大鼠脑缺血模型制作
大鼠缺血模型
大鼠和小鼠的优势
1. 大鼠品种多，易于饲养，价格低廉 2. 纯种鼠属近亲交配，基因型相似，脑血管解剖和生理机能也相 似 3. 大鼠脑血管解剖和生理机能接近于人类 4. 脑血管损伤部位恒定，实验重复性好 5. 动物存活时间长，利于脑缺血相关病理改变过程的研究 6. 脑体积大小适宜，易施低温固定技术和组织生化分析 7. 有关系列大鼠的生理、药理和生化方面的实验资料可供分析比 较 8. 克服了体外实验无法实施再灌流的缺陷 9. 沙土鼠缺乏后交通动脉及完整的基底动脉环，两侧大脑供血相 对独立，通过闭塞一侧或双侧CCA即可复制效果明显的同侧或 双侧脑缺血模型
栓线法
由 ECA 插入 4 -0 尼龙线进入 ICA , 阻断 MCA起 始端而导致局灶性脑缺血。通过提拉插线可以造成 再灌流损伤模型。
优点：该法手术创伤小, 动物易长时间存活血栓形
成过程与人类相似可选择皮层梗塞部位
缺点：较早地导致终末动脉及微血管永久性闭塞 ,
不利于扩血管及促进侧支循环作，切开皮肤， 暴露颅骨，静脉注射光敏材料虎红酸钠，用特 定冷光源(500--600nm)照射切口处颅骨，光 线透过颅骨与血管内的光敏物质接触，激发光 化学反应而产生单线态氧，直接损伤血管内皮 细胞而诱导血栓形成。 优点：不开颅，手术创伤小，动物易长时间存 活，血栓形成过程与人类近似，适用于抗血小 板、抗血栓及内皮细胞保护药物的急慢性动物 实验研究。 缺点：较早地导致终未动脉及微血管永久性闭 塞，不利于扩血管及促进侧支循环作用的研究
开颅法、光学法、栓塞法、栓线法。
开颅法
麻醉动物，耳眼连线的中点垂直切开皮肤，通过钝
性分离颞肌，开颅后暴露MCA，用电凝器横过嗅束旁 的MCA使其凝闭，用10号手术丝线结扎MCA，造成MCA 支配区局灶性脑缺血模型。
大鼠局灶性脑缺血模型的建立
缺 血 侧 ， 侧 为 正 常 对 照 。 １ 水 合 氯 醛 腹 腔 内 注 射 麻 醉 ， 右 用 Ｏ 游 离左 侧 颈 总 动脉 （ Ａ） 甲状 腺 上 动脉 及 其 细 小 分 支 ， ＣＣ ， 分
～ １ 者 ， 水 肿 不 明 显 。光 镜 观 察 ： 组 左 侧 大 脑 皮 层 可 见 分 脑 Ｃ
高 ， 起 人 们 对 溶 栓 疗 法 的 重 新 认 识 。 目 前 适 用 于 溶 栓 研 有 不 足 之 处 。我 们 采 用 并 改 良 Ｏｖ ｒ ａ ｒ ｅ ｇ ａ ｄ ＫⅢ 等 的 颈 内 动 脉 注 入 自体 血 凝 块 的 方 法 ， 作 制
大 鼠 局 灶 性 脑 缺 血 模 型 ， 模 型 具 有 与 人 类 脑 缺 血 极 其 相 似 此
的特 点 ， 适 用 于溶 栓研 究 ， 报 道如 下 。 最 现
１ 材 料 与 方 法
散 在 的 小 缺 血 灶 ， 经 细 胞 轻 度 肿 胀 ， 神 经 元 胞 核 及 胞 浆 神 但
分 为 Ｃ 、 Ｃ Ｃ 、 共 ３组 （ ： 指 长 度 为 ２ ｍ 的 血 栓 栓 子 制 注 Ｃ ａ ｒ
隙 增 大 ， 质 间 隙 略 增 大 。缺 血 ２ ｈ组 缺 血 区 淡 染 的 同 时 缺 白 ４
血 局部 可 见 神经 元 变性 ， 固性 坏 死 ， 胞 周 围间 隙增 大 ， 凝 细 胞 浆 均匀 呈 嗜伊 红 改变 ， 核 结构 不清 ， 色加 深 。 期 的缺血 胞 染 此 范围最 大 ， 显 著 的 改变是 此 期 缺血 组 织 与正 常 组织 的 分界 最 最 清 晰可 辩 ， 质疏 松 ， 显淡 染 ， 大 量空 泡形 成 。 血 ４ｈ 白 明 有 缺 ８ 组 缺 血 中 心 区 可 见 凝 固 性 坏 死 ， 经 元 胞 浆 与 胞 核 结 构 不 神
大鼠脑缺血模型制作
大鼠脑缺血模型制作大鼠脑缺血是一种神经病理学状态，常用于研究脑缺血和再灌注相关的疾病，如中风和心脑血管疾病。
制作大鼠脑缺血模型可以帮助研究者深入了解脑缺血的机制，并探索治疗方法。
下面将介绍一种常用的大鼠脑缺血模型制作方法。
材料准备：1.正常健康的大鼠（约250-300g）2.异氟醚（用于麻醉大鼠）3.氧化氮（用于麻醉大鼠）4.0.9%氯化钠溶液（生理盐水，用于预先裂解血栓）5.弹簧夹（用于阻断大脑供血）6.血管夹（用于再灌注）7.生理盐水或PBS（用于清洗伤口和冲洗大脑）操作步骤：1.麻醉大鼠-以适当的浓度向氧化氮罩中送气，让大鼠吸入异氟醚麻醉。
-确定大鼠是否处于麻醉状态，如失去帕金森反射。
-为了确保大鼠的安全性和麻醉质量，要定期监测大鼠的许多生理参数，如呼吸频率、血氧饱和度和体温。
2.颅窗手术-将大鼠固定在手术台上，用5%碘伏消毒实验区域的皮肤。
