多肽切割简介..

The Peptide Quality Standard
减压过滤

用切割液将附着在切割管上的树脂洗下来，
收集滤液。
*注意：标签号码对应。包括树脂切割管、切
割液收集管和砂心漏斗上的标签号码一一 对应。
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沉淀、离心、洗涤



根据大多数肽在非溶剂中不溶的特性及温 度越低，溶解度越低的性质，我们用冷乙 醚来沉淀溶解在切割液中的多肽。 操作时应注意：
3）、离心时，离心机的转速为3500Rad/Min， 离心时间为2min，确
保肽能完全沉淀下来。 4) 如序列为短肽或者序列中疏水性氨基酸较多,用乙醚沉淀时需加入
一定量的石油醚,再离心。如还不能沉淀下来，则需将上清液旋蒸。
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得粗品肽抽干送QC

切割液的配比

E液：TFA:茴香硫醚:苯酚:EDT:水 =87.5:5:2.5:2.5:2.5

F液：TFA:TIS:水=95:2.5:2.5
源自文库
*注：苯酚的体积是指在熔点下熔融的体积，其他 液体为常温下的体积。 还原切割液：10ml的E液加100-200mg的 NH4I,0.5ml的DMS,摇匀，静置，用上清液！
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切割液用量

一般按10-15ml/g 树脂加入切割液。 如0.2mmol的合成量，树脂的取代度为0.5 左右，这样合成前空白树脂重为0.4克， 加上合成后由肽链引起的增重(15肽)，树 脂大约0.7g，因此，需要加入大约8ml切 割液。
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切割液低温储存:(-20℃) ⒈E液不得超过一周 ⒉F液不得超过一个月
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切割液的选择

根据肽的序列上氨基酸的不同，选用不同 的切割液，除去肽链上氨基酸的保护基团。
YES 含有Trp，Met或Cys(Trt) NO
E液
F液
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多肽切割简介
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切割流程图
准备工作
切割液的选择
切割液的配制
仪器设备的调试
加入切割液并于摇床震荡
抽滤并收集滤液
沉淀、离心、洗涤
得粗品肽抽干送QC
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切割前准备工作



文件和树脂一一对应检查 树脂称重 切割液配制
将离心好的粗品肽于真空干燥器中，抽真 空12小时以上，送QC检测并复核称量粗品 重量。
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安全防护

在切割操作中一定要戴好相应的防护器具(
防毒面具,防强酸强碱防腐蚀牛筋橡皮手套,防护 面罩),并且检查通风柜是否开启,保持窗户打开以 便空气对流。

切割时间


切割时间：是指向树脂中加入切割液开始，到用 乙醚沉淀滤液为止这段时间。 大部分linker用 TFA处理2.5h已经足够，但是要完全去除一些侧链 保护基团则须要延长一些时间。 切割时间对肽链的影响：切割时间太长，肽链容 易断裂，粗品中的产品含量就少；切割时间太短， 树脂上的肽链没能完全切下来，或者肽链上氨基 酸侧链保护基团不能完全除去。对于30个以上的 肽来说，适当延长时间。对于切割不完全的树脂 和粗品肽可依据已得粗品的质量、色谱和质谱， 考虑重切。
1）、看收集管中滤液的量。一般少于15ml的， 用一个离心管离心即可；多于15ml的要用两个离 心管，以洗涤完全。
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2）、边倒边用乙醚冲，使在乙醚中析出的肽尽量分散。如出现结块、 抱团等现象，应用干净的玻璃棒将其打散。 如用玻璃棒还不能将其打散或粘在玻璃棒上，则需将其用TFA溶解后 再用乙醚沉淀。

离心机运转时一定要保持顶盖是封闭状态， 必须等离心机停止后才能打开顶盖。 当三氟乙酸溅到皮肤时,应用大量清水冲洗, 然后涂上专用烫伤膏。
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