血小板抗原抗体检测精品PPT课件
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血小板抗原抗体检测及其输血科应用课件
流式细胞术
一种利用流式细胞仪进行检测的方法
将待测样品与特异性抗体结合，通过 流式细胞仪对细胞表面抗原进行检测 ，可同时对多个抗原进行定量和定性 分析。
微量淋巴细胞毒试验
一种用于检测人类白细胞抗原抗体的 试验方法
通过将待测血清与淋巴细胞混合培养 ，观察淋巴细胞的死亡情况，从而判 断血清中是否存在针对特定抗原的抗 体。
血小板抗原抗体
是指人体免疫系统对血小板表面抗原产生的特异性抗体，通过与血小板抗原结 合，引发一系列免疫反应。
血小板抗原
指血小板表面存在的特异性抗原，这些抗原在正常生理状态下通常不会引起免 疫反应，但在某些情况下，如免疫系统异常、药物作用等，可能会引发免疫反 应，产生血小板抗原抗体。
血小板抗原抗体的分类
02
CATALOGUE
血小板抗原抗体检测的方法
酶联免疫法
一种常用的免疫学检测方法
通过酶与抗体或抗原的结合，将抗原或抗体的性质、定位及数量“放大”，从而 对样品中的抗体或抗原进行定性或定量的检测。
固相放射免疫法
01
一种将放射性同位素与免疫反应 相结合的检测方法
02
利用放射性同位素作为示踪剂对 抗体或抗原进行标记，通过测量 放射性强度来检测样品中的抗体 或抗原。
04
CATALOGUE
血小板抗原抗体检测在输血科的应用
交叉配血
血小板交叉配血是输血科的重要工作之一，通过检测受血者和供者之间的血小板抗 原抗体，确保输注的血小板与受血者配型相合，减少输血反应的风险。
交叉配血试验包括主侧配血和次侧配血，主侧配血是将受血者的血清与供者的血小 板反应，次侧配血是将供者的血清与受血者的血小板反应。
感谢观看
临床应用范围的扩大
血小板的检测PPT课件
7
血小板计数
血小板计数(platelet count,PC) 是计数单位容积（L） 外周血液中血小板的数量，可以采用镜下目视法，目 前多用自动化血细胞分析仪检测。
参考值：(100-300)X 109/L
8
临床意义
（一）. 血小板减少
PC ＜ 100x109/L 称为血小板减少。
1. 血小板生成减少或障碍：见于再障、巨幼贫、急性白 血病、放射性损伤、骨髓纤维化晚期等．
34
用EDTA抗凝血测定
35
用EDTA抗凝血(双通道)
36
用肝素抗凝的
37
用枸橼酸钠抗凝
38
用Na2-EDTA抗凝血所制的涂片
39
用枸橼酸钠抗凝血所制的血涂片
40
用肝素抗凝血所制血涂片
41
感谢下 载
23
血小板减少伴小血小板病例
Wiskott-Aldrich 综合征
血小板减少伴小血小板（约
1μm）。X性联隐性遗传。T细胞免疫缺陷、感染、湿疹、出血。
24
血片中血小板的观察
通过与红细胞比较判断是否正常，是否增加或 减少 （正常情况下红细胞15-20个有1个 血小板）
大小、形态的变化（是否有畸形小板的存在） 聚集性观察（抗凝剂诱导血小板聚集，导致
15
血小板的体积
1.正常血小板胞体直径2~4 μm 2.小血小板指直径<2μm 3．大血小板指直径5~7μm 4．巨大血小板指直径>8μm 5．超巨大血小板指直径>20μm
16
小血小板、正常血小板、大血小板
17
异常血小板形态
1．畸形血小板胞体形态怪异的血小板，其胞体往往巨大或超巨大。 2．少或无颗粒血小板指颗粒无或减少的血小板 3．血小板卫星现象也被称为“玫瑰花形血小板”。
血小板计数
血小板计数(platelet count,PC) 是计数单位容积（L） 外周血液中血小板的数量，可以采用镜下目视法，目 前多用自动化血细胞分析仪检测。
参考值：(100-300)X 109/L
8
临床意义
（一）. 血小板减少
PC ＜ 100x109/L 称为血小板减少。
1. 血小板生成减少或障碍：见于再障、巨幼贫、急性白 血病、放射性损伤、骨髓纤维化晚期等．
34
