食品中甜味剂的测定(糖精钠)
荧光光度法测定样品中糖精钠含量
实验分子荧光光度法测定样品中糖精钠含量一、实验目的1．了解分子的电子结构、振动结构和转动结构2. 掌握荧光光谱分析法的基本原理,学会利用工作曲线进行荧光定量分析的方法。
二、实验原理糖精作为人工合成甜味剂, 其学名为邻-磺酰苯甲酰亚胺,分子式为C7H5O3NS。
糖精为无色到白色结晶或白色晶状粉末,在水中溶解度很低,易溶于乙醇,乙醚,氯仿,碳酸钠水溶液及氨水中。
对热不够稳定,无论是在酸性还是在碱性条件下,将其水溶液长时间加热则逐渐分解而失去甜味。
因糖精难溶于水,故常用其钠盐,即糖精钠。
糖精钠的分子式为C7H4O3NSNa·2H2O,它为无色结晶,易溶于水,不溶于乙醚,氯仿等有机溶剂。
其热稳定性与糖精类似但较糖精要好,其甜度为蔗糖的200-700倍。
糖精钠已有80多年的使用历史, 并广泛用于食品、医药、日用化工等行业中。
糖精钠被摄入人体后,不分解,不吸收,将随尿排出,不供给热能,无营养价值。
但是近年来国内外一些学者对糖精钠的致癌问题有所争论, 尤其食用性及安全性越来越引起人们的重视, 因此我国对糖精钠的使用量做出严格的规定(国标中规定糖精钠用于饮料等食品, 其最大使用量为0. 15—5.0g/k g) 。
由此看来, 研究快速、高效的检测糖精钠的方法是十分必要的。
目前测定食品中糖精钠的方法很多, 国标中规定的测定方法有高效液相色谱法、薄层层析法和离子选择电极法。
文献报道的测定方法有: 比色法和紫外吸收分光光度法等。
前者中以高效液相色谱法最为理想, 后者中或需高温反应, 或需配置大量试剂, 其分析速度也较慢。
1. 荧光产生原理荧光是光致发光。
某种物质的分子受到紫外光的激发, 吸收光能后使电子发生能量跃迁, 从基态能级跃迁至激发态能级, 处于激发态的电子很不稳定, 经过很短的时间后会释放出能量, 即发出荧光,重新回到分子基态。
荧光的产生过程:2.糖精钠可以用荧光光度法定量测定。
对于稀溶液，在实验条件相同的情况下，同一物质的荧光强度与其浓度成正比。
第十二章食品添加剂
操作方法
（1）样品处理:取样10g放入小烧杯中，微温去除 CO2，水浴加热至蒸除乙醇，冷却后用1：1氨水调 PH约为7。加水定容成20ml，混匀，经滤膜 （0．45u）过滤，滤液备用。 （2）高效液相色谱条件： ① 柱：YWG-C18 4．6×250mm，填料粒径10um。 ② 流动相：甲醇：0．02mol/l乙酸铵（5：95） ③ 流速：1ml/min或2ml/min ④ 检测器：UV230nm，0．20或0．1AUFS
亚硝酸盐的测定（盐酸萘乙二胺法）
原理 样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条 件下，亚硝酸盐与对氨苯磺酸重氮化，再与 盐酸萘乙二胺偶合成紫红色染料，其最大吸 收波长为538nm，可测定吸光度并与标准比 较定量。
测定方法
1．试样中硝酸盐和亚硝酸盐的提取 肉类制品（红烧类除外）：称取经搅碎混合均匀的试样5g于50ml烧杯中。 加入硼砂饱和溶液12．5ml，以玻璃棒搅和，继之以70℃左右重蒸馏水约 300ml将其洗入500ml的容量瓶中，置沸水浴中加热15分钟，取出，一边转 动，一边加入5ml亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5ml乙酸锌溶液以沉淀蛋 白质。定容，混匀，静置半小时，除去上层脂肪，过滤，弃去初滤液30ml， 收集滤液备用。 2．标准曲线绘制 吸取0、0．20、0．40、0．60、0．80、1．0、1．5、2．0、2．5ml亚硝酸 钠标准使用液（相当于0，1，3，4，5，7．5，10，12．5ug亚硝酸钠）， 分别置50ml比色管中。各假如0．4%对氨基苯磺酸2ml，混匀，静置3～5分 钟后加入1。0ml0。2%盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度、混匀，静置15分钟， 用2cm比色杯，以零管调零，于538nm处测定吸光度，绘制标准曲线。 3．样品测定 吸取40ml样品提取液于50ml比色管中，按绘制标准曲线同样方法操作，于 538处测吸光度，从标准曲线上查出测定用液中亚硝酸钠的含量（ug/ml）。
6、食品添加剂的检测1.甜味剂的测定(糖精钠)2.防腐剂的测(共84张PPT)
饮料、果汁类：用氨水(1:1)调节PH约为7，加水定容，
离心沉淀， 过滤；
固体样品：如凉果、蜜饯等，将样品捣碎，称取适量用
温水浸泡，冷却后定容，过滤。
