【CN109991418A】一种循环肿瘤细胞捕获装置及方法【专利】
一种循环肿瘤细胞筛选分离装置及方法和应用[发明专利]
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专利名称：一种循环肿瘤细胞筛选分离装置及方法和应用专利类型：发明专利
发明人：林杰,吴爱国,徐夏薇,陈天翔,何孟
申请号：CN202010514536.0
申请日：20200608
公开号：CN111733072A
公开日：
20201002
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本申请公开了一种循环肿瘤细胞筛选分离装置及方法和应用，所述装置包括自上而下设置的血样培育室和细胞筛选室；血样培育室与细胞筛选室固定连接，且细胞筛选室与血样培育室连通；血样培育室利用磁石的吸引作用将血样中的CTCs和血细胞分离；细胞筛选室内设置有生物过滤膜，生物过滤膜用于拦截CTCs，滤过纳米材料或者血细胞。
通过设置血样培育室，能够在血样培育室中利用磁性纳米材料受吸铁石吸引，将CTCs与血细胞分离，避免传统的利用大小差异分离CTCs造成的CTCs丢失，提高检测的准确性；通过设置细胞筛选室，利用生物过滤膜进行CTCs，实现了CTCs的快速筛选和分离。
申请人：中国科学院宁波工业技术研究院慈溪生物医学工程研究所,中国科学院宁波材料技术与工程研究所
地址：315300 浙江省宁波市慈溪市担山北路145号
国籍：CN
代理机构：北京元周律知识产权代理有限公司
代理人：张梅娟
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一种集循环肿瘤细胞捕获、裂解与核酸检测于一体的微流控芯片及其装置以及方法[发明专利]
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专利名称：一种集循环肿瘤细胞捕获、裂解与核酸检测于一体的微流控芯片及其装置以及方法
专利类型：发明专利
发明人：贾春平,王艳敏,郜晚蕾,金鎏,赵辉,齐同,周洪波,赵建龙
申请号：CN201910249655.5
申请日：20190329
公开号：CN109852530B
公开日：
20220405
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明提供一种集循环肿瘤细胞捕获、裂解与核酸检测于一体的微流控芯片及其装置以及方法。
微流控芯片由玻璃基底层和聚二甲基硅氧烷芯片层贴合而成，聚二甲基硅氧烷芯片层包括：循环肿瘤细胞捕获区；核酸检测区，包括：具有弹性侧壁的进样通道，微腔阵列区以及出样口；以及阀门控制区，包括：分别布置于进样通道两侧的T形管道结构，该结构包括相对进样通道平行延伸的第一管道，以及相对进样通道垂直延伸的第二管道，第二管道与一供气机构连接，通过控制供气机构的启闭，实现进样通道的闭合和开启。
根据本发明，提供了一种高通量，低成本，高灵敏度，操作简便，耗时短的集循环肿瘤细胞捕获、裂解与核酸检测于一体的微流控芯片及其装置以及方法。
申请人：中国科学院上海微系统与信息技术研究所
地址：200050 上海市长宁区长宁路865号
国籍：CN
代理机构：上海智信专利代理有限公司
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循环肿瘤细胞捕获装置[实用新型专利]
![循环肿瘤细胞捕获装置[实用新型专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/b5e7f0c24b73f242326c5f80.png)
专利名称：循环肿瘤细胞捕获装置专利类型：实用新型专利
发明人：赖胜,杜昭辉
申请号：CN201120255677.1
申请日：20110719
公开号：CN202279815U
公开日：
20120620
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本实用新型公开了一种循环肿瘤细胞捕获装置。
所述装置包括表面具有纳米柱阵列结构的三维纳米结构基质，所述纳米柱阵列结构与所述循环肿瘤细胞的表面突起结构相匹配，其中，所述三维纳米结构基质由生物相容的聚合物制成。
由于该装置的三维纳米结构基质采用生物相容性聚合物，且通过纳米压印方法制造，因此成本低廉，易于产业化生产，可一次性用于临床诊断。
申请人：西门子公司
地址：德国慕尼黑
国籍：DE
代理机构：北京康信知识产权代理有限责任公司
代理人：李慧