用EDTA抗凝血测定
35
用EDTA抗凝血(双通道)
36
用肝素抗凝的
37
用枸橼酸钠抗凝
38
用Na2-EDTA抗凝血所制的涂片
39
用枸橼酸钠抗凝血所制的血涂片
40
用肝素抗凝血所制血涂片
41
感谢下 载
23
血小板减少伴小血小板病例
Wiskott-Aldrich 综合征
血小板减少伴小血小板（约
1μm）。X性联隐性遗传。T细胞免疫缺陷、感染、湿疹、出血。
24
血片中血小板的观察
通过与红细胞比较判断是否正常，是否增加或 减少 （正常情况下红细胞15-20个有1个 血小板）
大小、形态的变化（是否有畸形小板的存在） 聚集性观察（抗凝剂诱导血小板聚集，导致
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血小板的体积
1.正常血小板胞体直径2~4 μm 2.小血小板指直径<2μm 3．大血小板指直径5~7μm 4．巨大血小板指直径>8μm 5．超巨大血小板指直径>20μm
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小血小板、正常血小板、大血小板
17
异常血小板形态
1．畸形血小板胞体形态怪异的血小板，其胞体往往巨大或超巨大。 2．少或无颗粒血小板指颗粒无或减少的血小板 3．血小板卫星现象也被称为“玫瑰花形血小板”。
《血小板图检测》课件
献血者筛选
在献血过程中，进行血小 板图检测有助于筛选出健 康的献血者，确保血液质 量。
法医学应用
在某些法医学案例中，如 涉及外伤或中毒的案件， 血小板图检测可以为案件 调查提供线索。
03
血小板图检测的注意事项
样本采集与处理
采集时间
选择清晨空腹时采集样本 ，以减少饮食和日常活动 对检测结果的影响。
监测治疗效果
在治疗过程中，定期进行血小板图检测可以 帮助医生了解治疗效果，及时调整治疗方案 。
预防并发症
对于某些疾病，定期进行血小板图检测可以 及时发现血小板异常，预防因血小板异常引 发的并发症。
科研应用
基础研究
血小板图检测为血小板相关的基 础研究提供了数据支持，有助于 深入了解血小板的生理和病理机
技术创新与进步
自动化技术
通过引入更先进的自动化技术，提高血小板图检测的效率和准确 性，减少人为误差。
人工智能与机器学习
利用人工智能和机器学习算法对血小板图像进行分析，实现更精准 的检测和诊断。
新型检测方法
研究开发新的血小板图检测方法，提高检测的灵敏度和特异性，满 足临床对血小板功能检测的需求。
应用领域的拓展
预处理
对血液样本进行稀释、 染色或标记。
检测
使用特定的仪器或设备 进行血小板计数和功能
分析。
结果解读
根据检测数据解读血小 板的功能和数量状态， 并给出相应的诊断和治
疗建议。
02
血小板图检测的应用
临床应用
诊断疾病
通过血小板图检测，医生可以快速准确地诊 断出血性疾病、血栓性疾病等与血小板相关 的疾病，为后续治疗提供依据。
《血小板图检测》PPT课件
《临床输血检验技术》课件——血小板血型系统
阳性反应
阴性反应
简易致敏红细胞血小板血清学试验
制备固相化血小板
血液7ml ACD-A液1ml
富血小板血浆
100g*10min ACD-A液
101g*15min
生理盐水洗涤5次 调整血小板浓度
患者血小板 50μl/孔
甲醛固定20分钟
反应板（固 洗涤5次 相化血小板）
简易致敏红细胞血小板血清学试验
间接试验（检查患者血清中的抗血小板抗体）
想一想
血小板血型系统的抗体临床是如何分类的？
血小板血型检测技术
学习要求
掌握简易致敏红细胞小板血清学试验的原 理、方法及质量控制。
简易致敏红细胞血小板血清学试验
原理
患者血小板 50μl/孔甲醛固定 20分钟
患者血清/血浆 阳性
25μl/孔
洗涤5次 血小板单层
反应板（固相化血 小板）
阴性
指示红细胞
简易致敏红细胞血小板血清学试验
间接试验（检查患者血清中的抗血小板抗体）
PBS25ul
