循环肿瘤细胞,告诉你所不知道的(一)：认识CTC的真相
ctc循环肿瘤细胞检测
CTC循环肿瘤细胞检测循环肿瘤细胞（CTC）是一种罕见的血液中的癌细胞，可以从原发肿瘤脱落，并通过血液循环传播到其他部位。
CTC的检测对于癌症的早期诊断、治疗选择和预后判断具有重要意义。
CTC循环肿瘤细胞检测是一种非侵入性、无创的方法，可以提供关于肿瘤发展和蔓延的有价值的信息。
本文将介绍CTC循环肿瘤细胞检测的原理、方法和应用。
原理CTC循环肿瘤细胞检测的原理基于CTC的特殊性质。
CTC具有一定的生物特性，如细胞形态学特征、表面标记、核酸和蛋白质表达等，使其能够与正常血液细胞区分开来。
通过对CTC进行特异性标记和分离，可以将其从血液中分离出来，并进行进一步的表征和分析。
目前，CTC的检测方法大致可以分为两类：物理方法和生物学方法。
物理方法包括密度梯度离心、滤膜分离和微流控芯片等，通过差异化的物理性质实现CTC的分离。
生物学方法则利用CTC与正常血液细胞之间的生物学区别，如表面标记的差异、特定蛋白和核酸标记等，通过生物学分子靶向的方式进行CTC的富集和分离。
方法CTC循环肿瘤细胞检测的方法多样，具体的选择取决于实验室的设备和研究目的。
下面将介绍几种常见的CTC检测方法：密度梯度离心法密度梯度离心法是最早用于CTC检测的方法之一。
该方法通过利用瘦脂蛋白或葡聚糖等高分子物质在不同浓度下形成的梯度来分离CTC。
通过对梯度离心后，在不同密度层次上找到CTC，并进行进一步的分析和鉴定。
滤膜分离法滤膜分离法基于滤膜的孔径大小来分离不同大小的细胞。
通过选择合适的滤膜孔径，可以将CTC与正常血液细胞分离开来。
然后，通过对滤膜上沉积的细胞进行进一步的标记和分析，即可获得CTC的信息。
微流控芯片法微流控芯片法是一种新兴的CTC检测方法。
该方法利用微流控技术，在芯片上制造出复杂的细流体网络，并通过微米级别的微通道将CTC富集和分离。
微流控芯片法具有高通量、高灵敏度和高特异性的优点，被广泛应用于CTC的检测。
应用CTC循环肿瘤细胞检测在临床和研究领域具有广泛的应用前景。
关于循环肿瘤细胞(CTC)的一些认识
关于循环肿瘤细胞（CTC）的一些认识摘要：通常把进入人体外周血的肿瘤细胞称为循环肿瘤细胞（circulating tumor cell）。
随着人们对循环肿瘤细胞研究的深入，尤其是伴随现代检测技术的广泛应用，CTC逐渐被人们所重视。
循环肿瘤细胞的检测可有效地应用于体外早期诊断，化疗药物的快速评估，个体化治疗包括临川筛药、耐药性的检测，肿瘤复发的监测以及肿瘤新药物的开发等。
检测CTC 有着良好的应用前景，随着这一研究领域的不断发展，必将产生新的诊疗手段，从而使肿瘤的治疗提高到一个崭新的阶段。
关键词：循环肿瘤细胞；CTC；检测方法；临床意义早在1896年，Ashworth曾报道1例因癌症死亡的患者外周血中发现了类似肿瘤的细胞，并首次提出循环肿瘤细胞（circulating tumor cell, CTC）的概念[1]。
随着人们对循环肿瘤细胞研究的深入，尤其是伴随现代检测技术的广泛应用，CTC逐渐被人们所重视。
1、概述CTC指自发或因诊疗操作进入外周血循环的肿瘤细胞。
随着肿瘤细胞的不断增殖,部分细胞可以通过分泌一种抑制黏附因子表达的物质,增加其运动能力并使之与肿瘤母体脱离。
这些脱落的肿瘤细胞再分泌一种蛋白溶解酶，以破坏周边宿主结缔组织并进入脉管系统。
诊疗操作也可使肿瘤细胞扩散进入外周血循环。
2、检测方法2.1免疫细胞化学（immunocytochemistry, ICC）这一检测方法基于抗原抗体结合反应的原理，利用单克隆抗体（McAb）与特异的肿瘤标记物结合，并通过酶与底物反应显色来判断肿瘤细胞的存在。