-在头部进行剃发和消毒。
- 用手术刀在头部切开皮肤，在颅骨上切开一个直径约 1 cm的圆洞。
-清除头骨上的组织，暴露出颅骨。
-用电动开骨钻在颅骨上进行微抖动，直到打开一个圆洞。
通过控制速度和钻头的压力来避免损伤脑组织。
-用细钳将头皮撕开，暴露出脑膜。
3.制作脑缺血-用生理盐水或PBS洗涤脑膜，以确保大脑的清洁。
-用弹簧夹仔细阻断大脑的供血。
通常选择大脑的前动脉（MCA）或双侧MCA，使大脑区域发生缺血。
-检查大鼠是否出现神经功能缺陷，如软瘫、不对称性和意识丧失等。
-记录缺血时间，通常在20-30分钟之间。
-选择再灌注时间，通常是60分钟。
4.再灌注-在再灌注前，用生理盐水或PBS冲洗大脑。
通过防止缺血时间和再灌注时间的太长，以减少实验操作引起的伤害。
-用血管夹将阻断的血管解除，实现再灌注。
-观察大鼠是否恢复神经功能，例如排尿、动作和体位等。
-保持大鼠体温适宜，定期监测大鼠身体参数。
5.实验后处理-在实验结束后，用生理盐水或PBS冲洗伤口。
-给大鼠提供足够的水和食物，让其恢复。
脑血管病动物模型制作步骤及方法
脑血管病动物模型制作步骤及方法1自发性脑梗死模型高血压动物可形成自发性脑梗死。
常用的有原发性高血压和继发性高血压两大类。
前者以日本种的自发性高血压大鼠(SHR)及其易卒中亚型(SHRsp)为常用，后者为各种肾性高血压动物。
这种脑梗死与人类的脑梗死发病情况为接近，是目前较为理想的动物模型之一，国内主要的实验动物研究机构都有供应。
2沙鼠大脑中动脉缺血模型【操作步骤】成年沙鼠，10％水合氯醛(4ml/kg)腹腔麻醉，沿腹部中线于颈部切开。
剥离出一侧颈动脉，用银制钳夹夹闭。
考虑实验需要可实行长期夹闭或可再灌注。
【结果分析】由于沙鼠后交通动脉缺失，Willis环前后不连续，故经颈部夹闭一侧总动脉可以方便地造成同侧半球缺血，可依据沙鼠表现的体征，结合眼底观察镜观察眼底缺血情况判别。
3急性大鼠大脑中动脉阻塞全脑缺血模型【操作步骤】成年SD或Wistar大鼠，10％水合氯醛(4ml/kg体重)麻醉。
右侧卧位，在左眼外缘到左外耳道连线的中点，垂直于连线切开皮肤约2cm，沿颧弓和下颌骨，用文氏钳将手术面撑大，暴露鳞状骨的大部分，用牙科钻在颧骨前联合前内2cm处钻孔开颅。
在手术显微镜下切开硬脑膜，暴露出大脑中动脉，分离出中动脉周围的软脑膜和蛛网膜，使中动脉游离。
用双电极(电压12V)电灼损毁Willis环起始部至嗅沟段的大脑中动脉，使之阻塞。
为防止电极的电流对脑组织造成电损伤，在操作过程中不断向中动脉周围滴加生理盐水，并尽量缩短操作时间。
创面覆盖一小块明胶后，缝合肌肉和皮肤。
【结果分析】大脑中动脉从Willis环发出后向外跨过嗅束蜿蜒走行于大脑的外侧面，供应大部分的大脑半球，大脑中动脉在Willis环起始到嗅沟区发出许多的分支，供应豆壳复合体，所以电灼此段大脑中动脉的主干血流，复制中风模型的成功率较高。
用本实验手术方法复制的大鼠中风模型的成功率较高，死亡率低，较为理想，有面积不等的梗死区出现，行为障碍约占90％。
由于手术部切断颧弓，术后基本不影响动物的采食行为，并可以进行长期的观察，有利于建立慢性中风动物模型。
大鼠窒息性心跳骤停全脑缺血模型制作的改进
大 鼠窒息 性 心 跳 骤停 全 脑 缺 血 模 型 制作 的改 进
廖 常莉 。 姜 鲜。 张 英。 欧册 华 （ 州医 学院附属 医院 ， 泸 四川 泸 州 ６６０ ） ４００
摘要 ： 目的
对 大 鼠窒 息性心跳骤停 全脑缺 血模型进行 改进 。方法
（ ０ ０ ） ａｄｔ ｅｒｎ ｅ ｓｉ ｅｅｌ ｅ ａ ｏｅｉ ａ ｏｐ（ ０ ０ ） ｏ ｃ ｓ ｎ Ｒ ｔ ｄ ｌ ｆ ｓ Ｐ＜ ． １ ， ｎ ｅｎｕ ａ ｄｎｉｅ ｗ ｒ ｗ ｒｈ ｎｔ ｓ ｓ ｍ ｇ ｕ Ｐ＜ ．１ ．Ｃ ｎ ｌ ｉ ｓ ａ ｍｏｅ ｏ — ｈ ｏｌ ｔｓ ｏ ｔ ｈ ｎｈ ｒ ｕｏ ａ
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全脑缺血再灌注动物模型建立方法
全脑缺血再灌注动物模型建立方法引言全脑缺血再灌注是一种临床上常见的危重症，常见于心脏骤停、溺水等情况下，出现全脑缺血缺氧，随后通过复苏措施进行再灌注。
建立全脑缺血再灌注动物模型对于深入研究相关疾病的发病机制，评估治疗方法具有重要意义。
本文将介绍一种常用的全脑缺血再灌注动物模型的建立方法。
动物模型选择建立全脑缺血再灌注模型时，主要选择小鼠或大鼠作为实验动物。
一般情况下，小鼠更为常用，因其易于操作、成本较低，且其脑血管结构与人类相似，因此具有较高的可比性。