阳性 患者血清25μl/孔 室温湿盒静置1小时
洗涤2次
血小板单层
阴性
指示红细胞 （IgG抗D抗体致敏红 PBS 细胞） 各25μl/孔 静置4小时
阳性反应 静置4小进
阴性反应
简易致敏红细胞血小板血清学试验
直接试验（检查血小板表面结合的抗血小板抗体）
单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验 敏感性强，可以检测出血小板膜上微量表达的HPA-5抗原。可用于鉴定血
小板抗原和血小板同种特异性HPA抗体，以及血小板交叉配血试验。但由
于HPA定型血清来源困难，本方法主要用于对部分HPA基因定型结果的验
证。
改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验
阴性反应
简易致敏红细胞血小板血清学试验
制备固相化血小板
血液7ml ACD-A液1ml
富血小板血浆
100g*10min ACD-A液
101g*15min
生理盐水洗涤5次 调整血小板浓度
患者血小板 50μl/孔
甲醛固定20分钟
反应板（固 洗涤5次 相化血小板）
简易致敏红细胞血小板血清学试验
间接试验（检查患者血清中的抗血小板抗体）
想一想
血小板血型系统的抗体临床是如何分类的？
血小板血型检测技术
学习要求
掌握简易致敏红细胞小板血清学试验的原 理、方法及质量控制。
简易致敏红细胞血小板血清学试验
原理
患者血小板 50μl/孔甲醛固定 20分钟
患者血清/血浆 阳性
25μl/孔
洗涤5次 血小板单层
反应板（固相化血 小板）
阴性
指示红细胞
简易致敏红细胞血小板血清学试验
间接试验（检查患者血清中的抗血小板抗体）
PBS25ul
阳性 患者血清25μl/孔 室温湿盒静置1小时
洗涤2次
血小板单层
阴性
指示红细胞 （IgG抗D抗体致敏红 PBS 细胞） 各25μl/孔 静置4小时
阳性反应 静置4小进
阴性反应
简易致敏红细胞血小板血清学试验
直接试验（检查血小板表面结合的抗血小板抗体）
单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验 敏感性强，可以检测出血小板膜上微量表达的HPA-5抗原。可用于鉴定血
小板抗原和血小板同种特异性HPA抗体，以及血小板交叉配血试验。但由
于HPA定型血清来源困难，本方法主要用于对部分HPA基因定型结果的验
证。
改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验
人类白细胞抗原,血小板抗原检测技术-PPT精品文档
仁爱为本
精诚为强
人类白细胞抗原(HLA)
• HLA抗原分布相当广 泛，见于所有的有核 细胞上，但在淋巴细 胞上的密度最高 • 血小板上的HLA抗原 是血小板膜表面的固 有结构成分，主要是 HLA-I类的A、B位点 的抗原 • HLA-I类抗原是引起 血小板同种免疫和血 小板输注无效的主要 抗原，约占80%
• • • • 血清学方法 ①粒细胞凝集试验（GAT） ②粒细胞免疫莹光试验（GIFT） ③单克隆抗体特异性粒细胞抗原捕获试 验（MAIGA） • ④ELISA方法 • ⑤流式细胞术
仁爱为本
精诚为强
基因分型技术
• 主要方法为PCR-RFLP PCR-SSP PCRSSO等 • 1、PCR序列特异性引物 • 2、PCR限制性片段长度多态性
仁爱为本
精诚为强
预致敏淋巴细胞试验
• 在应答细胞A与刺激细胞B的初次混合淋 巴细胞培养反应(MLC)中，经过9-12天培 养，应答细胞A增生为淋巴细胞后变成小 淋巴细胞，即为预致敏淋巴细胞（PL）
仁爱为本
精诚为强
混合淋巴细胞培养
• 两个无关个体的淋巴细胞，在体外适当 的 环境下混合培养后可以互相激发，使 细胞活化并向母细胞转化，产生分裂增 生现象，即为混合淋巴细胞培养方法 （MLC）。 • 现MLC主要用于实体器官移植前的快速 相容性检测。分双向MLC和单向MLC
