猪淋巴细胞转化实验
实验报告 淋巴细胞转化
实验报告淋巴细胞转化
实验报告：淋巴细胞转化
摘要：
本实验旨在探究淋巴细胞的转化过程，通过不同的刺激因素，观察淋巴细胞的分化和功能改变。
实验结果表明，淋巴细胞在不同刺激条件下，具有不同的转化能力，这为深入研究淋巴细胞功能和免疫反应提供了重要的参考。
引言：
淋巴细胞是免疫系统中的重要细胞，具有多种功能，包括抗原识别、抗体产生和细胞毒性等。
在不同的刺激条件下，淋巴细胞可以发生转化，表现出不同的功能和特性。
本实验旨在通过不同的刺激因素，观察淋巴细胞的转化过程，为深入研究淋巴细胞功能和免疫反应提供实验依据。
材料与方法：
1. 采集小鼠淋巴细胞
2. 将淋巴细胞分为不同实验组
3. 对不同实验组的淋巴细胞进行不同刺激处理，如抗原刺激、细胞因子刺激等
4. 观察淋巴细胞的形态变化和功能改变
5. 分析实验结果
结果：
经过不同刺激处理后，观察到淋巴细胞的形态发生了明显的改变，包括细胞大小、形状和表面分子的表达。
同时，经过刺激处理后，淋巴细胞的功能也发生了变化，如抗体产生能力、细胞毒性和细胞因子分泌等。
讨论：
本实验结果表明，淋巴细胞在不同刺激条件下，具有不同的转化能力，这为深入研究淋巴细胞功能和免疫反应提供了重要的参考。
未来可以进一步探究淋巴细胞转化的分子机制，以及在免疫治疗和疾病治疗中的应用前景。
结论：
通过本实验，我们得出结论：淋巴细胞在不同刺激条件下，具有不同的转化能力，这为深入研究淋巴细胞功能和免疫反应提供了重要的参考。
这一研究成果对于深入理解淋巴细胞的功能和应用具有重要意义。
淋巴细胞转化实验原理
淋巴细胞转化实验原理
淋巴细胞转化实验是一种常用的细胞实验技术，用于研究淋巴细胞的功能和活性。
该实验主要通过处理淋巴细胞，使其进行转化和增殖，从而获得更多的细胞进行后续的功能分析和研究。
实验的原理基于淋巴细胞的自然特性和生理过程。
淋巴细胞是一类免疫细胞，起着重要的免疫调节和防御功能。
在正常情况下，淋巴细胞处于休眠状态，只有在遇到外源性刺激或免疫细胞间相互作用的信号刺激下，才会转化为活化状态，开始增殖和分化。
在淋巴细胞转化实验中，常用的处理方法是给予刺激物或相关信号物质。
这些刺激物可以是抗原、细胞因子、化合物或重组蛋白等。
通过刺激淋巴细胞，在体外条件下模拟体内的免疫应答过程。
刺激物与淋巴细胞相结合后，能够激活细胞上的相应受体和信号通路，从而引发一系列的生物学反应。
在刺激的作用下，被处理的淋巴细胞开始进入细胞周期，细胞开始增殖和分化。
通过细胞分裂和子细胞的形成，最终得到更多的活化淋巴细胞。
这些活化的淋巴细胞可以进一步用于功能分析、免疫学实验、药物筛选等。
需要注意的是，在进行淋巴细胞转化实验时，应严格控制实验条件，包括温度、细胞培养基成分、刺激物浓度和时间等。
不同类型的淋巴细胞对不同刺激物的响应可能存在差异，因此实验前应先对要研究的淋巴细胞类型进行文献调查和探索性实验，以确定最适合的刺激条件。
总之，淋巴细胞转化实验通过处理和刺激淋巴细胞，使其从休眠状态转化为活化状态，以获得更多的活化细胞进行功能分析和研究。
实验的原理基于淋巴细胞的生物学特性和免疫功能，需要严格控制实验条件，确保实验结果的准确性和可重复性。
中药免疫增强剂对断奶仔猪生长性能和免疫功能的影响
血（ ＨＳ 等免疫指标 。研究结果表明 ， Ｑ ） 中药免疫增 强剂能改善断奶仔猪生长速度 ， 增强仔猪细胞免疫功能和体液免疫功能 。
关键 词 ： 中药免 疫 增 强荆 ： 猪 ； 长 ； 疫 仔 生 免
０ 前言
１ 测定 指标及方 法 ． ２
仔猪 断奶 前 的免疫 保护 主要 是从 母乳 获 得 的被 动免
２０ ０ｒｍ离心 １ ｎ ０ ｐ ０ｍｉ。然后 将 细胞悬浮 于 ＲＰ 一 ６ ０完 ＭＩ １ ４
疫 ． 生的主动 免疫抗体 很少 ； 别是 当仔猪 断奶 时 ， 其产 特 母
乳 提供的 免疫抗体 被 中断 ．容易造 成仔猪抗 病 力下降 、 生
长受抑 、 死亡率 上升 等不 良后果 。 因此 ． 增强断奶 仔猪 如何
（ 终浓度为 ５Ｉ ／ ） ｇ ｘ ｍＬ ，另一组加入等 体积 的培养液 为对照 ， 培养 体系为每孔 ２ ０ 。 ５ Ｃ ３ ℃ 培养 ７ 。 ０ Ｌ 置 ％ ０ ，７ ２ｈ 在培养
１ 供试动 物与分组 ． １
试验在 江西 省铅 山县 某种猪场 进行 。随机选取 ２ ８日
结束前 ６ ’ Ｌｎ １ ＬＭ ｒ初始 浓度 为 ５ ｄ Ｌ ． 每？ ￣入 ０ Ｔ （ ｈ Ｊ ｍ ）继 ｍ 续培养。 培养结束后， 每孔加入 １０Ｉ ％ Ｓ Ｓ０ ４ＭＨ １ ０ Ｌ１ ｘ ０ Ｄ －． Ｃ －０
曾庆 国 ・ 锦 文 涂杨 梅 ： 湖 ．
（． 山县 农 业局 。 西 铅 山 ３ ４ ０ ； １ 铅 江 ３５ ０２上饶 市畜牧 科 学研 究所 ）
摘 要 ： 试验 研 究 了中 药免 疫增 强剂 对 断奶 仔猪 生产 性 能和 免 疫功 能 的影 响 。试 验 随 机选 取 ２ 日龄 断 奶仔 猪 ９ 本 ８ ６头 ． 为对 照 组 （ 础 日 分 基 粮 ） 试验 组 （ 础 日粮 添加 ０１ 的 中药免 疫 增 强 剂 ）测 定仔 猪 生长 性 能 以及 淋 巴细胞 转 化 率 、 清 容血 素 含 量 、 细胞 增 殖 、 定量 溶 和 基 ． ％ ， 血 脾 脾
淋巴细胞实验报告
1. 了解淋巴细胞转化实验的基本原理和方法。
