细胞（乙）进行动物细胞培养。
下列说法正确的是（）A．制备肝细胞悬液时，可用胃蛋白酶代替胰蛋白酶处理肝组织B．CO2培养箱中CO2浓度维持在5%左右，以促进细胞呼吸C．本实验应设置对照实验，以检测药物对甲、乙的毒性大小D．为防止细胞培养过程中细菌的污染，需适量添加干扰素4．下列关于动物细胞培养所需条件的叙述，错误的是（）A．无毒、无菌的环境B．温度与动物体温相近C．不需要O2，需要CO2调节培养液的pH D．合成培养基中通常需加入血清5．一般来说，动物细胞体外培养需要满足以下条件（）①无毒的环境②无菌的环境③培养基需加动物血清④温度与体温相近⑤需要O2，不需要CO2⑥需要保持稳定的pHA．①②③④⑤⑥B．①②③④C．①③④⑤⑥D．①②③④⑥6．下列关于动物细胞培养的叙述，错误的是（）A．一般选取动物胚胎或幼龄组织细胞进行细胞培养B．为防止杂菌污染，可在培养基中添加一定量的抗生素C．培养动物细胞的培养基中无需添加血清、血浆，以免造成污染D．定期更换培养液，防止细胞代谢产物积累对细胞自身造成危害7．下图为动物成纤维细胞的培养过程示意图。
海藻糖果的制作实验指导
海藻糖果的制作实验指导一、实验目的1．理解海藻糖果的制作原理；2．掌握海藻糖果制作的工艺流程。
二、实验原理硬糖是一种坚脆的透明似玻璃态的无定形固体。
它是经过高温熬煮脱水浓缩而成。
硬糖含水分较低，一般浓度在98％以上，是最坚硬的一种糖果,所以称为硬糖。
在硬糖制作过程中，将处理过的海藻与硬糖充分地溶合在一起，即成海藻糖果。
三、实验材料与设备1、实验材料淀粉糖浆、白砂糖、海带、柠檬酸。
2、实验设备熬糖锅、电磁炉、鼓风恒温干燥箱、组织捣碎机、电子天平等。
四、实验内容1、工艺流程海带→浸泡→预处理→搅碎↓砂糖、淀粉糖浆+水→溶化→过滤→溶合→常压熬煮→冷却→凝结→切块→包装2、参考配方：海带1Kg、淀粉糖浆1.2Kg、白砂糖2.8Kg、柠檬酸10ml。
3、操作要点（1）海带处理：海带1Kg预先用凉水浸泡0.5h，水量约为海带5倍。
经洁净、煮熟、冷却、搅碎后备用。
（2）溶糖根据硬糖的制造原理，要制成无定型硬糖，需要彻底破坏糖的结晶状态。
溶糖的工艺目的就是利用砂糖易溶于水的特点将结晶状态的糖变成分子状态的糖溶液，达到改变砂糖结晶状态的目的。
溶糖的加水量：在常温常压下 1.4Kg水能溶解2.8Kg砂糖,也就是糖液中含33％左右的水。
随着温度上升到90°C时加水量也是需20％。
以此作为依据。
再考虑到糖浆干固物含量，加热过程中水分的损失，溶糖的温度等因素。
加水量一般控制在30％左右。
为了求得溶糖的正确水量，可通过W=0.3Ws-Wm 经验公式计算求得 (W：实际加水量kg； Ws：配料中干固物总重量kg； Wm：配料中水分总含量kg)溶糖的操作要点：①按配方正确投料，加水量按规定。
当糖温升至108～110℃，即为熬汤终点。
②糖浆加热到 105-107℃，加入淀粉糖浆1.2Kg，浓度为75-80％。
糖液沸腾后要静止片刻，使砂糖、葡萄糖浆充分溶合。
③溶糖时要不断搅拌 ,防止糖浆结焦或溶解不彻底。
④糖液不能放在加热锅内太久 ,防止糖液转化糖增加，色泽变深。
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海藻糖实验初步工艺一、项目简介海藻糖（Trehalose）是由两分子葡萄糖通过α-1,1糖苷键结合的非还原性双糖，无毒无害，具有非着色性、耐酸、耐热、低吸湿性等特性，具有抗辐射、防止蛋白质变性、稳定组织细胞结构与保鲜效果、抗冷冻保护、稳定物料中超氧化物歧化酶等诸多功能。
