血清葡萄糖GLU己糖激酶HK法测定法

血清葡萄糖GLU己糖激酶HK法测定法

1.实验原理

己糖激酶紫外比色测定法。

HK

葡萄糖+ ATP -------------﹥G-6-P+ ADP

Mg2+

G6PDH

G-6-P + NAD+-------------﹥6-磷酸葡萄糖+NADH + H+

2. 标本：

2.1 病人准备：12小时禁食。

2.2 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。

3. 标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。血清中的

葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。

4. 标本运输：常温条件下保存运输。

5. 标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。

6. 实验材料

6.1 试剂威特曼血糖测定试剂盒试剂1 ＋试剂2 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。

6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。

6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的

叠氮钠，如排向下水道请用大量的水冲洗。

6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。

6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。

7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪

8. 操作步骤

8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件

8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件

9. 检验结果的判断与分析

10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I 与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以TruCal U复合校准品血糖校准值校准

仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。手工测定计算方法为：

Au

葡萄糖浓度（mmol/L）＝×校准液浓度

As

12. 参考值范围：（mmol/L）

新生儿

脐带血 3.5～8.8

1小时 2.0～5.5

2小时 2.2～4.9

5～14小时 1.9～4.3

10～28小时 2.6～4.5

44～52小时 2.7～4.4

儿童（空腹）

1～6岁 4.1～7.0

7～19岁 3.9～5.9

成人（空腹） 3.9～6.4

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差

别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义：检测血清或血浆中葡萄糖主要用于糖尿病的诊断和治疗监视，还可用于检出新生儿低血糖症、排除胰岛细胞癌以及评估各种疾病碳水化合物代谢状况。血清葡萄糖水平可能会异常高（高血糖）或异常低（低血糖）。葡萄糖测量用于诊断和治疗碳水化合物代谢紊乱，包括糖尿病，新生儿低血糖，自发性低血糖，郎格罕氏岛细胞癌等。

葡糖尿（存在葡萄糖化尿）在健康，怀孕的妇女中很常见。妊娠葡糖尿的最主要的特征就是每天之间或一天之中有一个显著的变化。

脑脊髓液（CSF）葡萄糖的测定帮助区别病毒性脑膜炎与细菌性脑膜炎；细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中的葡萄糖值通常很低（不到的40%至50%血清葡萄糖），病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。癌性脑膜炎（肿瘤细胞在脑膜中广泛渗透）也使CSF葡萄糖值在正常值以下。

14. 操作性能

14.1 线性范围：0.1～28mmol/L

14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

批内精密

度

n=20

x

(mmol/L

)

s

(mmol/L

)

CV

(%)

批间精密

度

n=20

x

(mmol/

L)

s

(mmol/L

)

CV

(%)

样品1 5.05 0.047 0.94 样品1 3.65 0.077 2.11 样品2 6.50 0.059 0.91 样品2 6.72 0.142 2.11 样品316.10 0.127 0.79 样品316.54 0.296 1.79

14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂

盒(x)，同时对76个样品进行GLU检测，将检测结果作

方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x+0.00mmol/L；

r=0.998。

14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.1mmol/L。