10 鼠神经生长因子

注射用鼠神经生长因子
Zhusheyong Shu Shenjing Shengzhangyinzi
Mouse Nerve Growth Factor for Injection
本品系由健康小鼠颌下腺提取的生物活性蛋白质。

经分离、纯化后加入适宜稳定剂后冻干制成，不含防腐剂。

1 基本要求
生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。

2 制造
2.1 小鼠颌下腺来源及采集
2.1.1 采用体重为20克以上60-90日龄健康雄性小鼠，小鼠应符合清洁级动物相关要求（附录XXX）。

2.1.2 采用适宜方法处死小鼠，经局部消毒处理后摘取颌下腺，剔除其他组织后备用。

如需存放应冻存于-20℃以下，并规定保存时间。

2.2 原液
2.2.1 提取
采用适宜的方法将小鼠颌下腺破碎匀浆，离心取上清。

2.2.2 纯化
采用经批准的方法进行纯化、病毒去除或灭活后即为鼠神经生长因子原液。

2.2.3 原液检定
按3.1项进行。

2.3 半成品
2.3.1 配制
按成品规格配制，并加入适宜稳定剂。

2.3.2 半成品检定
按3.2项进行。

2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。

2.4.2 分装及冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”及附录I A有关规定。

2.4.3 规格
应为经批准的规格。

30μg(≥15000AU) /支18μg(≥9000AU) /支20μg(≥9000AU)/支
2.4.4 包装
应符合“生物制品包装规程“及附录I A有关规定。

2.5 病毒去除和灭活
生产过程中应采用经批准的方法去除和灭活病毒。

如用灭活剂(如有机溶剂、去污剂)灭
活病毒，则应规定对人安全的灭活剂残留量限值。

3 检定
3.1 原液检定
3.1.1 生物学活性
依法测定（附录Ⅹxx）。

3.1.2 蛋白质含量
依法测定（附录ⅥB第二法），应不低于0.1mg/ml。

3.1.3 比活性
为生物学活性与蛋白质含量之比。

每1mg蛋白质应不低于5.0×105AU。

3.1.4 纯度
3.1.
4.1 电泳法
依法测定（附录ⅣC）。

用非还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于10μg（考马斯亮蓝R250染色法）。

经扫描仪扫描，纯度应不低于98.0%。

3.1.
4.2 高效液相色谱法
依法测定（附录ⅢB）。

色谱柱以适合分离分子质量为5～60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；流动相为0.25mol/L磷酸盐缓冲液(含0.15mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L磷酸二氢钠溶液)-乙腈（85∶15）；上样量应不低于20μg，在波长280nm处检测，以鼠神经生长因子色谱峰计算的理论板数应不低于1000。

按面积归一化法计算，鼠神经生长因子主峰面积应不低于总面积的98.0%。

3.1.5 分子量
依法测定（附录ⅣC）。

用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法，分离胶胶浓度为15%，加样量应不低于1.0μg，供试品的分子质量应为12.0kD～15.0kD。

3.1.6 等电点
主区带应为8.4～9.4，且供试品的等电点图谱应与对照品的一致（附录ⅣD）。

3.1.7 紫外光谱
用水或生理氯化钠溶液将供试品稀释至约100～500μg/ml，在光路1cm、波长230～360nm下进行扫描，最大吸收峰波长应为280±3nm（附录ⅡA）。

3.1.8细菌内毒素检查
每1次人用剂量应小于10EU（附录ⅫE凝胶限度试验）。

3.1.9 磷酸三丁酯残留量
如工艺中采用磷酸三丁酯，则每1ml中磷酸三丁酯应不大于10μg（附录ⅥJ）。

3.1.10 聚山梨酯80残留量
如工艺中采用聚山梨酯80，则每1ml中聚山梨酯80应不大于100μg（附录ⅥH）。

3.1.11 鼠源性病毒检查
依法检查（附录ⅫH），至少每半年一次，应无任何特定的鼠源性病毒。

3.2 半成品检定
3.2.1细菌内毒素检查
每1次人用剂量应小于10EU（附录ⅫE凝胶限度试验）。

3.2.2无菌检查
依法检查（附录ⅫA），应符合规定。

3.3 成品检定
除水分测定、装量差异检查、不溶性微粒检查、生物学活性、含量测定外，应按标示量加入灭菌注射用水，复溶后进行其余各项检定。

3.3.1 鉴别试验
按免疫印迹法（附录ⅧA）或免疫斑点法（附录Ⅷ B）测定，应为阳性。

3.3.2 物理检查
3.3.2.1外观
应为白色或类白色的疏松体或粉末，按标示量加入灭菌注射用水后迅速复溶为无色澄明液体。

3.3.2.2 可见异物
依法检查（附录V B），应符合规定。

3.3.2.3 不溶性微粒检查
依法检查（附录V I），应符合规定。

3.3.2.4 装量差异
依法检查（附录I A），应符合规定。

3.3.3 化学检定
3.3.3.1 水分
应不高于3.0%（附录ⅦD第一法）。

3.3.3.2 pH值
应为6.0～7.4（附录V A）。

3.3.3.3渗透压摩尔浓度
依法测定（附录V H），应符合批准的要求。

3.3.3.4 辛酸钠含量
如制品中加入辛酸钠，则每1支中辛酸钠应不大于0.1mmol（附录ⅥK）。

3.3.4生物学活性
应不低于标示量（附录Ⅹxx）。

3.3.5含量测定
采用酶联免疫法（ELISA）或HPLC法，应为标示量的80%～120%。

酶联免疫法按试剂盒说明书进行。

高效液相色谱法（附录ⅢB）
色谱条件：以适合分离分子质量为5～60kD蛋白质的色谱用凝胶为填充剂；以0.25mol/L 磷酸盐缓冲液(含0.15mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L磷酸二氢钠溶液)-乙腈（85∶15）为流动相；检测波长为214nm。

供试品溶液中鼠神经生长因子与人血白蛋白的分离度应符合要求。

测定法取供试品和标准品适量，用流动相分别稀释制成每1ml中含鼠神经生长因子50μg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录30分钟。

标准品溶液、供试品溶液均进样3次，记录色谱图并计算峰面积。

按外标法以峰面积计算供试品中鼠神经生长因子的含量。

3.3.6 无菌检查
依法检查（附录ⅫA），应符合规定。

3.3.7 细菌内毒素检查
每1次人用剂量应小于10EU（附录ⅫE凝胶限度试验）。

3.3.8 异常毒性检查
依法检查（附录ⅫF小鼠试验法），应符合规定。

3.3.9 外源病毒污染检查
采用动物病毒敏感细胞（如BHK21），每瓶（25cm2）培养细胞中加入供试品1ml，37ºC 培养7天为一代，连续盲传3代，细胞应生长良好，不应出现病毒感染引起的病变，判为合格。

4保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。

自生产之日起，按批准的有效期执行。

5 使用说明
应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。