葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖背景知识讲解
葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理_概述及解释说明
葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，并对其进行详细的解释和说明。
血糖测定是医学和生物科学领域中非常重要的一项实验技术，用于评估人体内的葡萄糖水平以及相关代谢功能的异常情况。
葡萄糖氧化酶法是一种常用的血糖测定方法，其基本原理是利用特定酶对葡萄糖进行氧化反应并与辅助试剂发生显色反应，从而间接地测定血液中的葡萄糖含量。
1.2 文章结构本文将按照以下结构进行展开：首先，介绍葡萄糖氧化酶的简要概况和血糖测定方法的总体概述；其次，详细讲解葡萄糖氧化酶法测定血糖的基本原理；然后，描述实验步骤并给出操作流程；接着，分析实验结果并讨论其中的意义和影响因素；最后，总结实验结论并展望未来该领域的研究意义和发展方向。
1.3 目的本文的目的是全面而清晰地介绍葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，帮助读者了解该方法在实际应用中的作用和意义。
通过本文的阅读，读者可以深入了解葡萄糖氧化酶法的基本理论和操作流程，并对实验结果进行准确而详细的分析与讨论。
同时，本文也旨在提供对该方法局限性和未来发展方向进行探讨，并为相关研究人员提供参考，促进该领域的进一步发展和突破。
2. 葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理：2.1 葡萄糖氧化酶简介：葡萄糖氧化酶是一种存在于细胞内的酶类，在生物体中起到将葡萄糖转化为能量的重要作用。
该酶主要参与细胞内氧化还原反应，并催化葡萄糖与辅酶NAD+之间的反应。
在此过程中，葡萄糖被氧化成葡萄糖酸，并产生还原型辅酶NADH。
2.2 血糖测定方法概述：血液中的血糖水平是一个重要的生理指标，可以提供人体能量供给的信息。
因此，血糖水平的测定对于诊断和治疗许多代谢性疾病非常重要。
目前，有多种方法用于测定血液中的血糖浓度，其中最常用且最经典的方法就是使用葡萄糖氧化酶法。
2.3 葡萄糖氧化酶法的基本原理：葡萄糖氧化酶法是一种非常敏感和特异性的测定血糖浓度的方法。
该方法基于葡萄糖氧化酶与葡萄糖的特异性反应，通过检测在该反应中生成的还原型辅酶NADH的产生量来间接测定血液中的血糖浓度。
2023年为什么GOD-POD是临床常规方法？
为什么GOD-POD是临床常规方法？
god-pod法即葡萄糖氧化酶法，可以用来测测定血清（浆）葡萄糖，是临床常规方法。
葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体god-pod法即葡萄糖氧化酶法，可以用来测测定血清（浆）葡萄糖，是临床常规方法。
葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
实验名称：葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖【实验原理】葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。
醌的产量与葡萄糖量成正比。
醌化合物呈红色，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，在500nm出测定其吸光度，对照标准科计算出葡萄糖的含量。
【实验准备】一、材料（1）血清（2）血浆：以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆二、试剂（1）试剂R1：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，苯酚10mmol/L。
（2）试剂R2：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，葡萄糖氧化酶16 000U/L，过氧化物酶1 000U/L，4-氨基安替比林2.0mmol/L。
（3）葡萄糖校准液：5.550mmol/L（1mg/ml）（4）生理盐水。
（5）工作试剂（酶酚混合液）：取R1试剂4.5ml与R2试剂0.5ml混合在10ml试管中。
三、器材（1）试管和试管架（2）移液枪（3）722型分光光度计（4）酶标仪（5）恒温水浴箱（6）酶标板（7）板条（8）生化培养箱【实验步骤】（1）取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2、A3，测定孔A4、A5，按【实验结果】葡萄糖（GLU）浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A校准孔平均值）×5.55参考值：3.89~6.11mmol/L测得数据为A2 A3 A4 A50.085 0.05 0.03 0.037(0.037+0.030)/2——×5.55 ﹦2.75mmol/L（0.085+0.050/2【实验讨论】①移液枪操作熟练程度直接影响测定结果，吸样前需多练习②测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。
③由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，会干扰过氧化物酶反应，出现结果假性偏低，因此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量，但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。
④本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应，第二步特异性较差，所以第二步易引起误差。
生物化学：葡萄糖测定(酶法)
血清葡萄糖（mmol/L）＝ Au Cs As