对于大鼠，其相对较大的体积能够更好地模拟人体情况，但操作相对较为复杂。
手术操作准备在进行全脑缺血再灌注动物模型的建立前，需要进行手术操作的准备工作。
首先需要进行动物的麻醉和固定，确保手术操作的安全性。
其次需要准备全脑缺血再灌注模型所需的仪器和设备，包括导管、监测仪器等。
在手术操作前，还需要对实验动物进行术前处理，包括禁食、定时给予抗生素等。
手术操作步骤1. 麻醉和固定：将实验动物置于麻醉箱内，使用合适的麻醉药物使其达到麻醉状态。
随后将其固定在手术台上，以确保手术操作的稳定性。
2. 手术部位暴露：在麻醉状态下，对实验动物进行皮肤消毒，随后进行手术部位的切开，暴露出颅骨表面。
3. 血管结扎：通过显微外科手术操作，对实验动物的颅骨表面的动脉和静脉进行结扎，以模拟全脑缺血的状态。
4. 缺血时间控制：根据实验设计的需要，控制全脑缺血的时间，一般为15至20分钟。
5. 再灌注：在全脑缺血一定时间后，通过解开血管结扎，使血液重新灌注至大脑。
6. 术后处理：对实验动物进行术后处理，包括给予液体、保暖、饲养等。
检测指标和评价方法建立全脑缺血再灌注模型后，需要对实验动物进行一系列的检测和评价，以评估其神经功能恢复情况。
常用的评价指标包括神经行为学评分、脑组织病理学检测、神经元凋亡检测、脑组织炎症因子检测等。
通过对这些指标的检测和评价，可以全面地评估全脑缺血再灌注模型的建立效果，为后续的实验研究提供可靠的依据。
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型的制备
线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的方法研究马贤德1孙宏伟1 柴纪严1 赵金茹1（1 辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110032；）摘要①目的建立一种比较系统，操作简单，成功率高的大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注动物模型，达到只要读者根据本文所述的方法操作就能制作出MCAO再灌注模型的目的。
②方法成年健康雄性 SD大鼠40只，参照Longa法并适当改进建立MCAO模型20只，假手术组20只。
本文将详细叙述手术过程以及再灌注时间点的合理选择。
最后利用行为学测试、四氮唑(TTC)染色对模型成功与否进行判定。
③结论线栓法是一种操作简单的制备MCAO 再灌注动物模型的方法，并且此方法的再灌注效果较为明显。
关键词动物模型；脑缺血；再灌注；线栓法Establishment a model of rat ischemia-reperfusion injury with intraluminal sutureMa Xian-de1 Sun Hong-wei1 Chai Ji-yan1 Zhao Jin-ru1(1.Liaoning University of Chinese Traditional Medicine, Shenyang, 110032) Abstract: Objective To establish a model of rat ischemia-reperfusion injury, in terms of the model, the operation will be simple, and the achievement ratio will be high. Methods: 40 Male Sprague-Dawley ( SD ) rats were separated into two groups randomly: 20 were model of rat ischemia-reperfusion injury based on Longa method, and the other 20 were sham-operated group. The process of the operation and the selection of different time point following ischemic-reperfusion were discussed in the paper. What’s more , the model was appraised by behavioral test and Triphenyl Tetrazolium Choloride（TTC）Staining. Conclusion: The operation of intraluminal suture method is very simple for the establishment of model of rat ischemia-reperfusion, what’s more, the effect of reperfusion is very obvious.Key words: Animal Model, ischemia, reperfusion, intraluminal suture脑缺血再灌注动物模型是研究缺血性脑血管病的一条重要途径，因为脑缺血再灌注动物模型具有很好的重复性并能最大程度模拟人类缺血性卒中的发生。
全脑缺血动物模型制作步骤及方法
全脑缺血动物模型制作步骤及方法1两动脉阻断法(occlusion of bilaterial carotis communis artery) (1)复制方法 SD大鼠，雌雄不拘，体重为250～300g。
经腹腔注射水合氯醛(350～400mg/kg体重的剂量)或戊丨巴丨比丨妥丨钠(50～60mg/kg体重的剂量)麻醉后，仰卧位固定，剃除颈部毛发，手术区域皮肤常规消毒。
颈前正中切口，分离双侧颈总动脉(carotis communis artery, OCA)，夹闭双侧CCA，同时合并低血压以减少脑血流量，造成急性脑缺血。
由于啮齿动物(沙土鼠除外)脑血液循环有较人类丰富的侧支循环，仅结扎双侧CCA不足以明显降低脑血流量(CBF)，因此结合降压药三丨甲噻吩、酚妥拉明或静脉放血等方法使动脉血压降低至50mmHg(6.7kPa)，使CBF降低至正常的5％～15％。
放血方法：由颈静脉插管至右心房，供放血并连续记录EEG。
采用抽血的方法放血，失血达80mmHg(10.7kPa)时结扎双侧颈动脉，再继续抽血，使血压降至6.7kPa。
(2)模型特点此方法的优点是操作简便，用一次性手术即可完成，阻断可逆，可人为控制动物呼吸。
采用这种方法复制的模型，能进行缺血再灌流损伤的研究，模拟了临床上休克、心功能不全、脑血管严重狭窄或阻塞合并血液低灌流引起的脑循环障碍，造成不同程度的脑组织缺血损伤。
因而，对于探讨人类缺血性脑损伤的发病规律，评价抗脑缺血药物的疗效等有价值。
缺点是：①模型不能在清醒动物上复制，无法研究血管狭窄后行为学的变化。
②常因存在侧支循环而造成缺血不，部位不宜确定。
③脑缺血时限长，有时导致脑缺血后抽搐、癫癎等并发症的发生。
且由于低血压状态，可干扰其他器官、组织的供血和实验结果。
此方法除可用于大鼠外，也可用于兔、猫和猴的性脑缺血。
2四动脉阻断法(occlusion of four blood vessels)(1)复制方法 SD大鼠，雌雄不拘，体重为250～300g。
线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型研究
１ 左 连 富 ． 式 细 胞 样 品 制 备技 术 ． 京 ： 夏 出版 社 ．９ １ 流 北 华 １９ ． ２ Ｍａｕ ｅ ，ｌｓａＤ， ｌ ａａ ． ｋｌａ ｄｈ ｄ ｌ ｏ ｙ ｚｍｄｒＳ Ｐｅｃ Ａ ｍ ｓｎＡ Ａｊ ｙ ｎ ｙｅｒ ｅ ｆｃ－ ｅ ｌ ｏ
参与和作用 。 Ｃ Ｋ 基 因及蛋 白在食管上皮不典型增 生过 程中已有明 Ｄ ２
显的异常， 尤其 是 在 中度 及 重度 不 典 型 增 生 中 。 示 Ｃ Ｋ 提 Ｄ ２的 异 常 表达 可 能 促 进 食管 上 皮 异 型 增生 的过 程 。另 外 ．Ｄ ２在 ＣＫ
４
３
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ｃｎｒｌ０ａｏ ｔ ｉ ｒｇｌｔ ｎ Ｃ ｌ Ｃ ｃｅ２ ０ ， （２ ： ３ － ｏ ｔ ｐ ｐｏ ｓ ｅｕａｉ ． ｅｌ ｙｌ，０ ７ ６ １ ）１ ７ ｏｔ ｓ ｏ ４
１４ ． ４ ２
学 意 义 ，表 明 ｃｃｎ ｙｌ Ｅ可 能 是 食 管 高 分 化 鳞 癌 的分 子 标 志物 ｉ
增殖 活性 ， 其恶性程度会越 高。 本研究结 果显示 ： 细胞周期调控异 常在食管癌发生发展 过程 中作用显 著 ，对细 胞周期调控 元件 的联合 检测 ，结合 Ｄ Ａ含量及倍体 的分析 ， Ｎ 将有 助于进一步 阐明食管癌的癌变 机制和寻找癌变不同阶段 的分子标 志物 。
改良式大鼠全脑缺血再灌注模型的制作及海马回核因子-κB的表达研究
ｈ海马 Ｃ １区苏木精 一伊红 （ Ｅ 染 色的病理改变 ；免疫组织化学法检 测 Ｎ Ａ Ｈ ） Ｆ—Ｋ Ｂ的表达 。结果