仁爱为本
精诚为强
血小板血型抗原
• 血小板血型抗原主要有两大类： 血小板相关抗原 血小板特异性抗原。
仁爱为本
精诚为强
• 血小板相关抗原：血小板表面存在的与 其他细胞或组织共有的抗原 • 血小板特异性抗原（HPA）：通常将血 小板表面由血小板特有的抗原决定簇组 成，表现出血小板特有的遗传多态性， 并且不存在于其他细胞和组织上的抗原。
血小板 抗原抗体检测
血小板抗原抗体检测什么是血小板？血小板又称为血小板细胞，是一种无核的细胞碎片，主要功能是协助止血和凝血。
在血液中的数量通常是150,000到450,000个/微升，以细胞碎片的形式存在于血液中，通过骨髓细胞不断增生来保持血小板数量的平衡。
血小板在凝血过程中起到关键的作用，它们会迁移至受损的血管壁，然后与其他血小板和蛋白质一起形成血栓，堵住受损的部位防止进一步出血。
什么是抗原和抗体？抗原是指触发人体免疫系统反应的物质，包括细菌、病毒、真菌、肿瘤等。
当免疫系统侦测到它们时，会产生抗体来攻击这些物质。
抗体是由免疫系统产生的一种蛋白质，其特异性与抗原相对应。
当免疫系统产生抗体之后，抗体会结合到相应的抗原上面，从而促进细胞递送并消灭被抗体结合的物质。
为什么要进行血小板抗原抗体检测？血小板抗原抗体检测是用于分析血液样本中抗体和抗原的存在情况的实验室检测。
该检测通常用于两个主要的目的：1.诊断凝血障碍：一个常见的例子是自身免疫性血小板减少症（ITP），这种疾病导致人体免疫系统攻击自身的血小板，引发低血小板计数和出血。
血小板抗原抗体检测可以帮助诊断这种疾病，从而安排相应的治疗方案。
2.确定血型：血小板抗原抗体检测也可以用于确定个人的血型，这对于无论是进行输血还是移植都是非常重要的信息。
如何进行血小板抗原抗体检测？血小板抗原抗体检测通常需要一份血液样本。
在实验室中，会使用不同的试剂来检测特定的抗原和抗体。
检测结果会被记录下来，以便将来参考。
血小板抗原抗体检测的常见问题：1.血小板抗原抗体检测是痛苦的吗？因为血小板抗原抗体检测需要采集血液样本，因此可能会引起少许疼痛或不适。
但是，采集血液只需要很少的时间，这种不适通常不会持续很久。
2.血小板抗原抗体检测是否需要特殊准备？通常不需要特殊准备。
建议避免在检测前吃过多的食物，并避免饮用咖啡或茶。
此外，如果正在服用任何药物或服用保健品，请在检测前通知医生。
3.血小板抗原抗体检测的结果需要多长时间才能出来？血小板抗原抗体检测通常需要几天时间即可出结果。
血小板血型系统PPT课件
存在HLA-A和B位点的抗原 HLA-C位点的抗原? 未发现HLA-DP、DQ和DR等位点抗原 经细胞因子刺激，可产生HLA-DR抗原
2020/7/14
.
8
2020/7/14
.
9
血小板特异性抗原
血小板特异性抗原是通过相应抗体 的检出而发现的，具有独特的型特异性。 被国际输血协会组织确认的血小板特异 性抗原已有28个抗原（使用血清学方法 检出的），正式命名的有23个。
2020/7/14
.
10
2020/7/14
.
11
2020/7/14
.
12
血小板抗原频率调查与日本人、白种人比较
2020/7/14
.
13
人类血小板同种抗原频率
抗原 白人 日本人 韩国人 黑人 印第安人 印尼人 中国人
HPA-1a 97.9 HPA-1b 28.6 HPA-2a >99.9 HPA-2b 13.2 HPA-3a 80.9 HPA-3b 69.8 HPA-4a >99.9 HPA-4b 0.0 HPA-5a 99.0 HPA-5b 19.7 HPA-6W 0.7
GP II b GP III a
GP III b GP V
2020/7/14
167
Br, He, Zav
157
165
P1E,
Bemard-Soulier综合症
Ko(Sib/Koz)
155
Bak
114 Zw(PLA), Yuk/Pen
Glanzmann’s血小板无 力症
110 Nak
82
P1T
.