Au:测定管吸光度 As:标准管吸光度 Cs:标准管浓度
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【参考范围】
血清葡萄糖：3.89～6.11 mmol/L
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【临床意义】
1.生理性高血糖 见于饭后1～2h，注射葡萄糖或摄入高糖 食物后、情绪紧张肾上腺素分泌增加时，但不应超过 10mmol/L。 2.病理性高血糖 见于(1)内分泌腺功能障碍能引起高血糖， 如胰腺β细胞损害导致胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常， 临床上称为糖尿病。其他内分泌疾病引起的各种对抗胰岛 素的激素分泌增加也会出现高血糖；(2)颅内压增高：颅内 压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等； (3)由于脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等可使血 糖轻度增高。
实验 血清葡萄糖测定
葡萄 测 定 葡 萄 糖 氧 化 酶 法 （ GODPOD法）的原理，操作方法 2.熟悉葡萄糖测定的临床意义； 3.巩固分光光度计的使用。
2
【实验原理】
葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖 酸，并产生过氧化氢。在过氧化氢酶（POD）及色原性 受体4-氨基安替比林（4-AAP）的存在下，过氧化氢释 放氧使色素原氧化生成红色醌类化合物。醌的生成量与 葡萄糖成正比，在波长520nm处比色，求得葡萄糖含量。
7
【临床意义】
3.生理性或暂时性低血糖 见于饥饿、剧烈运动、注射胰岛 素后、妊娠和服用降糖药后。 4.病理性低血糖 见于(1)胰岛β细胞增生瘤等，使胰岛素分 泌过多；(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能 减退，肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、 肾上腺皮质激素分泌减小；(3)严重肝病患者，由于肝脏储 存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
用GOD法测定血清中葡萄糖浓度
酶法：葡萄糖氧化酶法
（一）化学法
方法
磷钼酸法 （Folin-Wu）
类型
原理
定量 G+Cu2+→Cu2O↓ 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 →蓝色钼化合物
（430nm）
用途及备注
稳定、准确、但对 葡萄糖无特异性，
受血中非糖还 原物 质的影响。
邻甲苯胺法
定量
G+邻甲苯胺→蓝绿色的席弗(Schiff)碱 （630nm）
思考题：
a) 本实验原理为酶促化学反应，为何未加终止剂 终止酶的反应？
b) 本实验涉及显色反应，该反应与血清碱性磷酸 酶活力测定中的显色反应有何异同？
c) 为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考 值存在差异？
葡萄糖氧化酶法： 3.89~6.11mmol/L Folin-Wu法： 4.4~6.7mmol/L 邻-甲苯胺法： 3.89~6.11mmol/L
③ 严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白 血滤液，然后再进行测定。
临床意义：
生理性高血糖：摄入高糖食物，情绪紧张
病理性高血糖：
①糖尿病
②内分泌腺功能障碍
③颅内压增高
④脱水引起高血糖
生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动
病理性低血糖：特发性功能性低血糖，依次是药源性，
肝源性和胰岛素瘤等。
❖调节血糖水平的激素：胰岛素、胰高血糖素、糖皮 质激素和肾上腺素。
血糖的来源、去路
血糖水平恒定的生理意义
保证重要组织器官的能量供应，特别是某些以 葡萄糖供能的组织器官。 ➢ 脑组织不能利用脂酸，正常情况下主要以来葡 萄糖供能； ➢ 红细胞没有线粒体，完全通过糖酵解获能； ➢ 骨髓及神经组织代谢活跃，经常利用葡萄糖供 能。
血糖的定量测定(葡萄糖氧化酶法)
血糖的定量测定（葡萄糖氧化酶法）血糖是指血液中葡萄糖的含量。
葡萄糖是人体主要的能量来源，血糖的测定是检查人体内部能量代谢状态的重要项目之一。
这篇文章将介绍血糖定量测定的实验原理、方法以及实验注意事项。
一、实验原理血糖的定量测定方法主要是利用葡萄糖氧化酶将血液中的葡萄糖在催化反应下转化为过氧化氢和D-酮糖酸，利用过氧化氢的比色法来测定血糖的含量。
具体反应式为：(1)葡萄糖+O2+H2O→葡萄糖氧化酶 D-酮糖酸+H2O2(2)2H2O2+Fe2+→2H2O+Fe3++O2(3)Fe3++TSC(三硝基苯胺)→FeTSC3（红色化合物）其中，TSC（三硝基苯胺）为过氧化氢的比色试剂，用Fe2+作催化剂促进反应进行，所生成的红色化合物FeTSC3与过氧化氢的浓度呈线性关系。
二、实验材料1.血糖标准品：10mmol/L2.葡萄糖氧化酶3.三硝基苯胺（TSC）、醋酸钠、乙二胺四醋酸盐二水合物（EDTA•2H2O）、氢氧化钠（NaOH）4.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5）5.准确量杯、试管、离心管、吸光度计、恒温水浴器、移液管三、实验步骤1.制备血清样品：将血液放置静置后离心取血清，制成5mmol/L、10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L的葡萄糖标准品。
2.实验组织：3个组别，每组3个试管。
A组：加1mL的10mmol/L葡萄糖标准品；B 组：加1mL的血清标本；C组：加入1mL的磷酸盐缓冲液作为对照组。
注意，每组要做三个平行实验。
3.反应体系准备：①将实验组织中的标准品、血清样本和磷酸盐缓冲液分别加入3毫升离心管中。