当生物细胞处于干燥、高温、高压等恶劣环境，海藻糖对生物和生物大分子有良好的非特异性保护作用，在科学界素有“生命之糖”的美誉。
随着其独特的生物学性质及功能的发现，海藻糖逐渐成为国际上研究热点。
二、海藻糖国内外市场概况海藻糖在食品工业、生命科学、医药、农业、化妆品工业等领域都有着广阔的应用前景。
2000年，美国FDA授予海藻糖GRAS(安全健康食品)，联合国粮农组织和世界卫生组织(FAO/WHO)食品添加剂联合专家委员会确认对海藻糖的每日允许摄入量(ADI)不需特别限制；2001年，欧盟批准海藻糖作为新型食品或食品添加剂进入其市场。
海藻糖由此成为热门的产品，掀起了应用研究的高潮，在国际市场上的需求量连年剧增，至今已在欧洲、北美和亚洲国家被广泛应用于上万种商品中。
估计今后几年，海藻糖国际市场的年需求量将达15万吨以上。
国际的海藻糖年产量约5万吨，经调研，国内的海藻糖年产量约4千吨，市场存在着严重的空缺。
海藻糖的市场前景较好。
三、实验材料1、菌株扣囊复膜酵母(Saccharomycopsis fibuligera)的海藻糖高产突变株A11:中国海洋大学实验室分离并保存。
2、培养基和试剂及仪器YPD (Yeast Polypepton Dextrose)培养基：1.0%(w/v)酵母膏，2.0%(w/v) 葡萄糖，2.0%(w/v)蛋白胨。
YPS (Yeast polypepton starch)培养基：1.0%(w/v)酵母膏，2.0%(w/v)可溶性淀粉，2.0%(w/v)蛋白胨。
黄豆饼粉水解液培养基：4.0%(w/v)黄豆饼粉水解液，1.0%(w/v)可溶性淀粉。
Biostat B2 5L 发酵罐(德国B. Braun 生产)平板超滤系统(MILLIPORE,MINTANTM Ⅱ)，Cole-Parmer Instrument Company两套离子交换柱(30mm x 50mm)旋转蒸发仪，RE-524，上海亚容生化仪器厂生产732型大孔阳离子树脂，201 x 7型阴离子树脂SephadexG-50为Pharmacia公司产品，其余试剂除注明外均为国产分析纯试剂。
四、实验方法1、摇瓶振荡培养种子液培养：从YPD平板上分别挑取扣囊复膜酵母A11-a和突变菌株A11-b 单菌落接种到含50.0mL的YPS液体培养基的250mL三角瓶中，在30℃和200 rpm 下振荡培养24 h。
取5.0mL培养好的种子液转接到含45.0 mL的2.0% (w/v)木薯淀粉的豆饼粉水解液培养基的250-mL三角瓶中，在30℃在200 rpm下振荡培养96 h。
2、发酵培养2.1、豆饼粉水解液的制备把32.0 g豆饼粉中加到250 mL 0.25 mol/L HCl溶液中，把该混合物在14磅下高温灭菌25 min，冷却，然后用浓度为1.0 mol/L的NaOH溶液调pH值至5.5，最后在12,000 g下离心8 min得上清液，上清液用蒸馏水定容至800 mL，此溶液为4.0%豆饼粉水解液。
2.2、种子液培养：从YPD琼脂平板上挑取突变菌株A11-b单菌落接种到含100.0 mL YPS液体培养基的500-mL三角瓶中，在28℃和200 rpm下振荡培养24 h。