Bemard-Soulier
非免疫因素 输注后1小时血小板计数增高，但24小时
浅谈开展血小板抗体检测项目的体会陈秉宇幻灯片
2021/5/19
浙江省人民医院 输血科
6
一血小板抗体的简介
〔四〕我们的观点： 1 患者和医院的输血平安重于泰山
！ 2 输注血小板是临床治疗的重要手段 ，今后 必将有更大开展。
3 大行何不做小微？
2021/5/19
浙江省人民医院 输血科
7
二开展血小板抗体检测的目的和意义
关于血小板抗体检测工程的说明〔202111-21〕
4 指示红细胞：
2021/5/119〕指示红细胞的浙江外省人表民医已院致输血敏科 人IgG抗体
13
三血小板抗体检测技术的简述
鉴于血小板抗体对临床的重要价值，为此该工程得 到今年11月1日卫生厅质量检查组的充分肯定。目前我省 兄弟医院已相继开展。
输血科 2021年11月21日
2021/5/19
浙江省人民医院 输血科
9
三血小板抗体检测技术的简述
〔一〕原理 〔二〕试剂组成 〔三〕实验前准备 〔四〕操作
2021/5/19
浙江省人民医院 输血科
浙江省人民医院 输血科
4
一血小板抗体的简介
〔二〕 目前杭州省级医院开展情况：
1〕血小板抗体检测试剂注册时间：国家药监局， 2021年4月3日。
2〕我院开展时间：2021年5月26日；关注和准备时间 约10年。
3〕现在杭州，浙一医院、浙二医院、邵逸夫医院、浙江省 中医院、 浙江医院等相继开展。
2021/5/19
2〕物价收费目录：编码—260000016 ；工程名称—白细胞特异性和组织 相容性抗体检测；价格—90元/次。
3〕现医保限定支付范围：无限定支付范围；甲乙分类—甲。 2血小板特异性和组织相容性抗体：
1〕针对血小板特异性抗原〔HPA抗原〕的HPA抗体〔17-25%〕。 2〕物价收费目录：编码—260000017 ；工程名称—血小板特异性和组织
血小板抗体检测临床应用(妇产科篇) PPT
NAIT的治疗--产前管理
1. 静脉注射用人免疫球蛋白（IVIG） 许多研究中心用IVIG治疗HPA-1a免疫的孕妇，在瑞典，治疗HPA-1a免疫的孕妇用 量为0.5~1.0g/kg/周，新西兰为2g/kg/周，在妊娠12周开始使用。 2. 糖皮质激素治疗 许多治疗方案中同时使用IVIG和糖皮质激素，研究发现IVIG和糖皮质激素一起的 治疗效果高于单独使用IVIG。 3. 剖腹产 在分娩时选择性剖宫产可能有助于防止脑出血发生。
近年来研究发现母婴间血型不合导致的同种抗体免疫因素是造成不 明原因流产的主要因素之一，母婴间红细胞血型抗体不合是导致晚期习 惯性流产的主要原因，而母婴间血小板血型不合的血小板同种抗体（包 括血小板特异性抗体和HLA抗体）是导致早期流产的主要原因。
研究论文
上海血液中心刘达庄教授对1200名正常孕妇及52名有早期流产史患 者进行了血小板同种抗体的筛查和研究，探讨了抗体特异性与早期流产 的发病关系和NAIT的预防，结果见下表。
治疗方案
四、妇产科开展的意义及项目优势
检测原理--SPRCA
采用先进的固相红细胞吸附试验技术（solid-phase red cell adherence, SPRCA），反应板中已包被抗血小板单克隆抗体，血小板悬 液经离心洗涤后可在反应孔底部形成血小板单层。加入血清或血浆，在 孔中经过孵育后，若该血清或血浆中含有血小板抗体，则该抗体与反应 孔中的血小板单层结合，未结合的成分通过洗涤被去除。加入抗人IgG 及人IgG致敏红细胞（指示红细胞），经离心后指示红细胞通过抗人IgG 的桥连与血小板单层上的血小板抗体结合，因此阳性反应为指示红细胞 平铺在反应孔底部表面。而阴性反应为指示红细胞在离心力的作用下聚 集于反应孔底部中央。
2. 血小板抗体检测
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血小板抗原抗体
目录
血小板抗原 血小板抗体 抗体检测及交叉配血
血小板相关疾病
血小板抗原
❖ 血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生抗体, 并能与之结合的血小板膜蛋白质和糖分子.