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(2)高效液相色谱分析(sè pǔ fēn xī)参考条件： 检测器：紫外检测器 检测波长：230nm 色谱柱：C18柱 流动相：甲醇+0.02mol/L乙酸铵（5+95） 流速：1.0mL/min 进样量：20µL
和评价方法，对食品添加剂联合专家委员会（JECFA）所 通过的各种食品添加剂的标准、安全性评价方法等进行 审议和认可，在提交食品法典委员会（CAC）复审后公
布。
我国1995年颁布《食品卫生法》；1997年颁布《食品添加剂 使用卫生标准》（GB2760）
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➢ 测定意义
食品添加剂是食品工业的基础原料，对食品的生产工艺、 产品质量、安全卫生都起到至关重要的作用。但毕竟不是食品 的基本成分，尽管在用于食品之前已在实验室中进行多次安全 性测试，但违禁、滥用以及超范围、超标准使用添加剂，都会 给食品质量、安全卫生以及消费者的健康带来巨大的损害。食 品添加剂的种类和数量越来越多，对人们健康的影响也就越来 越大。随着研究的不断改进和发展，原来认为无害的添加剂， 近年来发现还可能存在慢毒性、致癌作用、致畸作用及致突变 作用等各种潜在的危害，因而更加不能忽视。
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6.2.2糖精钠的测定方法 高效(ɡāo xiào)液相色谱法 薄层色谱法
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6.2.2.1高效液相色谱法
原理： 样品经加温除去二氧化碳和乙醇后，调节pH至近中性，
过滤后进高效液相色谱仪。经反相色谱柱分离后，根据保留 时间和峰面积进行定性和定量(dìngliàng)。 仪器和试剂
饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定
仪器关机
测定结束后，点停止，停止泵运行。把A瓶 中的滤头取出，放入超纯水中，设定水：甲 醇=90：10的比例，点运行，启动泵运行 30分钟。30分钟后再设定100%甲醇运行 30分钟，后关闭软件，电脑。依次关闭各模 块电源。
实验步骤1
按照下列高效液相色谱参考条件和仪器操作说明开 机，设定。 检测器：紫外检测器，230nm波长， 色谱柱：C18 4.6×250mm, 5μm不锈钢柱 流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02 mol/L） =5:95（先100%甲醇运行10分钟后再设定次比 例） 流速：1 mL/min 进样量：10 μL
实验步骤4
先进混和标准溶液（ 0.1mg/mL）一针分 析，记录色谱图及各峰面积保留时间。 进汽水样品溶液，根据保留时间定性，外标 峰面积法定量。以其峰面积求出样液中被测 物质的含量，供计算。
数据处理
以糖精钠为例
式中 X------试样中糖精钠含量，g/kg; A------进样体积中糖精钠的质量，mg； V2-----进样体积，mL； V1-----试样稀释液总体积，mL； m-----试样质量，g。
饮料中苯甲酸、山梨酸和糖精钠 的测定—HPLC法
1、掌握HPLC测定饮料中糖精钠、苯甲酸钠和山 梨酸钾的原理和方法。 2、了解HPLC的结构，学习HPLC的操作方法。 3、掌握HPLC的定性定量方法
糖精钠是最古老的甜味剂。糖精于1878年被美国 科学家发现，很快就被食品工业界和消费者接受。 糖精的甜度为蔗糖的300倍到500倍，它不被人体 代谢吸收，在各种食品生产过程中都很稳定 。 据国外资料记载，1977年加拿大进行的一项多代 大鼠喂养实验发现，摄入大量的糖精钠可以导致雄 性大鼠膀胱癌。因此，美国等发达国家的法律规定， 在食物中使用糖精时，必须在标签上注明“使用本 产品可能对健康有害，本产品合有可以导致实验动 物癌症的糖精”的警示。
糖精钠检测
糖精钠是最古老的甜味剂，又称可溶性糖精，是糖精的钠盐，带有两个结晶水，无色结晶或稍带白色的结晶性粉末，一般含有两个结晶水，易失去结晶水而成无水糖精，呈白色粉末，无臭或微有香气，味浓甜带苦。
糖精于1878年被美国科学家发现，很快就被食品工业界和消费者接受。
糖精的甜度为蔗糖的300倍到500倍，它不被人体代谢吸收，在各种食品生产过程中都很稳定。
8.29
广泛用于以下行业：
1、食品：一般冷饮、饮料、果冻、冰棍、酱菜类、蜜饯、糕点、凉果、蛋白糖等。
应用于食品工业及糖尿病患者作甜化饮食，普遍使用的人工合成甜昧剂。
2、饲料添加剂：猪饲料、香甜剂等
3、日化行业：牙膏、漱口水、眼药水等
4、电镀行业：电镀级糖精钠主要是用在电镀镍上，是作为光亮剂使用的。