５％，Ｂ组成功率为７％ ， ５ ０ Ｃ组成功率为９％，３ ０ 组造模成功率间差异有统计学意义 （２ ６０ ，Ｐ＜ ．５ ，ｃ组的 Ｘ ＝ ．７ ００ ）
造 模 成 功 率 高于 Ａ、Ｂ组 ，差 异 有 统 计 学 意 义 （ ０ ０ ） Ｅ 染 色显 示再 灌 注后 海 马 区神 经 元 大量 坏 死 ；Ｓ Ｐ＜ ． ５ 。Ｈ Ｏ组 Ｎ Ｆ—
Ｙ Ｎ ｈｎ ｇ ａ ｇ ＵＫ ， Ａ ＧＳ ｅｇ— ｕ ｎ ，Ｓ ｅ
ｈ ｎ ５１ ０３， Ｃｈｉａ ｅ ８１ ｎ
Ｙ ｈ— ｉ ｔ １ Ｄｐ ｒ ｅｔｆＥ ｒｅｃ ，Ｆ ｙｎ ｅｐｅ ｏ ｉ ｌｆＳｅｚｅ ，Ｓ ｅｚ ａ ｘ，ｅ ａ． ｅａｔ ｎ ｏ ｍ ｇｎｙ ｕｏｇＰ ｏｌＳ ｓ ｔ ｈｎｈｎ ｈｎ— ｍ ｅ Ｈ ｐ ａｏ
Ｋ ｐ５表达在胞质 中，ＩＲ组 ３ｈ胞核 中就有表 达，１ 高峰 ，到 ２ ４ 都 表达在胞核 中，与 ｓ Ｂ６ ／ ２ｈ达 ４ｈ和 ８ｈ ０组 比较差异有
统计 学意 义 （ ０ ０ ） Ｐ＜ ． １ 。结 论 改 良后 的 四血 管 阻塞 建 模 法 简单 、经 济 、成 功 率 高 ，值 得 推 广 。 通 过 成 功 模 型 证 实全
ｃｅｓ ｅＳ ＣＥ Ｓ ａ ｆ ｏ ｅｉ ｎ ｅ ｒ ｉｅｔｅｅ ｐｅｓ ｎ ｏ ｎ ｃ ａ ｃ ｒ ａ ｐ Ｂ （ Ｆ—Ｋ ）ｉ ｉ ｏａ ｕ ． Ｍｅｈ ｒａｅｔ Ｕ Ｃ Ｓ ｒｔ ｏ ｄ ｌ ｇａ ｄｄ ｔ ｍ ｎ ｘ ｒｓｉ ｆ ｕ ｌ ｒ ａｔ —ｋ ｐ ａ Ｎ ｈ ｅ ｍ ｎ ｅ ｈ ｏ ｅ ｆ ｏ Ｂ ｎｈｐ ｃｍｐ ｓ ｐ ｔ－ ｏ ｓ Ｎ ｎ ｔ ａ ｕ Ｄ ｒｔ ｗ ｒ ｉｉ ｄ ｉｔ ｇｏ ｐ ｅｔ ｒｌ ｒ ｒ ｅ ｃ ｏ ｏ ｇ ｌｔ ｎ （ ｒｕ ，ｖｒ ｂａ ａ ｅ ａ ａ ｅ ｄ ｉｅ ｌ ｈ Ｓ ａｓ ｅｅ ｄ ｄ ｎｏ ｒｕ ｓｖ ｒ ｂ ａ ａ ｅ ｌ ｔ ｃ ａ ｕａ ｏ ｇｏ ｐ Ａ） ｅ ｅ ｒｌ ｒ ｒ ｄ ｍ ｇ ｙ ｄ ｖ ｅ ｅ ｔ ｙ ｅ ｒ ｉ ｔ ｔｙ
脑缺血模型的制作
脑缺血模型的制作：1.动物模型制作原理制作脑缺血动物模型的方法很多，但常用方法主要有结扎法和栓塞法两种，结扎法是运用外科手段结扎脑的供血动脉，中止脑的血氧供应，它可以进一步分为颅内结扎和颅外结扎。
颅外结扎主要是用于制作全脑缺血模型，可进一步分为①4血管结扎，即结扎颈总动脉/颈内动脉和椎动脉；②2血管结扎，即结扎两侧颈总/颈内动脉，同时抽取动物一定量的血液，使血压降低到50mmHg以下，达到造成全脑缺血的目的。
这种方法因为需要监视和控制血压，实验条件要求严格，且因椎动脉未予结扎，往往造成的脑缺血是不完全的。
另一种两血管结扎法是用沙土鼠（Gerbil）进行，利用沙土鼠脑底Willis动脉环发育不全后交通动脉缺如的特点，结扎两侧的颈总或颈内动脉造成前脑缺血。
2. 实验动物实验动物的选择对脑缺血模型是非常重要的，理论上兔、猫、狗和灵长类都可被用来制作脑缺血模型，但更多的人倾向于选择使用鼠作实验。
这主要是基于如下认识：因为鼠是小动物，价格便宜，躯体小，消耗药品试剂较少；鼠的脑血管解剖和生理与高级动物无明显差异；一些在体的实验操作更容易进行，甚至在伦理学上更容易接受等等。
3. 仪器和设备制作脑缺血动物模型的仪器设备分为二类：一类是为动物手术服务，包括一套手术器械，手术显微镜，颅钻，脑立体定位仪，温度控制装置（控温仪、红外线灯和加热垫），呼吸机；另一类是用于监测和分析的仪器，包括脑电记录装置，血压记录装置，多谱勒血流记录仪，血气血糖分析仪。
4. 四血管结扎脑缺血模型的制作这是一个广泛应用的脑缺血模型。
最常用的为Pulsinelli的改良方法。
该模型选用Wistar大鼠，可以在清醒和自由运动状态下制作严重的脑缺血和恒定的病理学改变。
该模型分二个阶段制作，第一阶段：将动物麻醉，按置在脑立体定位仪上，调节耳杆和门齿高度使鼠头前倾约30度，同时用橡皮栓住鼠尾给以轻度的牵拉力，使颈椎伸直，翼孔呈水平位，便于观察。
枕骨下第一颈椎水平正中切口，仔细分离两侧第一颈椎横突，暴露第一颈椎横突上的翼孔，翼孔下有两则椎动脉通过，用小的单极或双极电凝器插入翼孔烧灼闭塞双侧椎动脉。
资料 大鼠脑缺血再灌注模型的建立
大鼠脑缺血再灌注模型的建立首席医学网2009年10月27日16:34:55 Tuesday医师杂志征稿急救医师学术年会冠心病诊疗研讨会网站运营核心论文年内发表泌尿外科主任研讨世界神经内镜大会内蒙中医药超值牙科管理课程世界糖尿病大会神经病学国际论坛心血管介入研讨会欧洲放射学年会美国骨科年会中医药学术大会作者：先雄斌杨朝鲜作者单位：(泸州医学院神经生物学研究室，四川泸州646000)【关键词】脑缺血/再灌注;模型脑血管病具有发病率高、致残率高、死亡率高、复发率高和并发症多的特点，是中、老年人致死和致残的主要疾病。