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循环肿瘤细胞的捕获方法及捕获试剂盒[发明专利]
![循环肿瘤细胞的捕获方法及捕获试剂盒[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/d7aa5b2515791711cc7931b765ce0508763275bd.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811447767.3(22)申请日 2018.11.29(71)申请人 北京优迅医学检验实验室有限公司地址 100195 北京市海淀区四季青杏石口路65号益园C区C7(72)发明人 骆靖华 王燕 刘霞 方楠 王建伟 伍启熹 刘倩 刘珂弟 唐宇 (74)专利代理机构 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240代理人 韩建伟 金田蕴(51)Int.Cl.G01N 33/543(2006.01)G01N 33/574(2006.01)(54)发明名称循环肿瘤细胞的捕获方法及捕获试剂盒(57)摘要本发明公开了一种循环肿瘤细胞的捕获方法及捕获试剂盒。
其中，该捕获方法包括以下步骤：S1，利用淋巴细胞分离液对外周血中的细胞进行分离，取得白膜层细胞；S2，利用EpCAM抗体和Vimentin抗体捕获白膜层细胞中的循环肿瘤细胞。
应用本发明的技术方案，通过增加间质型标记(Vimentin，波形蛋白)抗体，与EpCAM抗体混合后进行CTC的捕获，不仅能够捕获常规的上皮型CTC，还能捕获危险性更大的发生了EMT转化的CTC，能够极大的提高捕获效率，提高CTC的检出率。
权利要求书1页 说明书9页CN 109856388 A 2019.06.07C N 109856388A1.一种循环肿瘤细胞的捕获方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，利用淋巴细胞分离液对外周血中的细胞进行分离，取得白膜层细胞；S2，利用EpCAM抗体和Vimentin抗体捕获所述白膜层细胞中的循环肿瘤细胞。
2.根据权利要求1所述的捕获方法，其特征在于，所述S2具体包括中，向含有所述白膜层细胞的液体中加入EpCAM抗体和Vimentin抗体，孵育后，弃上清，重悬抗体细胞混合物加入链霉亲和素磁珠或亲和素磁珠孵育，与链霉亲和磁珠或亲和素磁珠结合的细胞为最终捕获到的循环肿瘤细胞。
基于留置针的循环肿瘤细胞在体捕获装置及方法[发明专利]
![基于留置针的循环肿瘤细胞在体捕获装置及方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/66768e3ead51f01dc281f1fd.png)
专利名称：基于留置针的循环肿瘤细胞在体捕获装置及方法专利类型：发明专利
发明人：张鸿雁,贾真珍,武传琛,唐波
申请号：CN201410153597.3
申请日：20140417
公开号：CN103908306A
公开日：
20140709
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种基于留置针的循环肿瘤细胞在体捕获装置，包括留置针，留置针外表面包覆有可吸附蛋白的材料，可吸附蛋白的材料上吸附有用于特异性识别与捕获循环肿瘤细胞的上皮细胞特异性抗体。
本发明还公开了利用该捕获装置捕获循环肿瘤细胞的方法：采用本发明的留置针给癌症患者输液，在输液过程中，癌症患者血管中的循环肿瘤细胞即被留置针上修饰的特异性抗体捕获；输液过程完成后，将留置针拔出，从而将捕获的循环肿瘤细胞清除出体外，用洗脱液洗脱，洗脱下来的细胞可以置于显微镜下观察计数，或针对细胞内待测目标分子做免疫染色，共聚焦显微镜观测。
本发明的循环肿瘤细胞在体捕获方法，操作简单，可以实现对目标细胞高效率和高选择性的捕获。
申请人：山东师范大学
地址：250014 山东省济南市历下区文化东路88号
国籍：CN
代理机构：济南圣达知识产权代理有限公司
代理人：彭成
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(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910313986.0
(22)申请日 2019.04.18
(71)申请人 山东师范大学
地址 250014 山东省济南市历下区文化东
路88号
(72)发明人 张鸿雁 贾敏 毛艺霏 逄淑雪
(74)专利代理机构 济南圣达知识产权代理有限
公司 37221
代理人 张晓鹏
(51)Int.Cl.