检测的肿瘤标志物主要分三类：①上皮细胞角蛋白（CK），如CK19；②上皮细胞膜特异性抗原，如黏蛋白类，包括EMA、HMFG、HEA125等；③肿瘤相关糖蛋白（TAG），如TAG12。
1980年，Sloane等首次采用ICC的方法检测乳腺癌患者骨髓中的肿瘤细胞。
该方法可以进行形态学分析，但是检测的细胞量少，敏感性只有10－4～10－5（即在1万~10万个单核细胞中发现一个肿瘤细胞），而且许多分化差的肿瘤不能表达目标抗原，而非上皮细胞中细胞角蛋白和上皮细胞抗原亦可能阳性,故特异性不高。
【肿瘤转移】循环肿瘤细胞（CTCs）和循环肿瘤DNA
【肿瘤转移】循环肿瘤细胞（CTCs）和循环肿瘤DNA 循环肿瘤细胞（CTCs）：是在肿瘤形成早期，从原发肿瘤脱落进⼊到⾎液循环中⽽成。
播散肿瘤细胞（DTCs）：循环肿瘤细胞脱离⾎液循环，定居在次级器官。
循环肿瘤DNA：肿瘤发展的早期，原发肿瘤细胞凋亡和坏死，释放DNA进⼊⾎液循环。
循环肿瘤DNA的两个来源：1，原发肿瘤或微转移瘤。
2，循环肿瘤细胞的凋亡。
循环肿瘤细胞形成和转移过程原发肿瘤（乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌）的早期形成和⽣长过程中，⼀些细胞会从原发肿瘤上脱落，进⼊⾎液循环。
这些循环肿瘤细胞各不相同，可以根据它们的物理和⽣物学特性采⽤不同的技术进⾏富集和检测。
对肿瘤患者进⾏循环肿瘤细胞（CTCs）检测被认为是⼀种实时“液体活检”。
肿瘤，即使是⼩的原发肿瘤，也会通过⾎液循环从原发区域传播到远处的器官，如⾻髓、肝脏、肺、或脑，然后这些细胞在新的微环境下⽣长。
播散肿瘤细胞（DTCs）是⼀种微⼩的转移。
在完全切除原发肿瘤后它们仍可以处于休眠状态数年，然后变成⼤的转移。
DTCs可以通过⾎流进⾏流动，在远端器官定居，发展成第⼆转移灶。
有趣的是DTCs还可以转化成原发肿瘤，术语叫做“肿瘤⾃我播种”或“交叉播种”变成具有侵袭性的转移体形式。
这些DTCs可能促使肿瘤局部复发，但这些假设还需要进⼀步验证。
微⼩残留病变（MRD）例如DTCs，通过⾼分辨率的成像技术是检测不到的。
然⽽，通过灵敏的和特异性的检测技术在⾻髓、淋巴结或循环⾎液中可以检测到DTCs。
通过髂⾻使⽤针吸活检技术，很容易就得到⾻髓样本，⽬前这是在远处器官检测微⼩残瘤病变（MRD）的主要⽅法。
⾻髓是其他肿瘤器官源的DTCs的主要宿主部位，储存DTCs，然后转移到远端器官。
对肿瘤患者的随访，需要进⾏持续监测。
因为⾻髓针吸活检术⽐抽取外周⾎更有侵害性。
研究者往往通过检测外周⾎⽽不是⾻髓来评估患者预后和监测系统治疗。
近期，已经研制出了超⾼灵敏性的CTC检测⽅法，包括CTC微芯⽚，过滤装置，定量RT-PCR检测，⾃动成像技术。
循环肿瘤细胞CTC检测及临床应用
循环肿瘤细胞C T C检测及临床应用Prepared on 22 November 2020循环肿瘤细胞检测及临床应用中文摘要：循环肿瘤细胞是从原发肿瘤扩散，进入到血液或淋巴系统的肿瘤细胞。
循环肿瘤细胞在血液中含量稀少，一般先将循环肿瘤细胞富集，然后再进行检测，现在已经开发了多种细胞富集和检测技术。
本文主要对CTCs的富集和检测技术研究进展，以及CTCs在临床分析和研究上的应用进行了综述。
关键词：循环肿瘤细胞富集检测临床Abstract:Circulatingtumorcellscomefromtheprimarytumorproliferation,andprolife ration,癌症转移的过程是循环肿瘤细胞(CirculatingTumorCells，CTCs)从原发肿瘤分离，通过循环系统扩散，进入血液或者淋巴系统，在远处形成新的肿瘤，最终导致大多数的癌症病人死亡。