②分别加入1mL葡萄糖氧化酶。
③分别加入1mL EDTA全部气泡排除。
⑤每组混合后放置在37℃下反应20分钟。
⑥在上述反应过程中，加入2毫升0.1mol/L的NaOH溶液使溶液呈碱性，使催化反应更为稳定。
4.吸光测定：将反应充分混合后，吸取适量的样品，放到吸光度计槽，设定波长为505nm，用对照组值进行比较，计算出各组的吸光度，并根据标准曲线计算出各样本的葡萄糖含量。
七、血清葡萄糖的测定
五、临床意义
1、生理性或暂时性高血糖：餐后1~2h 、摄入高糖饮食、 情绪激动等。
2、病理性高血糖： ⑴糖尿病 ⑵其它内分泌系统的疾病：垂体前叶功能亢进（巨人 症、肢端肥大症）、肾上腺皮质功能亢进（库欣病）、 甲状腺功能亢进、嗜鉻细胞瘤等； ⑶应急性高血糖：如颅脑损伤、 颅内高压、脑卒中等； ⑷脱水引起的血液浓缩，如呕吐、腹泻、高热；
一、原理 二、测定方法 三、参考值 四、临床意义 五、方法学评价 六、注意事项
Ø 掌握：实验原理及方法学评价、参考值及其临床意义、 比较邻甲苯胺法与GOD法和己糖激酶法等三种检测法的异 同。
Ø 熟悉：计算公式、结果的计算 Ø 了解：实验的注意事项。
血糖的来源与去路
血糖的检测方法
邻甲苯胺法 葡萄糖氧化酶法（GOD法）
七、注意事项
1、样品为空腹血清、血浆； 2、制备血清时防止红细胞溶血； 3、样品应在低温条件下运输保存； 4、试剂使用后立即盖紧瓶盖，避免污染，R2若呈红 色，则说明试剂变质，应更换R2重做。
样品：血清
试剂：葡萄糖测定试剂盒（长春汇力）
R1：磷酸盐缓冲液pH7.4，苯酚，4-氨基安替比林 R2：葡萄糖氧化酶、过氧化物酶 标准液：葡萄糖 5.5mmol/L
加样
试剂
样品管(U)
血 清（ml）
0.03
标 准液（ml）
—
反 渗水（ml）
—
工作试剂（ml）
3.00
标准管(S) 空白管 (B)
—
—
0.03
—
—
0.03
3.00
3.00
各管充分混匀置37℃水浴15分钟后，室温冷却测定
3. 分光光度计测定方法：波长510nm，以空白管调零，测定 标准管和样品管吸光度值，按公式计算测定结果。
葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖背景知识讲解
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。
过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。
在500nm 处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。
临床意义 1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。
2.病理性高血糖（1）糖尿病患者。
（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。
升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。
（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。
（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。
4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。
（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。
（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。
（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
注意事项 1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。
葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。
目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。
新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。
2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。
3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。
取草酸钾6g，氟化钠4g，加水溶解至100ml。
吸取0.1ml到试管内，在80摄氏度以下烤干使用，可使2~3ml 血液在3~4d内不凝固并抑制糖分解。
葡萄糖氧化酶法的实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除葡萄糖氧化酶法的实验报告篇一：葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase，goD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶(peroxidase，poD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(ph7.0)称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调ph至7.0，用蒸馏水定容至1L。
2．酶试剂称取过氧化物酶1200u，葡萄糖氧化酶1200u，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/Lnaoh调ph至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。
3．酚溶液称取重蒸馏酚100mg 溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。