G01N 33/574(2006.01)
(54)发明名称
一种循环肿瘤细胞捕获装置及方法
(57)摘要
本公开涉及肿瘤细胞捕获技术领域，具体涉
及一种循环肿瘤细胞捕获装置及方法。
本公开提
供了一种循环肿瘤细胞的捕获装置，将上皮细胞
粘附分子(EpCAM)、表皮因子生长受体(EGFR )的
抗体修饰在包被有PDMS胶状物的留置针上进行
肿瘤细胞的捕获。
本公开通过血液循环泵中模拟
体内环境，EGFR抗体捕获循环肿瘤细胞数在60左
右，EpCAM捕获的循环肿瘤细胞数在55左右，而
EGFR+EpCAM混合抗体捕获的细胞数约为130，大
于两种抗体单独使用的捕获数量之和。
多抗体联
用技术可远远提高循环肿瘤细胞的捕获效率，减
少循环肿瘤细胞的损失，为循环肿瘤细胞的捕获
与检测奠定了基础。
权利要求书1页 说明书7页 附图3页CN 109991418 A 2019.07.09
C N 109991418
A
权 利 要 求 书1/1页CN 109991418 A
1.一种用于循环肿瘤细胞检测的捕获探针，其特征在于，所述捕获探针置于样本中能够特异性吸附样本中的肿瘤细胞，所述捕获探针表面具有特异性识别肿瘤细胞表面抗原EpCAM及EGFR的抗体。
2.如权利要求1所述的捕获探针，其特征在于，所述捕获探针为表面覆盖特异性识别抗体的留置针。
3.如权利要求1所述的捕获探针，其特征在于，捕获探针表面包覆可吸附蛋白材料，所述可吸附蛋白材料表面包覆所述特异性识别肿瘤细胞表面抗原EpCAM及EGFR的抗体；优选的，所述可吸附蛋白材料为聚二甲基硅氧烷。
4.权利要求1-3任一项所述肿瘤细胞捕获探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：在留置针表面制备可吸附蛋白层获得功能化留置针，将功能化留置针分别置于一定浓度的EpCAM及EGFR抗体溶液中得到所述肿瘤细胞捕获探针。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述可吸附蛋白层为聚二甲基硅氧烷，所述聚二甲基硅氧烷的制备方法如下：按比例称取预聚物和固化剂后混合连续搅拌一段时间获取胶状物，将胶状物减压干燥排尽其中的气泡后保持真空一段时间；将留置针蘸取真空后的胶状物并在一定温度下干燥。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述预聚物为SYLGUARD-184A；和所述固化剂为SYLGUARD-184B；所述预聚物和固化剂的比例为9～11:0.5～1.5；和/或所述胶状物在真空状态下干燥0.5-1h。
7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述特异性识别抗体EpCAM及EGFR浓度分别为50～100μg/mL、50～100μg/mL；优选的，所述EpCAM及EGFR的比例为4～6：3～5；优选的，所述功能化的留置针置于EpCAM及EGFR抗体溶液中，4℃孵育过夜制备所述捕获探针。
8.一种肿瘤细胞的捕获方法，其特征在于，所述方法包括采用权利要求1-3任一项所述的捕获探针放置于样品中一段时间捕捉样品中的肿瘤细胞，取出捕获探针后用洗脱液将肿瘤细胞洗脱并收集。
9.一种非诊断治疗目的的肿瘤细胞检测方法，其特征在于，所述检测方法采用权利要求8所述肿瘤细胞捕获方法将样本中的肿瘤细胞收集后，通过免疫细胞化学法、流式细胞术法、PCR方法及荧光检测方法对收集的肿瘤细胞数量进行检测；优选的，收集到的肿瘤细胞经DAPI染色后检测。
10.一种肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包括权利要求1-3任一项所述的肿瘤细胞捕获探针；优选的，所述肿瘤细胞检测试剂盒中还包括洗脱液、酶标板及检测试剂；进一步优选的，所述检测试剂包括固定液、透膜液及清洗液。
2。