1869年，Ashworth在一例癌症死亡患者的外周血中发现了类似肿瘤的细胞，并首次提出了CTCs的概念。
从此，越来越多的研究表明，CTCs的出现与癌症密切相关。
通过上皮-间质转化(EMT)，实体瘤的上皮细胞进行细胞的变化，使他们通过增加流动性和侵袭性脱离组织，进入到血液中，附着，、发展成远端转移。
由于CTCs能够代表原发肿瘤的表型和遗传组成，并能够作为任何转移性肿瘤的”液体活检”，CTCs的富集分离和特征研究，十分具有吸引力。
CTCs的富集和计数技术已经建立，其中CTCs的计数可以成为预测指标，当其大于已知的阈值时，就预示着病人就患有转移性乳腺癌，、前列腺癌，、结直肠癌等。
基于临床试验，美国FDA批准了一种临床检测CTCs的CellSearch技术，用于上述癌症的CTCs的富集和计数。
CellSearch技术成功的证明了CTCs确实表征了疾病的活跃，CTCs数量的增加预示着病情的恶化，可以通过CTCs了解原发性和转移性肿瘤，以CTCs为基础的分析，可以帮助人们实时诊断和预测，对病情做出决定，并取样检测耐药性。
循环肿瘤细胞(CTC)检测
循环肿瘤细胞（CTC）检测一、什么是循环肿瘤细胞（CTC）？循环肿瘤细胞（Circulating Tumor Cell，CTC）是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称，因自发或诊疗操作从实体瘤病灶（原发灶、转移灶）脱落，进入外周血循环的肿瘤细胞。
CTC非常稀少，每毫升血液中109血细胞只有几个CTC。
大部分CTC在进入外周血后会发生凋亡或被吞噬，少数能够逃逸并发展成为转移灶，增加恶性肿瘤患者的死亡风险。
二、肿瘤的发生及检测诊断全国肿瘤登记中心发布的2015年年报显示，2011年我国新增癌症病例约337万例，比2010年增加28万例——这相当于每分钟有6人被诊断为癌症。
然而，令人担忧的是这样的情势似乎仍未到达峰顶，未来可能还会不断增加。
美国约翰-霍普金斯大学Kinmel 癌症中心的Bert-Vogelstein 等专家在2013年3月份的一篇综述文章中写道：在今年将死于癌症的一百万人里，绝大部分是因为他们的癌症没有在发生、发展的前90%的时间内被发现。
因此，我们需要明确一点：癌症是一种慢性病，它只是被突然发现，并非是突然发生的。
我们需要尽可能早的发现它，从而提高治愈率。
伴随肿瘤的发生过程，肿瘤细胞的大小也随之增大。
传统方法诊断出癌症的时候，大部分已经是晚期。
晚期癌症的治愈率极低，其五年生存率也很低。
在肿瘤的发生过程中，早期到中期之间是最佳治疗期，因此，如果在早期就可以发现肿瘤的存在，必然可以提高治愈率。
临床癌症研究（Clinical Cancer Research）杂志上发表的荟萃分析（Meta-analysis）证实CTC在乳腺癌预测中的价值，结果表明早期和转移性乳腺癌患者的循环肿瘤细胞CTC检测是一个稳定的预测和预后工具。
如果将肿瘤易感性基因检测和循环肿瘤细胞检测完美结合，那么能够将肿瘤的早期发现率提高数倍。
肿瘤易感性检测是对未来可能患有癌症的一种风险预测。
如果风险等级高，除了改变生活方式外，还可以定期做循环肿瘤细胞检测，即CTC检测，而且检查频率可以适当增加，每2-3个月检查一次，从而达到实时监控的目的。
文档：循环肿瘤细胞(CTC)
循环肿瘤细胞(CTC)循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell; CTC)通常是指因自发或诊疗操作引起的从原发灶或转移灶侵入人体外周血的肿瘤细胞。