缺血性脑血管病约占全部脑血管病人的70%～80%。
因此建立稳定的、可重复、损伤小的大鼠脑缺血再灌注模型具有极其重要的价值。
以往模型的建立〔1，2〕均缺乏详细操作过程及各操作细节的注意要点，因而建模的重复性和成功率相对较低。
本文成功制备了大量SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，现介绍如下。
1 对象与材料1.1 实验动物的选择由于SD大鼠具有成本低、种系纯合性好、抗感染能力较强，与人类的脑血管解剖相似,以及与Wistar大鼠比较,SD大鼠可见恒定的顶颞皮质梗死灶，梗死体积大于Wistar大鼠，变异较小，周边不完全坏死区(半暗带)所占体积明显小于Wistar大鼠等优点〔3〕,因此本文采用成年SD大鼠(第三军医大学实验动物中心),清洁级，体重250～320 g，雌雄不限。
1.2 器械和药品线剪1把、眼外科剪2把、弯镊4把、4#手术缝线、6×17三角形缝针、0.2 mm直径的尼龙线、游标卡尺1把、持针钳1把。
多聚 L 赖氨酸、戊巴比妥钠、速尿(20 mg/支)、硫酸庆大霉素(80 mg/支)等。
1.3 阻塞线的制备把0.2 mm直径的尼龙盘线剪成6 cm每段，一端靠近酒精灯火焰加热，并放于显微镜下观察，要求末端成光滑球面且直径不要大于0.30 mm。
过大者可能造成较难通过颈静脉孔，不光滑者可能刺破血管，导致蛛网膜下腔出血，且可引起血小板聚集和血栓形成，导致微血管循环的逐渐恶化。
大鼠MCAO模型制作学习
大鼠MCAO模型制作学习大鼠是常用的实验动物之一，在中风研究中，大鼠的MCAO（脑缺血再灌注）模型被广泛应用。
本文旨在介绍制作MCAO模型的步骤和必要的操作要点，以帮助读者更好地理解和应用该模型进行相关研究。
本文为第二版，相较于第一版，进行了更新和补充，以提供更详尽和准确的信息。
1.实验动物的选取在制作MCAO模型前，需要选择合适的实验动物。
一般情况下，成年雄性大鼠是最常用的模型动物。
选择同一品系和年龄相仿的大鼠，以减小实验结果的差异性。
2.麻醉和固定在操作前对大鼠进行全身麻醉，常用的麻醉药物有：45 mg/kg的氯丙嗪、35 mg/kg的阿托品和5 mg/kg的氯胺酮。
氯胺酮在操作过程中可以作为镇痛药物使用。
麻醉后，将大鼠固定在手术台上。
可以使用特制的外耳道委内瑞拉套和鼻鼻夹来固定大鼠的头部，以保证操作的准确性。
3.手术前准备首先，在头部的横纹上进行刮毛和消毒。
然后，注射青霉素（40,000 U）和伯氨喹（0.02 mg）以预防感染。
同时，使用外科剪刀剪开皮肤，将双眼收敛于外侧，暴露侧枕中动脉和颈内动脉。
4.暴露颈外动脉用外科剪刀剪开皮肤和筋膜，小心地将侧脖肌肉向后收拢，可以使用吸引器来辅助。
将剪开的筋膜用湿纱布或者胶布临时覆盖住。
5.分离颈外动脉和侧脑动脉用显微镊子小心地拉开组织，找到颈外动脉和侧脑动脉，将其两者之间的分支切断。
注意不要损伤到其他周围的组织。
6.模拟大脑缺血使用小血管夹或者线缚住颈外动脉，是的血流中断。
夹或者线的拇指静脉下方位置比较理想，但是要注意不要损伤到其他组织。
7.设定缺血时间一般情况下，将血流中断一小时可以模拟大脑缺血，如果需要模拟更严重的缺血，可以延长血流中断的时间。
8.再灌注当需要终止大脑缺血时，可以通过解开夹子或者拆除线来恢复大脑的血流。
再灌注后，动物会逐渐恢复意识并呈现异常的行为和生理反应，比如抽搐、四肢不协调等。
9.手术封口待实验结束后，用缝合线或者胶布将切口封闭。
线栓大鼠大脑中动脉缺血模型制作方法的改进
线栓大鼠大脑中动脉缺血模型制作方法的改进（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：吴培要, 王静, 谢丽芬, 张贵林, 任光友【关键词】大脑中动脉，脑缺血；模型，动物；大鼠，Sprague-Dauley；改良线栓法缺血性脑血管病的基础研究需要建立简便有效的动物模型，制备局灶性脑缺血模型的方法有很多种，常用的有经颞下或经眶入路夹闭或电凝大脑中动脉(MCA)、光化学诱导血栓形成等。
目前，国内外广泛应用的另一种方法是颈内动脉(ICA)线栓法。
可逆性线栓大鼠大脑中动脉缺血模型适于脑梗死缺血半暗区病理生理研究、影像学研究、缺血再灌注损伤机制和脑保护药物研究。