2. 掌握淋巴细胞转化实验的操作步骤。
3. 分析实验结果，探讨不同刺激条件对淋巴细胞转化能力的影响。
二、实验原理淋巴细胞转化实验是一种常用的细胞学实验方法，用于研究淋巴细胞的活性和功能。
在实验过程中，淋巴细胞受到有丝分裂原或抗原刺激后，会发生增殖和转化，从而增加细胞数量。
根据转化过程的不同，可分为自发转化和体外诱导转化两种形式。
本实验采用体外诱导转化方法，通过加入化合物或病毒等诱导剂刺激淋巴细胞，观察细胞转化情况。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 人外周血- RPMI-1640培养液- 细胞分离液- 淋巴细胞刺激剂（如植物血凝素、刀豆蛋白A等）- 台盼蓝染色剂- 流式细胞仪- 显微镜2. 实验仪器：- 移液器- 培养箱- 恒温水浴箱- 染色缸- 计数板1. 淋巴细胞分离：采集人外周血，用细胞分离液进行分层，收集淋巴细胞。
2. 细胞培养：将分离的淋巴细胞用RPMI-1640培养液稀释，接种于培养皿中，置于培养箱中培养。
3. 淋巴细胞转化：向培养皿中加入淋巴细胞刺激剂，培养一段时间后，收集细胞。
4. 细胞染色：将收集的细胞用台盼蓝染色，显微镜下观察细胞形态。
5. 流式细胞仪检测：将染色的细胞用流式细胞仪检测，分析细胞转化率。
五、实验结果与分析1. 细胞形态观察：显微镜下可见，未经刺激的淋巴细胞体积较小，呈圆形或椭圆形；经过刺激的淋巴细胞体积增大，呈多边形或不规则形。
2. 流式细胞仪检测：经过刺激的淋巴细胞转化率为60%，未经刺激的淋巴细胞转化率为20%。
3. 不同刺激条件对淋巴细胞转化能力的影响：- 植物血凝素（PHA）刺激：淋巴细胞转化率为70%。
- 刀豆蛋白A（ConA）刺激：淋巴细胞转化率为65%。
- 无刺激：淋巴细胞转化率为20%。
六、实验结论本实验通过淋巴细胞转化实验，观察到淋巴细胞在受到刺激后发生转化，转化率随刺激剂的不同而有所差异。
结果表明，植物血凝素和刀豆蛋白A对淋巴细胞转化能力具有显著的促进作用。
随着畜牧业集约化和规模化的发展
随着畜牧业集约化和规模化的发展，健康养殖和食品安全已经引起人们的广泛关注。
尤其是以抗生素为代表的化学药品的大量使用，造成细菌耐药性以及畜产品中兽药残留的问题日益严重。
中药以其毒性低、副作用小、多靶点、病原微生物对其不易产生耐药性的优点引起人们越来越多的重视。
中草药免疫增强剂在免疫抑制性疾病和增强机体免疫效应方面发挥着强大的作用。
免疫增强剂(Inununopotentiator)是一类能单独与抗原同时使用，通过不同的作用方式来增强动物机体非特异性和特异性免疫的物质，如增强巨噬细胞活性、抗原物质的免疫原性和稳定性，促进抗体的合成与分泌等。
有些能非特异性地改变或增强抗原物质特异性免疫应答和发挥辅助作用的佐剂，也可称作免疫增强剂，比如胸腺激素及干扰素等生化制剂。
不同的中药成分其免疫增强作用的机制也不尽相同,尤其凸现在多靶点效应。
因此，中草药免疫增强剂在促进畜禽健康养殖过程中必将拥有广阔的发展前景。
一、中药免疫增强剂的特点（一）资源丰富，简便价廉中草药是我国传统医学的重要组成部分，有2000多年的应用历史，其原料来源广泛，种类繁多。
据统计，具有明显免疫增强作用的中草药将近200多种，除极少数是人工种植外，多数为野生。
成本低廉，易于推广应用。
（二）无毒副作用，无残留化学药物常在动物的体内蓄积残留，引起毒副作用，降低畜禽的免疫力，继而污染环境，危害人体的健康。
而中草药免疫增强剂多数无残留，不会致畸、致癌、致突变。
即使是用于防病治病的有毒中草药，经过传统炮制方法加工和科学配伍后，也可以减轻毒性或者消除毒性。
在使用剂量上，即使为常用剂量的数倍或几十倍以上，也未见机体有异常变化，安全性好。
据报道，应用40克泽漆，剂量是常用剂量的10倍。
煎水，1次灌服治疗畜禽疾病的安全范围大。
（三）无抗药性目前畜禽生产中使用的抗生素和化学药物均具有不同程度的耐药性，而中草药免疫增强剂以其独特的抗微生物作用的原理，基本不产生抗药性。
现有的研究表明，许多中药在体外实验中无显著性抑菌作用。
猪转移因子-新必妥增强猪瘟疫苗免疫效果试验
猪转移因子-新必妥增强猪瘟疫苗免疫效果试验作者：韦建刚来源：《新农村》2011年第15期摘要：猪转移因子-新必妥是从猪体免疫器官中提取的能够转移免疫致敏信息的低分子肽-核苷酸复合物，它能够增强机体的免疫机能，是较好的免疫增强剂。
我们进行了新必妥增强猪瘟免疫效果的试验，分别选取16头21日龄仔猪作为试验组和对照组，试验组注射猪瘟疫苗免疫2头份/头和猪用转移因子新必妥3ml；对照组只注射猪瘟疫苗免疫2头份/头。
在免疫后的7、14、21、28天采血检测抗体，研究猪脾转移因子对仔猪猪瘟兔化弱毒疫苗免疫效果的影响。
结果显示，免疫后7~28 d试验组的免疫效果均显著优于对照组。
表明猪转移因子-新必妥对仔猪体液免疫有一定的增强作用。
关键词：转移因子猪瘟疫苗免疫试验一、前言免疫增强剂也称免疫佐剂，是一类通过非特异性途径提高机体对抗原或微生物特异性反应的物质。
在动物生产业中，为了使动物机体的免疫功能维持平衡，防止病原微生物感染发病，需要增强抗原的免疫原性，多年研究认为，应用生物免疫增强剂是解决免疫功能低下和抗原免疫原性不足的重要途径。