此概念是在1869年由Ashworth等首次提出的，2015年研究人员成功培育出第一株由CTC产生的永生细胞株。
CTC一般以单细胞或者细胞团的形式存在于循环系统中，大部分侵入循环系统的肿瘤细胞会在短期内死亡，只有极少数具有高度转移倾向和活力的CTCs才能存活下来，并在一定条件下发展为转移灶。
一般在外周血中大约105~107个单核细胞中才有一个CTCs，因此为获得更好的灵敏度和特异性，对检测技术的要求极高。
由于CTCs检测的对象是血液标本，取材比传统意义上的组织活检更便捷且重复性强，属于“液态活检”的一种。
就概念而言，广义液体活检指从血液、尿液、唾液甚至脑脊液等人体体液中获取相关疾病信息的技术。
临床科研中应用的液体活检，主要是通过检测并分析血液中的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTCs）、游离肿瘤脱氧核糖核酸片段（Circulating Tumor DNA ，ctDNA）、外泌体(exosomes)、分泌物（secretomes）等组分对患者进行早期筛查、诊断并监测癌症发展演变的技术。
近年来，CTCs在临床应用的研究获得了长足的发展，积累的研究表明CTCs可更有效的反应肿瘤在机体内的发生、发展、转移、复发的情况，对预后判断、疗效检测及转移机制研究有更切实的指导意义。
间变性淋巴瘤激酶(Anaplasticlymphomakinase, ALK)基因是一种致癌驱动基因。
突变、基因扩增或染色体重排均可以导致ALK基因异常激活，从而促进肿瘤生长。
在3-7%的非小细胞肺癌患者中ALK基因重排是一个独特的分子子集，主要是由于该基因发生重排并与其他基因进行了融合。
Vincent Faugeroux等证实在ALK阳性的非小细胞肺癌患者中通过检测CTCs发现了ALK重排，这项研究为ALK阳性的患者在使用ALK抑制剂治疗诊断方面提供了新的观点。
循环肿瘤细胞CTC
循环肿瘤细胞CTC肿瘤发生转移的早期, 循环肿瘤细胞(CTC)就可以沿循环系统种植于远处器官, 逐渐形成转移灶利用特异性的抗体“捕获”肿瘤细胞。
应用检测单个或小量血中循环肿瘤细胞簇(CTCs)的结果进行分析, 对推测每个独立患者具体预后、评估治疗反应的准确性和有效性都可以有明显改善。
显然, 在单个细胞水平检测血中的循环肿瘤细胞(CTC) 要比影像学分析更为敏感。
这种技术是将抗肿瘤细胞表面标志物的抗体包被在磁性小珠上, 这样不但可以利用抗原抗体结合来识别循环肿瘤细胞(CTC), 还可以用磁性“捕获”患者血样中的循环肿瘤细胞(CTC)。
这种技术的主要限制在于:是否存在针对肿瘤表面抗原的高度特异的抗体, 以及制备这种抗体质量的优劣。
更重要的一个限制因素在于, 由于肿瘤细胞往往处于去分化的状态, 循环中的肿瘤细胞常是高度异质性的, 这时具有组织特异性的表面标志物的表达就会有所下调。
这样的结果就会导致一些变异的肿瘤细胞可以逃脱掉捕获富集的过程。
如何从富集的样本中确认和识别循环肿瘤细胞?即在对含有循环肿瘤细胞(CTC) 样本进行富集处理之后，这些方法包括:①免疫荧光染色显微镜下的图像分析, 可以进行肿瘤细胞计数;②反转录聚合酶链式反应(RT -PCR)技术来检测肿瘤细胞基因标志物的mRNA 水平;③肿瘤相关基因(包括癌基因和抑癌基因)的突变分析;④DNA 甲基化技术; ⑤功能活性技术, 如端粒酶技术等。
据GENYO研究团队介绍，这主要是因为只有少量的上皮标志物可用来鉴定和分离全血中的循环肿瘤细胞，通常是上皮细胞粘附分子（EpCAM）和细胞角蛋白（CK）。
然而，这些上皮细胞也可能来自其他上皮组织，而并非肿瘤。
让事情更加复杂的是，最新数据表明存在一部分CTC，不表达EpCAM或CK。