加少量的糖精钠，可以提高电镀镍的光亮度和柔软性。
一般使用量每升药水用0.1--0.3克，其中电镀行业用量较大，出口总量占到中国产量的大部分。
检测标准如下：
DB37/T1104-2008食品中糖精钠的测定液相色谱-质谱法
GB/T23495-2009食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法
GB/T23746-2009饲料级糖精钠
GB4578-2008食品添加剂糖精钠
GB/T5009.28-2003食品中糖精钠的测定
服务范围：成分分析、物理性能、配方分析、成分鉴定、含量分析、纯度分析等。
科标化工分析检测，从事化工材料与制品性能测试、成分分析、配方研究的分析测试研发。
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科标化工以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。
山梨酸、苯甲酸、糖精钠、安赛蜜
标准溶液
糖精钠标准储备溶液：准确称取0.0851g经 糖精钠标准储备溶液：准确称取0.0851g经 120℃烘干4h后的糖精钠，加水溶解并定 120℃烘干4h后的糖精钠，加水溶解并定 容至100mL，糖精钠含量为1mg/mL。 容至100mL，糖精钠含量为1mg/mL。 安赛蜜标准储备溶液：准确称取0.1000g安 安赛蜜标准储备溶液：准确称取0.1000g安 赛蜜，加水溶解并定容至100mL，安赛蜜 赛蜜，加水溶解并定容至100mL，安赛蜜 含量为1mg/mL。 含量为1mg/mL。
待测液的制备
→15mL水洗入50mL容量瓶中 液体试样15g } ↓ 定容至刻度 ←乙酸铅、草酸钾磷酸氢二钠各4mL ↓ 氨水（1+1） 静置15min→ 滤纸过滤 调节pH约7 ↓
0.45μm滤膜过滤
固体试样5g
色谱参考条件
色谱柱：C18柱（粒径5μm， 色谱柱：C18柱（粒径5μm， 250mm×4.6mm） 250mm×4.6mm） 流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L） 流动相：甲醇：乙酸铵溶液（0.02mol/L） （30:70）（根据情况可以调整） 30:70） 流速：1.0mL/min。 流速：1.0mL/min。 检测波长：紫外检测器，波长230nm。 检测波长：紫外检测器，波长230nm。 进样量：20μL。 进样量：20μL。
标准溶液
山梨酸、苯甲酸、糖精钠、安赛蜜标准混 合溶液 取山梨酸、苯甲酸、糖精钠、安赛 蜜标准储备溶液各1.0mL，放入100mL容 蜜标准储备溶液各1.0mL，放入100mL容 量瓶中，加水至刻度。此溶液含山梨酸、 苯甲酸、糖精钠、安赛蜜各10μg/mL，经 苯甲酸、糖精钠、安赛蜜各10μg/mL，经 0.45μm滤膜过滤。 0.45μm滤膜过滤。
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证
066苯甲酸、山梨酸、糖精钠是常用的食品添加剂，也是衡量食品卫生质量的重要指标。
苯甲酸、山梨酸具有防腐保鲜的作用，糖精钠是合成甜味剂，甜度比蔗糖甜300－500倍。
GB2760－2016《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》对这三者的添加范围和限量都有明确的规定，超范围或者超限量使用都是违法的。
GB5009.28－2016《食品安全国家标准 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定》对其检测方法做了规定，有高效液相色谱法和高效气相色谱法，其中高效液相色谱法为第一法仲裁法被广泛应用。
国标方法在使用前要进行方法验证，核查实验室能否满足检测方法的要求。
本研究针对高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的适用性、线性、检出限、定量限、加标回收率等进行了一一验证，均能够满足检测方法的要求。
一、仪器与试剂1.仪器。
高效液相色谱仪（紫外检测器，Y001），岛津LC－20AT；电子分析天平（Y033），BSA623S－CW，d ＝0.001g。
2.试剂。
苯甲酸钠标准品（唯一性标识3422003，纯度100.0％），北京坛墨质检科技有限公司；山梨酸标准品（唯一性标识3192003，纯度99.9％），北京坛墨质检科技有限公司；糖精钠标准品（唯一性标识3212005，纯度99.5％），北京坛墨质检科技有限公司；甲醇（色谱级），Aigma－Aldrich；乙酸铵（色谱级），aladdin；亚铁氰化钾、乙酸锌（分析纯），天津市天力化学试剂有限公司；实验室用水为自制超纯水。