❖ 血小板相关抗原: 红细胞血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 白细胞抗原：HLA抗原
❖ 血小板特异性抗原（human platelet antigen，HPA）
❖ 主要位于人血小板膜的一大类抗原,称之为血小板 特异性抗原
❖ 高频率抗原以“a”表示，低频率抗原以“b”表示 ❖ 人血小板同种抗原（HPA）自1959年被发现以来，
迄今已经检出24个抗原，其中HPA-1，-2，-3，-4 ，-5，-6,-15被血小板命名委员会（PNC）列入抗 原系统，包含14个对偶抗原，而HPA-7-14，-16,17因为对偶抗原未检出而未达到系统命名标准。
血小板谱细胞 （三人份O型混合血小板）
50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔
阳性 水浴 洗30涤m5i次n
反应板 （已包被血小板单抗）
血小板单层
阴性
指示红细胞 （人IgG致敏红细胞）
抗人IgG 各50μl/孔
200g,5min离 心
200g,5min离 心
阳性反应
阴性反应
❖ GPⅡb（CD41）是跨膜蛋白，细胞外116 kD的重链，通过 二硫键与22 kD的轻链共价结合。GPⅡb上携带 HPA-3和 HPA-9bw；
血小板抗体
抗体 分类
疾病
同 种 格兰茨曼血小板功 抗 体 能不全病
同种 异 体抗 体
新生儿同种异体免 疫性血小板减少症
血小板输注无效症
血小板输血后紫癜
筛选基因型相容的供者 避免血小板抗体的产生
采取预防和治疗措施 避免流产、出血等
减少血小板输注无效 避免紫癜、出血和死亡
血小板抗原定型
HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 HPA-15 a ba ba b a b ab a b阳性对照条带等位源自因条带1bb2ab
3bb
4aa 5aa 15aa
血小板相关疾病
临床上由于血小板血型抗原引起的血小板减少 症主要有5种：
1. 血小板输注无效（PTR） 2. 输血后紫癜（PTP） 3. 新生儿同种免疫血小板减少症（FMAIT/NAIT） 4. 被动免疫血小板减少症（PAT）
5. 移植相关的同种免疫血小板减少症（TAT)
血小板抗原
血小板抗原
血小板抗原
❖ 24个抗原主要分布在糖蛋白GPⅡb，GPⅢa，GPⅠb，GPⅠa 以及CD109上 ；
❖ GPⅢa（CD61）携带9种HPA抗原，分别为HPA-1，HPA-4， HPA-6bw，HPA-7bw，HPA-8bw，HPA-10bw，HPA-11bw， HPA-14bw，HPA-16bw
血小板抗体检测 血清学
❖ ELISA法(酶联免疫试验) ❖ 血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA) ❖ 固相血小板免疫血清学试验(SPISA) ❖ 简易致敏红细胞血小板血清学试验(SEPSA) ❖ 流式细胞仪 ❖ 改良抗原俘获(ELISA) ❖ 免疫荧光试验
简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA
血小板抗原
❖ 白细胞抗原：HLA抗原 ❖ 血小板存具有HLA-Ⅰ类抗原类抗原，主要是HLA-A
和HLA-B位点的抗原（少量表达的HLA-C抗原）。 ❖ HLA-Ⅰ类分子为血小板的固有蛋白，少量从血浆中
吸附。血小板HLA抗原的免疫原性比白细胞弱。
血小板抗原
❖血小板特异性抗原（human platelet antigen， HPA）
血清学定型 ➢ 即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原 ➢ 缺点：特异性抗体来源困难
---人血清中血小板抗体通常为多特异性 ---单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗，
无其它HPA单抗。 基因定型 ➢ 限制性片段长度多态性分析（RFLP） ➢ 序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO) ➢ 序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)
血小板抗原
血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 ❖ 来源：血小板表面的A、B抗原来源主要有两个：大部分是血小板本身所
固有（从巨核细胞分化而来）；小部分是从血浆吸附而来。如体外将O 型血小板和A或B型血清温育，血小板就会带上A或B抗原。 ❖ 不同个体间血小板膜ABH抗原量存在差异; ❖ 同一个体的每一个血小板抗原量差别非常大，由此可以解释有些人输入 ABH不相容血液后,一部分输入的血小板迅速被破坏,而另外的血小板其 生命力不受影响.
