实验十一病毒的血清学实验

1∶320
1∶640
1∶1280 1∶2560
对照
各0.2ml 各0.4ml
血凝抑制试验
•从第1孔起至第9孔，每孔加生理盐水0.2ml，第10孔加0.4ml。 •抗血清按下表进行稀释，第8孔为血清对照。 •于第1孔至第7孔中各加入0.2ml 4个血凝单位的病毒液，第9孔亦加入0.2ml病毒液作病毒对照。 •稍加震摇后，每孔加入0.5%鸡红细胞0.4ml，室温静置45分钟。
1∶80
1∶160
1∶320
1∶640
各0.2ml
各0.4ml
0.2ml
0.2弃掉
血凝试验原理
血凝素（hemagglutinin HA）：由病毒基因编码 的糖蛋白刺突。与病毒吸附和传入宿主细胞有关。 HA能与人或其它动物多种红细胞表面N－乙酰 神经氨酸酶受体结合引起红细胞凝集。
血凝试验结果判定
实验十一 病毒的血清学实验
操作： 血凝实验 血凝抑制实验
实验目的
血凝试验：滴定病毒的血凝效价，采用一定的病 毒量，通常采用4个血凝单位。
血凝抑制试验： 应用标准病毒液测定血清中的相应抗体或应用 特异性抗体鉴定新分离的血凝性病毒。
血凝试验（血凝效价的滴定)
•将有机玻璃板孔从1~10进行编号，从第1孔起至第10孔，每孔加生理盐水0.2ml。 •将尿囊液按下表进行稀释。 •自第10孔开始反方向向前每孔补充0.2ml生理盐水。(WHY?) •自第10孔开始反方向向前每孔加入0.5%鸡红血球0.4ml，摇匀后放置室温45分钟
血凝原理
血凝抑制原理
血凝抑制试验结果判定
测定孔 RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)
凝集
（-）
血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝
病毒对照孔：凝集
RBC对照孔：无自凝
血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制使的最高血 清稀释度。
思考问题
血凝试验中为什么要加补充液？ 为什么加病毒液和红细胞悬液时要反向加？ 血凝试验和血凝抑制试验中空白对照的意义？
孔号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
生理盐水 0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
（ml）
+
+
+
+
+ຫໍສະໝຸດ Baidu
+
+
+
+
尿囊液
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
（ml）
0.2弃掉
病毒稀释 1∶10 度
补充液 （ml）
鸡红血球 细胞悬液 （ml）
1∶20
1∶40
1∶80
1∶160
孔号
1
2
3
4
5
6
7
血清对 照
病毒对 照
红细胞 对照
生理盐水 0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.4
（ml）
+
+
+
+
+
+
+
+
抗血清
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
0.2
（ml）
抗血清稀 1∶10 释度
4个单位 病毒液 （ml）
鸡红血球 细胞悬液 （ml）
1∶20
1∶40
效价判定： 凝集特别显著：“＋＋＋＋” 凝集现象次之：“＋＋＋” 凝集清楚可见：“＋＋” 稍显凝集者：“＋”
血凝效价：呈“＋＋”凝集时的最高稀释度。此 时的稀释度即为1个血凝单位。
血凝抑制试验原理
病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所 抑制，称血凝抑制。利用血凝素特异性抗体与病 毒表面相应的HA相互作用，使病毒血凝现象抑 制的试验称血凝抑制试验。