二、实验与方法1.色谱条件。
（1）色谱柱：Diamonsil Plus 5um C 18，250×4.6mm；检测波长230nm；进样量10uL。
（2）流动相：甲醇＋乙酸铵溶液（0.02mol/L）＝5＋95；流速1mL/min。
高效液相色谱法测定食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的方法验证2.样品前处理。
准确称取约2g（精确到0.001g）试样于50mL具塞离心管中，加水约25mL，涡旋混匀，于50℃水浴超声20min。
食品中糖精钠含量快速分析方法的探讨
食品中糖精钠含量快速分析方法的探讨近年来随着人们生活水平日益提高，对于食品安全性也越来越重视。
各种食品添加剂被广泛使用，特别是人工合成的添加剂越来越受到人们的关注，食品添加剂中的糖精钠作为甜味剂是用来增强食品的感官性状。
适当使用是允许的，但要求使用量应控制在最低有效量的水平，否则会给食品带来毒性，影响食品安全，危害人体健康。
糖精（2-benziso thiazol-3(2H)-one-1,1-dioxide）为白色粉末，化学名称为邻苯甲酰磺酸亚胺，其钠盐称做糖精钠或可溶性糖精，易溶于水，稀水溶液的甜味约为蔗糖的400-500倍，无营养价值。
目前，国内研究报告报道的我国食品中糖精钠检验方法的主要技术路线是高效液相色谱法、气相色谱法、薄层层析法，目前已有的高效液相色谱特异性较强，仪器多不普及加之分析方法繁琐、费时并耗用大量有机溶剂，使其应用受到限制。
所以在实际工作中我们引进应用次甲基蓝快速测定糖精钠地方法，该法的试剂、操作方法和实验条件简便，可以广泛用于基层在食品中的糖精钠的测定，而且操作简单、快速、灵敏度高。
1 材料与方法1.1 原理糖精钠在酸性缓冲溶液中可与次甲基蓝生成蓝色缔合物,被有机溶剂萃取进行定量测定。
1.2 仪器和试剂分光光度计;60ml 分液漏斗;磷酸氢二钠—柠檬酸缓冲溶液;0.01%次甲基蓝溶液;糖精钠标准溶液:准确称取1.0000g干燥纯糖精钠,溶解后加水至100ml ,临用时稀释成使用液;分析纯氯仿。
1.3 检测方法根据检样适当取量5～10ml（测定前除去二氧化碳、酒精等气体）于60ml分液漏斗中;②另取标准使用液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml入分液漏斗中各加水至10ml;③于样品和标准系列中各加入缓冲溶液5ml 摇匀,加次甲基蓝溶液2ml摇匀,再各加氯仿10ml 振摇萃取,静止分层,氯仿层通过0.5g无水硫酸钠脱水,于722型分光光度计650nm波长,2cm比色皿,以零管调节零点,测定标准和样品的吸光度。
甘草水果中糖精钠、甜蜜素的测定及结果分析
甘草水果中糖精钠、甜蜜素的测定及结果分析邱晓丹（广东省潮州市质量计量监督检测所，广东潮州 521011）摘 要：目的：提高景区特色美食的食品质量，规范生产。
方法：随机抽取景区10家小餐饮店的甘草水果样品10批次，进行糖精钠和甜蜜素的含量测定。
结果：有2批次的糖精钠和4批次的甜蜜素项目结果不合格，总不合格率为60%。
结论：景区小餐饮店甘草水果的甜味剂使用存在很多问题，需要加强监督，增加抽检次数，让商家引起关注，不断改善产品质量。
关键词：甘草水果；甜味剂；检测Determination and Result Analysis of Saccharin Sodium andCyclamate in Licorice FruitQIU Xiaodan(Chaozhou Quality Measurement Supervision and Testing Institute, Chaozhou 521011, China) Abstract: Objective: To improve the food quality and standardize the production of the characteristic food in scenic spots. Method: The contents of saccharin sodium and cyclamate were determined by sampling 10 batches of licorice fruit samples from 10 small restaurants in scenic spots. Result: There were 2 batches of sodium saccharin and 4 batches of cydoline project results were