相反，这些细胞表现出上皮-间质转化（EMT）的特征。
这个过程与肿瘤转移相关，其中上皮细胞呈现出间质特征，促进迁移、入侵和抗凋亡。
新方法：将原位杂交方法以及基于CK表达的免疫磁性选择和免疫细胞化学相结合，利用锁核酸（LNA）探针来检测miRNA。
循环肿瘤细胞(CTC)和循环肿瘤干细胞(CTSC)的检测与结直肠癌临床资料的相关性分析
目录第一部分循环肿瘤细胞（CTC）及循环肿瘤干细胞（CTSC）的检测与结直肠癌临床资料的相关性分析中文摘要 2 英文摘要 4 前言 6 材料与方法8 结果12 讨论17 结论27 参考文献28 致谢32第二部分综述：胃、肠道肿瘤干细胞的研究进展综述33 参考文献37循环肿瘤细胞（CTC）及循环肿瘤干细胞（CTSC）的检测与结直肠癌临床资料的相关性分析中文摘要目的：通过检测结直肠肿瘤患者外周血中的循环肿瘤细胞（circulating tumor cells, CTC）以及循环肿瘤干细胞(circulating tumor stem cells, CTSC)，分析其数目与患者临床分期、肿瘤淋巴结转移、肿瘤远端转移等的相关性，验证它们作为患者预后评判指标的可行性，初步探讨CTC及CTSC与肿瘤转移的相关性。
方法：本论文入组首诊初治结直肠癌患者50人，在其手术治疗前，以及治疗后一周各抽取外周血15ml，利用Ficoll淋巴细胞分离液分离出外周血单个核细胞后，平均分成两份：CTC组标记表面标记物--CD45、EpCAM、CK，CTSC组标记表面标记物--CD45、EpCAM、CD44、CD133，并利用超高速流式细胞分选仪MOFLO XDP进行CTC及CTSC的检测分析。
结果：判定CD45-/EpCAM+/CK+细胞为CTC，CD45-/EpCAM+/CD44+细胞为CTSC1，CD45-/EpCAM+/CD133+细胞为CTSC2，CD45-/EpCAM+/CD44+/CD133+细胞为CTSC3。
判定手术前（手术后）检测出CTC ≥2个/7.5ml外周血者为阳性结果，CTC<2则为阴性；CTSC1≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，则CTSC1<1为阴性；CTSC2≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，则CTSC2<1为阴性；CTSC3≥1个/7.5ml外周血者为阳性结果，CTSC3<1为阴性。
循环肿瘤细胞的介绍（上）
循环肿瘤细胞的介绍（上）众所周知，癌症是一类一直处于不断变化状态的疾病。
因此能够实时的观察监测到这种变化意义就尤为重大。
传统的病理检测方法虽然被认为是“金标准”但是这一检测方法需要手术后才能得到病理组织，进行检测。
即使采用穿刺活检办法也不能完整的跟踪整个病程，而且会给病人带来极大的痛苦。
尤其当肿瘤的原位灶很小的时候往往多次穿刺都不能准确地收集到肿瘤组织。
介于以上原因，大家更多的把目光集中在了液态活检上。
这一概念早在上个世纪七十年代就有人提出(Sorrells,1974)近来在癌症的研究上越来越突出其作用。
液态活检顾名思义是指以包括血液、尿液、淋巴液、脑脊液腹水等体液在内的样本作为检测对象的一种检测手段。
目前主要包括游离DNA(Cell free DNA),外泌体（Exosome）和循环肿瘤细胞（Circulating tumor cells）三大类研究对象。
Cell free DNA是血液中肿瘤细胞游离出来的DNA片段，数量稀少不易检测，虽然有相关报道显示Cell free DNA 可以用于癌症的诊断，并使癌症可以提早被发现(Heitzer et al. 2013)，但是仍然会因为血液中含有较高的背景而难以达到检测所需的分辨率，并且无法探知Cell free DNA的来源，并不能提示肿瘤的发病部位。