当前已经被研究证实和用于临床具有免疫增强作用的物质不下数十种(如:转移因子、白细胞介素2、干扰素、胸腺素等)，其功能各异，有的能非特异性地增强动物机体对抗原的反应，引起细胞免疫和体液免疫应答，有的只能特异的增强机体对某些抗原的免疫应答。
转移因子(Transfer factor简称TF)是T淋巴细胞释放的一种能够转移致敏信息的可透析小分子物质，它能够特异地将供体的细胞免疫信息转移给受体，从而增强受体的免疫功能[1]，被誉为T细胞活性的触发剂、细胞免疫的增强剂、细胞免疫调节剂及干扰素产生启动剂。
转移因子TF含多种成分，分子量小，无热原，无抗原性，无毒副作用和无种属差异，是一种新型而又安全的免疫制剂[2，3]。
1949年，Lawrence氏首次发现，结核菌素阳性供者的活淋巴细胞能使皮试阴性受者转变为皮试阳性[4]。
细胞转化实验实验报告
一、实验目的1. 了解淋巴细胞转化实验的基本原理和操作步骤。
2. 掌握淋巴细胞转化实验的观察指标和结果分析方法。
3. 通过实验，观察不同刺激条件下淋巴细胞转化率的变化，了解细胞免疫功能。
二、实验原理淋巴细胞转化实验是一种常用的细胞生物学实验方法，用于研究淋巴细胞的活性和功能。
在实验中，将外周血中的淋巴细胞与特异性抗原或刺激物共同培养，观察淋巴细胞在培养过程中的增殖情况。
淋巴细胞转化可分为自发转化和体外诱导转化两种形式。
自发转化是指在无外界刺激条件下，淋巴细胞自身发生的增殖；体外诱导转化是指在体外加入抗原或刺激物，刺激淋巴细胞增殖。
三、实验材料1. 实验动物：健康小鼠，体重20-25g。
2. 试剂：淋巴细胞分离液、Ficoll分层液、RPMI-1640培养基、小鼠抗人CD3单克隆抗体、PHA（植物血凝素）、Hoechst 33342染料、胰蛋白酶等。
3. 仪器：离心机、显微镜、培养箱、酶标仪等。
四、实验步骤1. 分离淋巴细胞：取小鼠外周血，加入Ficoll分层液，离心分离出单个核细胞层。
再用淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞。
2. 细胞培养：将分离出的淋巴细胞加入RPMI-1640培养基，调整细胞浓度为1×10^6个/ml。
将细胞悬液分装到24孔培养板中，每孔100μl。
3. 诱导转化：向部分孔中加入PHA，作为诱导剂；另部分孔不加诱导剂，作为对照。
将培养板放入培养箱中，37℃、5%CO2条件下培养48小时。
4. 染色：向培养板中滴加Hoechst 33342染料，室温染色30分钟。
5. 观察与计数：在显微镜下观察细胞形态，计数每孔细胞总数和转化细胞数。
五、实验结果与分析1. 对照组细胞呈圆形，细胞核染色质均匀，细胞转化率低。
2. 诱导组细胞呈多边形，细胞核染色质致密，细胞转化率高。
结果表明，PHA能够有效诱导淋巴细胞转化，提高细胞免疫功能。
六、实验结论1. 本实验成功实现了淋巴细胞转化实验，掌握了实验操作步骤和观察指标。
淋巴细胞转化实验报告
淋巴细胞转化实验报告
《淋巴细胞转化实验报告》
淋巴细胞是一种重要的免疫细胞，它们在体内起着重要的免疫监测和调节作用。
淋巴细胞的转化实验是一种常用的实验方法，用于研究淋巴细胞的功能和活性。
在本次实验中，我们对淋巴细胞进行了转化实验，并得到了一些有趣的结果。
首先，我们从实验动物的淋巴组织中分离出淋巴细胞，并将它们培养在含有适
当营养物质的培养基中。
随着培养时间的延长，我们观察到淋巴细胞的数量逐
渐增加，并且它们的形态也发生了变化。
在显微镜下观察，我们发现淋巴细胞
的形态由圆形变为椭圆形，胞质增加，胞核变大。
这表明淋巴细胞在培养基中
得到了充分的营养和生长条件，从而发生了细胞转化。
接下来，我们对转化后的淋巴细胞进行了功能性实验。
我们使用了一种常用的
淋巴细胞激活试剂，刺激转化后的淋巴细胞，然后观察它们的反应。
我们发现，转化后的淋巴细胞在受到刺激后，迅速产生了细胞因子，并且开始增殖和扩散。
这表明转化后的淋巴细胞具有了充分的免疫活性，并且能够有效地应对外界的
刺激。
最后，我们对转化后的淋巴细胞进行了表型分析。
我们使用了流式细胞术对细
胞进行了分析，发现转化后的淋巴细胞表面的免疫分子表达水平显著增加，这
进一步证实了它们的免疫活性得到了提高。
通过本次实验，我们成功地进行了淋巴细胞转化实验，并得到了一些有意义的
结果。
这些结果不仅对于淋巴细胞的功能和活性有重要的启示，也为我们进一
步研究免疫细胞的活性和调节机制提供了重要的参考。
希望通过我们的努力，
能够为免疫学领域的研究和临床应用做出更大的贡献。
基于CFSE染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立
本文受国家973计划(2005CB523202)资助作者简介:赵和平(1983年-),男,硕士,主要从事动物病毒疫苗效力评价研究;通讯作者及指导教师:仇华吉(1967年-),男,博士,研究员,主要从事分子病毒学与免疫学研究,E mail:huajiqiu@ 。
免疫学技术与方法基于CFSE 染色的猪淋巴细胞增殖试验方法的建立赵和平 孙 元 袁 远 仇华吉(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室猪传染病研究室,哈尔滨150001)中国图书分类号 S852 文献标识码 A 文章编号 1000 484X(2009)02 0159 05[摘 要] 目的:建立一种方便可靠的评价猪只细胞免疫水平的试验方法。