把400.0 mL种子液接入含3.6 L 2.0% (w/v)木薯淀粉的豆饼粉水解液培养基的SY-3005 B 5 L发酵罐中进行发酵培养，发酵条件如下：转速200 rpm、通气量4 L/min、温度28℃、培养时间96 h。
3、海藻糖的纯化3.1、海藻糖粗制品的制备扣囊复膜酵母A11-b突变株的发酵培养，收集菌液，5000×g和4℃下离心10 min收获细胞，再用冷冻灭菌蒸馏水通过离心洗涤细胞3次。
洗涤好的5.0 mL菌液细胞重悬在灭菌蒸馏水中，在37℃下振荡抽提2 h，在5000×g和常温下离心10 min取上清抽提液，用同样的方法重复3次抽提后所有抽提液混合在一起。
1000 mL提取液在用玻璃棒搅拌情况下加入2000-3000 mL冷冻无水乙醇(或95％乙醇)，并充分混匀，再加入适量的KCl饱和液（10-20g/L），混匀后放置4℃下过夜，在13600×g和4℃下离心10 min，去上清，得到海藻糖混合沉淀物，海藻糖沉淀物以无水乙醇、丙酮、乙醚各洗涤一次，洗涤过的海藻糖沉淀物放80℃烘箱内烘干，直到重量不再发生变化为止，干燥的沉淀物作为海藻糖粗制品。
3.2、除蛋白质称取上述的海藻糖粗制品5.0 g重新溶于25.0 mL蒸馏水中，加热至海藻糖完全溶解于蒸馏水中为止，再用浓NaOH或 H2SO4调节pH值至8.0。
为了除去蛋白质，加入0.5 g胰蛋白酶，37℃保温24 h用来消化蛋白质。
经胰蛋白酶处理过的粗制海藻糖溶液在13600×g下离心10 min，再以Sevag方法继续除去上清液中的蛋白质（Sevag法操作均在4℃下进行）（Chi et al., 2007），按上清液:Sevag试剂（氯仿:正丁醇=4:1）=4:1的比例加入预冷的Sevag试剂，在4℃的摇床上剧烈振荡30 min，在13600×g和4℃下离心10 min，混合液分三层，上层为海藻糖溶液，下层为Sevag试剂，中间为变性蛋白质。
收集上层海藻糖溶液在旋转蒸发仪中浓缩除去溶液中的有机溶剂。
3.3、脱色素除去蛋白质的海藻糖溶液还含有一些天然色素，主要呈淡黄褐色。
为了除去这些天然色素，海藻糖溶液用浓氨水调节pH值至7.0，再逐滴加入25％（V/V）的H2O2，直至海藻糖溶液由淡黄褐色转变为淡黄色为止，然后装入10 kDa的透析袋，在蒸馏水中透析24 h，期间不断换水。
透析后的海藻糖溶液中加入无水乙醇至有沉淀生成，再放置在4℃下过夜，在13600×g和4℃下离心10 min，弃上清液，得到海藻糖沉淀。
沉淀物再用无水乙醇、丙酮、乙醚各洗涤一次，然后放在100℃的烘箱中，烘干至重量不再变化为止。
3.4、过分子筛层析经过上述处理过的海藻糖25 mg溶于1.0 mL 0.1 M的NaCl溶液中，在13600×g和4℃下离心10 min后，上Sephadex G50柱，以0.1 M的NaCl溶液洗脱，流速为 2 mL/min。
每管收集 2 mL，各收集管分别取0.1 mL，用硫酸-蒽酮法（Stewart , 1982）检测海藻糖含量，记录数据，绘出洗脱曲线。
把在海藻糖吸收峰上的各管合在一起，再上Sephadex G-25柱用蒸馏水洗脱，进行脱盐，含海藻糖的洗脱液在-20℃下放2–3d，然后在-50℃下冻干。
4、海藻糖测定4.1、海藻糖藻的提取和定量测定蒽酮溶液配制：称取200 mg蒽酮粉末放三角瓶，放冰水中，按比例加入100 mL75%浓硫酸，用磁力搅拌棒在冰浴中充分搅拌，至蒽酮充分溶解，现配现用。
