试验柱色谱分离实验

液（石油醚：乙酸乙酯=9:1）洗脱，直至所有物质都被洗脱完全。
4、产品收集：分别收集不同颜色的产物及洗脱剂，并量取 和记录各自的体积。
六、注意
1、吸附剂的选择和活化 2、洗脱剂的选择：对未知样品先用极性小的溶剂洗
脱，再用极性大的溶剂洗脱
3、装柱的技术：松紧度 4、吸附剂的用量：是被分离样品量的30-40倍,有时
化合物的结构：化合 物的吸附性和它们的 极性成正比
3. 试样成分的性质 在给定的条件下，各个成分的分离情况，与被分离物 质的结构和性质有关，对极性吸附剂而言，被分离物质的
极性越大，两者吸附作用也越强。具有极性基团的化合物，
其吸附能力按下列顺序增加： Cl－，Br，I < C=C < -OCH3 < -CO2R < C=O ，－ CHO < -SH- < -NH2 < -OH < -CO2H 溶解试样用的溶剂，极性应与流动相接近
三、实 验 内 容 收 集 试样有色，在层析柱上可直接观察。洗脱后
分别收集各个组分。
试样无色，收集洗脱液时，多采用等份收 集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样 的分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小， 分离效果越好。
三、实 验 内 容 鉴 定
试样有色
依据颜色直接鉴定 试样无色 可结合薄层色谱结果
合物，向色谱柱中滴加5-8滴，至混合物完全渗入到硅胶中。
(混合物为：苏丹三、偶氮苯的苯溶液，注：不能用极性大的 溶剂溶解混合物，否则柱色谱不能分离。
4. 洗脱：用滴管吸取纯的石油醚沿管壁加入到色谱柱中，注
意滴加过程沿色谱柱壁加入，防止硅胶层溅起。继续加入 石油醚，当黄色组分被洗脱至与红色组分完全分离后可用洗脱
再向烧杯中加入约35mL的石油醚，用玻璃棒搅拌是混合均匀。
2、混合液的加入：将色谱柱固定好，色谱柱下放置一锥形瓶。 将石油醚硅胶混合液摇匀，趁硅胶未沉淀，通过漏斗迅速将混
合液倒入色谱柱中，注意混合液不要倒满溢出。装住过程中要
不断的敲打柱子，使硅胶沉淀均匀、密实。
五、实验操作步骤
3、加样：待溶剂石油醚至硅胶层相平时，用滴管吸取分离混
三、实 实 验Βιβλιοθήκη Baidu 步内 骤: 容 柱色谱操作：
•干法：10g 硅胶 +乙醇 •先用乙醇 后用水 •操作 •组分颜色
装柱
加样
洗脱
收集
鉴定
•1mL样品 •加样操作 •0.5mL×2乙醇洗涤
•组分颜色
仪器和试剂
• 1.仪器 • 锥形瓶、玻璃漏斗、色谱柱 • 2.试剂 • 柱层析硅胶、脱脂棉、乙醇（95%）甲 基橙、亚甲基蓝。
• H2O∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (A 液) • 0. 2mol·L -1HCl∶ 95 %乙醇 = 1∶ 1 (B 液)
实验步骤
• 装柱：
•
1、装色谱柱：
•
• •
（1）取一支色谱柱，在柱子的收缩部塞一小团脱脂棉花将色谱柱垂
直固定在铁架台上。 (2) 关闭活塞，向柱中倒入蒸馏水（也是洗脱剂，至柱体积的 1/2） （3）填吸附剂：称取10g 硅胶于小烧杯中 ,加入 15mL 蒸馏水 ,用玻 璃棒调好通过漏斗慢慢装入玻璃柱, 使其逐渐沉入底 部。用洗耳球敲打柱身使硅胶装填紧密，打开活塞，用小锥型
