尿样中氧氟沙星含量测定大全

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1.116
mAU
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Fra Baidu bibliotek
0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5 min
2.363
标准品中左氧氟沙星出峰图 （荧光检测法）
FLD1 A, Ex=295, Em=505 (STU\20080523\DOX000097.D) 25
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2.3 标准曲线的制作 测定时，取标准液0.5，1，1.5，2， 2.5ml,用流动相稀释于10ml量瓶，吸取 20μl作为进样品，记录色谱图，以氧氟沙 星标准浓度对峰面积进行回归，得到回归 方程。
2.4 空白尿样的配制 取空白尿液滤液1ml,用流动相稀释20倍， 吸取20μl作为进样品。
2.5 尿样的配制 取尿液滤液1ml,用流动相稀释20倍，吸取 20μl作为进样品。
排出药物量（g）
0.002 0.0015 0.001 0.0005 0 0 1 2 3 时间（h） 4 5 6
紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙 星量（g）-时间曲线
0.0014 0.0012
尿液中药物的量（g）
0.001 0.0008 0.0006 0.0004 0.0002 0 0 1 2 3 时间（h） 4 5 6
尿样采集： 受试者空腹饮水200ml排尿, 留取1h后 尿样作空白,一次口服OFLX片600 mg, 收 集1，2，3，4，5小时后的尿样，做好标 记。
LC-UV法分析尿样中氧氟沙星的含量
一、实验条件： 1.1 实验仪器 Agilent高效液相色谱仪，G1314B-VWD紫外 检测器，色谱柱，量瓶 1.2 实验试剂 氧氟沙星片剂，甲醇(色谱纯)，尿样，空 白尿样，HAc溶液
精密度
日内、 日间RSD 测量 荧光法 日内RSD=2.6% 日间RSD=3.3% 紫外法 日内RSD=0.8% 日间RSD=2.9%
回收率实验
回收率 荧光 紫外
98.7%、101.4%、101.2%； 99.6%、98.4%、99.1%。
荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星 量（g）-时间曲线
0.004 0.0035 0.003 0.0025
1.3色谱条件 色谱柱:C18 5μm (250 mm ×416 mm) 流动相: 甲醇/0.05 %HAC=80：20 流速:1ml/min 进样量：20μl 柱温：室温 检测波长：在250～400nm处扫描，选取有最大吸 收度处作为检测波长。实际过程中选用294nm作为 检测波长。
二、实验方法
5、实验中考虑到出峰时间和分离度以及实际操作 的便利程度，最终选择的流动相甲醇：0.05%冰醋 酸溶液=80：20，但是还是有脱尾现象，在荧光检 测中特别明显。
6、从实验数据，我们可以认为荧光检测器作为检 测装置，灵敏度、专属性好（没有杂质峰），较 紫外检测器优。
标准品中左氧氟沙星出峰图 （紫外检测器检测）
尿样中氧氟沙星的含量测定
组员：胡帆、周凡漪
实验目的： • 1.分析临床上广泛用于治疗泌尿系统，呼 吸系统感染的药物氧氟沙星。 • 2.比较LC-UV与LC-荧光分析氧氟沙星的区 别。
背景资料： 氧氟沙星是第三代喹诺酮类新型广谱抗菌 药,并具分布广,吸收好,半衰期长等特点, 临床广泛应用具有广谱抗菌作用。
讨论
1、采用LC-UV法与LC-荧光法分别测定尿 样中氧氟沙星的含量，并且比较两种方法 测量结果的不同，因此要求测量过程具有 对照性：待测样品，标准品，空白样品的 浓度两者均相同，流动相也相同，都采用 外标法，但因为分析方法的不同，检测波 长不同。
2、实验中所采用的尿液因为新鲜尿液， 如果无法做到这点，因在尿液中加入二甲 苯等防腐剂，避免尿液因细菌繁殖造成混 浊，影响试验效果。而且尿样中的药物会 分解，影响实验结果，因而最好是现取， 实验过程中不使用时放入冰箱保存
2.8精密度实验 取浓度为0.5～2.5μg/ml的氧氟沙星标准 品，1d内重复测定5次,测得日内RSD，隔日 测定5 次, 测得日间RSD。
紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的 含量
紫外检测测定尿液中左氧氟沙星的含量， 实验操作方法除检测器设定与荧光检测器 不同外（检测波长：294nm），其余设置和 操作均与荧光检测时相同。
3、由于没有标准品对照，在测定时以左 氧氟沙星片作为标准品使用。而事前没有 对其中左氧氟沙星的实际含量进行过标定， 也不能排除片剂中的其他成分（如辅料中 的抗氧化剂等）对实验结果的影响。
4、实验本来应该统计每次的尿液量，计 算出每次排尿中含有的左氧氟沙星的含量， 然后制的排出药物量-时间曲线，因为本次 实验中没有精密的容器量尿液体积，只能 大概估计尿液量，测算出尿液中药物的量。
2.1 尿液的预处理 取空白尿样和尿样，13000r/min离心 10min，取上清液经0.45μm的水相滤膜过 滤，保留滤液。
2.2 氧氟沙星标准液的配制 精密称取氧氟沙星片剂200 mg ,置50ml 容量瓶中,以流动相稀释至刻度,配成4.0 mg/ml的储备液，用流动相稀释400倍，吸 取20μl作为进样品。
三、实验结果
荧光法测定尿样中左氧氧氟沙星浓度标准 曲线图
1200 1000 800 600 400 200 0 0 0.5 1 1.5 2 y = 638.87x + 22.417 2 R = 0.9991
紫外法测定尿样中左氧氟沙星浓度 标准曲线图
1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 0 0 0.5 1 1.5 2 y = 858.59x + 14.44 2 R = 0.9998
2.6 进样 先进1针标准品观察流动相配置是否合适, 合适后,进1针空白尿样观察有无杂质在测 定波长处影响左氧氟沙星的吸收,然后进样 标准品与待测样品,标准品进样5针来检验 仪器精密度。
2.7回收率实验 取浓度为0.5，1，1.5 μg/ml的氧氟沙 星尿样，称取氧氟沙星标准品，配置为相 同浓度，通过峰面积比值，测定回收率。
VWD1 A, 波 长 =294 nm (20080524\DOX000028.D) 250
200
150
100
50
0 0 0.5 1 1.5 2 2.5 min
1.045
mAU 300
尿样中左氧氟沙星出峰图 （紫外检测器检测）
VWD1 A, 波 长 =294 nm (20080524\DOX000033.D) 35 30
荧光法测定尿样中排出左氧氟沙星 的累计量（g）-时间曲线
0.012
排出药物累计量（g）
0.01 0.008 0.006 0.004 0.002 0 0 1 2 3 时间（h） 4 5 6
紫外检测测定尿样中排出左氧氟沙 星的累计量（g）-时间曲线
0.0035 0.003
累计排药量（g）
0.0025 0.002 0.0015 0.001 0.0005 0 0 1 2 3 时间（h） 4 5 6
1.165
LU
尿样中左氧氟沙星出峰图 （荧光检测器）
FLD1 A, Ex=295, Em=505 (STU\20080523\DOX000119.D) 2 1.75 1.5 1.25 1 0.75 0.5 0.25 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 min
1.189
LU