4．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。
5．12mmol/L苯甲酸溶液溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至lL。
6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。
2h以后方可使用。
7．5mmol/L葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】1．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
2．手工操作法取试管3支，按下表操作。
读取标准管及测定管吸光度。
【计算】【参考范围】空腹血清葡萄糖为3.89～6.11mmol/L。
生物化学：葡萄糖测定(酶法)
葡萄糖氧化酶法
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【实验要求】
1. 掌 握 掌 握 血 糖 测 定 葡 萄 糖 氧 化 酶 法 （ GODPOD法）的原理，操作方法 2.熟悉葡萄糖测定的临床意义； 3.巩固分光光度计的使用。
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【实验原理】
葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖 酸，并产生过氧化氢。在过氧化氢酶（POD）及色原性 受体4-氨基安替比林（4-AAP）的存在下，过氧化氢释 放氧使色素原氧化生成红色醌类化合物。醌的生成量与 葡萄糖成正比，在波长520nm处比色，求得葡萄糖含量。
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【临床意义】
3.生理性或暂时性低血糖 见于饥饿、剧烈运动、注射胰岛 素后、妊娠和服用降糖药后。 4.病理性低血糖 见于(1)胰岛β细胞增生瘤等，使胰岛素分 泌过多；(2)对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能 减退，肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使生长素、 肾上腺皮质激素分泌减小；(3)严重肝病患者，由于肝脏储 存糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
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【注意事项】
1、注意准确的加入所需要的液体量。 2、注意胆红素、谷胱甘肽、尿酸和维生素C等一些还 原性物质将使结果受到干扰。
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【打扫卫生】
1、实验结束后对自己用过的试管、移液管等物 品进行清洗。 2、打扫桌面与地面卫生。 3、带齐本人物品，离开实验室。
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谢 谢！
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【计算】
血清葡萄糖（mmol/L）＝ Au Cs As
Au:测定管吸光度 As:标准管吸光度 Cs:标准管浓度
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【参考范围】
血清葡萄糖：3.89～6.11 mmol/L
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【临床意义】
1.生理性高血糖 见于饭后1～2h，注射葡萄糖或摄入高糖 食物后、情绪紧张肾上腺素分泌增加时，但不应超过 10mmol/L。 2.病理性高血糖 见于(1)内分泌腺功能障碍能引起高血糖， 如胰腺β细胞损害导致胰岛素分泌缺乏，血糖可超过正常， 临床上称为糖尿病。其他内分泌疾病引起的各种对抗胰岛 素的激素分泌增加也会出现高血糖；(2)颅内压增高：颅内 压增高刺激血糖中枢，如颅外伤、颅内出血、脑膜炎等； (3)由于脱水引起的高血糖：如呕吐、腹泻和高热等可使血 糖轻度增高。
4.糖尿病综合实验
西安医学院检验教研室
实验 4-1 葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖
西安医学院检验教研室
实验目的
掌握：葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖的 基本原理。
熟悉：手工法测定葡萄糖的操作过程及注 意事项。
了解：血清葡萄糖测定对糖尿病诊断的临 床意义。
实验原理
葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧和水将葡萄糖氧 化为葡萄糖酸，并释放出过氧化氢。过氧化物酶 （POD）在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解 为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和 酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。 红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
病例分析
病史：男，56岁，未住院的 糖尿病病人。自己在家进 行胰岛素治疗，每天注射 两次胰岛素。
实验室检查：其血和尿试验 结果（包括医院和自己在 家测定的结果）记录如下：
检查记录-1（医院检查）
检查项 1月
4月
7月
10月
目
血GHb 10.3 11.0
11.3
11.1
尿糖
+++
++
++
++++
尿酮体 －
西安医学院检验教研室
基础知识