unqualified, the total unqualified rate was 60%. Conclusion: There are many problems in the sweetener use of licorice fruit in small restaurants in scenic spots, so it is necessary to strengthen supervision, increase the number of sampling inspections, let businesses attract attention, and constantly improve product quality.Keywords: licorice fruit; sweetener; test甘草水果是潮汕的一道特色街头美食，是在现切水果中加入特制的甘草汁、白砂糖、食盐，腌制而成的水果制品，酸甜可口。
食品中糖精钠的测定
5
五、所用仪器和试剂
1、试剂 乙醚：不含过氧化物。 无水硫酸钠。 无水乙醇及乙醇（95%）。 聚酰胺粉：过200目筛。 盐酸（1+1）：取100mL盐酸，加 水稀释至200mL。
6
展开剂：正丁醇-氨水-无水乙醇
（7+1+2）；异丙醇-氨水-无水乙醇 （7+1+2）。 显色剂：溴甲酚紫溶（0.4g/L）。
10
醚提取液，用5mL盐酸酸化的 水洗涤一次，弃去水层。乙 醚层通过 无水硫酸钠脱水后，挥发乙 醚，加2.0mL乙醇溶解残留 物，密塞保 存，备用。
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2、薄层板的制备 聚酰胺粉板：称取3.2g聚酰胺粉， 加0.8g可溶性淀粉，加约12mL 水， 研磨3min～5min，立即涂成0.25～ 0.30mm 厚10cm×20cm的薄层板，室 温干燥后，在80℃下干燥1h。置于 干燥器中保存。 硅胶板：称取3.2g硅胶J，加 0.8gCMC，加约12mL 水，研磨 3min～5min，立即涂成0.25～ 0.30mm 厚10cm×20cm的薄层板，室 温干燥后，在80℃下干燥1h。置于 干燥器中保存。
食品中糖精钠 的测定
一、实验目的与意义
糖精钠俗称糖精，是广泛使用 的一种人工甜味剂常用食品如酱菜、 冰淇淋、蜜饯、糕点、饼干、面包 等，均可以糖精钠作甜味剂来提高 其甜度。糖精钠的定量分析方法有 高效液相色谱法、薄层色谱法、离 子选择电极法及紫外分光光度法等。 目前使用较多的是高效液相色谱法。 本次实验所使用的方法是薄层色谱 法。
2
二、实验原理
在酸性条件下，食品中的糖 精钠用乙醚提取、浓缩、薄层色 谱分离、显色后，与标准比较， 进行定性和半定量测定。
白酒中糖精钠、安赛蜜、甜蜜素等甜味剂的测定(上)
白酒中糖精钠、安赛蜜、甜蜜素的分析方法1 范围1.1本方法规定了食品中糖精钠、安赛蜜、甜蜜素检验的制样和液相色谱-质谱法。
1.2本方法适用食品、固态化发酵酒及勾兑低度饮料性用白酒糖精钠、安赛蜜、甜蜜素等的测定。
2 引用文件本方法引用了GB/T5009.28-2003；SN/T1948-2007。
3 总则3.1本方法所采用名词术语和计量单位均符合国家相关标准的规定。
3.2本方法所用的液相色谱-质谱联用仪要按时检定，所用的移液管、刻度吸管、容量瓶、微型进样器等计量器具应按相关检定规程进行校正。
3.3本方法所用的试剂均为色谱纯（HPLC）或经0.22μL膜过滤、所用的水为实验室一级。
4 基本要求4.1分析样品应做平行试验，以实测数据报告其分析结果，不需要按酒精度折算，有效数字要与技术要求相一致。
4.2分析中所用器皿应先用溶剂浸泡并经过过超声处理，再用自来水冲洗干净，然后用实验室一级水冲洗。
5 原理白酒样品处理后,经液相色谱-质谱联用仪进行测定,采用多反应监测离子扫描模式(MRM),以碎片离子的丰度比定性,标准样品定量离子外标法定量。
6 仪器及器材液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾（ESI）离子源、分析天平、真空泵及真空过滤器、100ml烧杯、25ml容量瓶、2ml样品瓶、25ml吸管等。
7 试剂7.1甲醇7.2水7.3甲酸或乙酸7.4标准溶液7.4.1糖精钠标准储备溶液准确称量糖精钠标准品100mg溶液于100mL的容量瓶内加水定容，即为1000mg/L标准储备溶液。
7.4.2安赛蜜标准储备溶液准确称取100mg安赛蜜加水定容至100mL，即为1000mg/L的标准储备溶液。
7.4.3甜蜜素标准储备溶液准确称取100mg甜蜜素加水定容至100mL，即为1000mg/L的标准储备溶液。