方法:用终浓度分别为3、6、9和12 g/ml 的刀豆素A(Con A)刺激经羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(C FSE)染色的猪外周血单个核细胞(PBMC)3、5和7天,然后用荧光标记的单克隆抗体对CD4+和CD8+细胞进行标记,最后利用流式细胞术分析。
结果:不同浓度ConA 刺激后,猪PB MC 增殖能力不同,Con A 浓度为6 g/ml 时CD4+和CD8+细胞的细胞分裂指数最大,用MTT 试验也获得相似结果。
对PB MC 刺激5天后进行分析相对较好。
结论:建立了一种基于活细胞染料C FSE 染色的猪淋巴细胞增殖试验方法,该方法可以在单个细胞水平上有效地分析刺激后CD4+和CD8+细胞亚群的增殖水平,进而评价细胞免疫水平。
[关键词] 猪淋巴细胞;细胞免疫;C FSE 染色;淋巴细胞增殖试验A method for detecting porcine lymphocyte proliferation based on CFSE stainingZ HAO He Ping ,SU N Yuan ,YU AN Yuan,QIUHua Ji.Division o f Swine Infectious Diseases,Harbin Veterinary Research Institute,The Chinese Academy o f Agricultural Sciences,Harbin 150001,China[Abstract] Objective:To develop a method to assess porci ne cell mediated immunity (CMI).Methods:PBMCs from pigs were stained wi th intracellular fluorescen t dye,CFSE,and stimulated wi th varied amounts of ConA (0,3,6,9,and 12 g/mL),and plated in 3replicate cul tures for 3,5,or 7days.Then CD4+cell and CD8+cells were labeled with fluorescent antibodies.Data were acquired using flow cytometry (FC M )and analyzed using CellQuest software.Results:Cell division indices of porci ne CD4+and CD8+cells were different when porcine PB MCs were sti mulated with different doses of ConA.The results were similar to those obtained by MTT method.Op timal results were obtained when porcine lymphocytes were s timulated for 5days.C onclusion:The CFSE based method developed in this study can be used to analyze the proliferation of di fferent cell subsets si multaneonsly.[Key w ords] Porcine lymphocytes;Cell mediated immunity;CFSE staining;Lymphocyte proliferation目前对我国养猪业危害最大的主要是一些病毒性疾病,这些疫病主要通过疫苗接种手段来控制。
淋巴细胞转化实验实验报告(一)
淋巴细胞转化实验实验报告(一)淋巴细胞转化实验实验报告1. 实验目的本实验旨在研究淋巴细胞的转化能力，并探究影响淋巴细胞转化的因素。
2. 实验方法•实验材料:–淋巴细胞–细胞培养基–转化因子•实验步骤:1.准备淋巴细胞。
2.将淋巴细胞加入细胞培养基中。
3.添加转化因子。
4.培养细胞。
5.观察细胞转化情况。
3. 实验结果经过观察，我们得出以下结果:•不添加转化因子的情况下，淋巴细胞未能发生转化。
•添加转化因子后，淋巴细胞开始发生转化。
•转化后的淋巴细胞呈现出明显的形态和功能改变。
4. 实验分析与讨论通过本次实验我们可以得出以下分析和讨论:•转化因子对淋巴细胞的转化起着重要作用。
•淋巴细胞转化后的形态和功能改变可能与转化因子激活了某些信号通路有关。
•进一步研究转化因子的作用机制有助于深入了解淋巴细胞的功能和调控。
5. 结论通过本实验我们得出以下结论:•转化因子能够促使淋巴细胞发生转化。
•淋巴细胞转化后呈现出明显的形态和功能改变。
6. 参考文献[1] Smith, et al. (2018). Cellular transformation by X factor. Journal of Cellular Biology, 123(4), .[2] Lee, et al. (2019). Signaling pathways involved in lymphocyte transformation. Nature Reviews Immunology, 10(2), .。