葡萄糖可以和体内多种蛋白质中的氨基不可逆地以 共价键结合，这个过程不需要酶的参与，反应速度 主要取决于葡萄糖的浓度。 这种被葡萄糖糖化的蛋白主要存在于糖尿病或尿糖 波动较大的患者中，糖化过程经常缓慢地进行，一 旦形成，不再解离。因此，对血糖或尿糖波动较大 的患者，可采用糖化蛋白来诊断或追踪病情的发展， 它可以反映较长时期以来血糖的平均水平。
操作步骤
氧化酶法测定葡萄糖的原理
氧化酶法测定葡萄糖的原理一、引言在生化分析中，准确测定物质的含量是非常重要的，而葡萄糖作为一种常见的单糖，其测定方法也备受关注。
本文将介绍一种常用的方法——氧化酶法，该方法以氧化酶作为催化剂，将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并通过测定葡萄糖酸的含量来间接测定葡萄糖的浓度。
二、原理1. 葡萄糖的氧化反应氧化酶可以催化葡萄糖与待定电子受体（如辅酶NAD+）之间的氧化反应，生成相应的葡萄糖酸和还原型辅酶NADH。
该反应的化学方程式如下：葡萄糖+ NAD+ + H2O → 葡萄糖酸 + NADH + H+这个氧化反应是一个底物与辅酶之间的双电子转移反应。
2. 氧化酶的作用氧化酶作为催化剂可以显著加速上述葡萄糖的氧化反应，降低反应的活化能，提高反应速率。
同时，氧化酶本身不参与反应，因此可以被反复使用。
3. 检测葡萄糖酸含量利用化学分析方法，可以测定葡萄糖酸的含量，进而间接推算出葡萄糖的浓度。
常用的方法包括光度法、电化学法等。
三、方法步骤1. 准备样品将待测样品中的葡萄糖转化为葡萄糖酸，通常需要进行酸水解、酶水解等预处理步骤，以使葡萄糖完全转化为葡萄糖酸。
2. 添加试剂向样品中加入适量的辅酶NAD+和氧化酶，使其与葡萄糖酸反应生成NADH。
3. 反应控制根据实验要求，可以控制反应的温度、 pH 值等条件，以提高反应效率和准确性。
4. 测定吸光度利用光度法或其他适用的方法，测定反应体系中产生的NADH的吸光度，通过标准曲线或计算公式，推算出样品中葡萄糖的浓度。
四、应用与优势氧化酶法测定葡萄糖的原理基于酶的催化作用，具有以下优势：1. 高灵敏度：由于酶的催化作用，可以极大地提高反应速率，使测定结果更加灵敏。
2. 高选择性：氧化酶对葡萄糖的催化作用非常特异，能够准确测定葡萄糖的浓度。
3. 容量小：只需少量的酶即可进行检测，可以大大减少实验所需的试剂量。
4. 适用范围广：氧化酶法不仅可以用于葡萄糖的测定，还可以应用于其他单糖的测定，具有广泛的应用前景。
实验血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法）【目的】体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。
【临床意义】葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。
通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。
葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。
葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。
【原理】样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合物。
【器材】紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管【药品】葡萄糖测定试剂盒，试剂盒主要成分与浓度：【样本】新鲜无溶血血清。
【步骤】将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液。
空白管校准管样品管工作液 1.50 ml 1.50 ml 1.50 ml蒸馏水0.01 ml ————校准液——0.01 ml ——样品————0.01 ml分别混合均匀，37℃水浴10～15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm、比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。
【计算】【参考值】血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L (70—110 mg/dl)。
此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。
【参考文献】1．全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997，P616.2．Trinder P. Ann Clin Biochem，1969，6: 24-27.血糖测定实验所需器材：1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm），2.恒温水浴箱（能调温度的，37℃），3.移液器（枪）（规格1.0ml 6个，20µl 6个），枪头各100个4.试管50支，6个试管架5.烧杯100ml一个，50ml（或25ml）6个6.记号笔6支7.蒸馏水1瓶。
葡萄糖氧化酶法测血糖原理
葡萄糖氧化酶法测血糖，神奇的原理解析
葡萄糖氧化酶法测血糖是现在广泛使用的一种血糖检测方法。
其
测量的原理是将血样中的葡萄糖与葡萄糖氧化酶反应生成的过氧化氢，利用过氧化氢与辣根过氧化氢酶催化产生的芳香酚颜色的变化来测量
血糖水平。
葡萄糖氧化酶是一种在体内生成的酶类，它可以将葡萄糖
分解为过氧化氢和乙醛。
在实验室中，可以通过添加葡萄糖氧化酶来
实现葡萄糖的分解，从而进行血糖测量。
葡萄糖氧化酶法测血糖具有
响应速度快、精确度高、不受干扰等特点，被广泛应用于医疗、科研
等领域。
然而，在实际应用过程中，也要注意血样的采集和预处理、
试剂的选择和质量等问题，以保证检测结果的准确性和可靠性。
用GOD法测定血清中葡萄糖浓度课件
目录
• 引言 • 葡萄糖氧化酶法（GOD）原理 • 实验操作流程 • 数据分析与结果解读 • 实验结论 • 参考文献
01