测定：取5ml菌液，其中的菌体用冰冻的蒸馏水在4000rpm，5min的条件下离心洗涤3次，加入4ml 0.5M的三氯乙酸(TCA)，混匀后在冰浴中放置20分钟，其间每5分钟振荡混匀一次。
混合液在4000rpm下离心5分钟，收集上清液。
剩下的菌体再按上述方法用4ml 0.5M TCA提取两次，共得12ml提取液。
稀释后用蒽酮法[40]测定提取液中海藻糖的含量。
4.2、细胞干重的测定取5.0 mL培养的菌液在5000×g和4℃下离心10min收获细胞，再用蒸馏水通过离心洗涤细胞，重复3次。
然后，离心管中细胞在100℃下烘干，直到细胞的重量不再变化为止。
4.3、发酵培养下还原糖和总糖含量的测定4.3.1、还原糖浓度的测定取适量菌液，4000rpm离心5min，收集上清液，用Nelson-Somogyi法测定上清液中的还原糖浓度，见参考文献[40]。
4.3.2、总糖含量的测定A11-b突变株发酵液总糖含量是通过测定发酵液被完全酸解后所含还原糖量换算得到的（Chi et al., 2001）。
取经过3000×g、4℃离心5 min的发酵液上清10 mL，加入10 mL 25%的HCl和30 mL蒸馏水，混匀后在100℃水浴中煮3 h，经适当稀释后，用上述的Nelson-Somogyi方法测定混合液中的还原糖含量，重复三次。
4.4、海藻糖的纯度鉴定4.4.1、高效液相色谱(HPLC)分析从扣囊复膜酵母A11-b细胞中提取纯化的海藻糖和购自Sigma的海藻糖标准品用Agilent Zorbax NH2 column (5 μm) (4.6×250 mm)进行高效液相色谱分析来确定纯度。
高效液相色谱条件：柱温：35℃样品体积：40.0 µL检测器：DAD（200nm）流动相：乙腈-水（7:3）样品浓度：5.0 mg/mL流速：1.0 mL/min4.4.2、紫外扫描检测将经过上述处理过的海藻糖配制成浓度为1 mg/mL的溶液，使用可见紫外分光光度仪UV-2102在波长范围170－400 nm内进行扫描。
4.5、海藻糖标准曲线的制作精确称取已经干燥的海藻糖100 mg，溶于1000 mL蒸馏水中，为海藻糖标准液。
分别取7支试管，取海藻糖标准液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.6、0.8 mL 各加入比色管中，再依次加入蒸馏水1、0.9、0.8、0.7、0.6、0.4、0.2 mL，然后各管分别加入5 mL配制好的蒽酮溶液，迅速放入冰块中冷却，然后所有比色管放在沸水浴中加热10 min，取出后冷却后在波长620 nm处测定吸光度。
空白对照即以蒸馏水代替糖溶液。
然后以620 nm处的光吸收值为横坐标，以1 mL 样品中海藻糖的量为纵坐标，绘制标准曲线。
取5 mL菌液，其中的菌体用冰冻的蒸馏水在4000 g，5 min的条件下离心洗涤3次，加入4 mL 0.5 mol/L的三氯乙酸（TCA），混匀后在冰浴中放置20 min，其间每5 min振荡混匀一次。
混合液在4000 g下离心5 min，收集上清液。
剩下的菌体再按上述方法用4 mL 0.5 mol/LTCA提取两次，共得12 mL提取液。
稀释后用蒽酮法测定提取液中海藻糖的含量。
把稀释好的1 mL提取液加在盛有5 mL 蒽酮的试管里，把盛有提取液和蒽酮的试管在沸水中煮10 min，冷却后在620 nm 下读其吸光值，然后按照标准曲线得出恩酮含量。