Exosome是一种包裹了核酸蛋白的囊泡，结构稳定但是不易稳定分离，很多标志物还在探索当中。
循环肿瘤细胞发现的最早，而且作为这三类当中唯一的实体瘤，它们的在医学上的意义值得我们进行更加深入的探索。
循环肿瘤细胞的研究进展循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTC)是包括除白血病和淋巴瘤来源的肿瘤细胞以外的所有类型的肿瘤实体瘤细胞在血液和淋巴管中扩散的肿瘤细胞。
其实在很早之前就有人观察到了这一现象，Ashworth是第一个提出这一概念的人，他在一名因为癌症导致死亡的患者遗体内发现肿瘤细胞本身与血液中的肿瘤相同，这一事实表明同一个人体内可能存在的多种肿瘤的起源模式。
循环肿瘤细胞检测原理及其应用
02
CellSearch检测结果
CTCs： DAPI + CK- PE+ CD45- APC-
02
CellSearch CTC 检测结果 Cutoff 值
Unfavorable
≥5 CTCs/7.5ml
Favorable
0-4 CTCs/7.5ml
优点： 血液中捕获肿瘤细胞的效率达到70%； 无标记，细胞保存良好活性 不足之处： 细胞的介电性能会逐渐变化，必须在较短的时间内完成； 承载介质的电导率必须适当的控制在一个较低的范围
02
基于分子生物学特性的分离捕获方法
免疫磁珠分离：最常见且有效地检测捕获脱落肿瘤细胞的方法 阳性富集—捕获肿瘤细胞 负性筛选—去除非肿瘤细胞（如白细胞、红细胞）
基线 CTC 检测结果大于等于5个细胞病人预后不好，总生存期和无进展生存期较短 基线 CTC 检测结果小于5个细胞的病人预后良好，总生存期和无进展生存期较长 此 Cutoff 值基于临床研究实验得出，并已被 FDA 和 CFDA 批准用于临床实践
临床应用 转移性癌症的监护 无进展生存期 总生存期 未来: 疾病管理
肿瘤细胞
白细胞
抗 EpCAM 磁珠
EpCAM 抗原
CD45 抗原
CK 抗原
抗 CD45-APC 染料
抗 CK-PE 染料
荧光染料
EpCAM – 上皮细胞粘附分子 APC – 异藻蓝蛋白荧光染料 CK – 细胞角蛋白 PE – 藻红蛋白荧光染料 DAPI – 4,6-二脒基-2-苯基吲哚（DNA荧光染料）
种子和土壤学说
循环肿瘤细胞的存在正是实体恶性肿瘤远处转移的根源
02
循环肿瘤细胞CTC
癌细胞从原位脱离 侵犯血液循环，在循环中存活 渗出进入远端器官 在继发部位增殖
一种循环肿瘤细胞(CTC)检测用微流控芯片装置[发明专利]
![一种循环肿瘤细胞(CTC)检测用微流控芯片装置[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/e703f2dbb9f67c1cfad6195f312b3169a551ea4d.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710845373.2(22)申请日 2017.09.19(71)申请人 朱嗣博地址 200082 上海市杨浦区国权北路1688弄A8栋903室(72)发明人 朱嗣博 (51)Int.Cl.C12M 1/34(2006.01)C12M 1/00(2006.01)(54)发明名称一种循环肿瘤细胞（CTC）检测用微流控芯片装置(57)摘要本发明提供了一种循环肿瘤细胞(CTC)检测用微流控芯片装置。