7.4.4糖精钠、安赛蜜、甜蜜素、阿斯巴甜混合标准溶液（100mg/L）7.4.4.1混合标准溶液：分别吸取以上糖精钠、安赛蜜、甜蜜素标准储备溶液各10mL于100mL 容量瓶加水定容，即为100mg/L的糖精钠、安赛蜜、甜蜜素混合标准溶液。
白酒中糖精钠、安赛蜜、甜蜜素等甜味剂的测定(下)
0.18
0.52
0.01
16.00
56.00
28.64
7.14
0.02
91.33
91.33
5.57
1.38
0.05
85.20
85.20
2.37
3.61
0.10
86.83
86.83
4.10
4.46
0.20
94.03
94.03
0.86
2.20
0.50
104.55
104.55
0.69
3.84
1.00
105.70
1.04
0.20
84.97
108.92
0.43
0.75
0.50
70.95
104.06
0.32
1.03
1.00
95.94
95.94
0.31
0.64
2.00
94.65
94.65
0.06
0.42
4.00
82.89
93.65
0.31
0.57
说明：
1、通过对白酒样品采取挥干和直接进样进行对比试验。
2、此方法标准曲线的线性范围是分为两段进行的（分两段比分一段要优越），若待测样品
接近真实值，而经挥干处理后的样品实测值约偏低。
2、安赛蜜含量≥0.02mg/L 时，回收率在 80%-125%之间，相对标准偏差(RSD)在某种程度 5%
以内；糖精钠含量≥0.02mg/L 时，回收率 80%-110%之间，相对标准偏差在某种程度 5%以内；
甜蜜素含量≥0.02mg/L 时，回收率 90%-100%之间，相对标准偏差在某种程度 5%以内。
糖精钠的检测
苯甲酸、山梨酸、糖精钠是衡量食品卫生质量的重要指标，苯甲酸、山梨酸的检测参照GB /T5009.29-2003，糖精钠的检测参照GB/T 5009.28-2003，即可开展实验。
苯甲酸、山梨酸、糖精钠虽是较常见的检测项目，但是要得到一个准确可靠的结果，也存在一定的难度，许多新手常出现因对方法理解发生偏差而检测出错的事故。
笔者根据自己多年该方面工作的实际经验出发，以苯甲酸、山梨酸为着重点，从样品前处理、检测仪器的选择、超标时的判断等几个易出问题的方面，进行了详细的阐述。
2 样品前处理的注意事项GB/T5009.28-2003和GB/T5009.29-2003 在文字结构上有缺陷，在涉及用仪器法测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠时，只讲述了液体样品的前处理方法，没有涉及对固体样品的前处理。
食品样品往往含有大量的油脂、蛋白质，对提取极为不利；如处理不干净也会污染色谱柱，影响检测工作。
这类样品处理的关键在于如何找到一种较理想的沉淀剂，尽量排除待测样品中的油脂、蛋白质，且不影响待测物组分的回收率。
GB/T5009.29-2003使用5％硫酸铜溶液沉淀蛋白，对于蛋白质含量较低的食品尚可，对于豆粉、奶粉、月饼等高油脂、高蛋白样品则沉淀效果不理想。
如用10％钨酸钠溶液作为沉淀剂，效果好些；如用10％亚铁氰化钾溶液和20％醋酸锌溶液则效果更理想（这是笔者目前用过最理想的沉淀剂）。
具体操作步骤如下：取一定量样品，捣碎，利用四分法原理称取样品5.0 克于50ml比色管中，加水20ml，浸泡、振荡均匀，加入氢氧化钠溶液(1mol/L)1.0 ml，加入9.5mL10%亚铁氰化钾溶液，9.5 0mL 20%乙酸锌溶液，定容，振荡使其充分混匀后,用滤纸初滤除去沉淀物, 初滤液过0.45μm微孔滤膜,收集滤液于样品瓶中，样品处理液和标准有溶液各进样5uL测定。
用这种方法简单易行，接触有机试剂少，重复性和回收率都令人满意；缺点是一定要用液相色谱法检测，有一定局限。
糖精钠
文献综述摘要糖精钠（邻苯甲酰磺酰亚胺钠）是一种最古老的化学合成甜味剂，摄入后在体内不分解，随尿液排出，不能供给热能，对人体无营养价值[1]。
目前，糖精钠的检测方法主要有液相色谱法[2]、分光光度法[3]、荧光光度法[4]、薄层色谱法[5]、极谱法[6]和非水滴定法[7]、液膜电极法[8]等，但是这些方法操作复杂、灵敏度较低、耗时长。
少量糖精钠的存在可以使食品吸收峰增强，且吸光度的增强随糖精钠浓度的增大而增大，因此建立紫外分光光度法是测定糖精钠的新方法。
关键词糖精钠（邻苯甲酰磺酰亚胺钠）吸光度紫外分光光度法测定1 研究的目的和意义食品的添加剂有多种，例如维生素C、柠檬酸、苯甲酸、山梨酸、糖精钠等，了解食品添加剂的益处以及对人体的危害是非常重要的，下面对糖精钠的研究目的和意义进行分析。
1.1 研究的目的糖精钠是美国的法利德别尔格在一次偶然的机会中发现的。