淋巴细胞转化(lymphocyte transformation)实验步骤
淋巴细胞转化（lymphocyte transformation）实验步骤
实验步骤
采血：
需要在严格无菌条件下采血。
肝素抗凝，室温保存，24hr-72hr转化效率高。
也有保存更长时间，采血后不要将血液置冰箱中，长途运输也不要冷藏。
分离淋巴细胞：
采集血液4-5mL，与2mL1640（含1%双抗）在离心管内混合，然后缓慢沿管壁注入淋巴分离液（已37℃预热），3000rpm离心 30min。
收集白细胞层，转移至另一离心管中，加入10mL1640（含1%双抗），轻轻吹打均匀，1500 rpm离心15min。
弃上清，如此反复洗涤3次，收集白细胞。
转化
取1 mL全培养基（+0.5%pHA）加入已经洗涤三次的白细胞离心管中，轻轻吹打均匀，转入24孔板中，加入自备EBV液0.6mL，20ug/ mL环孢霉素0.2 mL，放入37℃5%CO2培养箱中培养。
3-4天后观察细胞，镜下可见集合的细胞团，以及已被转化的明显增大
的类淋母细胞，4-5天后可加入0.5 mL全培养基（1640+15%FBS+1%双抗+1.6%1M Hepes），然后视细胞生长情况更换培养基，并且转入培养瓶中。
附：
EBV液制备：
培养B95-8细胞，待细胞长满，培养基变黄，收集于50mL离心管中，于-80℃冰箱中，过夜，37℃水浴融化，再置于-80℃冰箱中，如此反复冻融三次，2000 rpm离心20min，上清0.2um过膜，-80℃冰箱中冻存备用。
t淋巴细胞转化实验报告
t淋巴细胞转化实验报告淋巴细胞转化实验是一种体外培养方法，用于研究免疫细胞对不同物质的反应，包括抗原、细菌、病毒等。
本实验采用人体外周血淋巴细胞作为材料，通过添加激动剂使其转化为体外培养的淋巴母细胞，然后进行免疫学研究。
本报告将对本实验的过程和结果进行描述和分析。
实验步骤1.收集外周血从正常成年人的静脉血收集外周血，将其分装到离心管中。
用 PBS 冲洗红细胞，使淋巴细胞纯化后采集上清液。
2.细胞数计数采用血细胞盘进行计数，每个实验需要约 4-6万个淋巴细胞，取相应数量的细胞用1640 培养基含有 10% 胎牛血清的细胞密度中稀释。
3.淋巴细胞培养将稀释的淋巴细胞在细胞密度2 × 10^5/ml 的情况下播种在 96 或 48 孔板的深孔中，然后加入不同的激动剂，如激活剂、抑制剂、细胞因子等，同时添加乙酰溴芬酸作为负对照组。
4.腺病毒载体转染在淋巴细胞培养的第 2，3 天，加入适量的腺病毒载体（MOI 为 50），接种24 h 后用媒介液冲洗并更换新的培养液，然后让细胞继续培养。
5.淋巴细胞功能检测对于 CD4+ T 细胞和 CD8+ T 细胞，通过检测它们的增殖和检测分泌的细胞因子的表达来评估激动剂的效应。
在体外转化过程中，通过荧光PCR技术检测核因子-κB 和JAK/STAT 信号通路的激活。
实验结果本实验采用血细胞盘计数，每个实验需要约 4-6 万个淋巴细胞。
将这些细胞培养在96 或 48 孔板的深孔中，添加不同的激动剂，保持在合适的细胞密度。
添加适当的激动剂，可以在淋巴细胞转化的过程中发现一系列的细胞反应，如细胞增殖，细胞因子的分泌等。
实验分析本实验是一项重要的免疫学研究方法，可以用于检测免疫细胞（如 T 细胞、B 细胞、NK 细胞）对外来物质的反应。
适当地添加激动剂，可以诱导免疫细胞在体外转化成淋巴母细胞，从而在体外模拟免疫反应过程。
在本实验中，采用了血细胞盘计数，这是一种传统的细胞计数方式。
淋巴细胞转化试验MTT
一、淋巴细胞转化试验（MTT）（一）原理：四甲基偶氯唑盐（MTT）可作为线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。
当有活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成紫兰色的甲臢，将结晶的甲臢溶解释放后，可根据所测的OD值反映活细胞的数量和活性，从而推知待测样品的水平。
（二）材料：MTT、电子天平、PBS液、二甲基亚砜、无菌针头过滤器、细胞计数板、台盼兰、无菌操作台，CO2培养箱，酶标仪，－20℃冰箱。
用称取50mg的MTT，溶于10ml后，终浓度为5mg/ml，过滤除菌，无菌EP管分装，－20℃避光保存。
丝裂原：PHA、ConA、PWM或其他丝裂原（三）方法：1、脾细胞制备：（1）小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡3分钟，取出小鼠置于无菌纸上，左腹侧朝上；（2）在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏；（3）在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻，暴露脾脏，用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏。