该装置以集成微流控芯片的方式，实现血液样品预处理、红细胞裂解、白细胞筛选、循环肿瘤细胞富集、细胞标记染色、清洗及检测、CTC收集等功能；微流控芯片各功能单元与芯片结构相对应。
其中，各溶液池由微流控通道连接，通道直径与所研究的细胞的结构相适应，并保证通道内细胞溶液的功能运输。
本发明用于筛选、检测和收集待检查病人的外周血样本溶液中的循环肿瘤细胞、提供临床上治疗以指导及对循环肿瘤细胞进行数量统计，并可用于下游单细胞基因组和转录组分析。
本发明操作简单，具有节省时间成本、实现自动化检测、提高检测效率和分析效率的优点，具有极其重要的临床检验价值。
权利要求书2页 说明书5页 附图5页CN 107699478 A 2018.02.16C N 107699478A1.一种循环肿瘤细胞(CTC)检测用微流控芯片装置，其特征在于：该微流控芯片装置包括上层辅助结构和下层筛选、标记与检测区，所述上层辅助结构覆盖在下层筛选、标记与检测区之上，芯片结构主要可分五个基本单元，各基本单元都有相应的微通道结构：第一个基本单元是血液样本进样和预处理单元；第二个基本单元是红细胞裂解及分离单元；第三个基本单元是白细胞筛选单元；第四个基本单元是循环肿瘤细胞(CTC)标记染色及清洗单元；第五个基本单元是循环肿瘤细胞(CTC)计数检测单元；第六个基本单元是循环肿瘤细胞(CTC)回收单元。
CTC循环肿瘤细胞详解及应用_20231031
CTC(循环肿瘤细胞)详解及应用9肿瘤异质性——肿瘤耐药的罪魁祸首之一空间异质性时间异质性疗程1疗程2疗程3液体活检- 动态监控- 实时调整用药方案- 及时进行疗效评估10液体活检技术——肿瘤精准治疗的指南针循环肿瘤细胞 (CTC)外泌体临床需求Ø癌症预警早诊Ø肿瘤预后复发监控Ø肿瘤耐药位点筛查Ø药敏筛查Ø药物疗效持续评估液体活检循环肿瘤细胞u 在肿瘤组织的全生命周期，特别是在极早期，就开始有完整的肿瘤细胞进入人体外周血，这些细胞成为循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cell,简称CTC)。
CTC以单个细胞或细胞团（又称循环肿瘤微栓子，CTC-microemboli，CTC-cluster，简称CTM）的形式存在于循环系统中。
u 循环肿瘤细胞(CTC)检测是一种非侵入性的液体活检技术，相比于组织活检，具有无创，可重复采样，可实时长期跟踪，可克服肿瘤异质性，结果准确等优势，目前已经越来越广泛地应用于肿瘤疗效监测、预后评估、复发监测等场景，成为辅助指导癌症患者的个体化治疗的一大“利器”，被麻省理工评为2015年“10大全球突破性技术”。
u 肿瘤细胞在进入外周血循环的过程中会发生上皮-间质转变（EMT，Epithelial Mesenchymal Transition），故CTC存在不同类型，包括上皮型、间质型和上皮-间质混合型。
CTM和间质细胞表型CTC具有更强的转移潜能。
u 研究表明，检测出CTM的患者平均PFS时间比仅有单个CTC的患者短。
同样，与只有单个CTC的患者相比，在多个时间点上检测出CTM的患者平均OS更短，死亡风险显著增高。
Clotilde Costa, et.al., Analysis of a Real-World Cohort of Metastatic Breast Cancer Patients Shows Circulating Tumor Cell Clusters (CTC-clusters) asPredictors of Patient Outcomes. Cancers (Basel). 2020 Apr 29;12(5).间质型CTC上皮型CTC混合型CTC上皮型CTM混合型CTM间质型CTMCTC检测优势显著12广阔的临床应用前景1314广泛的临床适用人群无药可用人群高危人群难取样人群复发人群用药方案筛选药敏筛选及疗效评估免疫抑制剂用药评估癌前筛查肝硬化、肺部结节、乳腺结节等辅助诊断鉴定原发灶；个性化用药指导复发监控靶向用药；耐药评估；NCCN乳腺癌临床实践指南正式引入含有CTC 的cM0(i+)分期。
