结核感染T细胞斑点试验

阴性结果
空白对照
抗原A ESAT-6
抗原B CFP10
阳性对照 （PHA）
阳性结果
一个斑点=一个结核效应淋巴细胞
二 、Pa结rt 12核现 中T-感有 国SP检 结染O测 核T原T手 病理细段 疫不 情胞能 现斑满 状足点临试床需验求优 点
1、T-SPOT的高特异性
结核特异性抗原（ESAT-6、CFP-10）
涂片 镜检
• 耗时长4-8周 • 检出低50% • 肺外结核难 • 易受环境污染
细菌培养
接触史 临床症状 病原/病理
结核 诊断
X射线
抗体检测
• 特异性差 • 误诊肺炎、肺癌 • 肺外结核难
• 假阳/假阴性高； • 不能区分既往感染
和发病病人 • 卡介苗影响 • 2011WHO建议禁用
分子诊断
• 操作复杂技术要求高 • 肺外结核难取样 • 易受外源性DNA污染
一 、Pa现rt 1有现 中检有 国检 结测测 核手手 病段 疫段不 情不能 现满 状能足满临床足需临求 床 需 求
假阴性
免疫力低下或HIV人群，新生儿、老弱人群、药物影响
假阳性
BCG接种人群，其他环境分支杆菌感染，交叉污染
难诊断
肺外结核感染、儿童结核感染、潜伏性结核感染等
医疗事故
无法排筛结核感染，造成生物制剂或移植手术治疗后病患免疫 力下降，引起结核，形成医疗事故
步骤3
结核特异抗原（ESAT-6/CFP 10）刺激结核特异的效 应T淋巴细胞使其分泌γ-干扰素，孵育。
步骤4
效应T淋巴细胞分泌的γ-干扰素与膜板预包 被的抗γ-干扰素抗体结合并固定在细胞周围
洗板，加入酶标二抗，孵育1h
洗板，加入显色液，观察结果
1个斑点=1个效应T细胞
二 、Pa结rt 12核现 中T-感有 国SP检 结染O测 核T原T手 病理细段 疫不 情胞能 现斑满 状足点临试床需验求效 果 图
有临床症状 具有传染性
- 结核杆菌可以通过涂片、培养 检测出
- 胸部的 X-光或 CT 扫描显示 异常
- 肺外结核难以诊断 (特别是儿童)
活动性结核
一 、Pa结rt 1核中病国结常核规病疫检情测现状技 术
• 卡介苗交叉反应 • 不能区分NTM • 免疫力低下人群敏
感性差
结核菌素皮试
• 不能区分NTM • 检出率低20% • 肺外结核难
每年新发结核病患者比例
全世界约三分之一的人群感染结核分支杆菌，每年约有900万新发病例， 150万人死亡；在传染病死亡中占第
二位。
中国是结核病高发区，感染人数5.5亿；发病数居全球第二130万/年；死亡人数25万/年仅次于艾滋病；耐药患
者10万/年
一 、Pa结rt 1核中病国结免核疫病疫方情式现状
二 、Pa结rt 12核现 中T-感有 国SP检 结染O测 核T原T手 病理细段 疫不 情胞能 现斑满 状足点临试床需验求步 骤
步骤1
步骤2
用BD CPT 管或Ficoll提取液收集外周血单个核细胞 并计数，加入至 4 个微孔（分别为阳性对照孔、A 孔： ESAT-6、B 孔：CFP-10 和阴性对照孔）
• r干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答 中最重要的细胞因子
二 、Pa结rt 12核现 中T-感有 国SP检 结染O测 核T原T手 病理细段 疫不 情胞能 现斑满 状足点临试床需验求原 理
酶联免疫吸附试验（ELISA）
全血检测或结核感染T 细胞免疫检测
检测γ-干扰素水平
γ-干扰素释放试验分 析技术（IGRA）
结核感染T细胞斑点试验
目录
CONTENTS
1 结核病概况 2 结核感染T细胞斑点试验 3 T-SPOT 临床应用
PART ONE
结核病概况
一 、Pa结rt 1核中病国结流核行病疫病情学现状
中国 15%
India 30%
Other s 28%
结核病由结核分枝杆菌引起的慢性肉芽肿炎；以肺结核最常见，也可见于全身各器官。
酶联免疫斑点技术（ELISPOT）
细胞检测或结核感染T 细胞检测
检测能够释放γ-干扰素的效应T细胞数量
T-SPOT技术： 利用结核杆菌感染者外周血单个核细胞（PBMC）中存在T淋巴细胞，这些淋巴细胞在受到结核特异抗原刺激 后分泌r干扰素而设计的T淋巴细胞免疫斑点试验。 检测外周血中受结核特异抗原(ESAT-6，CFP -10)刺激释放r干扰素的T淋巴细胞，经酶联免疫显色后，通过 ELISPOT分析系统对斑点进行计数，1个斑点代表一个细胞，计算出抗原特异性细胞的频率。
➢ 来自结核分枝杆菌基因组RD1编码 ➢ 所有的卡介苗均缺失RD1 NTM干扰
（除堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、戈登分枝杆菌、苏氏分支杆菌）
特异性 美国FDA临床研究数据：特异性97.1%(297/306) 国内临床研究数据：特异性94.1%(478/508)
二 、Pa结rt 12核现 中T-感有 国SP检 结染O测 核T原T手 病理细段 疫不 情胞能 现斑满 状足点临试床需验求原 理 γ-干扰素释放试验分析技术（IGRA）
• 结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主， 结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆 性T细胞
• 当再次遇到结核特异性抗原（ESAT-6,CFP-10） 刺激时，能迅速活化增殖，释放r干扰素
接触活动性结核病患者
30%
- 没有症状,结核杆菌仍旧存在而不能被 侦测
- X-光/ CT 扫描显示正常 - 没有抗体应答 - 诊断困难 - 传统的结核感染检测只有 TST（PPD）
机体被感染
受机体免疫力抑制 没有临床症状
潜伏性结核
终身处于感染状态
70%
5% 5% 再次激活
暴露程度不足，结核杆菌被机体清除
无论活动性结核还是潜伏性结核均需要足够快速、灵敏、简便的检测方法
PART TWO 结核感染T细胞斑点试验
二 、Pa结rt 1核现 中感有 国检 结染测 核T手 病细段 疫不 情胞能 现斑满 状足点临试床需验求
结核感染T细胞斑点试验 T-SPOT ➢结核分枝杆菌感染的体外免疫诊断新方法 ➢具有极高的敏感性及特异性 ➢诊断迅速
二、结核感染T细胞斑点试验优点
2、T-SPOT的灵敏性
灵敏度： 美国FDA临床研究数据： 灵敏度95.6%(175/183) 国内临床研究数据： 灵敏度95.3%(624/655)
T-SPOT检测单个反应细胞