贝类毒素的测定
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
毒力单位转换
样品中的毒力单位的按公式（4）计算。 F·80µg /100g＝400MU/100g ………（3） F=5
式中： F—毒素转换系数；
80µg /100g—样品中PSP限量，µg /100g 400MU/100g—样品中PSP限量，MU/100g
实用文档
二、腹泻性贝类毒素（DSP） Diarrhetic shellfish poisoning
生物法(即小白鼠法)，系采用ICR系列的小白鼠作为检验 动物，进行贝类毒素分析
生物法(即小白鼠法)优势：当使用生物法检测法时，一旦
发现超标样品，则本批样品不得食用，这说明所检测贝类
中相关的毒素含量已经影响到人们的食用安全，不适合食
用。
实用文档
麻痹性贝类毒素的测定 生物法
(SC/T 3023-2003)
贝类毒素的测定 生物法
实用文档
一、麻痹性贝类毒素（PSP） Para1ytical shellfish poisoning
PSP中毒是最常见的食用贝类中毒 PSP由一组石房蛤毒及其衍生物组成，PSP与涡
鞭毛藻的水华有关（＞106个细胞／升） PSP在世界范围内分布 PSP中毒引起神经系统紊乱，呼吸困难，感觉
DSP是由于双壳贝类滤食含毒的涡鞭毛藻而引起 影响较严重的地区主要是日本和欧洲沿海国家，
发病率高，引起许多国家地区的关注 受DSP中毒的症状表现为消化功能紊乱（腹泻、
呕吐、腹痛），食用含毒贝类后30分钟至几小 时出现症状，中毒者一般在3-4天康复，尚无死 亡病例
实用文档
腹泻性贝类毒素的测定方法
实用文档
样品的测定
提取
取 100g 样 品 于 800mL 烧 杯 中 ， 加 0.1mol/L HCl溶液100mL充分搅拌， 检 查 pH （ pH 应 为 2.0-4.0 ） 。 需 要 时，可逐滴加入5mol/L HCl溶液或 0.1mol/L NaOH溶液调整pH，加碱 时速度要慢，同时需不断搅拌，防 止局部碱化破坏毒素
在国际上对腹泻性贝类毒素的检测方法较 多，主要有生物法、高效液相色谱法、酶 联免疫法、放射性免疫法等
生物法（小白鼠法，Mouse bioassay）是 最常用的一种方法
保留进行小鼠注射用的足量液体（约10mL）
实用文档
样品的测定
小鼠试验
选择ICR系小鼠 称重 ：以感量 为 0.1g
的天平将小鼠称重并 记录重量
实用文档
样品的测定
小鼠试验
每个样品注射3只小鼠，每只小鼠腹腔注射1mL 提取液。注射时若有一滴以上提取液溢出，须 将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠
将混合物加热，并徐徐煮沸5min，冷却至室温， 调节pH至2.0-4.0（切勿＞4.5）。将混合物移至 量筒中并稀释至200mL
实用文档
样品的测定
提取
将混合物倒回烧杯，搅拌至均质状，使其沉降至 上清液呈半透明状，不能堵塞注射针头即可
必要时将混合物或上清液以3000r/min离心5min， 或用滤纸过滤
实用文档
剂
样品的测定
检样的制备
贝类罐头 1.将罐内所有内容物（包括贝肉组织及汁液），
于均质器中均质 2.大容量的罐头，则过滤分离贝肉及汁液，分别
称重，将固形物和汤汁按比例混合，充分均质 冷冻贝类
在室温下，使冷冻的样品（带壳或脱壳的）呈 半冷冻状态，按上述规定的方法清洗、开壳、 淋洗、取肉、均质
试剂
盐酸溶液：0.1 mol/L 盐酸溶液：5 mol/L 氢氧化钠溶液：0.1 mol/L
实用文档
仪器和设备
均质器 天平（感量0.1g） 离心机 pH计 秒表 玻璃皿；烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等 注射器：1mL 注射器针头：8#
实用文档
小白鼠：
体重为19-21g的健康ICR系雄性小白鼠 若体重＜19g或＞21g，查表中的校正系
数便可得到校正的死亡时间 体重＞23g、或已用过的小白鼠则不能
使用
实用文档
样品的测定
检样的制备
贝类
洗净外壳，切断闭壳
肌，开壳，用清水淋
洗内部去除泥沙及其