HPA-1a,HPA-3,HPA-5b
其它抗体 抗GPⅡb/Ⅲa抗体
极少数为ABO抗体 少数为抗GPIa/IIa抗 体
多数位于GPⅡb/Ⅲa GPIb/IX/V，少数位 于 GPIV/V 和 GPIa/IIa 同上
抗体检测及交叉配血
抗原定型
血小板相容性检测 抗体检测
交叉配型
建立血小板供者库
诊断血小板免疫性疾病 筛查血小板相容性供者
简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA
▪ 直接测定法
血小板表面结合血小板抗体的测定
▪ 间接测定法
血清内抗血小板抗体的测定
▪ 交叉配血试验
选择配合的血小板供体
▪ 质量控制
阴阳性对照
ELISA法(酶联免疫试验)
单克隆抗体免疫固定血小板抗原方法（MAIPA）：该法先制备羊抗鼠IgG包被 的多孔板，另外，将鼠抗人血小板糖蛋白单克隆抗体和带有抗体的血小板共 同孵育，再将孵育后的复合物加入多孔板，孵育，洗涤，最后加入酶联羊抗 人抗体和酶反应底物后显色，定量测定血小板抗体。
自身 抗体
被动同种异体免疫 性血小板减少症
移植相关同种异体 免疫性血小板减少 症
自发性血小板减少 症
继发于母体自发性 血小板减少症
HLA / HPA 抗 体
HPA1b(78%), HPA5b(19%) HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, AntiCD36 HLA-I抗体50~80% 17~25%(日本人为 HPA-2b), HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA3b,HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-5b
目录
血小板抗原 血小板抗体 抗体检测及交叉配血
血小板相关疾病
血小板抗原
❖ 血小板抗原泛指存在于血小板膜的能够刺激机体产生抗体, 并能与之结合的血小板膜蛋白质和糖分子.
❖ 血小板相关抗原: 红细胞血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 白细胞抗原：HLA抗原
❖ 血小板特异性抗原（human platelet antigen，HPA）
❖ 主要位于人血小板膜的一大类抗原,称之为血小板 特异性抗原
❖ 高频率抗原以“a”表示，低频率抗原以“b”表示 ❖ 人血小板同种抗原（HPA）自1959年被发现以来，
迄今已经检出24个抗原，其中HPA-1，-2，-3，-4 ，-5，-6,-15被血小板命名委员会（PNC）列入抗 原系统，包含14个对偶抗原，而HPA-7-14，-16,17因为对偶抗原未检出而未达到系统命名标准。
血小板谱细胞 （三人份O型混合血小板）
50μl/孔
50g,5min离心 洗涤3次
患者血清/血浆 50μl/孔
阳性 水浴 洗30涤m5i次n
反应板 （已包被血小板单抗）
血小板单层
阴性
指示红细胞 （人IgG致敏红细胞）
抗人IgG 各50μl/孔
200g,5min离 心
200g,5min离 心
阳性反应
阴性反应
❖ GPⅡb（CD41）是跨膜蛋白，细胞外116 kD的重链，通过 二硫键与22 kD的轻链共价结合。GPⅡb上携带 HPA-3和 HPA-9bw；
血小板抗体
抗体 分类
疾病
同 种 格兰茨曼血小板功 抗 体 能不全病
同种 异 体抗 体
新生儿同种异体免 疫性血小板减少症
血小板输注无效症
血小板输血后紫癜
筛选基因型相容的供者 避免血小板抗体的产生
采取预防和治疗措施 避免流产、出血等
减少血小板输注无效 避免紫癜、出血和死亡
血小板抗原定型
HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 HPA-15 a ba ba b a b ab a b阳性对照条带等位源自因条带1bb2ab
3bb
4aa 5aa 15aa
血小板相关疾病
临床上由于血小板血型抗原引起的血小板减少 症主要有5种：
