实验四 抗生素敏感实验

肠杆菌科细wenku.baidu.com在不同培养基上的 生长现象观察
大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌在中国蓝、EMB培养基、KIA 培养基和SS培养基等培养基的菌落特点，注意其颜色、大 小、透明度、光滑度等。
（1）KIA培养基含乳酸、葡萄糖、硫化亚铵和酚红指示剂（PH=7.4为红色 ），细菌分解糖产酸时变成黄色。因此，底层穿刺中可以观察细菌动力 ，对葡萄糖发酵的能力及是否产生硫化氢；斜面可观察细菌对乳糖的发 酵情况。肠道致病菌多不发酵乳糖，因此可以区别肠道内的致病菌和大 肠艾希菌。 （2）大肠杆菌在中国蓝琼脂平板上由于本菌分解乳糖产酸则形成凸起的、 大而混浊的蓝色菌落。肠道致病菌在中国蓝琼脂平板上由于不分解乳糖 ，形成透明、淡红色的菌落。 。
实验七
抗生素敏感实验
一、实验目的和要求
掌握纸片扩散法（K－B法）的原理、操作方
法等、结果判断、意义及质量控制； 了解大肠杆菌、葡萄球菌对几种抗生素的敏 感性。
二、纸片扩散法（K-B法）
原理：
含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼
脂平板上，纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶 解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯 度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长 被抑制，形成透明的抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度， 并与该药对测试菌的最低抑制浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）呈负相关，即抑 菌圈愈大，MIC愈小。
含药纸片
抑菌圈
三、材料
1、菌种：大肠杆菌、葡萄球菌18-24小时琼脂 斜面培养物。 2、培养基：普通琼脂平板 3、分别含各种抗生素（青霉素、链霉素、庆大 霉素、红霉素等）的圆形滤纸片（直径 0.6cm）。小镊子等。
四、方法
1、取琼脂平板两只，每只平板表面分四等份， 于皿底注明待检抗生素名称。 2、于两只平板用棉拭子或接种环分别密涂大肠 杆菌及葡萄球菌于琼脂平板表面。
3、用小镊子以无菌操作分别将含有各种抗生素 的滤纸片，平贴于各区中央，注明药名、班 级、姓名、日期等。 4、置于37℃孵育24小时，观察各种药物滤纸 片周围的抑菌环、测量其直径。
五、结果判定
抑菌程度的判定是依照滤纸片周围细菌的 生长与抑菌圈直径大小判定 ①不敏感—纸片周围细菌生长，无抑菌环。 ②轻度敏感--纸片周围细菌不生长，抑菌环小 于10mm。 ③中度敏感--纸片周围细菌不生长，抑菌环在 10-15mm。 ④高度敏感--纸片周围细菌不生长，抑菌环在 15mm以上。


（3）大肠杆菌在SS琼脂平板上因分解乳糖，形成红色的、圆形、凸起、 边缘整齐的菌落，多为光滑型菌落。肠道致病菌（沙门菌属、志贺菌属） 在SS琼脂平板上由于不分解乳糖则形成无色透明、中等大小的菌落。 （4）大肠杆菌在麦康凯琼脂平板上形成红色、中等大小的菌落。肠道致病 菌（沙门菌属、志贺菌属）。在麦康凯琼脂平板上由于不分解乳糖则形成 无色透明、中等大小、光滑型的菌落。