他外来杂质，仔细取
贝 肉 ， 收 集 沥 水 5min
（避免贝肉堆积），
捡出碎壳等杂物，将 注意：取肉时切勿
贝肉均质
ห้องสมุดไป่ตู้
割破肉体，开壳前
不能加热或用麻醉
稀释提取液时，要调节pH至2.0-4.0,逐滴加入 0.1mol/L或0.01mol/LHCl溶液
实用文档
结果的计算与判断
毒力的计算
根据小鼠的死亡时间，在附录B 中查出相应的每毫升注射
液的鼠单位数M
将存活鼠的死亡时间视为大于60min即相当于＜0.875MU 若试验动物重量＜19g或＞21g。则根据附录C查出重量校
原理
根据小鼠注射贝类提取液后的死亡时间，查出 鼠单位，计算确定每100g贝肉中PSP的含量
特点：测定结果代表存在于贝肉内各种化学结 构的麻痹性贝类毒素的总量
鼠单位 mouse unit，MU：对体重为20g的小白 鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素后，小鼠在 15min时死亡所需的最低毒素量
实用文档
窒息，心肺衰竭而在2—24小时内死亡 一般PSP中毒在0.5-2h的时间内，症状逐渐发
展，能承受12h以上的中毒者一般能康复
实用文档
麻痹性贝类毒素的测定方法
国际上麻痹性贝类毒素的检测方法较多，主要有小白鼠法、 高效液相色谱法、酶联免疫法、放射性免疫法等。
生物法(即小白鼠法)是国际惯用的麻痹性贝类毒素的测定 方法，已被美国公职分析化学家协会《公定分析方法》 （AOAO）收入，而成为最普遍应用的检验方法。
记录注射完毕时间，仔细观察 并用秒表记录小鼠停止呼吸时 的死亡时间（到小鼠呼出最 后一口气止）
实用文档
样品的测定
小鼠试验
若注射样品原液后，1只或2只小鼠的死亡时间 大于7min，则需再注射至少3只小鼠以确定样 品的毒力
若小鼠的死亡时间小于5min，则要稀释样品提 取液后，再注射另一组小鼠（3只），得到 5min-7min的死亡时间
正系数k 样品中PSP的含量按公式（1）计算。
……………（1） 式中：
X—样品中PSP含量，每百克样品中鼠单位（MU / 100g）
Ki—每只小鼠的重量校正系数 Mi—每只小鼠的鼠单位数，鼠单位（MU）
D—样品提取液的稀释倍数
200—样品量，克（g） 实用文档
实用文档
实用文档
结果的计算与判断
样品中的毒力单位的按公式（4）计算。 F·80µg /100g＝400MU/100g ………（3） F=5
式中： F—毒素转换系数；
80µg /100g—样品中PSP限量，µg /100g 400MU/100g—样品中PSP限量，MU/100g
实用文档
二、腹泻性贝类毒素（DSP） Diarrhetic shellfish poisoning
生物法(即小白鼠法)，系采用ICR系列的小白鼠作为检验 动物，进行贝类毒素分析
生物法(即小白鼠法)优势：当使用生物法检测法时，一旦
发现超标样品，则本批样品不得食用，这说明所检测贝类
中相关的毒素含量已经影响到人们的食用安全，不适合食
用。
实用文档
麻痹性贝类毒素的测定 生物法
(SC/T 3023-2003)
贝类毒素的测定 生物法
实用文档
一、麻痹性贝类毒素（PSP） Para1ytical shellfish poisoning
PSP中毒是最常见的食用贝类中毒 PSP由一组石房蛤毒及其衍生物组成，PSP与涡
鞭毛藻的水华有关（＞106个细胞／升） PSP在世界范围内分布 PSP中毒引起神经系统紊乱，呼吸困难，感觉
DSP是由于双壳贝类滤食含毒的涡鞭毛藻而引起 影响较严重的地区主要是日本和欧洲沿海国家，
发病率高，引起许多国家地区的关注 受DSP中毒的症状表现为消化功能紊乱（腹泻、
呕吐、腹痛），食用含毒贝类后30分钟至几小 时出现症状，中毒者一般在3-4天康复，尚无死 亡病例
实用文档
腹泻性贝类毒素的测定方法
实用文档
样品的测定
提取
取 100g 样 品 于 800mL 烧 杯 中 ， 加 0.1mol/L HCl溶液100mL充分搅拌， 检 查 pH （ pH 应 为 2.0-4.0 ） 。 需 要 时，可逐滴加入5mol/L HCl溶液或 0.1mol/L NaOH溶液调整pH，加碱 时速度要慢，同时需不断搅拌，防 止局部碱化破坏毒素