1. 血小板输注无效（PTR） 2. 输血后紫癜（PTP） 3. 新生儿同种免疫血小板减少症（FMAIT/NAIT） 4. 被动免疫血小板减少症（PAT）
5. 移植相关的同种免疫血小板减少症（TAT)
血小板抗原
血小板抗原
血小板抗原
❖ 24个抗原主要分布在糖蛋白GPⅡb，GPⅢa，GPⅠb，GPⅠa 以及CD109上 ；
❖ GPⅢa（CD61）携带9种HPA抗原，分别为HPA-1，HPA-4， HPA-6bw，HPA-7bw，HPA-8bw，HPA-10bw，HPA-11bw， HPA-14bw，HPA-16bw
血小板抗体检测 血清学
❖ ELISA法(酶联免疫试验) ❖ 血小板抗原单抗特异性固相化法(MAIPA) ❖ 固相血小板免疫血清学试验(SPISA) ❖ 简易致敏红细胞血小板血清学试验(SEPSA) ❖ 流式细胞仪 ❖ 改良抗原俘获(ELISA) ❖ 免疫荧光试验
简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA
血小板抗原
❖ 白细胞抗原：HLA抗原 ❖ 血小板存具有HLA-Ⅰ类抗原类抗原，主要是HLA-A
和HLA-B位点的抗原（少量表达的HLA-C抗原）。 ❖ HLA-Ⅰ类分子为血小板的固有蛋白，少量从血浆中
吸附。血小板HLA抗原的免疫原性比白细胞弱。
血小板抗原
❖血小板特异性抗原（human platelet antigen， HPA）
血清学定型 ➢ 即用已知特异性抗体检测血小板血型抗原 ➢ 缺点：特异性抗体来源困难
---人血清中血小板抗体通常为多特异性 ---单克隆抗体匮乏，目前国际上仅有HPA-1a单抗，
无其它HPA单抗。 基因定型 ➢ 限制性片段长度多态性分析（RFLP） ➢ 序列特异性寡核苷酸聚合酶链反应(PCR-SSO) ➢ 序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)
血小板抗原
血型抗原：ABO、Lewis和P系统抗原等，无RH抗原 ❖ 来源：血小板表面的A、B抗原来源主要有两个：大部分是血小板本身所
固有（从巨核细胞分化而来）；小部分是从血浆吸附而来。如体外将O 型血小板和A或B型血清温育，血小板就会带上A或B抗原。 ❖ 不同个体间血小板膜ABH抗原量存在差异; ❖ 同一个体的每一个血小板抗原量差别非常大，由此可以解释有些人输入 ABH不相容血液后,一部分输入的血小板迅速被破坏,而另外的血小板其 生命力不受影响.
HPA-1a,HPA-3,HPA-5b
其它抗体 抗GPⅡb/Ⅲa抗体
极少数为ABO抗体 少数为抗GPIa/IIa抗 体
多数位于GPⅡb/Ⅲa GPIb/IX/V，少数位 于 GPIV/V 和 GPIa/IIa 同上
抗体检测及交叉配血
抗原定型
血小板相容性检测 抗体检测
交叉配型
建立血小板供者库
诊断血小板免疫性疾病 筛查血小板相容性供者
简易致敏红细胞血小板血清学试验 SEPSA
▪ 直接测定法
血小板表面结合血小板抗体的测定
▪ 间接测定法
血清内抗血小板抗体的测定
▪ 交叉配血试验
选择配合的血小板供体
▪ 质量控制
阴阳性对照
ELISA法(酶联免疫试验)
单克隆抗体免疫固定血小板抗原方法（MAIPA）：该法先制备羊抗鼠IgG包被 的多孔板，另外，将鼠抗人血小板糖蛋白单克隆抗体和带有抗体的血小板共 同孵育，再将孵育后的复合物加入多孔板，孵育，洗涤，最后加入酶联羊抗 人抗体和酶反应底物后显色，定量测定血小板抗体。
自身 抗体
被动同种异体免疫 性血小板减少症
移植相关同种异体 免疫性血小板减少 症
自发性血小板减少 症
继发于母体自发性 血小板减少症
HLA / HPA 抗 体
HPA1b(78%), HPA5b(19%) HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, AntiCD36 HLA-I抗体50~80% 17~25%(日本人为 HPA-2b), HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA3b,HPA-15, anti-CD36 HPA-1a,HPA-5b