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循环肿瘤细胞，告诉你所不知道的（一）：认识CTC的真相
今年1月份，随着CFDA刚刚批准的靶向PCR CTC检测技术应用于临床，国内CTC市场鱼龙混杂，沸反盈天。
但是，CTC 到底是个什么玩意儿？到底能解决什么临床问题，各种说法甚嚣尘上，在CTC领域深潜了11个月后，我也来谈谈我的看法。
全面了解CTC，就像把大象放进冰箱里，分三步走：
第一步：认识CTC的真相第二步：解析CTC的最佳用武之地第三步：洞察CTC的未来价值
认识CTC的真相（1）你所看到的CTC ，是逻辑上推导的肿瘤细胞
（2）天生的定量神器
（1）你所看到的CTC ，是逻辑上推导的肿瘤细胞
在血液中看到“CTC”用计数的方法尝试“定义”它，最早开始“看到”CTC，大家都会提起强生的CellSearch系统，但实际上，强生发明这套系统也许就是想要用在活体上。
“捕捉”到CTC最早在1891年一个转移性肿瘤病人男性病人的血管中，它的发现者Thomas Ashworth，推论说：“那些在肿瘤病人的血液里找到的跟肿瘤细胞一样的细胞，可能能够”映射“出那个病人的可能存在的多种肿瘤起源”随后1990年代，CTC被证实在肿瘤的早期就存在，应运而生了许多试
图捕获这些循环肿瘤细胞的技术。
强生的Cellsearch就是其中的佼佼者。
强生的Cellsearch系统“制造”了循环肿瘤细胞。
我们都知道，所谓癌症诊断的金标准，就是通过HE染色观察细胞核的形态后作出的病理诊断。
只有在镜下看到被染色的细胞核形态异常的细胞，我们才能说，这是肿瘤细胞。
但CellSearch系统无法对在血液中捕获的“长相异于常人”的细胞进行HE染色，观察核形态。
于是，用一个简单但是却有趣的逻辑公式，来“命名”了“循环肿瘤细胞”。
所以，我们可以说，现在，我们所知道的CTC，都是被CellSearch所定义的循环肿瘤细胞。
或者说，CellSearch让我们看到了它所定义的CTC。
（2）天生的定量神器
CTC的评估标准是单位体积血液中CTC的数量（计数），CellSearch系统“检测CTC”的流程步骤是“富集+检测”，先把高危细胞用各种方法“召集”到一起，再通过PCR或者免疫荧光把CTC从高危细胞中分离出来，并且进行计数。
这套流程步骤，成为我们最终“描述”CTC的理论体系。
我们用CTC>7, CTC > 5 这样的语言来描述所看到的CTC的“状态”。
当我们用一种特定的语言开始描述我们看到的现象，我们才开始认识它。
但是，我们需要知道CTC 7个，8个，10个，或者3个，到底能说明什么问题，于是，人为的定义了一个cutoff
值，这可以让我们能够简单粗暴的用两分法来“认定”我们假设有“意义”的CTC状态。
这就是我们现在所知道的CTC 阳性或者阴性。
无论你这个cutoff值怎么定，事实上都会存在一个灰度区间（假阳性和假阴性），这个区间的存在就导致了一个经典的罗生门困境，凭什么说4个CTC与5个CTC就有本质上的区别？
因此，定性不是CTC的特点，定量才是，CTC是天生的定量神器那么这个天生的定量神器，到底和什么样的“临床事件”或者“临床状态”相关联呢？敬请期待，下期精彩内容。
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