在国际上对腹泻性贝类毒素的检测方法较 多，主要有生物法、高效液相色谱法、酶 联免疫法、放射性免疫法等
生物法（小白鼠法，Mouse bioassay）是 最常用的一种方法
保留进行小鼠注射用的足量液体（约10mL）
实用文档
样品的测定
小鼠试验
选择ICR系小鼠 称重 ：以感量 为 0.1g
的天平将小鼠称重并 记录重量
实用文档
样品的测定
小鼠试验
每个样品注射3只小鼠，每只小鼠腹腔注射1mL 提取液。注射时若有一滴以上提取液溢出，须 将该只小鼠丢弃，并重新注射一只小鼠
将混合物加热，并徐徐煮沸5min，冷却至室温， 调节pH至2.0-4.0（切勿＞4.5）。将混合物移至 量筒中并稀释至200mL
实用文档
样品的测定
提取
将混合物倒回烧杯，搅拌至均质状，使其沉降至 上清液呈半透明状，不能堵塞注射针头即可
必要时将混合物或上清液以3000r/min离心5min， 或用滤纸过滤
实用文档
剂
样品的测定
检样的制备
贝类罐头 1.将罐内所有内容物（包括贝肉组织及汁液），
于均质器中均质 2.大容量的罐头，则过滤分离贝肉及汁液，分别
称重，将固形物和汤汁按比例混合，充分均质 冷冻贝类
在室温下，使冷冻的样品（带壳或脱壳的）呈 半冷冻状态，按上述规定的方法清洗、开壳、 淋洗、取肉、均质
试剂
盐酸溶液：0.1 mol/L 盐酸溶液：5 mol/L 氢氧化钠溶液：0.1 mol/L
实用文档
仪器和设备
均质器 天平（感量0.1g） 离心机 pH计 秒表 玻璃皿；烧杯、量筒、容量瓶、搅拌棒等 注射器：1mL 注射器针头：8#
实用文档
小白鼠：
体重为19-21g的健康ICR系雄性小白鼠 若体重＜19g或＞21g，查表中的校正系
数便可得到校正的死亡时间 体重＞23g、或已用过的小白鼠则不能
使用
实用文档
样品的测定
检样的制备
贝类
洗净外壳，切断闭壳
肌，开壳，用清水淋
洗内部去除泥沙及其
他外来杂质，仔细取
贝 肉 ， 收 集 沥 水 5min
（避免贝肉堆积），
捡出碎壳等杂物，将 注意：取肉时切勿
贝肉均质
ห้องสมุดไป่ตู้
割破肉体，开壳前
不能加热或用麻醉
稀释提取液时，要调节pH至2.0-4.0,逐滴加入 0.1mol/L或0.01mol/LHCl溶液
实用文档
结果的计算与判断
毒力的计算
根据小鼠的死亡时间，在附录B 中查出相应的每毫升注射
液的鼠单位数M
将存活鼠的死亡时间视为大于60min即相当于＜0.875MU 若试验动物重量＜19g或＞21g。则根据附录C查出重量校
原理
根据小鼠注射贝类提取液后的死亡时间，查出 鼠单位，计算确定每100g贝肉中PSP的含量
特点：测定结果代表存在于贝肉内各种化学结 构的麻痹性贝类毒素的总量
鼠单位 mouse unit，MU：对体重为20g的小白 鼠腹腔注射1mL麻痹性贝类毒素后，小鼠在 15min时死亡所需的最低毒素量
实用文档
窒息，心肺衰竭而在2—24小时内死亡 一般PSP中毒在0.5-2h的时间内，症状逐渐发
展，能承受12h以上的中毒者一般能康复
实用文档
麻痹性贝类毒素的测定方法
国际上麻痹性贝类毒素的检测方法较多，主要有小白鼠法、 高效液相色谱法、酶联免疫法、放射性免疫法等。
生物法(即小白鼠法)是国际惯用的麻痹性贝类毒素的测定 方法，已被美国公职分析化学家协会《公定分析方法》 （AOAO）收入，而成为最普遍应用的检验方法。
记录注射完毕时间，仔细观察 并用秒表记录小鼠停止呼吸时 的死亡时间（到小鼠呼出最 后一口气止）
实用文档
样品的测定
小鼠试验
若注射样品原液后，1只或2只小鼠的死亡时间 大于7min，则需再注射至少3只小鼠以确定样 品的毒力
若小鼠的死亡时间小于5min，则要稀释样品提 取液后，再注射另一组小鼠（3只），得到 5min-7min的死亡时间
正系数k 样品中PSP的含量按公式（1）计算。
……………（1） 式中：
X—样品中PSP含量，每百克样品中鼠单位（MU / 100g）
Ki—每只小鼠的重量校正系数 Mi—每只小鼠的鼠单位数，鼠单位（MU）
D—样品提取液的稀释倍数
200—样品量，克（g） 实用文档
实用文档
实用文档
结果的计算与判断