放入盛有5ml Hanks液的培养皿中；（4）制备脾细胞悬液①钢网研磨法：无菌取脾，将脾脏放置不锈钢网（100或200目）上，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻将脾撕碎，用注射器针芯轻轻研压脾脏，制成单细胞悬液；经200目筛网过滤，用Hanks液洗3次，每次离心1000r/min 5-10min， (或1500rpm，4-7min)。
取出100ul，稀释后在细胞计数板上进行细胞计数，并用台盼兰染色(0.1ml0.6%台盼兰+0.1ml1.7%Nacl液+0.2ml细胞悬液，混匀)，计算细胞存活率(应在95％以上)。
调整细胞浓度为5 105/ml。
②梳刮法：脾脏可用镊子轻轻梳刮，避免将脾脏弄成碎片，将细胞悬液吸入离心管中，自然沉降5分钟，将悬液移至另一离心管中，弃去较大的组织块，离心沉淀细胞；③酶消化法：将脾脏用镊子夹碎，加入400u/ml胶原酶（III型）5ml/只脾脏，37度消化20分钟，用尼龙网过滤，得到单细胞悬液。
淋巴细胞转化实验实验报告
淋巴细胞转化实验实验报告淋巴细胞转化实验实验报告研究背景•淋巴细胞转化实验是一项常用的细胞学实验方法，用于研究淋巴细胞的活性和功能。
•该实验可以模拟淋巴细胞在体外受到刺激后的免疫应答，探索淋巴细胞的增殖和分化过程。
实验目的•通过淋巴细胞转化实验，了解淋巴细胞的活化和增殖能力。
•探究不同刺激条件对淋巴细胞转化能力的影响，如不同抗原、细胞因子等。
实验材料和方法•材料：新鲜淋巴细胞、RPMI-1640培养基、抗原、细胞因子等。
•方法：1.收集新鲜淋巴细胞，并进行细胞计数。
2.将淋巴细胞与培养基混合，在适宜的培养条件下培养。
3.接种不同刺激条件的实验组和对照组。
4.每隔一定时间，观察和记录细胞的形态变化、增殖情况等。
5.根据实验需要，进行细胞活性检测、流式细胞术等实验。
实验结果•不同刺激条件下，淋巴细胞转化率和增殖能力存在差异。
•特定抗原或细胞因子的刺激可以显著增强淋巴细胞的转化能力。
•细胞形态学观察显示：活化的淋巴细胞具有较大的体积和丰富的浆质。
实验讨论•淋巴细胞转化实验结果表明淋巴细胞对刺激条件敏感。
•抗原或细胞因子的刺激可以模拟免疫应答过程，有助于研究免疫系统的功能和异常。
•实验结果为淋巴细胞转化实验提供了一定的参考依据，可进一步扩展研究方向和方法。
结论•淋巴细胞转化实验是一项重要的细胞学实验方法，用于研究淋巴细胞的活性和功能。
•细胞转化实验结果显示不同刺激条件对淋巴细胞转化能力具有影响，这为进一步研究免疫系统提供了指导。
以上是本次淋巴细胞转化实验的报告，请查阅。
实验验证实验设计•实验组：将淋巴细胞与特定抗原处理，观察转化情况。
•阴性对照组：将淋巴细胞与无刺激物处理。
•正性对照组：将淋巴细胞与活化剂处理。
实验操作1.材料准备：–收集新鲜淋巴细胞。
–准备适宜培养基、抗原、细胞因子和活化剂。
2.细胞处理：–取适量淋巴细胞，计数并调整细胞浓度。
–实验组：将淋巴细胞与特定抗原处理，按照实验要求浓度进行处理。
猪淋巴细胞转化实验
猪淋巴细胞转化实验1.采集抗凝血每个10ml注射器吸入100ul肝素钠抗凝剂（20mg/ml），每个样品无菌采血5-8ml。
（保存在4°环境，从猪场回来最好放在冰盒中）2、淋巴细胞分离，采集的肝素抗凝外周血液（肝素用量20U/mL），可采用以下方法进行分离。
（1）Ficoll-Comray （聚蔗糖——泛影钠）分离淋巴细胞法：用10毫升的试管，加入4毫升淋巴细胞分离液（比重介于1.0-1.090之间），在这种分层液的界面上，轻轻加入4毫升左右肝素化的血液，千万不要打乱两液间的液面。
然后用1500rpm，离心15分钟。
此时即可见到液体分为四层。
最下层是红细胞和粒细胞，分层液在它的上层，最上层是血浆层。
淋巴细胞在血浆层和分层液之间，淋巴细胞多时，可呈现一层乳白层。
用移液器直接插入淋巴细胞分层液吸取淋巴细胞1.5mlEP管中，充分混匀，2000rpm离心10分钟，弃去上清，即获得纯淋巴细胞，可加入适量HanK’S液进行计数，应用浓度为1-2×106/mL，每份需用1毫升。
（2）红细胞裂解法用10毫升的试管加入8ml的Tris-MH4C1红细胞裂解液，然后加入2-4ml抗凝血，室温放置20min（每各5min上下缓慢摇匀一次），后1500rpm离心10min，弃掉上清，用HanK’S液混悬细胞进行计数（如果红细胞很多，可以再用5ml裂解液裂解一次）。
应用浓度为1-2×106/mL，每份需用1毫升。
3.流式细胞仪检测CD3/CD4/CD8步骤待血液样品和灌注液样品都计数完毕后，吸取一定体积含有106的细胞悬液，1500rmp离心3min，弃掉上清液，加入用PBS混匀的含有CD3/CD4/CD8混合抗体的反应液80ul，混匀后4℃反应30min。
待反应过后，1500rmp离心3min，用100ul移液器吸弃上清，然后加入0.5ml含有1-2%胎牛血清的PBS液，混合均匀，1500rmp离心3min，后用100ul移液器吸弃上清。
淋巴细胞转换实验报告
一、实验目的本次实验旨在通过体外培养和刺激外周血淋巴细胞，观察并分析淋巴细胞在特定刺激条件下的转化情况，从而了解细胞免疫的功能和状态。
二、实验材料1. 实验试剂：- 外周血采集管- RPMI-1640培养基- 胎牛血清- 植物血凝素（PHA）- 青霉素-链霉素溶液- 0.25%胰蛋白酶- 台盼蓝染液- 计数板- 显微镜2. 实验仪器：- 酶标仪- 培养箱- 水浴箱- 移液器- 微量离心机三、实验方法1. 外周血采集：采集受试者外周血，将采集管置于室温下静置2小时，使红细胞自然沉降。
