基因工程思考题答案

基因工程思考㼵答案

一、填空题

1．70

2．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达

3．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择

4．限制性酶切图谱

5．属名的第一个字母；种名的前两个字母；株名

6．(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积

7．EcoK；EcoRl

8．GGCC；异源同工酶（同裂酶）

9．枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'合成酶的活性；(2)3'-5'外切核酸酶

10．碱性磷酸酶；5’端的磷酸基团

11．Ca2+

13．DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶

14．S1核酸酶切割；DNA聚合酶补平

15．核酸水解酶H；RNA

16．质粒DNA；病毒DNA；质粒和病毒DNA杂合体

17．复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入

18．质粒消除(或治愈)

19，pMBl；pSCl01；pSF2124(R质粒)

20．1000kb；300kb

21. 严紧

22．pBR322和M13；pMBl；转座子

23．它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA的扩增；对某些噬菌体(如λ噬菌)的遗传结构和功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统的遗传也研究得比较详尽

24．没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记

25．质粒；λ噬菌体；45

26．(1)分子量大，(2)酶的多切点，(3)无选择标记

27．复制区；IG区

28．75％～105％

29．螯合Mg2+离子，抑制核酸酶的活性

30．中和DNA分子的负电荷，增加DNA分子间的凝聚力

31．(1)合成探针；(2)合成cDNA；(3)用于PCR反应；(4)进行序列分析32．T—载体

33．第二链合成时形成的发夹环

34．乙醇使DNA分子脱水

35．(1)保持正确的可读框(2)能够使其转录的启动子(3)具有翻译的起始和终止信号

36．接受外源DNA的生理状态

37．(1)黏性末端连接；(2)平末端连接；(3)同聚物接尾连接；(4)接头连接法

38．基因组DNA克隆；基因组DNA文库

39．cDNA克隆；cDNA文库

40．聚合酶链式反应(PCR)

41．0︒C；42︒C

42．(1)遗传学方法；(2)物理筛选法；(3)核酸杂交法；(4)表达产物分析法43．插入外源片段的种类较多，大小又极为相似的重组体的筛选

44．基因组DNA；cDNA

45．Klenow酶填补的方法；T4DNA聚合酶

46．(1)用M13噬菌体载体合成单链DNA探针；(2)从mRNA反转录合成单链cDNA探针；(3)用不对称PCR合成单链DNA探针

47．外源基因是否进行了转录

48．两种不同的细胞群体能够表达不同的基因，即在一个群体中能够表达一些基因，而在另一个细胞群体中不能表达这些基因

49．Northern印迹

50．Southern印迹

51．5’→3’合成酶；3’ →5’外切核酸酶

52．(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表达载体；(3)不含内含子

53．(1)印迹的对象不同：Northern是RNA，Southern是DNA；(2)电泳条件不同，前者是变性条件，后者是非变性条件

54．(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合；(3)抗体能够被标记

二、选择题(单选或多选)

1．c；2．c；3．b；4．b 5．b，C，d，e；6．c；7．b；8．d；9．d；10．B；11．a；12．a；13．d；14．b 15．d；16．c；17．a，b；18．a；19．c；20．d；21．c；22．C；23．b；24．C；25．d；26．a，C，d；27．b；28．c；29．b；30．a；31．c；32．a,c,d,e，33．a，b，c；34．b；35．c；36．c；37．d；38．b；39．c；40．a；41．c；42．a，b，c；43．b；44．b；45．d；46．a；47．a；48．c；49．c；50．b；51．c；52．c；53．b；54．a,c,d；55．a；56．b；57．a，b；58．c；59．a；60．d；61．b；62．c；

三、简答题

1．答：

Sanger DNA测序法是建立在两个基本原理之上：

(1)核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5'端向3'端聚合(DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程)；

(2)可延伸的引物必须能提供游离的3'羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3'羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。

2．答：

盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。

3．答：

回文序列是：5'-CATATG-3，

4．答：

GATATC；AAATTT，因为它们是回文序列。

5．答：

注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶；并且可以直接在换酶前将第一种酶失活，再加第二种酶，否则，易产生星活性。或使用通用缓冲液。6．答：

由于反转录酶缺少在E．coli DNA聚合酶中起校正作用的3'-5'外切核酸酶活性，所以聚合反应往往会出错，在高浓度的dNTP和Mg2+下，每500个碱基中可能有一个错配。

7．答：

所谓测序酶即是修饰了的T7 DNA聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸，这样使T7 DNA聚合酶完全失去了3'-5'的外切核酸酶活性，只有5'---3'聚合酶的活性，而且聚合能力提高了3～9倍，测序时常用此酶。

8．答：

S1核酸酶作图是一种对RNA转录产物的末端和剪接位点进行作图的方法。

9. 答：

YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。10．答：

(1)独立复制；(2)有选择标记；(3)有独特的酶切位点；(4)能转化但不扩散。

11．答：

含有细菌质粒和克隆的真核生物DNA片段的杂种质粒，有两个复制起点和既能在细菌又能在真核细胞中进行选择的选择标记，所以，很容易从一宿主转到另一个宿主(来回穿梭)。

12. 答：

(1)削减分子量(除去非必需区和整合区)；(2)削减酶切位点；(3)添加选择标记；(4)引入终止突变

13．答：

(1)DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。