但是，据国外文献报道，可逆性线栓大鼠大脑中动脉缺血模型制作成功率不高（为30%～70%），且模型的神经功能评分变异较大[1]。
鉴于此，在经多次预试验的实践基础上，对可逆性线栓大鼠大脑中动脉缺血模型制作进行改进，以图提高其成功率和稳定性，增加实验结果的可靠性。
1 材料与方法1.1 实验材料显微镊、手术刀、止血钳、微动脉夹、尼龙线、开口器、大鼠固定器、油性记号笔、直尺等。
水合氯醛（AR，天津市大茂化学试剂厂，批号：20070403）；SPF级SD大鼠60 只，雌雄兼用，体重280～320 g，由重庆市中药研究院动物中心提供，许可证号：SCXK （渝）2007-0006[2]。
1.2 实验方法1.2.1 栓子制作将尼龙线剪成长4~5 cm 线段，一端加热呈圆球状（直径0.28 mm左右）制成栓子[1，3]。
用黑色油性记号笔在圆球头端及距离圆球头端1.8~2.0处各作一记号备用。
1.2.2 动物分组将60只大鼠随机分成传统方法组和改良方法组，每组30只。
1.2.3 模型制作传统方法制作模型（传统组）：大鼠麻醉（腹腔注射10% 水合氯醛，0.35 ml/100 g[4])，取颈正中切口，撕裂胸骨舌骨肌并暴露气管，从气管右侧分离颈总动脉（CCA）、颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）、枕动脉；结扎枕动脉，分离颈内动脉（ICA）及颅外分支翼腭动脉。
建立大鼠全脑缺血模型制作的方法改进
ｔｅ ｔ ｎ ｒ ｕ ｔｅ ｃ ｂ ｅ ｖ ｔｏ ｒ ｅ ｒｔ ａ ｈ ｔｉ ｈ ｍ ｒ ｕ （ ｒ ａｍｅ ｔｇ ｏ ｐ ａ ａ ｈ ｏ ｓ ｒ ａ ｎ ｗｅ ｅｆ ｗｅ ｈ ｎｔ ａ ｎ ｓ ａ ｇ ｏ ｐ Ｐ＜ ０ ０ ） Ｃｏ ｃｕ ｉ ｎ Ｃｅ ｅ ｒ ｌ ｓ ｈ ｍｉ ｄ ｌ ｉ ． １ ． ｎ ｌｓｏ ｒ ｂ ａ ｃ ｅ ａｍｏ ｅ ｉ
【 键 词 】 大 鼠 ； 全 脑 缺 血 ／ 灌 注 ； 模 型 关 再
【 图分 类 号】 Ｒ 一３ 中 ３２
【 献 标识 码 】 Ａ 文
【 文章 编 号 】 １ ７ — ５ １ ２ １ ） １０ １ 一３ ６ ２ ３ １ （ ０ ０ ０ ・ ０ ８Ｏ －
Ｉ ｍｐｒ ｖ ｍ ｅ ｆｃ ｒ ｂ ａ ｓ ｈ ｍ ｉ ｏ ｅ ｏ ｅ ｎｔｏ ｅ ｅ ｒ ｌｉｃ ｅ ａ ｍ ｄ ｌ
（ 义医 学 院第 五 附 属 医院 ，广东 珠海 ５９ ０ 遵 １ １０）
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO)制备方法
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型制备前言相信不少神经内科的研究生都作过或将要作大鼠线栓模型，都有一个从查文献了解方法到跟师兄、师姐学习再到自己体会摸索直至熟练的过程，在模型制作的过程中可能的经历了从模型不成功的郁闷到熟练后成功的喜悦（我们是有这样的感觉）。
为了缩短各位将要作或刚开始作MCAO模型的战友的摸索过程，提高模型制作的成功率，我们愿意将自己的经验与大家分享，相信各位战友看过后将对制作大鼠线栓模型有更深的认识，并以其为乐趣，同时欢迎各位熟练的战友与我们交流经验。
第一部分线栓模型制备理论及经验⒈ 插线法局灶性脑缺血模型简介八十年代 Koizumi 和 Longa 创用了不开颅的大鼠 MCA 可逆性脑梗塞模型，此后，应用插线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的方法不断改进和完善，已渐趋成熟，目前该法已逐渐取代开颅法而成为最流行的方法。
该模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。
从 ECA 插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。
此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。
1994 年 Huang 等[55]首次将线栓技术应用于小鼠局部永久性脑缺血模型。
1997 年 Hara等[56]将线栓技术改进后应用于小鼠局部暂时性脑缺血模型。
此后不断有学者借助于显微技术和多功能生理监测手段建立小鼠局部线栓脑缺血模型[57,58]。
国内蒋晓帆等[59]，王芙蓉等[60]也对该方法进行了研究。
线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。
控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。