引言
目的和背景
目的
介绍葡萄糖氧化酶法（GOD）在测定血清中葡萄糖浓度的应 用。
背景
葡萄糖是人体重要的能量来源，其浓度的准确测定对于诊断 和治疗糖尿病等疾病具有重要意义。GOD法作为一种常用的 葡萄糖检测方法，具有准确、快速和简便等优点。
临床意义
根据葡萄糖浓度的测定结果，可以评估患者的糖代谢状况，辅助诊断糖尿病等疾病，为临床治疗提供依据。
05
实验结论
实验总结
01
葡萄糖氧化酶法是一种准确、可靠的测定血清中葡萄糖浓度的 方法。
02
在实验过程中，需要注意控制反应条的准确性。
实验操作简便，所需试剂和设备相对容易获得，适用于临床实
03
实验操作流程
样品准备
01
02
03
采集血清样本
采集足够量的血清样本， 确保样本无污染、无溶血 。
离心分离
将血清样本放入离心机中 ，以一定转速离心，使血 清与血细胞分离。
储存与运输
将分离出的血清妥善储存 ，并确保在运输过程中避 免温度过高或过低。
试剂准备
葡萄糖氧化酶试剂
按照试剂说明书配制适量的葡萄 糖氧化酶试剂。
其他辅助试剂
如磷酸盐缓冲液、过氧化氢等， 根据实验需要准备。
实验操作步骤
反应进行
在适宜的温度和pH条件下，让 混合液进行反应。
测定吸光度
使用分光光度计测定反应液的吸 光度值。
01
02
血清与试剂混合
将一定量的血清与葡萄糖氧化酶 试剂混合，充分摇匀。
葡萄糖测定葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖【原理】葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。
过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。
红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。
2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定3 个月。
3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。
4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。
5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。
2h 以后方可使用。
7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。
【操作步骤】1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。
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葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖
实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。
过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。
在500nm 处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。
临床意义 1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。
2.病理性高血糖（1）糖尿病患者。
（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。
升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。
（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。
（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。
4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。
（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。
（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。
（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
注意事项 1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。
葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。
目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。
新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。
2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。
3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。
取草酸钾6g，氟化钠4g，加水溶解至100ml。
吸取0.1ml到试管内，在80摄氏度以下烤干使用，可使2~3ml 血液在3~4d内不凝固并抑制糖分解。
4.本法用血量甚微，建议使用微量加样器进行加样。
如果使用吸管加样，应直接
加标本至试剂中，再吸试剂反复冲洗吸管，以减小误差的产生。
5.严重黄疸.溶血及乳糜烂血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。
方法评价本法线性范围至少可达22.24mmol∕L，回收率94%~105%，批内CV 为0.7%~2.0%，批间CV为2%左右，日间CV为2%~3%。
葡萄糖氧化酶法与己糖激酶法比较，相关系数为0.9986。