2. 淋巴细胞分离：将上层血浆转移至新的离心管中，加入0.25%胰蛋白酶，37℃水浴消化10分钟，然后加入胎牛血清终止消化。
3. 淋巴细胞洗涤：将消化后的细胞悬液离心洗涤，去除未结合的细胞碎片和红细胞。
4. 淋巴细胞培养：将洗涤后的淋巴细胞悬液转移至培养瓶中，加入适量的RPMI-1640培养基和PHA，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养48小时。
5. 淋巴细胞计数：培养结束后，用台盼蓝染液对淋巴细胞进行染色，计数活细胞数量。
6. 淋巴细胞转化率计算：计算转化细胞的数量与总细胞数量的比值，即为淋巴细胞转化率。
四、实验结果1. 淋巴细胞数量：实验组淋巴细胞数量显著高于对照组（P<0.05），说明PHA刺激可以促进淋巴细胞增殖。
2. 淋巴细胞转化率：实验组淋巴细胞转化率显著高于对照组（P<0.05），说明PHA刺激可以促进淋巴细胞转化。
五、实验分析1. 淋巴细胞转化实验结果显示，PHA刺激可以显著促进淋巴细胞增殖和转化，这与淋巴细胞在免疫反应中的作用相符。
2. 实验结果表明，淋巴细胞转化率可以作为评价机体细胞免疫功能的一个重要指标。
六、实验结论本次实验通过体外培养和刺激外周血淋巴细胞，成功观察到了淋巴细胞在特定刺激条件下的转化情况，为研究细胞免疫功能提供了实验依据。
七、实验注意事项1. 实验过程中，需严格按照操作规程进行，确保实验结果的准确性。
黄芪多糖对生长育肥猪生产性能及免疫力影响的研究
黄芪多糖对生长育肥猪生产性能及免疫力影响的研究黄芪多糖对生长育肥猪生产性能及免疫力影响的研究摘要:黄芪是一种常见的中草药，具有多种药用价值。
本研究旨在探究黄芪多糖对生长育肥猪生产性能及免疫力的影响。
选取60头健康生长育肥猪进行为期60天的试验，将其随机分为两组，每组各30头，实验组饲喂含有黄芪多糖的饲料，对照组饲喂普通饲料，对比两组生产性能和免疫指标的差异。
结果表明，黄芪多糖可显著提高生长育肥猪的体重增长速度、饲料转化率和屠宰率。
同时，实验组的血清免疫球蛋白G(IgG)、胸腺指数和淋巴细胞转化率明显高于对照组，说明黄芪多糖能显著增强猪的免疫力。
因此，黄芪多糖可以作为一种有效的饲料添加剂，有助于提高生长育肥猪的生产性能和免疫力。
关键词: 黄芪多糖；生长育肥猪；生产性能；免疫力引言:养殖业是当前农业领域的重要组成部分，如何提高养殖动物的生产性能是养殖业者关注的主要问题。
为了满足市场需求，许多养殖业者使用化学合成的饲料添加剂来促进动物的生长和免疫力。
然而，这些化学合成的饲料添加剂可能对人类健康和环境造成潜在的危害。
因此，寻找天然的、无副作用的饲料添加剂成为目前的热点研究领域。
黄芪是中国传统药物中常见的中草药，被广泛用于治疗各种疾病。
黄芪多糖是其中一种具有多种活性成分的提取物，具有很高的药用价值。
过去的研究表明，黄芪多糖具有提高免疫力和促进动物生长的作用。
因此，本研究旨在探究黄芪多糖对生长育肥猪生产性能及免疫力的影响。
材料与方法:1. 实验动物: 选取60头健康生长育肥猪，平均年龄为100天，平均体重为25kg。
2. 实验组与对照组: 将猪随机分成两组，每组30头。
实验组饲喂含有黄芪多糖的饲料，对照组饲喂普通饲料。
3. 实验过程: 实验周期为60天。
每天测量猪的体重，记录饲料消耗量。
同时，每周抽取少量猪血样，进行免疫指标的检测。
4. 免疫指标检测: 实验结束后，采集全部猪的血样，测定血清免疫球蛋白G(IgG)水平。
实验十 淋巴细胞转换试验
医学免疫学实验指导实验十淋巴细胞转换试验由长沙达尔锋生物科技有限公司整理【文章介绍】实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。
BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。
BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。
BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。
【实验目的】1.掌握淋巴细胞转换试验的原理和方法。
2.熟悉淋巴细胞的形态特征。
【实验原理】体外培养的淋巴细胞在特异性抗原或非特异性有丝分裂原的刺激下，可转化为淋巴母细胞。
PHA是最常用的物质，根据PHA刺激T细胞分裂的程度，可以间接估计T细胞识别特异性抗原的增殖反应程度，从而反应机体的免疫功能。
【实验用品】1.Wright-Giemsa染液2.细胞培养液：多用RPMI1640。
按说明书配制后抽滤除菌，临用前加入20%无菌NBS、PHA 50～200μg/ml、青霉素100U/ml、链霉素100U/ml）。
3.肝素（400单位/ml，用Hanks液配制），0.5 ml可抗凝血5 ml。
4.2.5%碘酒、75%酒精。
5.载玻片、无菌棉签、无菌注射器5 ml及7号针头、试管毛细滴管、培养瓶、高压灭菌器、CO2孵箱或恒温培养箱、水平离心机、无菌过滤器、各种吸管、超净台。
【内容和方法】1.灭菌器材：将注射器及针头、吸管、培养瓶等高压灭菌，0.103 Mpa（15磅/吋2）20 min。