但线栓造模也并非完美无缺，存在着下列不足：①线栓造模过程是非直视下的手术，血流是否完全阻断不能即刻得知。
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脑缺血模型分类及制备
1.全脑缺血模型
一般采用四血管闭塞法制作大鼠全脑缺血模型。
也有人通过结扎双侧颈动脉闭塞配合低氧或放血降压使全脑缺血。
但是全脑缺血模型与人类通常的脑梗死（多为单一血管闭塞）情形不一致, 且不能进行健患侧自身对照所以全脑缺血的动物模型在脑缺血研究中用的较少。
2. 局灶性脑缺血模型
2.1.线栓法：大脑中动脉阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前最常用的局灶性脑缺血模型,MCAO 模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。
从ECA插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。
此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。
线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。
控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。
1.0实验动物
1.2 SPF级SD大鼠，健康，雄性，体重为250g-300g
1.3.建模方法
1.4 颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，颈内动脉和颈外动脉。
使用6-0丝线在距离颈总动脉分叉4mm处结扎颈外动脉远心端，在颈外动脉穿入另一根6-0丝线，在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。
3.使用动脉夹夹闭颈总动脉。
在距离颈总动脉分叉处3mm处的颈外动脉上剪一个小口，将一根头端处理过的0.33mm直径的尼龙线从小口中插入，进入颈内动脉，并向内插入大脑中动脉，尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约16±1mm。
4.缺血后90min拔掉线栓，用6-0丝线结扎外动脉近心端，用3-0丝线缝合颈部伤口，活力碘消毒伤口，将大鼠放在加热垫上，待清醒后放入恒温抚养箱饲养。
2.2 化学刺激诱导血栓性阻断法
首先开颅暴露嗅束和大脑下静脉之间的大脑中动脉，并置一小片塑料薄膜保护血管周围组织，将浸有50% FeCl3溶液10ul的定量滤纸敷于暴露的大脑中动脉上30min。
术后24h大脑中动脉内即可形成混合性血栓。
其优点既能反应抗栓药又能反应溶栓药的药效，缺点是必须开颅，创伤较大。
2.3 微栓子阻断法
微栓子栓塞法是将微栓子分段注入颈内动脉，这样不仅颅内形成栓塞，而且颅外也栓塞，有一定的缺点。
近来有研究者改良了微栓子阻断法，将导管插至大脑中动脉起始部的血管腔内，通过导管把微栓子注入颅内段, 对栓子进入大脑中动脉供血区所致的损伤进行组织病理学分析等，这种模型成功率高些，但是也存在一定缺点。
2.4 开颅阻断法
利用显微外科技术，开颅暴露大脑中动脉，电凝阻断大脑中动脉的不同部位，发现在基底核和皮质区这些部位可形成相对比较恒定的梗死灶。
这种模型在一定程度上接近人类脑缺血的情况，但在实验过程中可能会一定程度上损伤相邻的部分脑组织。
2.5光化学诱导法
通过静脉途径注射光化学诱导剂玫瑰红B，然后用特定波长（560nm）的光束经颅骨表面照射大脑特定的部位,被照血管内产生光化学反应，引发血栓形成,建立大脑皮质血栓性梗死模型。
后来，又有人建立了老年大鼠光化学诱导局灶脑梗塞模型。
这类模型所造成的脑梗死现象和人类脑血栓形成的发病过程相似，并且根据此模型可以指导药物的研究。
然而毛细血管损伤所形成的脑血栓仍然和临床病人发生的脑血栓存在一定的差异。
2.6 内皮素诱导法
内皮素是一种内源性血管收缩活性物质，可通过其强烈持久的缩血管作用使局部脑血流量减少促进脑梗死形成外，还能直接损伤神经元及胶质细胞诱发脑缺血。
这种方法优点在于该模型可以控制脑缺血的再灌注时间，缺点在于需要开颅手术。
2.7地塞米松法
采用肌肉注射地塞米松的方法造大鼠血瘀模型，每日于大鼠后腿内侧肌注地塞米松溶液0.2mg|kg ，连续注射10d,血瘀模型成功时，麻醉动物分离两侧颈总动脉作结扎术，造脑缺血模型。