糖精钠化学名为邻苯甲酰磺酰亚胺钠盐，其分子式为C7H4O3NSNa·2H2O，又称为可溶性糖精，是广泛应用于食品中的甜味剂，失去结晶水后为无水糖精钠，结构式为。
由于食用过量会对人体造成伤害，具有潜在的致癌性，基于安全性问题，应严格控制糖精钠的使用量，故需要寻求快速高效的测定糖精钠含量的新方法，对维护食品安全和人们的身体健康有重要的意义。
因此，开发一种高选择性，简单，安全的方法测定糖精钠的含量是迫不及待的。
1.2 研究的意义糖精钠（邻苯甲酰磺酰亚胺钠）主要用于调味剂、饮料和诊断用药，广泛用于化妆用品和电镀工业。
在食品行业中一般用于冷饮、饮料、凉果、果冻、蛋白糖等；饲料行业用作添加剂，例如香甜剂、猪饲料等；日化行业一般用于眼药水、牙膏等；电镀行业，电镀级的糖精钠主要用在电镀镍上，是作为光亮剂而使用的。
加入少量的糖精钠，可以提高电镀镍的柔软性和光亮性。
本实验的重点就在于探讨一种方法简便，测定结果准确的方法来测定食品中糖精钠的含量。
从而，为保护人类的健康，生命科学和环境的发展提供参考。
食品中糖精钠的测定
我国食品中糖精钠的使用范围及最 大使用量
食品名称／分类
熟制豆类（五香豆、炒豆） 带壳烘焙／炒制坚果与籽类 脱壳烘焙／炒制坚果与籽类 面包 糕点 饼干 复合调味料 饮料类（包装饮用水类除外）
配制酒
最大使 备 注
用量
/(g/kg)
1.0
以糖精计
1.2
以糖精计
1.0
以糖精计
0.15 以糖精计
0.15 以糖精计
• 3．在酸性溶液中以糖精的形式存在，出峰较早；在 碱性溶液中以糖精钠的形式存在，出峰较晚。因此加入 少量氨水使其缓冲液的pH在7.5左右，这样出峰顺序为 苯甲酸、山梨酸、糖精钠，分离效果好。值得注意的是， 一般色谱柱的最高允许pH为8，所以加入氨水的量不宜 太多，以免损坏柱子。根据不同的柱子和柱子在不同的 使用时期选择不同的比例，调节缓冲液的pH非常重要。
0.2AUFS。
2
2015-3-23
注
• 1．波长的选择：有时实验要求同时测定苯甲酸、山梨 酸和糖精钠，山梨酸的灵敏测定波长为254 nm，但在此 波长下糖精钠和苯甲酸的灵敏度降低，为了照顾三者的 灵敏度，本方法采用测定波长为230 nm。
• 2．流动相和色谱柱的选择：测定糖精钠也可采用氨 基柱，流动相也可采用甲醇、水。本方法采用的柱子和 流动相系统均和测定合成色素的条件一致，更便于同时 测定糖精钠和合成色素。
0.15 以糖精计
0.15 以糖精计
0.15 以糖精计，固体饮料按冲 调倍数增加使用量
0.15 以糖精计
1
2015-3-23
二、 (GB/T 5009.28-2003)食品中糖 精钠的测定
• 1 范围 • 本标准规定了食品中糖精钠的测定方法。 • 本标准适用于食品中糖精钠的测定。 • 本方法检出限：高效液相色谱法为取样
《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测
《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准编制说明一、标准制定背景我院从2010年来承担了我省每年的白酒风险监测和监督抽查工作，发现生产企业违规添加甜味剂的检出率在2%左右，小作坊的检出率更高，白酒中滥用甜味剂已成为行业潜规则。
一些白酒生产企业为迎合消费者需求，在白酒中加入甜味剂以增加白酒的甜味和回甜感来改善口感，从而赚取高额利润。
在实际检测工作中发现现有国家标准针对不同甜味剂采用不同的检测方法，检测效率低，前处理较繁琐，且容易出现假阳性。
据报道目前我国白酒中甜味剂的添加呈现出多样少量的特点，企业加到白酒中的甜味剂仅需微量甚至痕量即可改善白酒的口感，因此传统的色谱法并不能有效地对白酒中的微量甜味剂进行监控。
本标准拟建立高效液相色谱-串联质谱法同时检测白酒中四种甜味剂，该检测手段拥有灵敏度高、特异性好等优点，通过同时检测改善目前检测工作繁琐低效的现状，大大提高工作效率，减少误判，准确定量。
2013年贵州省卫生厅组织了食品安全地方标准审评委员会专家组召开了评审会议，通过了《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准的立项，项目批准文号为：黔卫函【2014】26号。
二、主要工作过程（一）标准起草小组的成立《白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法》地方标准任务下达后，我院于2014年2月成立了以贵州省产品质量监督检验院、贵州茅台酒厂（集团）习酒有限责任公司两家单位组成的标准起草小组，对职责进行分工，确定工作计划，由贵州省产品质量监督检验院负责起草。