•
洗脱：待此混合液将要渗入柱内时 ,立即用 A 液洗脱 ,此时可以观察到有鲜明的黄、蓝 两条色带形成。黄色的甲基橙色带随洗脱剂的加入不断下移 ,而其顶部蓝色带不移动 , 当黄色带到达柱底部时 ,更换接受器 ,全部收集此黄色带 ,洗脱时间约 10 min。此后改 用B 液做洗脱剂 ,这时可看到蓝色带开始下移 ,当亚甲基蓝色带到达底部时 ,更换接受 器 ,全部收集此蓝色带 ,洗脱时间约 30 min。
装置图
洗脱
装柱
主要试剂及其物理常数
偶氮苯
-N=NHO
苏丹Ⅲ
-N=N-
-N=N-
300目 硅胶 石油醚、乙酸乙酯 乙酸乙酯
三、实 验 内 容 装 柱
干法装柱 湿法装柱 吸附剂装填紧密，排除 气泡。最终应使吸附剂的上 端平整，无凹凸面，无断层。
装柱
五、实验操作步骤
1、装柱：湿法装柱，在烧杯中，称取6g 300目的硅胶粉末，
瓶承接, 控制滴速为1 滴／秒,装完后在上面加一层脱脂棉（
，操作时要注意吸附剂始终不能露出液面）。
实验步骤（续）
• 加样：当液面刚好流至脱脂棉平面相切时，立刻关闭活塞， 加入 5mL左右的A 液 ,当
硅胶面又将要露出时 ,关紧活塞 ,用量筒准确加入 0. 50mL 以 A 液做溶剂的混合液(含甲
基橙和亚甲基蓝各为 0. 400 g·L -1) 。
需增加至100倍
5、柱高：柱子太高洗脱慢
三、实 验 内 容
加
样
样品为液体，可直接加样；样品为固体，可选
择合适溶剂溶解为液体再加样。加样时，要沿管
壁慢慢加入至柱顶部，勿使样品搅动吸附剂表面。
三、实 验 内 容 洗 脱
在柱顶不断加入洗脱剂，使
洗脱剂永远保持有适当的量，不 要让洗脱剂表面流干，使流动相 流速适当。
四、注 意 事 项
•
玻砂防堵塞
•
• •
装柱需紧密
加压不可大 溶剂勿流干
小
结
色谱法在有机化学中的应用:
分离混合物
精制提纯化合物
利用比移值(Rf)鉴定化合物
跟踪反应进程
小
结
色谱法的特点:
分离效率高 复杂混合物,同系物,异构体等。
灵敏度高
g-1(10-9)
可以检测出μg• g-1(10-6)级甚至ng•
柱
色
谱
一、实 验 目 的
了 解：
1. 柱色谱法分离有机物的原理。 2．固定相和流动相的选择原则。
掌 握：
1. 色谱柱的填充方法。 2．柱色谱分离的基本操作。
柱色谱分离示意图
洗脱剂(流动相) 混合物
二、实 验 原 理
吸附剂(固定相)
二、实 验 原 理 影响分离效果主要因素
洗脱剂的极性：溶解 度适中、不反应、易 获取回收 吸附剂的性质：均匀、 表面积大、不反应、 吸附能力不同
级的物质量。
分析速度快 几分钟或几十分钟内可以完成一个试
样分析。
柱色谱法分离甲基橙和甲基蓝
实验原理
甲基橙和亚甲基蓝均为指示剂,它们的结构式如下所示:
甲基橙
亚甲基蓝
由于甲基橙和亚甲基蓝的结构不同,极性不同,吸附剂对它们 的吸附能力不同,洗脱剂对它们的解析速度也不同,极性小、吸附能 力弱、解析速度快的亚甲基蓝先被洗脱下来，而极性大、吸附能力强、 解析速度慢的甲基橙后被洗脱下来，从而使两种物质得以分离。本实 验以硅胶为吸附剂，95%乙醇作为洗脱剂，先洗出亚甲基蓝，再用蒸 馏水作洗脱剂把甲基橙洗脱下来。