糖精钠的测定

实验七、甜味剂--糖精钠的测定－薄层色谱法

GB/T 5009.28-2003

糖精及其钠盐是使用较广的甜味剂之一，它的化学名是邻磺酰苯亚

胺（O-sulfobenzolc acidimide）,分子式为C

7H

5

SO

3

N,白色结晶或粉状，

无臭或微有酸性芳香气，在水中溶解度极小，味极甜。糖精钠进入人体后

不分解，不供给热能，无营养价值，随尿排除体外。我国《食品添加剂使

用卫生标准》规定，糖精钠用于饮料、酱菜类、复合调味料、蜜饯、雪糕、

配制酒、冰棒、糕点、饼干、面包等食品，最大使用量(以糖精计)为0.15g／kg；高糖果汁(果味)饮料按稀释倍数的80 %加入，瓜子的最大使用量为1.2g／kg；话梅、陈皮等的最大使用量为5.0g／kg。

测定糖精的方法较多，有薄层色谱法、纳氏比色法、硫代二苯胺比色法及紫外分光光度法等。

一、紫外分光光度法

1. 原理

样品经处理后，在酸性条件下用乙醚提取食品中的糖精钠，经薄层分离后，溶于碳酸氢钠溶液中，于波长270nm处测定吸光度，与标准液比较定量。

2. 试剂与仪器

(1) 2 %碳酸氢钠溶液

(2) 4 %氢氧化钠溶液

(3) 6 mol/L HCl溶液

(4) 乙醚（不含过氧化物）

(5) 10 %硫酸铜

(6) 无水硫酸钠

(7) 0.02 mol/L氢氧化钠

(8) 硅胶GF

254

(9) 聚酰胺，200目

(10) 糖精钠标准溶液：准确称取0.0851 g经120 ℃干燥4 h后的糖精钠，加乙醇溶解，移入100 mL

容量瓶中，加乙醇（95 %）稀释至刻度，此溶液每毫升相当于1 mg糖精钠（C

6H

4

CONNaSO

2

.2H

2

O）。

(11) 展开剂：苯-乙酸乙酯-乙酸（12:7:3），硅胶薄层用。

(12) 展开剂：正丁醇-浓氨水-无水乙醇（7:1:2），聚酰胺薄层用

(13) 显色剂：0.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调至PH值为8

(14) 紫外光灯(波长253.7nm),紫外分光光度计

(15) 薄层板10×20cm；展开槽

(16) 微量注射器

3.测定方法

(1)样品提取

1)饮料、冰棍、汽水类：取10 ml均样置100 ml分液漏斗中，加2 ml 6mol/L盐酸，用30、20、

20 ml乙醚提取三次。合并乙醚提取液，用5 ml盐酸酸化的水洗涤一次，以洗去水溶性杂质，弃

去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发干乙醚。加20 ml乙醇溶解残渣，密封保存，备用。

2)酱油、果汁、果酱、乳等：称取20.0g或吸取20.0ml均样置100ml容量瓶中，加水至约60ml，

加20ml10%硫酸铜溶液，混匀,再滴加4.4ml4%氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静置30min后过滤，取滤液50ml置150ml分液漏斗中，以下同1)中后序操作。

3)固体果汁粉等：先称取20.0g磨碎的均样，置200ml容量瓶中，加100ml水，加温使其溶解，

冷却后再按上述方法进行提取。

4)糕点、饼干等蛋白质、脂肪含量高的样品：均应采用透析法处理，使分子量较小的糖精钠渗入

溶液中，以消除蛋白质、淀粉、脂肪等的干扰。

称取捣碎、混匀的样品25.0g置透析玻璃纸内，置于大小合适的烧杯中。加50ml0.02mol/L氢氧化钠溶液于透析膜内，充分混合，使样品成糊状，将玻璃纸口扎紧，放入盛有200ml 0.02mol/L氢氧化钠的烧杯中，盖上表面皿，透析过夜。

量取125ml透析液（相当于12.5g样品），加约0.4ml 6mol/L盐酸，使成中性，加20ml 10%硫酸铜混匀，加4.4ml4%氢氧化钠，混匀，静置30min，过滤。取120ml滤液置250ml 分液漏斗中，以下同 1)中后序操作。

(2)薄层板制备

薄层板可以是硅胶GF

254

或聚酰胺薄层板，使用时选用一种。

①硅胶GF

254薄层板：称取1.4 g硅胶GF

254

，加4.5 ml 0.5 % CMC-Na溶液于小研钵中研匀，倒

在玻璃板上，涂成0.25-0.30 mm厚的薄层板，稍干后，在110℃下活化1 h，取出后置于干燥器内备用。

②聚酰胺薄层板：称取1.6 g聚酰胺，加0.4g可溶性淀粉，加约15ml水，研磨3-5分钟，使

其均匀即涂成0.25-0.30 mm厚的10*20 cm薄层板，室温下干燥，在80℃烘箱中干燥1h，置干燥器内备用。

(3)点样

在薄层板下端2 cm处，用微量注射器点10 µL和20 µL的样液二个点，同时点3.0，5.0，7.0，

10.0 µL糖精钠标准溶液，各点间距1.5 cm条的右端1.5 cm处。

(4)展开

将点好的薄层板放入盛有展开槽中，展开剂液层约0.5 cm，并预先已达到饱和状态。展开至10 cm，取出薄层板，挥发干。硅胶GF

254

板可直接在波长254 nm紫外线灯下观察糖精钠

的荧光斑点。把斑点连同硅胶GF

254

或聚酰胺刮入小烧杯中，同时刮一块与样品条状大小相同的空白薄层板，置于另一烧杯中做对照，各加5.0 ml 2 %碳酸氢钠，于50 ℃水浴中加热助溶，移入10 ml离心管中，离心分离（3000 r/min）20 min，取上清液备用。

(5)标准曲线绘制

吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml糖精钠标准液A，分别置于100ml容量瓶中，各以2 %

碳酸氢钠溶液定容，于270nm波长处测定吸光度，绘制标准曲线。

(6)样品测定

将经薄层分离的样品离心液及试剂空白液于270 nm处测定吸光度，从标准曲线上查出相应浓度。结果计算如下：

（C

1 - C

）× V

3

糖精钠（g/Kg或g/L）=------------------

W × (V

2/ V

1

）

式中：C

1

：测定用样液中糖精钠含量mg/ml。

C

：空白液中糖精钠含量mg/ml

V

1

：溶解样品残留物加入乙醇的体积ml。

V

2

：点样液的体积ml。