（二）收集资料及市场调研标准起草小组按标准的编制计划，组织技术人员对白酒中甜蜜素、糖精钠、安赛蜜和三氯蔗糖四种甜味剂的测定方法液相色谱-串联质谱法进行了方法资料查找收集，了解了目前我省白酒的生产情况，主要香型为酱香型白酒居多，同时生产的还有浓香型白酒、兼香型白酒、少量清香型白酒和普通白酒。
食品添加剂测定—甜味剂的测定(理化检验技术)
2.甜味剂分类
• 天然甜味剂：植物组织中提取，如甜菊糖苷、甘草 等，其安全性较高
• 人工合成甜味剂：甜度较高，不具营养价值，价格 低廉
目前，我国允许使用的人工合成甜味剂有糖精（钠）、甜蜜素、甜味素等。
（二）甜味剂的应用和测定意义 糖精，难溶于水，糖精钠为水溶性。两者可在酸碱性溶液中互相转化。
（三是液相色谱法
液相色谱法（GB 5009.28-2016） 1. 原理
样品经水提取，高脂肪样品经正己烷脱脂、高蛋白样品经蛋白沉淀剂沉 淀蛋白，采用液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定量。
（四）甜蜜素的测定方法 气相色谱法（GB 5009.97-2016） 1．原理
食品中的环己基氨基磺酸钠用水提取，在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠 与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯，利用气相色谱-氢火焰离子化检测器进 行分离及分析，保留时间定性，外标法定量。
在食品工业中常将水溶性较差的糖精转变成易溶于水的盐类物质糖精钠，以 增加其水溶性，便于食品工业生产的使用。糖精钠不具有营养价值，摄入人 体后，不能被机体吸收利用。
甜蜜素，易溶于水，难溶于乙醇等有机溶剂。其甜味是蔗糖的40倍左右 ，是一种高甜度的甜味剂。长期食用甜蜜素含量超标食品，会因摄入过量过 高对人体的肝脏和神经系统造成危害。
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组长：王雨濛 组员：应俊鹏 杨玲慧 程诗雨 吴伟
一、实验目的
糖精钠是最古老的甜味剂，糖精的甜度为 蔗糖的300倍到500倍，它不被人体代谢吸 收，在各种食品生产过程中都很稳定。缺 点是风味差，有后苦，这使其应用受到一 定限制。
二、实验原理
• 样品加温除去二氧化碳和乙醇，调pH至近 中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相 色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行 定性和定量。取样量为2.5g，进样量为 10μL，最低检出量为1．5ng。
四、实验步骤
• 样品处理 汽水：称取5．00～10．00g，放入小烧杯中，微温搅拌除去二 氧化碳，用氨水（1＋1）调pH约7。加水定容至适当的体积，经滤膜 （0．45μm）过滤。 果汁类：称取5.00～10．00g，用氨水（1＋1）调pH约7，加水 定容至适当的体积，离心沉淀，上清液经滤膜（0．45μm）过滤。 配制酒类：称取10．0g，放小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨 水（1＋1）调pH约7，加水定容至20ml，经滤膜（0．45μm）过滤 • 高效液相色谱参考条件 色谱柱：YWG－C184.6mm×250mm10μm不锈钢柱。 流动相：甲醇：乙酸铵溶液(0.02mol/L)(5＋95)。 流速：1mL/min。 检测器：紫外检测器，波长230nm，灵敏度0.2AUFS。 • 测定 取样品处理液和标准使用液各10μL(或相同体积)注入高效液相色 谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据进行定性，以其峰 面积求出样液中被测物质的含量，供计算。
、计算
•
式中：X1——样品中糖精钠含量， g/kg； m1——进样体积中糖精钠的质量，mg； V2——进样体积，mL； V1——样品稀释液总体积，mL； m2——样品质量，g。
三、试剂与仪器
• 试剂 甲醇：经滤膜（0．5μm）过滤，超声脱气 氨水（l＋1）：氨水加等体积水混合。 乙酸铵溶液（0．02mol／L）：称取1．54g乙酸铵， 加水至1000mL溶解，经滤膜（0．45μm）过滤。 糖精钠标准储备溶液： 准确称取0．0851g经120℃ 烘干4h后的糖精钠，加水溶解定容至100mL。糖精钠含量 1.0mg/mL，作为储备溶液。 糖精钠标准使用溶液：吸取糖精钠标准储备液10mL 放入100mL容量瓶中，加水至刻度。经滤膜（0．45μm） 过滤。该溶液每毫升相当于0．10mg的糖精钠。 • 仪器 高效液相色谱仪，紫外检测器。