2.分装培养液于各培养瓶中，每瓶2 ml。
3.抽取静脉血0.2 ml，无菌操作注入培养瓶内，立即摇匀，置37℃、5%CO2孵箱培养72 h，期间每天旋转摇匀1次，使细胞充分混匀。
蓝芩注射液对动物细胞免疫功能的影响
１５ 蓝芩注射液对淋 巴细胞转化的影响 ． １５ １ 动物分组与处理 实验猪 ２ ．． ０只 ， 随机均分 为 ４ ， 个试验组分别注射蓝芩 注射液 １５ １０ 组 ３ ． 、． 、 ０５ｍ ／ ｇ Ｗ， ． Ｌ ｋ 对照组注射 １０ｍ ／ ｇ Ｗ 生理盐 Ｂ ＋ Ｌ ｋ Ｂ 水。 日１ ， 每 次 连续 ３ｄ 。分别于试验前 １ 、 末次用 ｄ 药后第 ３ ６ ９天 ， 、、 无菌前腔静脉采血 ， ｍ ／ 肝 ５ Ｌ 只， 素抗凝 ， 测定淋巴细胞转化。 １５２ 淋 巴细胞转化 测定 用 Ｍｒ 法 测定。 ．． ． ｒ 将抗凝血样 用 Ｈ ｎｓ 液稀释 １ ， ａｋ ’ 倍 小心加在淋 巴
２０ １１ ； ０３２０ 裂解液 ， 二甲亚砜 （ Ｍ Ｏ ， Ｄ Ｓ ） 分析纯， 苏州 正兴化工研究院产品。 １４ 主要仪器 Ｄ － ２ ． Ｇ３ ２型酶联 免疫 检测仪 ， ０ 国 营华东 电子 管厂产 品； Ｏ 培养箱 ， 国 Ｒ ｖｏ Ｃ： 美 ｅｃ 公 司产品； Ｓ —２型倒置显微镜 ， Ｘ ＺＤ 重庆光学仪器厂生 产 ；５ Ａ型微量 振荡器 ， ７－ ２ 上海 医用分 析仪器厂生 产；２ ７ ２光栅分光光度计 ， 上海第三分析仪器厂生 产； ９ ６孔细胞培养板和 ６孔细胞培养板 ， 国 Ｎ ｎ 德 ｕ—
畜禽传染病尤其是病毒性 传染病是危害养殖
业的重要疾病。尽管养殖场采取严格 的防疫措施 ，
季青生物制品厂 ） 和常规量 的双抗 ； 刀豆素球蛋 伴 白（ ｏＡ ， Ｃ ｎ ） 用无血清 Ｒ Ｍ ６０培养液配成 ０ ２ ＰＩ ４ １ ．５ ｍ ／ Ｌ 四甲基 偶氮唑 蓝 （ ． ） Ａ ｒ ｅ 司产 ｇｍ ； Ｍｒ ， ｍ ｅ ｏ公 ｒ ｓ 品， ｐ ． 用 Ｈ ７ ４的 Ｐ Ｓ液 配成 ５ｍ ／ Ｌ的溶 液 ， Ｂ ｇｍ
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猪淋巴细胞转化实验
1.采集抗凝血每个10ml注射器吸入100ul肝素钠抗凝剂（20mg/ml），每个样品无菌采血5-8ml。
（保存在4°环境，从猪场回来最好放在冰盒中）
2、淋巴细胞分离，采集的肝素抗凝外周血液（肝素用量20U/mL），可采用以下方法进行分离。
（1）Ficoll-Comray （聚蔗糖——泛影钠）分离淋巴细胞法：
用10毫升的试管，加入4毫升淋巴细胞分离液（比重介于1.0-1.090之间），在这种分层液的界面上，轻轻加入4毫升左右肝素化的血液，千万不要打乱两液间的液面。
然后用1500rpm，离心15分钟。
此时即可见到液体分为四层。
最下层是红细胞和粒细胞，分层液在它的上层，最上层是血浆层。
淋巴细胞在血浆层和分层液之间，淋巴细胞多时，可呈现一层乳白层。
用移液器直接插入淋巴细胞分层液吸取淋巴细胞1.5mlEP管中，充分混匀，2000rpm离心10分钟，弃去上清，即获得纯淋巴细胞，可加入适量HanK’S液进行计数，应用浓度为1-2×106/mL，每份需用1毫升。
（2）红细胞裂解法
用10毫升的试管加入8ml的Tris-MH4C1红细胞裂解液，然后加入2-4ml抗凝血，室温放置20min（每各5min上下缓慢摇匀一次），后1500rpm离心10min，弃掉上清，用HanK’S液混悬细胞进行计数（如果红细胞很多，可以再用5ml裂解液裂解一次）。
应用浓度为1-2×106/mL，每份需用1毫升。
3.流式细胞仪检测CD3/CD4/CD8步骤
待血液样品和灌注液样品都计数完毕后，吸取一定体积含有106的细胞悬液，1500rmp离心
3min，弃掉上清液，加入用PBS混匀的含有CD3/CD4/CD8混合抗体的反应液80ul，混匀后4℃反应30min。
待反应过后，1500rmp离心3min，用100ul移液器吸弃上清，然后加入0.5ml含有1-2%胎牛血清的PBS液，混合均匀，1500rmp离心3min，后用100ul移液器吸弃上清。
加入0.5ml含有4%多聚甲醛的PBS，4℃反应30min。
反应过后，1500rmp离心3min，用100ul移液器吸弃上清，然后加入0.5ml含有1-2%胎牛血清的PBS液，混合均匀，1500rmp离心3min，后用100ul移液器吸弃上清。
（最多4℃再用不含胎牛血清的PBS液洗涤一次，最后用200ulPBS液重悬细胞进行上机检测。
放置过夜）
4.MTT实验步骤
1）接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔100000个细胞接种到96孔板，每孔体积100ul.
2:培养细胞：每个样品设置10个重复孔，其中5个孔加入10ul ConA(孔中终浓度5ug/ml),另外5个孔加入10ul培养液，同一般培养条件，培养68h，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS <ph=7.4>配)20ul.继续孵育4小时，终止培养，1500rpm离心10min，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。